обнаружение трамадола и его основных метаболитов в моче

Химия
В этих случаях образуются наночастицы с наименьшим размером и дисперсией, полученные гидрозоли сохраняют седиментационную устойчивость в течение длительного времени. Очевидно, при
указанных соотношениях реагентов скорость нуклеации частиц превышает скорость их роста.
По-видимому, скорость нуклеации превышает скорость роста наночастиц и при получении образца 7, который характеризуется минимальным среди полученных гидрозолей размером частиц дисперсной фазы и, как следствие, наибольшей седиментационной устойчивостью. Сравнение условий
получения образцов 6 и 7 свидетельствует о том, что увеличение относительного содержания борогидрида натрия в реакционной смеси является фактором, способствующим получению седиментационно-устойчивых гидрозолей, в которых не наблюдалось признаков агрегации в течение всего времени хранения образцов (51 сут).
Таким образом, в результате проведенного исследования разработан простой одностадийный способ получения гидрозолей золота, стабилизированных фолатом натрия, которые потенциально могут
использоваться для терапии онкологических заболеваний. Изучение влияния соотношения реагентов
на седиментационные и размерные характеристики гидрозолей золота позволило определить оптимальные соотношения исходных реагентов HAuCl4:NaBH4:фолат натрия, при которых образуются седиментационно-устойчивые гидрозоли. В соответствии с полученными данными фактором, способствующим образованию более дисперсных частиц золота, является содержание восстановителя и стабилизирующей добавки фолата натрия. Анализ результатов ИК-спектроскопического исследования и
сопоставление их с данными литературы позволили предположить, что стабилизация золота фолатом
натрия достигается в результате образования связи золота с NH2-группой фолата натрия.
1. B h a t t a c h a r y a R . , P a t r a C . , E a r l A . et al. // Nanomedicine: NBM. 2007. Vol. 3. P. 224.
2. S h a k e r i - Z a d e h A . , G h a s e m i f a r d M . , M a n s o o r i A . // Physica E. 2010. Vol. 42. P. 1272.
3. L i G . , L i D . , Z h a n g L . et al. // Chem. Eur. J. 2009. Vol. 15. P. 9868.
4. Z h a n g Z . , J i a J . , L a i Y . et al. // Bioorg. Med. Chem. 2010. Vol. 18. P. 5528.
5. Z h a n g J . , R a n a S . , S t r i v a s t a v a R . et al. // Acta Biomater. 2008. Vol. 4. P. 40.
6. N a y a k N . C . , S h i n K . // J. Nanosci. Nanotechnol. 2006. Vol. 6. P. 3512.
7. S e l v a k a n n a n P . R . , M a n d a l S . , P h a d t a r e S . // J. Colloid Interface Sci. 2004. Vol. 269. P. 97.
8. P o l a v a r a p u L . , X u Q . // Nanotechnology. 2008. Vol. 19. P. 075601.
9. L i m J . K . , K i m Y . , L e e S . Y . et al. // Spectrochim. Actа A. 2008. Vol. 69. P. 286.
10. G h o r b a n i A . A . , M a n o u c h e r V . , I r a n A . et al. // J. Disper. Sci. Technol. 2008. Vol. 29. P. 1062.
11. T s a i S . W . , L i a w J . W . , H s u F . Y . et al. // Sensors. 2008. Vol. 8. P. 6660.
Поступила в редакцию 07.09.10.
Ирина Анатольевна Милевич – младший научный сотрудник.
Светлана Александровна Воробьева – кандидат химических наук, ведущий научный сотрудник.
Анатолий Иванович Лесникович – академик НАН Беларуси, профессор, доктор химических наук, главный научный
сотрудник.
УДК 615.212.7: 616.634.94]- 074: 543.544.943.3
Л.Н. БОРОВИКОВА, В.С. КАМЫШНИКОВ, А.М. ЧУБУКОВ
ОБНАРУЖЕНИЕ ТРАМАДОЛА И ЕГО ОСНОВНЫХ МЕТАБОЛИТОВ В МОЧЕ
МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
The article deals with some aspects of a chemo-toxicological analysis of tramadol that is commonly used as analgesic. The authors propose a method for tramadol identification in urine. Presented technique based on tramadol detection by thin-layer chromatography. As a result of the study an optimal way of extraction, the composition of mobile phase and reagents for tramadol identification were chosen.
Трамадол (транс-2-[(диметиламино)метил]-1-(3-метоксифенил)-циклогексан-1-ола гидрохлорид) –
синтетический опиоидный анальгетик центрального действия, представляющий собой рацемическую
смесь двух изомеров, участвующих в обезболивании. По своему анальгетическому потенциалу трамадол близок к кодеину и принадлежит к анальгетикам средней силы. Его биотрансформация осуществляется в печени, при этом образуются несколько метаболитов, из которых только один – о-МТБ
(фенольный метаболит, о-дезметилтрамадол) – селективно стимулирует мю-опиоидные рецепторы и,
таким образом, обладает фармакологической активностью [1]. В аналитической практике значение
имеют два основных метаболита трамадола – о-МТБ и N-МТБ (вторичный амин, N-дезметилтрамадол),
33
Вестник БГУ. Сер. 2. 2011. № 1
остальные продукты биотрансформации образуются в меньшем количестве, и их обнаружение зависит от дозы принятого препарата и стадии метаболизма.
Трамадол применяется в клинической практике уже более 20 лет. Он широко используется для купирования острого болевого синдрома в хирургической практике, назначается онкологическим больным; имеются данные о его применении в ревматологии и неврологии [2]. Однако, несмотря на низкий наркогенный потенциал, при длительном применении трамадол способен вызывать привыкание,
зависимость и синдром отмены [3].
В последние годы наблюдается стойкая тенденция к увеличению числа случаев немедицинского
потребления трамадола. По данным Городского наркологического диспансера (г. Минск), количество
выявленных фактов употребления трамадола с немедицинской целью составило: в 2007 г. – 186, в
2008 г. – 233, в 2009 г. – 419 случаев. В 2009 г. трамадол был внесен в Республиканский перечень
наркотических средств, психотропных веществ и их прекурсоров, подлежащих государственному
контролю в Республике Беларусь.
В настоящее время особенно актуальным является вопрос создания и утверждения официальных
методик обнаружения наркотических средств и психотропных веществ в биологических жидкостях,
что имеет большое значение для осуществления профилактики злоупотребления наркотиками.
Целью настоящей работы явилась разработка методики обнаружения трамадола и его метаболитов
в моче.
Экспериментальная часть
Материал и методы исследования. Материалом исследования служила моча лиц, доставленных
для освидетельствования в кабинет экспертизы опьянения Городского клинического наркологического диспансера с подозрением в употреблении наркотических или психотропных веществ, у которых
при скрининге методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) был выявлен трамадол, что в дальнейшем было подтверждено газохроматографическим методом с масс-спектрометрическим детектированием (ГХ/МС). Для приготовления стандартных растворов трамадола использовали трамадолоснование (не менее 99 % чистоты).
Методы извлечения. Эффективность экстракции изучалась с использованием интактных проб мочи, в которых растворяли навески трамадола-основания. После инкубирования в течение 24 ч при
температуре +4 °С пробы исследовали. Для выявления максимально эффективного метода изолирования трамадола из мочи были апробированы четыре следующих экстрагента: I – хлороформ; II –
смесь растворителей хлороформ – н-бутанол (9:1); III – смесь растворителей хлороформ – изопропиловый спирт (9:1); IV – смесь растворителей диэтиловый эфир – этилацетат (1:1). Хлороформ (I) широко применяется в качестве экстрагента при скрининговом исследовании на наличие наркотических
и психоактивных веществ; экстрагент II был выбран нами как возможно эффективный. В литературе
описаны методы извлечения трамадола с использованием экстрагентов III и IV [4–7].
В настоящем исследовании экстрагирование выполнялось при рН 11÷12, поскольку трамадол и
его важнейшие метаболиты являются веществами основного характера, имеющими константу ионизации (рКа) от 9,0 до 10,0, для обеспечения полноты экстракции которых необходимо подщелачивание пробы до рН не менее 11,0. Количественное определение трамадола проводилось методом газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием на газовом хроматографе Agilent
6890 с масс-селективным детектором Agilent 5975В производства США с применением библиотек
масс-спектров электронного удара PMW Tox3, Wiley 7, NIST 05 и NIST Search. Расчет производился
по градуировочному графику, построенному с использованием стандартных растворов трамадола.
Методы идентификации. Обнаружение трамадола и его основных метаболитов в моче проводилось нами одним из наиболее доступных методов химико-токсикологического анализа – методом
тонкослойной хроматографии.
Для исследования были использованы пластины «Sorbfil» ПТСХ-П-В (РФ) с зернением силикагеля
8÷12 мкм. Экстракты наносили на хроматографическую пластину параллельно со «свидетелем»
(стандартным раствором трамадола), после чего проводили хроматографирование. Для разделения
трамадола и его метаболитов были использованы следующие системы:
I – этилацетат – этанол – аммиак (17:2:1);
II – бензол – этанол – триэтиламин (9:1:1);
III – этилацетат – гексан – аммиак (50:15:2);
IV – хлороформ – этилацетат – аммиак (12:8:0,2);
V – ацетон – аммиак – хлороформ (16:0,7:8).
34
Химия
После завершения процесса хроматографического разделения пластинки высушивали и обрабатывали растворами реагентов. Количественной величиной, отражающей подвижность вещества, являлось значение Rf.
Для идентификации трамадола нами были изучены свойства следующих реагентов, используемых
для определения наркотических и психоактивных веществ: реактив Марки (1 капля формалина в
1,0 мл концентрированной серной кислоты, х. ч.); 1 % (10 г/л) раствор нингидрина в концентрированной серной кислоте; реактив Манделина (0,01 г ванадата аммония, растворенного в 2,0 мл концентрированной серной кислоты); реактив Эрдмана (смесь концентрированных серной и азотной кислоты в соотношении 1:1); реактив Либермана (1,0 г нитрита натрия в 10,0 мл концентрированной серной кислоты); реактив Фреде (насыщенный раствор молибдата аммония в концентрированной
серной кислоте); 1 % водный раствор красителя прочного черного.
Результаты и их обсуждение
Показатели эффективности извлечения трамадола из мочи отражены в табл. 1.
Таблица 1
Эффективность извлечения трамадола из мочи
Степень экстракции, x ± Sx, %*
Экстрагент
Хлороформ
Хлороформ – н-бутанол (9:1)
Хлороформ – изопропиловый спирт (9:1)
Диэтиловый эфир – этилацетат (1:1)
60,16±0,48
80,06±0,65
84,73±0,60
40,20±0,52
П р и м е ч а н и е . * Приведенное значение процента экстракции представляет собой среднее значение, полученное при
выполнении 30 параллельных исследований.
Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что наиболее эффективным при направленном исследовании на трамадол является использование для экстракции смесей растворителей
хлороформ – н-бутанол (9:1) или хлороформ – изопропиловый спирт (9:1). Применение этих реагентов позволяет выделить до 85 % трамадола, присутствующего в образце мочи, в то время как с помощью традиционно применяемой экстракции хлороформом удается извлечь не более 60 % анализируемого вещества.
Анализ данных, приведенных в табл. 2, показывает, что наиболее эффективное разделение трамадола и его основных метаболитов методом тонкослойной хроматографии достигается при использовании двух систем: бензол – этанол – триэтиламин и этилацетат – гексан – аммиак. Их применение
позволяет получить четкую картину хроматографического разделения: трамадол, о-дезметилтрамадол
и N-дезметилтрамадол располагаются на пластинке отдельными зонами.
Таблица 2
Обнаружение трамадола и его метаболитов при исследовании методом ТСХ
Система растворителей
Этилацетат – этанол – аммиак
17:2:1
Бензол – этанол – триэтиламин
9:1:1
Этилацетат – гексан – аммиак
50:15:2
Хлороформ – этилацетат – аммиак
12:8:0,2
Ацетон – аммиак – хлороформ
16:0,7:8
трамадола
Rf
о-МТБ
N-МТБ
0,83
0,76
0,83
0,80
0,62
0,71
0,64
0,30
0,38
0,71
0,47
0,71
0,82
0,72
0,82
Наиболее специфичная и интенсивная окраска продуктов взаимодействия изученных реагентов с
трамадолом возникает после обработки хроматографической пластинки реактивом Марки, 1 % раствором нингидрина в серной кислоте и реактивом Манделина. Для данных реагентов были определены значения предела обнаружения трамадола, представленные в табл. 3.
35
Вестник БГУ. Сер. 2. 2011. № 1
Таблица 3
Идентификация трамадола и его метаболитов при исследовании методом ТСХ
Реактив
Окраска
Реактив Марки
1 % раствор нингидрина
в серной кислоте
Реактив Манделина
Реактив Эрдмана
Реактив Либермана
Реактив Фреде
1 % раствор прочного черного
Предел обнаружения,
мкг в пробе
Оранжево-коричневая, переходящая в зеленую; при добавлении
нескольких капель воды – изумрудно-зеленая
Розово-малиновая; при добавлении нескольких капель воды –
оранжевая
Серо-зеленая
Светло-желтая
Светло-желтая
Серо-зеленая
Бледно-розовая, выцветающая в центре
1,0
1,0
3,0
–
–
–
–
В итоге проведенного исследования разработана методика качественного определения трамадола
и его метаболитов в моче методом тонкослойной хроматографии на основе применения предложенных эффективных способов экстрагирования, систем фракционирования и реагентов для идентификации определяемого вещества.
Предлагаемая методика хроматографического исследования трамадола проста в применении, не
требует дорогостоящего оборудования и может быть использована для обнаружения трамадола в
моче во всех токсикологических лабораториях системы Министерства здравоохранения Республики
Беларусь.
1. В е с е л о в с к а я Н . В . , К о в а л е н к о А . Е . Наркотики. Действие. Свойства. Метаболизм. М., 2000. С. 218.
2. К и р и е н к о П . А . // Рус. мед. журн. 2004. Т. 12. № 8. С. 512.
3. М у р а в ь е в Ю . В . , Е в с и к о в а М . М . // Клин. фармакология и терапия. 2005. № 14. С. 83.
4. В е с е л о в с к а я Н . В . , К и с л у н Ю . В . , Е р е м и н С . К . и др. // Суд.-мед. экспертиза. 1996. № 7. С. 39.
5. М е л е н т ь е в А . Б . , К и м Д . Г . // Изв. Челябин. науч. центра. 2003. № 1 (18.). С. 98.
6. В о л к о в А . А . , М и щ и х и н В . А . // Микроэлементы в медицине. 2005. № 6. С. 102.
7. З а л е с о в а В . А . , К а т а е в С . С . , К у р д и н а Л . И . // Вопр. наркологии. 1998. № 2. С. 53.
8. Токсикологическая химия / Под ред. Т.В. Плетеневой. М., 2005. С. 187.
Поступила в редакцию 14.09.10.
Лидия Николаевна Боровикова – аспирант кафедры клинической лабораторной диагностики Белорусской медицинской
академии последипломного образования. Научный руководитель – В.С. Камышников.
Владимир Семенович Камышников – доктор медицинских наук, профессор кафедры клинической лабораторной диагностики Белорусской медицинской академии последипломного образования.
Александр Михайлович Чубуков – заведующий токсикологической лабораторией Городского наркологического диспансера.
УДК 619:616.995.7:615.777/779:636.4
А.Э. ВЫСОЦКИЙ, В.О. ШАБЛОВСКИЙ, А.В. ТУЧКОВСКАЯ, А.П. ЛЫСЕНКО
БИОЦИДНЫЕ СВОЙСТВА И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ
ХАРАКТЕРИСТИКА ПОРОШКОВОГО ДЕЗИНФЕКТАНТА ВАЛИСАН
ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ВЕТЕРИНАРНОЙ ДЕЗИНФЕКЦИИ
The bactericidal properties of disinfectant VALISAN have been studied by laboratory and industrial tests. This disinfectant possesses a wide bactericidal and viricidal action spectrum and it is a high-performance means for stock buildings decontamination was
estimated.
Best performances application for veterinary disinfection of it was determined. The results of toxicological characteristic definition of the VALISAN are presented. It is shown, that features of this preparation are its ecological safety, absence of annoyances and
allergenicity, and strongly pronounced sorbent properties, and possibility its application in presence of animals.
Большую опасность для промышленного животноводства и птицеводства представляют инфекционные заболевания. В случае их появления необходимо срочно проводить комплекс не только терапевтических мероприятий, но и организационно-хозяйственных, в частности дезинфекцию [1].
Дезинфекция гарантирует обеззараживание среды обитания, т. е. эффективное воздействие на факторы передачи инфекции, что приводит к существенному уменьшению потерь и улучшению качества
продукции.
В настоящее время для дезинфекции животноводческих и птицеводческих помещений традиционно применяются химические средства, такие как гидроокись натрия (каустическая сода), формальде36