Инфекция и иммунитет - Ижевская государственная

Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
ИНФЕКЦИЯ И ИММУНИТЕТ
Малый практикум для самостоятельной
работы студентов
Методическое руководство
Ижевск
2009
ПРАКТИКУМ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
студента ___________группы ___________________факультета
______________________учебного года
________________________________________________________
(Ф.И.О.)
Преподаватель________________________________________
(Ф.И.О.)
2
Лабораторное занятие №12
Тема: ИНФЕКЦИЯ. НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ЗАЩИТЫ
ОРГАНИЗМА. ПОНЯТИЕ И ВИДЫ ИММУНИТЕТА
Цель: отработать методику заражения и вскрытия лабораторных животных.
Усвоить методы определения основных факторов неспецифической
защиты организма
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
1. Понятие об инфекции. Условия возникновения, стадии развития
и характерные признаки инфекционной болезни.
2. Патогенность и вирулентность бактерий. Факторы патогенности.
3. Токсины бактерий, их природа, свойства, получение.
4. Неспецифическая резистентность. И. Мечников и его роль в формировании
учения об иммунитете. Виды фагоцитов, стадии фагоцитоза.
5. Комплемент, его структура, функции, пути активации, роль в иммунитете.
Другие гуморальные факторы неспецифической резистентности.
6. Интерфероны, природа, виды, получение, применение.
7. Теории иммунитета.
8. Понятие об иммунитете. Виды иммунитета. Видовой (наследственный)
и приобретенный иммунитет.
9. Структура и функции иммунной системы.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Отработать и описать методику заражения и вскрытия лабораторного
животного. При вскрытии: а) сделать посев крови в сахарный бульон;
б) сделать посевы и мазки-отпечатки легких, печени, почек, селезенки;
в) мазки окрасить фуксином, промикроскопировать, найти возбудителя,
зарисовать.
2. Изучить и зарисовать готовый мазок незавершенного фагоцитоза
гонококков.
3. Просмотреть и зарисовать мазки-отпечатки капсульных микроорганизмов.
4. Сделать вывод по результатам титрования биологических жидкостей
(сыворотки крови, слюны) на определение в них лизоцима. Зарисовать.
5. Отчет по протоколу.
6. Уборка рабочего места.
Основные понятия темы:
Инфекционный процессИнфекционное заболевание –
Пути передачи инфекционного агента:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
3
Факторы, необходимые для развития инфекционного заболевания:
микроорганизма
Макроорганизма
внешней среды
Формы инфекционных болезней:
 по виду возбудителя – _______________________________________
___________________________________________________________________

по количеству возбудителей - _____________________________________

по поражению различных систем –__________________________________
____________________________________________________________________
 по распространению агента ______________________________________
______________________________________________________________

по источнику инфекции – __________________________________________
_______________________________________________________________

по степени распространенности – __________________________________
_______________________________________________________________
1.
3.
Периоды инфекционного заболевания:
2.
4.
Патогенность –
Вирулентность –
DLM -
LD50 -
4
Факторы патогенности микроорганизмов:
структурные
ферменты агрессии
токсины
Характеристика бактериальных токсинов:
свойства
локализация
химическая природа
отношение к высокой t0
Токсичность
органотропность (специфичность)
источник получения анатоксина
экзотоксины
эндотоксины
Неспецифическая резистентность –
Факторы неспецифической резистентности:
общефизиологические
Гуморальные
клетки
Фагоцитоз Стадии
Комплемент (С) –
Биологические функции комплемента –
Активаторы комплемента
а) по классическому пути –
б ) по альтернативному пути –
5
клеточные
причины незавершенности
Интерфероны (ИФН) –
Виды интерферонов: 1.
3.
2.
4.
Иммунная система –
Компоненты иммунной системы:
Органы
1.центральные-
Клетки
2.периферические -
Виды иммунитета –
по происхождению:
 врожденный
 приобретенный активный естественный
 приобретенный активный искусственный
 приобретенный пассивный естественный
 приобретенный пассивный искусственный
по направленности:
6
биомолекулы
Работа №1: методика заражения и вскрытия лабораторного животного
Заражение. Мышь берем зажимом за хвост, опускаем на стол, туловище
быстро прижимаем к столу двумя пальцами левой руки и, скользя ими по спине,
захватываем кожу над головой. Животное фиксируем в руке в растянутом положении, придерживая хвост мизинцем.
Для подкожного заражения
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
________________________________________________________________
Для внутрибрюшинного заражения
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
Вскрытие: цель –
Этапы:
1) фиксация животного ___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
________________________________________________________________
2)осмотр наружных покровов –
3) вскрытие и исследование грудной полости ___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
_______________________________________________________________
4) вскрытие и исследование брюшной полости:
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
_
Оформляется протокол вскрытия животного и готовятся мазки-отпечатки.
Мазки-отпечатки из органов
Вывод:
7
Работа № 2: Микроскопия мазков с незавершенным фагоцитозом
окраска______________________
фагоцит
возбудитель
незавершенный фагоцитоз
Работа № 3: капсульные микроорганизмы в мазках-отпечатках из органов
окраска________________________
клетки органов
капсульный микроб
Работа № 4: определение лизоцима в биологических жидкостях
методом титрования
Компоненты:
1.
2.
Инкубация в термостате
Механизм: __________________________________________________
____________________________________________________________
10 -1
10 -2
10 -3
10 -4
10 -5
10 -6
10 -7
10 -8
КК
КС
Результат:_________________________________________________________
Титр лизоцима ___________________________________________________
Подпись преподавателя__________________
8
Дополнительная информация
9
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
34.
35.
36.
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43.
44.
45.
46.
47.
48.
49.
Вопросы для самоконтроля:
Что такое инфекция?
Факторы, обуславливающие развитие инфекционной болезни.
Чем характеризуется инфекционная болезнь?
Периоды инфекционной болезни.
Свойства микроорганизма, обусловливающие инфекционную болезнь.
Свойства макроорганизма, обусловливающие инфекционную болезнь.
Патогенность и вирулентность микробов.
С чем связана вирулентность микроорганизмов?
Факторы агрессии, связанные с морфологией возбудителя.
Факторы агрессии, связанные с физиологией возбудителя.
Характеристика экзотоксинов микробов.
Характеристика эндотоксинов микробов.
Из каких токсинов можно получить анатоксины и почему?
Классификация токсинов по механизму действия.
Чем отличаются экзогенные и эндогенные инфекции?
Формы инфекций в зависимости от локализации.
Повторное проявление инфекционного заболевания.
Когда происходит размножение возбудителя в крови?
Что такое рецидив, реинфекция, суперинфекция, микстинфекция?
Возврат клинических проявлений без повторного заражения.
Что значит аутоинфекция?
Классификация инфекций по кругу хозяев.
Что изучает эпидемиология?
Что необходимо для развития эпидемического процесса?
Классификация инфекций по путям передачи.
Спорадические заболевания, эпидемии, эндемии, пандемии.
Что такое конвенционные заболевания?
Что изучает иммунология?
Разделы иммунологии.
Неспецифическая резистентность организма.
Общие факторы неспецифической резистентности.
Клеточные факторы неспецифической резистентности.
Гуморальные факторы неспецифической резистентности.
Какую резистентность обеспечивает нормальная микрофлора?
Защитная функция кожи и слизистых оболочек.
Фагоцитоз, стадии.
Фагоцитирующие клетки.
Роль полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПМЯЛ).
Макрофаги: фиксированные и подвижные, их роль.
Процессы, в которых участвуют макрофаги.
Причины незавершенного фагоцитоза.
Характеристика и функции нормальных киллеров (NK).
Система комплемента: химическая структура, организация.
Где синтезируются белки комплемента?
Пути активации комплемента, их отличия.
Активаторы комплемента по классическому пути.
Активаторы комплемента по альтернативному пути.
Значение комплемента для развития воспаления.
Конечный итог активации комплемента.
10
50.
51.
52.
53.
54.
55.
56.
57.
58.
59.
60.
61.
62.
63.
64.
65.
66.
67.
68.
69.
70.
В каких реакциях участвует комплемент?
Лизоцим: химическая структура, биологическая роль.
Какие клетки синтезируют лизоцим?
Система пропердина: химическая структура, биологическая роль.
Интерфероны: химическая структура, биологическая роль.
Виды интерферонов, их отличия.
Функции лейкоцитарного и иммунного интерферонов.
Острофазные белки, их участие в неспецифической резистентности.
Понятие иммунитета.
Отличия специфических реакций резистентности от неспецифических.
Особенности видового (врожденного) иммунитета.
Классификация иммунитета по происхождению.
Варианты приобретенного активного иммунитета.
Варианты приобретенного пассивного иммунитета.
Местный иммунитет, его особенности.
Иммунная система, ее структура и функции.
Центральные и периферические органы иммунной системы.
Костный мозг: его роль в иммунитете.
Строение и функции тимуса.
Какие иммунные процессы протекают в селезенке и в лимфоузлах?
Биологическая роль небных миндалин, аппендикса, пейеровых бляшек.
Лабораторное занятие №13
Тема: ИММУНИТЕТ: АНТИГЕНЫ И АНТИТЕЛА. ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫЕ
КЛЕТКИ. РЕГУЛЯЦИЯ ИММУННОГО ОТВЕТА.
РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ (РА) И ЕЕ МОДИФИКАЦИИ
Цель: изучить постановку и учет результатов РА в различных модификациях,
уметь давать правильное заключение по готовым результатам
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
Антигены, их основные свойства. Антигены бактериальной клетки.
Изоантигены (эритроцитарные, лейкоцитарные и др.). CD-антигены.
Иммунокомпетентные клетки, их кооперация в иммунном ответе.
Регуляция иммунного ответа.
4. Формы иммунного ответа.
5.
Иммуноглобулины, их структура и функции. П. Эрлих.
6. Классы иммуноглобулинов, их отличия.
7. Антителообразование, первичный и вторичный ответ.
8. Иммунологическая память. Иммунологическая толерантность.
9. Реакция агглютинации: компоненты, механизм, способы постановки.
10. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА): компоненты, механизм,
постановка, применение.
11. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ): механизм, варианты постановки,
применение.
1.
2.
3.
11
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Поставить реакцию агглютинации (РА) на стекле для определения
неизвестной культуры. Сделать вывод, зарисовать.
2. Разобрать постановку и учет результатов развернутой РА для определения
неизвестного микроба, зарисовать.
3. Изучить и сделать вывод по готовой РА при определении антител
(на примере реакции Райта).
4. Оценить готовую реакцию непрямой или пассивной гемагглютинации
(РНГА): описать схему постановки, учесть результаты, дать заключение.
5. Разобрать и записать схему постановки и учет результатов прямой и
непрямой реакции иммунофлюоресценции (РИФ).
6. Изучить по таблице и записать механизм и схему постановки реакции
Кумбса на выявление неполных антител. Применение.
7. Описать диагностические препараты, используемые для постановки
изучаемых реакций.
8. Уборка рабочего места.
9. Отчет по протоколу.
Основные понятии по теме
АнтигеныГаптены –
Антигены бактериальной клетки –
1._____________________ 2. ___________________
3.______________________
4. ____________________ 5.____________________ 6.
_____________________
Гетероантигены Ксеноантигены Изоантигены Аллоантигены -
12
Основные иммунокомпетентные клетки
клетки
функции
Маркеры
продуцируемые
цитокины
АПК:
-дендритные
-моноциты
-макрофаги
Т-лимфоциты:
-Т-хелперы
Th1
Th2
Т-цитотоксические
В-лимфоциты
Антитела –
ФункцииВалентностьАффинностьАвидностьВиды –
Характеристика основных классов иммуноглобулинов:
Свойства
Молекулярная масса
% в сыворотке крови
Подклассы
Валентность
Проходимость через плаценту
Связывание комплемента
Число субъединиц
Наличие в молозиве
IgG
13
IgM
IgA
IgE
IgD
Динамика образования антител при первичном и вторичном
иммунном ответе (ИО)
стадия
первичный ИО (дни)
вторичный ИО (дни)
латентная
продуктивная
стационарная
угасания
Иммунологическая память –
Иммунологическая толерантностьСерологические реакции –
Стадии:
1)специфическая
2)неспецифическая
Реакция агглютинации –
Варианты использования:
1. Для определения возбудителя 2. для определения антител Варианты постановки РА:
1. ориентировочная 2. развернутая Работа № 1: ориентировочная реакция агглютинации (РА)
для определения неизвестной культуры
Компоненты: 1. культура ___________________________________________
2. диагностические аггл.сыворотки___________________________________
________________________________________________________________
Механизм: ______________________________________________________
Учет ______________
эшерихиозная
поливалентная
О-26
О-55
О-111
Результат:
Заключение: _______________________________________________________
14
Работа №2: развернутая реакция агглютинации (РА) при определении
неизвестной культуры
Компоненты:
1. культура _______________________________________________________
2. аггл.сыворотка _______________________________________Титр=
Инкубация в термостате_________________
Механизм: ________________________________________________________
__________________________________________________________________
1/100
1/200
1/400
1/800
1/1600
1/3200
КС
КК
Результат:
Заключение:
Работа № 3: Реакция агглютинации (РА) при определении антител
А)Ориентировочная –реакция Хеддльсона при бруцеллезе Компоненты:
1. сыворотка_______________________________________________________
2. диагностикум____________________________________________________
Инкубация ______________________
Механизм: ________________________________________________________
__________________________________________________________________
0,1
0,2
0,4
Результат:
Заключение:
15
К
Б) развернутая –реакция Райта при бруцеллезе.
Компоненты: 1. сыворотка
2. диагностикум
Инкубация Механизм: __________________________________________________________
Титр АТ в РА _______________________________________________________
1/100
1/200
1/400
1/800
1/1600
Диагностический титр (ДТ) –
Результат: титр АТ=
1/3200
КС
КД
ДТ=
Заключение:
Работа № 4: Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)
при серодиагностике инфекций
Компонеты:1.сыворотка______________________________________________
2.диагностикум______________________________________________________
Инкубация__________________
Проводится в лунках плексигласового планшета.
Механизм: _______________________________________________________
_________________________________________________________________
РНГА ( + ) –
РНГА ( - ) Титр АТ в РНГА -___________________________________________________
1/10
1/20
1/40
1/80
1/160 1/320 1/640 1/1280
Учет: Титр АТ=
Заключение:
ДТ=
16
КС
КД
Работа № 5: Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
Прямая РИФ позволяет выявить ___________________________________
Компоненты: 1. ____________________________________________________
2.________________________________________________________________
Постановка:
Механизм:_________________________________________________________
РИФ ( + ) –
РИФ ( - ) –
Непрямая РИФ – двухфазная: 1-я фаза ______________________________
2-я фаза__________________________________________________________
1вариант – для выявления возбудителя Компоненты: 1.
2.
.
3.
Механизм: _________________________________________________________
2 вариант – для выявления антител –
Компоненты: 1.
2.
3.
Механизм: ________________________________________________________
Работа № 6: реакция Кумбса на выявление неполных антител
Неполные антитела Компоненты: реакция двухфазная, 1-я фаза - __________________________
____________________________ 2-я фаза _____________________________
Механизм: _______________________________________________________
________________________________________________________________________
Используется для определения резус-антител.
Работа № 7: диагностические препараты, используемые
для постановки изучаемых реакций
1. агглютинирующие сыворотки:
 поливалентные
 видовые
 монорецепторные.2. диагностикумы
3. диагностикумы эритроцитарные
4. сыворотка антиглобулиновая (АГС)
5. сыворотки меченные ФИТЦ
Подпись преподавателя___________________
17
Дополнительная информация
18
Вопросы для самоконтроля
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
34.
35.
36.
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43.
44.
45.
46.
47.
Понятие об антигене.
Условия, определяющие антигенные свойства различных веществ.
Характерные свойства антигенов.
Что такое антигенность, с чем она связана?
Что такое валентность антигена?
Как можно повысить антигенность?
Адъюванты, химическая природа, роль.
С чем связана специфичность антигенов?
Что такое эпитопы, их строение, виды, свойства.
От каких факторов зависит иммуногенность антигенов?
Свойства антигена, обусловливающие его иммуногенность.
Типы антигенной специфичности.
Специфичность антигенов: видовая, групповая, типовая, патологическая.
Экзо- и эндоантигены.
Отличия антигенов Т-зависимых и В-зависимых.
Отличия полноценных антигенов от гаптенов.
Условия перехода гаптена в полноценный антиген.
Ксеноантигены, изоантигены, аллоантигены, их отличия.
Основные антигены тела человека.
Эритроцитарные антигены системы АВО и Rh.
Что такое CD-антигены, их структура и значение.
Что собой представляют аутоантигены?
Когда и почему к клеткам органов поздней закладки развивается
иммунный ответ?
Антигены бактериальных клеток.
Почему экзотоксины бактерий являются полноценными антигенами?
Какие клетки называют иммунокомпетентными (ИКК)?
Как подразделяют ИКК по функциональной активности?
Какие клетки относятся к эффекторным?
Какие клетки выполняют регуляторную роль?
Где находятся полипотентные стволовые клетки (ППСК)?
Основные антигенпрезентирующие клетки (АПК).
Профессиональные фагоциты - маркеры, продуцируемые цитокины.
Дендритные клетки, их характеристика и роль в иммунитете.
Из каких клеток происходят лимфоциты?
Основные группы лимфоцитов, их отличия.
Т-лимфоциты, основные рецепторы и функции.
Субпопуляции Т-лимфоцитов.
Основные рецепторы и продуцируемые цитокины Th1.
Основные рецепторы и продуцируемые цитокины Th2.
Какие Т-лимфоциты запускают гуморальный иммунитет?
Какие Т-лимфоциты запускают клеточный иммунитет?
В каком взаимоотношении находятся Th1 и Th2?
Какие Т-лимфоциты выполняют эффекторную роль?
Основные рецепторы и продуцируемые цитокины Т-киллеров.
Морфологические и функциональные особенности Т-киллеров.
Чем отличаются клетки-памяти от других лимфоцитов?
Особенности нулевых клеток.
19
48.
49.
50.
51.
52.
53.
54.
55.
56.
57.
58.
59.
60.
61.
62.
63.
64.
65.
66.
67.
68.
69.
70.
71.
72.
73.
74.
75.
76.
77.
78.
79.
80.
81.
82.
83.
84.
85.
86.
87.
88.
89.
90.
В-лимфоциты, их отличия от Т-лимфоцитов.
Основные рецепторы В-лимфоцитов.
От каких клеток получают помощь В-лимфоциты?
Основные индукторы иммунного ответа.
Участие каких клеток необходимо для развития иммунного ответа?
Какие вещества относятся к цитокинам?
Какие процессы регулируют цитокины?
Какова роль миелопептидов?
Основные участники запуска гуморального механизма иммунного ответа.
Основные участники запуска клеточного механизма иммунного ответа.
Формы иммунного ответа.
Иммунологическая память, механизм.
Положительные и отрицательные стороны иммунологической памяти.
Иммунологическая толерантность, врожденная и приобретенная.
Виды иммунологической толерантности.
Толерогены естественные и искусственные.
Положительные и отрицательные стороны иммунной толерантности.
Формы иммунного ответа клеточного типа.
Особенности иммунного фагоцитоза.
Антитела: химическая структура и функции.
Основные свойства антител: валентность, аффинность и авидность.
Антигенные детерминанты антител: изотипы, аллотипы, идиотипы.
Классы иммуноглобулинов, их структура и функции.
Основная характеристка Ig G, M, А, E, D.
В результате чего происходит переключение синтеза с IgM на IgG?
Какими иммуноглобулинами обусловлен местный иммунитет?
Какие клетки синтезирую антитела?
Где происходит синтез антител?
Стадии (фазы) продукции антител.
Чем обусловлен вторичный иммунный ответ?
Отличия первичного и вторичного иммунного ответа.
Нормальные антитела, неполные антитела, отличия, методы выявления.
Что лежит в основе серологических реакций ?
Реакция агглютинации (РА): понятие, механизм, варианты постановки.
Компоненты ориентировочной и развернутой РА для выявления антигена.
Компоненты ориентировочной и развернутой РА для выявления антител.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА): понятие, механизм.
Компоненты РНГА, особенности постановки, положительный результат.
Реакция Кумбса: компоненты, механизм.
В какой реакции определяют группу крови у человека?
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ), механизм.
Компоненты и особенности постановки прямой РИФ. Применение.
Компоненты и особенности постановки непрямой РИФ. Применение.
20
Лабораторное занятие № 14
Тема: ИММУННЫЙ ОТВЕТ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ И СОСТОЯНИЯХ.
РЕАКЦИИ ИММУНИТЕТА: ПРЕЦИПИТАЦИИ (РП), С УЧАСТИЕМ
КОМПЛЕМЕНТА - СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РСК),
ИММОБИЛИЗАЦИИ И ИММУННОГО ПРИЛИПАНИЯ; РЕАКЦИИ
НЕЙТРАЛИЗАЦИИ ТОКСИНОВ (РН)
Цель: научиться ставить, учитывать результаты и давать оценку изучаемым
иммунным реакциям
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
1. Главный комплекс гистосовместимости – МНС. CD- антигены.
2. Особенности трансплантационного и противоопухолевого иммунитета.
3. Особенности противогрибкового и противопаразитарного иммунитета.
4. Реакция связывания комплемента: компоненты, механизм, постановка,
применение.
5. Реакции иммобилизации и иммунного прилипания. Механизм, постановка
и применение РИБТ и РНБТ.
6. Реакция нейтрализации токсина антитоксинами: компоненты, механизм,
постановка, применение.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Поставить реакцию Асколи для выявления сибиреязвенного антигена,
оценить результат, дать заключение.
2. Дать заключение по определению токсигенности дифтерийной палочки
(готовая демонстрация). Зарисовать.
3. Разобрать и записать схему постановки реакции Манчини и зарисовать
результаты.
4. Записать схему постановки и определить силу анатоксина в реакции
флоккуляции (РФ).
5. Записать компоненты и механизм реакции связывания комплемента.
Учесть результат и сделать вывод при постановке РСК на определение
антител в сыворотке больного.
6. Оценить реакцию нейтрализации на белых мышах в диагностике ботулизма
(по таблице).
7. Изучить и записать иммунопрепараты по теме занятия.
8. Защита протокола.
9. Уборка рабочего места.
21
Основные понятия по теме
Главный комплекс гистосовместимости- МНС или HLA
Антигены МНС 1 классаАнтигены МНС 2 классаАнтигены МНС 3 классаЗначение :
Особенности различных видов иммунитета:
иммунитет
Антибактериальный
гуморальные факторы
Антитоксический
Трансплантационный
Противоопухолевый
Противогрибковый
Противопаразитарный
22
клеточные факторы
Реакция преципитации (РП) –
варианты РП
применение
В пробирках:
В геле:
Работа №1: реакция Асколи при выявлении сибиреязвенного антигена
Компоненты: 1.___________________________________________________
2.___________________________________________________
Учет через________________
Результат:
Заключение:
Работа №2: определение токсигенности дифтерийной палочки
реакцией преципитации в геле
Компоненты: 1.__________________________2___________________________
3.__________________________________
Учет _______________
Результат:
Заключение:
23
Работа №3: реакция преципитации в геле для определения уровня
иммуноглобулинов - метод радиальной иммунодиффузии Манчини
Компоненты: 1._____________________________________________________
2._____________________________________________________
3._____________________________________________________
Результат:
Заключение:
Работа № 4: реакция флоккуляции (РФ) для определения
силы анатоксина
Компоненты: 1. ________________________2._____________________________
Учет через __________________________
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
Инициальная флоккуляция (ИФ) –
Расчет силы анатоксина:
Заключение:
24
0,7
0,8
0,9
1,0
Работа №5: реакция связывания комплемента (РСК)
при определении антител в сыворотке больного
Компоненты: 1 система –
2 система –
Условия постановки
Схема РСК:
АГ
АТ
С
ЭБ
РСК (+)
ГС
РСК ( - )
Механизм: ________________________________________________________
1/10
1/20
1/40
1/80
1/160
1/320
КС
КД
КЭ
Титр АТ в РСК - ____________________________________________________
Результат: Титр АТ =
Заключение:
ДТ=
Реакция иммобилизации (РИБТ )______________________________________
и реакция иммунного прилипания (РНБТ )_______________________________
Назначение:
Компоненты:
Механизм:
опыт
контроль
Учет:
25
Работа №6: реакция нейтрализации in vivo на белых мышах
при диагностике ботулизма
Назначение:
Компоненты:
Механизм1 мышь
2 мышь
3 мышь
4 мышь
Тип сыворотки
Результат
РН
Заключение:
Реакция нейтрализации токсина антитоксинами in vivo используется также
для выявления антитоксического иммунитета – постановка внутрикожных
проб при дифтерии (Шика) и скарлатине (Дика).
ПостановкаУчет Механизм-________________________________________________________
Результат: проба (+)_____________________проба(-)_____________________
Заключение:
Работа №7: иммунопрепараты по теме занятия
1. сыворотки преципитирующие
2. сыворотки монорецепторные против иммуноглобулинов (G,M,A) человека
3. сыворотка противодифтерийная антитоксическая
4. видовые диагностикумы
5. комплемент
6. гемолитическая сыворотка
7.
сыворотки противоботулинические типовые
8. токсин Шика и Дика
Подпись преподавателя___________________
26
Дополнительная информация
27
Вопросы для самоконтроля:
1.
Антигены главного комплекса гистосовместимости (МНС).
2.
Что представляют собой HLA антигены?
3. Особенности антигенов HLA I,II и III классов.
4. За что отвечают антигены МНС человека?
5. На каких клетках присутствуют маркеры HLA II класса?
6. В ассоциации с какими рецепторами распознают антиген Т-лимфоциты?
7. Чем обусловлен трансплантационный иммунитет?
8. Формы иммунного ответа клеточного характера.
9. Механизм иммунного фагоцитоза.
10. Клетки, обладающие киллерной способностью.
11. Механизм антителозависимой цитотоксичности.
12. Особенности иммунитета при бактериальных инфекциях.
13. Основные участники антибактериальной защиты.
14. Какими факторами обусловлен противогрибковый иммунитет?
15. Особенности противопаразитарного иммунитета.
16. Механизм противоопухолевого иммунитета.
17. Чем обусловлен противоопухолевый иммунитет?
18. Реакция флоккуляции используется для определения:
19. Понятие и механизм реакции преципитации.
20. Варианты постановки РП
21. Необходимые условия постановки РП.
22. В основе каких реакций лежит РП?
23. Примеры реакции преципитации в геле.
24. Особенности реакции Манчини.
25. К какому типу реакций относится реакция Манчини?
26. Цель применения и компоненты реакции Асколи.
27. Механизм и применение реакции флоккуляции.
28. Особенности постановки реакции флоккуляции.
29. Компоненты и учет реакции нейтрализации на лабораторных животных.
30. Применение РН на лабораторных животных.
31. Какими реакциями можно выявить бактериальный экзотоксин?
32. Как определить токсигенность чистой культуры бактерий?
33. Для чего используют реакции нейтрализации in vivo?
34. Варианты учета внутрикожных проб с бактериальными токсинами.
35. Механизм реакции связывания комплемента.
36. Специфическая и индикаторная системы в РСК.
37. Особенности постановки РСК.
38. Требования к компонентам для РСК.
39. Возможные видимые результаты РСК.
40. Применение РСК.
28
Лабораторное занятие №15
Тема: АЛЛЕРГИЯ. ИММУНОДЕФИЦИТЫ. ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ.
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ (ИФА), ИММУНОБЛОТИНГ.
ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ
ИНФЕКЦИЙ. ОЦЕНКА ИММУННОГО СТАТУСА ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА
Цель: изучить принцип постановки и учета результатов изучаемых реакций.
Ознакомиться с методами оценки иммунного статуса человека
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
1. Классификация гиперчувствительности по Джейлу и Кумбсу.
2. Гиперчувствительность немедленного типа. Механизмы возникновения,
клиническое значение. Анафилактический шок и сывороточная болезнь,
их предупреждение.
3. Гиперчувствительность замедленного типа, ее диагностическое значение
4. Аллергические пробы, их сущность, применение.
5. Первичные и вторичные иммунодефициты, причины их возникновения,
примеры.
6. Понятие об иммуномодуляторах, принцип их действия и применения.
7. Иммуноферментный анализ (ИФА): компоненты, механизм, постановка,
применение. Иммуноблотинг.
8. Понятие о клинической иммунологии. Иммунный статус организма
человека и факторы, влияющие на него. Основные методы оценки
иммунного статуса.
9. Антигены вирусов. Особенности противовирусного иммунитета.
10. Серологические реакции, используемые в вирусологии: реакция
торможения гемагглютинации (РТГА), реакция нейтрализации по типу
«цветной пробы» (РН на культуре клеток) и др. Компоненты реакций,
механизм постановки, применение.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Разобрать постановку и учет результатов кожно-аллергических проб (КАП)
с инфекционными аллергенами.
Учесть готовый результат ИФА на определение антител в парных
сыворотках. Зарисовать и дать заключение.
Записать схему постановки и оценку реакций розеткообразования (Е-РОК,
ЕАС-РОК) и бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ).
Изучить и записать методику оценки иммунного статуса человека,
нормальные показатели иммунного статуса.
Поставить на стекле реакцию торможения гемагглютинации (РТГА) для
определения типа вируса гриппа (идентификация вируса).
Учесть результат РТГА в парных сыворотках на определение антител при
серодиагностике гриппа, зарисовать, дать заключение.
Оценить готовый результат реакции нейтрализации -РН « цветная проба»
при идентификации вируса, зарисовать.
29
8.
Разобрать и записать постановку и учет РН «цветная проба» на
определение антител при серодиагностике вирусных инфекций.
9. Описать иммунные препараты по теме занятия.
10. Уборка рабочего места.
11. Отчет по протоколу.
Основные понятия по теме
АллергияГНТГЗТ Фазы аллергических реакций:
1.2. –
3. Типы аллергических реакций
тип
Клинические проявления
1.
II.
III.
IV.
V.
Методы предупреждения:
1.анафилактического шока –
2. поллинозов3. сывороточной болезни-
4. контактной аллергии –
30
Работа №1: кожно-аллергические пробы (КАП)
с инфекционными аллергенами
Компоненты:
Постановка
Учет _____________________
Механизм: ________________________________________________________
_________________________________________________________________
КАП (+)___________________________ КАП ( -) _________________________
Заключение:
Применение:
Иммунопатологические состояния:
состояния
первичные
иммунодефициты
Механизм
проявления
вторичные
иммунодефициты
аутоиммунные
процессы
иммунопролиферативные процессы
31
Иммуномодуляторы:
Физические
химические
биологические
Иммуностимуляторы
(цель назначения)
Иммунодепрессанты
(цель назначения)
Реакции с использованием меченых антител (реже антигенов)
название реакции
РИФ –
Метка
ИФА –
РИА -
32
выявление метки
Иммуноферментный анализ (ИФА)- сэндвич-метод
Компоненты:
Постановка:
Механизм: _______________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
ИФА (+)________________________ ИФА (-) ___________________________
Работа №2: иммуноферментный анализ (ИФА)
для определения антител в парных сыворотках
Компоненты:
1 сыв
2 сыв
1/40
1/80
1/160 1/320 1/640 1/1280 . . . . . .
КС
КД
Титр АТ в ИФА ____________________________________________________
Результат:
Заключение:
На основе ИФА используется реакции иммуноблотинга.
Особенности реакции_______________________________________________
__________________________________________________________________
Применение________________________________________________________
Результат:
33
Работа №3: реакции розеткообразования (Е-РОК, ЕАС-РОК)
и бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ)
Количество Т-и В-лимфоцитов определяют в реакциях розеткообразования
Для Т-лимфоцитов – Е-РОК :к лимфоцитам добавляют _________________,
Инкубируют __________, готовят мазки и красят_________________________
для В лимфоцитов – ЕАС-РОК :к лимфоцитам добавляют _________________
инкубируют __________, готовят мазки и красят_________________________
В световом микроскопе подсчитывают количество «розеток», образуемых
Т- и В-лимфоцитами.
«розетка» -
Функциональную способность лимфоцитов оценивают по способности переходить в бластные клетки под влиянием неспецифических митогеновреакция бласттрансформации лимфоцитов-РБТЛ.
Для Т-лимфоцитов митогеном является ____________________________
Дл В-лимфоцитов -______________________________________________
К лимфоцитам добавляют митогены, инкубируют_____________________
Готовят мазки, красят по __________________________________________
При световой микроскопии подсчитывают % бластных клеток к количеству малых лимфоцитов.
В норме под действием митогена в бласты должны перейти _______% клеток.
Работа №4: оценка иммунного статуса человека
и иммунограмма здорового человека
Иммунный статус организма -________________________________________
__________________________________________________________________
Схема оценки иммунного статуса организма:
34
Иммунограмма
показатель
единицы измерения
норма
Серологические реакции в вирусологии применяются для:
1. определения возбудителя _________________________________________
2. определения антител______________________________________________
При диагностике вирусных инфекций всегда используются парные сыворотки,
взятые с 2-недельным интервалом, чтобы выявить нарастание уровня антител.
Диагностическим считается увеличение уровня антител в 4 и более раз.
Примеры серологических реакций:
Нейтрализации
выявление иммунного комплекса
35
Работа №5: реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
для идентификации вируса гриппа
Компоненты: 1______________________________
2.________________________________________3_______________________
Постановка:
Механизм: ________________________________________________________
__________________________________________________________________
РТГА (+) ___________________________РТГА (-) ________________________
А1
А2
В
Результат:
Заключение:
Работа №6: РТГА в парных сыворотках на определение антител
при серодиагностике гриппа
Компоненты:1.______________________
2. _____________________________3__________________________________
Постановка:
Механизм: ________________________________________________________
__________________________________________________________________
РТГА (+) _____________________________РТГА (-) ______________________
Титр АТ в РТГА ____________________________________________________
1сыв
2 сыв
1/10
1/20
1/40
1/80
1/160
1/320
1/640
КС
КД
КЭ
Результат: в 1 сыв.Титр АТ=__________, во 2 сыв.Титр АТ =________________
___________________________________________________________________
Заключение:
36
Работа №7: реакция нейтрализации по типу «цветной пробы»
при идентификации вируса полиомиелита
Компоненты: 1._________________________________
2______________________________________3 ___________________________
4______________________________________
Постановка:
Механизм: _________________________________ ________________________
___________________________________________________________________
РН «ЦП» (+) ______________________РН «ЦП» (-)_________________________
I типа
II типа
III типа
Результат:
Заключение:
Работа №8: реакция нейтрализации по типу «цветной пробы»
на определение антител при серодиагностике полиомиелита
Компоненты: 1.____________________________
2______________________________________3________________________
4______________________________________
Постановка:
Механизм: __________________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
РН «ЦП» (+) ______________________РН «ЦП» (-)_________________________
Титр АТ в РН «ЦП» ___________________________________________________
Заключение:
Работа №9: иммунопрепараты по изучаемой теме
1. аллергены инфекционные
2. АГС, меченная пероксидазой
3. вирусные диагностикумы
4. противовирусные сыворотки
Подпись преподавателя________________
37
Дополнительная информация
38
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
34.
35.
36.
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43.
44.
45.
46.
Вопросы для самоконтроля
Понятие аллергии.
Механизм аллергических реакций I типа.
Основные стадии развития аллергических реакций.
Патологические процессы, связанные с реакциями ГНТ.
Чем обусловлены реакции анафилактического типа?
Какие клетки участвуют в развитии реакций анафилактического типа?
Механизм аллергических реакций замедленного типа.
Какие клетки участвуют в развитии ГЗТ?
Патологические процессы, обусловленные ГЗТ:
Механизмы, лежащие в основе лекарственной аллергии.
Механизмы, лежащие в основе сывороточной болезни.
Особенности атопических реакций.
Десенсибилизация: понятие, цель и методика проведения.
Механизм аллергических реакций III типа.
Болезни иммунных комплексов.
Какие классы антител участвуют в развитии реакций I,II, III типов?
Кожно-аллергические пробы (КАП), механизм, применение.
О чем свидетельствует (+) кожно-аллергическая проба?
Аллергены, виды, применение.
Иммунопатологические состояния.
Причины аутоиммунных расстройств.
В основе каких заболеваний лежат аутоиммунные процессы?
Иммунодефициты, понятие, классификация.
Причины развития первичных иммунодефицитов.
Цель иммунокоррекции.
Виды иммуностимуляторов, их применение.
Иммунодепрессанты, механизм действия, виды, применение.
Понятие иммунного статуса, методы его оценки.
Какие показатели изучают при оценке иммунного статуса?
Какие неспецифические факторы изучают при оценке иммунного статуса?
Иммунные тесты I и II уровней.
К какому типу патологии относится синдром Ди-Джоржди?
Основные проявления врожденного Т-клеточного иммунодефицита.
Основные отличия вторичных иммунодефицитов от первичных.
Причины развития вторичных иммунодефицитов.
Какими реакциями оценивают клеточный иммунитет?
Механизм постановки и применение РБТЛ.
Что используют в РБТЛ для оценки Т- и В-звеньев иммунитета?
Е-РОК и ЕАС-РОК, механизм постановки, применение.
Современные методы количественной оценки Т- и В-лимфоцитов.
Как определяется индекс реактивности иммунитета (ИРИ), о чем говорит?
Твердофазные методы, особенности постановки.
Иммуноферментный анализ (ИФА), особенности постановки.
Компоненты ИФА, выявляющая система.
Применение ИФА.
Особенности постановки иммуноблотинга, применение.
39
47.
48.
49.
50.
51.
52.
53.
54.
55.
56.
57.
58.
59.
60.
Серологические реакции, применяемые в вирусологии.
Особенности определения уровня антител при вирусных инфекциях.
Реакции, основанные на нейтрализации вируса.
Вирусологические реакции, на выявления комплекса АГ+АТ.
К какому типу иммунных реакций относится РТГА?
Компоненты РТГА для определения вируса и для определения антител.
Особенности постановки РТГА для идентификации вируса.
Особенности постановки РТГА для определения антител.
Положительный результат в РТГА при определении антител.
Особенности постановки реакции нейтрализации « цветной проба».
Компоненты реакции нейтрализации « цветной проба».
Механизм РН «цветная проба».
Положительный результат в реакции нейтрализации « цветной проба».
Применение реакции нейтрализации « цветной проба».
Лабораторное занятие № 16
Тема: ИММУНОПРЕПАРАТЫ
Цель: изучить принципы приготовления и применения иммунопрепаратов
различных групп
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
Вакцины: определение, классификация, применение.
Живые вакцины: получение, применение, достоинства и недостатки.
Инактивированные (корпускулярные) вакцины: получение, применение, достоинства и недостатки.
4. Субклеточные и субъединичные (химические) вакцины: получение,
применение, достоинства и недостатки. Роль адъювантов. Генноинженерные вакцины, ассоциированные (комбинированные) вакцинные
препараты. Достоинства.
5. Анатоксины: получение, очистка, титрование, применение.
6. Антитоксические сыворотки: получение, титрование, применение.
Осложнения при использовании, методы предупреждения. Г. Габричевский.
7. Препараты иммуноглобулинов: виды, получение, очистка. Применение.
8. Агглютинирующие сыворотки, их виды, получение, применение.
9. Моноклональные антитела, их получение и применение.
10. Диагностикумы, их виды, получение и применение.
11. Препараты, препятствующие размножению возбудителя: фаги,
интерфероны, пробиотики.
1.
2.
3.
40
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Оформить классификацию вакцин.
2. Записать календарь профилактических прививок.
3. Из культуры стафилококков приготовить убитую вакцину.
Записать правила приготовления и применения аутовакцин.
4. Описать иммунопрепараты из различных групп, знать методы их
приготовления, состав, применение.
5. Уборка рабочего места.
6. Отчет по протоколу.
Основные понятии по теме
Иммунные препараты по назначению делят на группы:
1. для создания активного иммунитета –
2. для создания пассивного иммунитета3. для подавления размножения возбудителя в организме4. для диагностики заболеваний Вакцины –
Характеристика вакцин
виды вакцин
Аттенуировнные
Достоинства
Инактивированные
Субъединичные
(химические)
Молекулярные
Генно-инженерные
Ассоциированные
41
недостатки
Работа № 1: классификация вакцин
Бактериальные
Вирусные
1. Аттенуированные (живые)
2. Инактивированные
Профилактические
Лечебные:
Субъединичные (химические)
4. Молекулярные (анатоксины)
5. Генно-инженерные (рекомбинанные)
6. Ассоциированные
42
Профилактика заболеваний – это ______________________________________
Виды профилактики
профилактика
когда проводится
контингент
препараты
Прививки или вакцинация поводятся для
_________________________________
___________________________________________________________________
_
Работа №2: Календарь профилактических прививок
приказ от 27.06.2001 № 229
Возраст
против
инфекции
Вакцины
кратность
введения
сроки
ревакцинации
Работа №3: приготовление убитой вакцины
Используют штамм стафилококка _____________________________________
Этапы приготовления:
1.посев на __________________________________________________________
2. проверка _________________________________________________________
3. приготовление ____________________________________________________
4.инактивация ______________________________________________________
5. контроль ________________________________________________________
6.стандартизация ___________________________________________________
7. применение ______________________________________________________
43
Работа №4: состав, получение и применение
других иммунопрепаратов
Анатоксины –
Схема получения:
очистка___________________, титрование_______________________________
сорбирование____________________
Проверка на
_________________________________________________________
Применение:
Антитоксические сывороткиСхема получения
Очистка_______________________титрование___________________________
Сорбирование_____________________
Проверка на ________________________________________________________
Применение:
Примеры:
Осложнения
Предупреждение осложнений__________________________________________
___________________________________________________________________
Метод Безредки:
Гамма-глобулины –
По получению:
По составу:
По назначению:
Получение иммуноглобулинов –
Очистка_____________________________________________________________
Примеры:
Антибактериальные –
Противовирусные –
Моноклональные антитела МКА –
Получение –
Применение –
Преимущества –
44
Диагностические сыворотки (агглютинирующие, преципитирующие, меченные и др.) –
Получение
Применение
Гемолитическая сыворотка
Получение
Применение
Диагностические препараты
препарат
Диагностические сыворотки:
1.агглют.поливалентные
2.агглют. типовые
3. преципитирующие сыворотки
4.монорецепт.против Ig G человека
5. АГС
6. видовая, меченная ФИТЦ
7. АГС, меченная ФИТЦ
8. АГС, меченная пероксидазой
9. гемолитическая
10. антитоксические
11. противовирусные
для выявления
реакция
Диагностикумы:
1.поливалентный (единый)
2. видовые
3. эритроцитарный видовой
4. вирусный
5.
Комплемент
Фаги видовые
типовые
Токсины Дика и Шика
Аллергены бактерий
Подпись преподавателя___________________
45
Дополнительная информация
46
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
34.
35.
36.
37.
38.
39.
40.
Вопросы для самоконтроля
Препараты для создания активного иммунитета.
Препараты для создания пассивного иммунитета.
Препараты для определения возбудителя.
Препараты для определения антител.
Иммунобиологические препараты, вызывающие гибель возбудителя.
Принципы классификации вакцин.
Достоинства и недостатки аттенуированных вакцин.
Методы аттенуации возбудителя.
Примеры аттенуированных вакцин.
Достоинства и недостатки убитых вакцин.
Методы инактивации возбулителя при получении вакцин.
В каких вакцинах использованы дивергентные штаммы возбудителей?
Отличия аттенуированных вакцин от инактивированных?
Применение живых вакцин.
Применение убитых вакцин.
Получение рекомбинантных вакцин.
Примеры рекомбинантных вакцин.
Анатоксины: понятие, методы получения.
Необходимые условия для получения анатоксина.
Против каких инфекций можно получить анатоксины?
Примеры анатоксинов.
Применение анатоксинов.
Какой иммунитет формируется после введения анатоксинов?
Достоинства и недостатки ассоциированных вакцин.
Виды ассоциированных вакцин.
Получение диагностических сывороток.
Виды диагностических сывороток.
Меченные сыворотки, их виды, применение.
Антиглобулиновые сыворотки, виды, получение применение.
Монорецепторные сыворотки против глобулинов человека:
получение, применение.
Гемолитическая сыворотка: получение, применение.
Получение лечебных сывороток.
Виды лечебных сывороток.
Моноклональные антитела, особенности, получение.
Какой иммунитет создают лечебные сыворотки?
Виды иммуноглобулинов.
Получение и применение гомологичных иммуноглобулинов.
Диагностикумы: виды, состав, применение.
Состав и применение аллергенов.
Применение пробиотиков, механизм действия.
47
Лабораторное занятие № 17
Тема: КОЛЛОКВИУМ ПО РАЗДЕЛУ « ИНФЕКЦИЯ. ИММУНИТЕТ»
Цель: оценить степень усвоения теоретического материала и практических
навыков по теме: «Инфекция и иммунитет»
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ: смотри вопросы занятий №№ 12-16
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Ответить на 20 вопросов по теме.
2. Самостоятельно поставить и оценить одну из перечисленных реакций
иммунитета: агглютинации (РА) на стекле, р. Асколи, РТГА на стекле.
3. Дать заключение по готовым демонстрациям:
- развернутая реакция агглютинации (РА) для определения неизвестного
микроба и определения антител;
- реакция преципитации (РП) на определение токсигенности культур,
р. Манчини ,
- реакция флоккуляции для определения силы анатоксина,
- реакция связывания комплемента (РСК) на определение антител ,
- реакция торможения гемагглютинации (РТГА) на определение антител в
парных сыворотках,
- реакция нейтрализации (РН) по типу « цветной пробы» при
дентификации вируса,
- реакция нейтрализации токсина РН на белых мышах для определения токсина.
4. Охарактеризовать состав, получение и применение 1-2 иммунопрепаратов.
48
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА:
1. Борисов, Л.Б.Медицинская микробиология, вирусология, иммунология:
учебник / Л.Б.Борисов. - М.: ООО «Медицинское информационное агентство»,
2002. -736 с.
2. Вирусология: в 3-х т. /под ред Б. Филда, Д.Найна. – М.: Мир, 1989.
3. Клиническая иммунология и аллергология: учеб.пособие / Под ред.
А.В.Караулова – М.: Медицинское информационное агентство,
2002. – 651 с.
4. Медицинская микробиология / под ред. В.И.Покровского, О.К.Поздеева. М.:ГОЭТАР МЕДИЦИНА, 1999.-1200 с.
5.
Медицинская микробиология: учеб. пособие / под. ред. А.М.Королюка
и В.Б.Сбойчакова. - СПб.,1999. - 272 с.
6.
Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учебник.
/ под ред Л.Б.Борисова, А.М.Смирновой. - М.: Медицина, 1994. - 528с.
7.
Микробиология: учебник. / А..А.Воробьев [и др.]; под ред. А..А.Воробьева. М.:Медицина, 1998. - 336 с.
8.
Петров Р.В.Иммунология /Р.В.Петров.-М.:Медицина,1982. -368 с.
9.
Плейфер Дж. Наглядная иммунология: пер. с анг. /Дж.Плейфер. –
М.:ГЭОТАР МЕДИЦИНА,1999.- 96 с.
10. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии,
вирусологии, иммунологии / под ред. Л.Б.Борисова. - М.:Медицина,
1993.-240 с.
11. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам
исследования / под. ред. М.О.Биргера. - М.:Медицина, 1982. - 462 с.
49
СОДЕРЖАНИЕ
Стр.
12.
Лабораторное занятие №12: Инфекция. Неспецифические
факторы защиты организма. Понятие и виды иммунитета. . . . . . . . . . . 3
12.1. Работа №1: Методика заражения и вскрытия лабораторного
животного. . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . . .7
12.2. Работа №2: Микроскопия мазков с незавершенным фагоцитозом. . . . . . 8
12.3. Работа № 3: Капсульные микроорганизмы в мазках-отпечатках
из органов . . . ….. . .. . . . . . . … .………………………………………. . . . . . .8
12.4. Работа № 4: Определение лизоцима в биологических жидкостях
методом титрования . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
12.5. Вопросы для самоконтроля. . . .. . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . .. . 10
13.
Лабораторное занятие №13: Иммунитет: антигены и антитела.
Иммунокомпетентные клетки, регуляция иммунного ответа.
Реакция агглютинации (РА) и ее модификации . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
13.1. Работа № 1: Реакция агглютинации (РА) на стекле для определения
неизвестной культуры . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
13.2 Работа №2: Развернутая реакция агглютинации (РА) при
определении неизвестной культуры . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . 15
13.3. Работа № 3: Реакция агглютинации (РА) при определении антител . . ..15
13.4. Работа № 4: Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) при
серодиагностике инфекций . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 16
13.5. Работа № 5: Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
в диагностике различных заболеваний . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . 17
13.6. Работа № 6: Реакция Кумбса на выявление неполных антител. . . . . . ...17
13.7. Работа № 7: Диагностические препараты, используемые для
постановки изучаемых реакций. . . .. . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . 17
13.8. Вопросы для самоконтроля . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
Лабораторное занятие № 14: Иммунный ответ при различных
инфекциях и состояниях. Реакции иммунитета: преципитации (РП),
с участием комплемента - связывания комплемента (РСК),
иммобилизации и иммунного прилипания; реакции нейтрализации
токсинов (РН) in vivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …21
14.1. Работа №1: Реакция Асколи при выявлении сибиреязвенного
антигена . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …23
14.2 Работа №2: Определение токсигенности дифтерийной палочки
реакцией преципитации в геле . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..23
14.3. Работа №3: Реакция радиальной преципитации в геле для
определения уровня иммуноглобулинов - реакции Манчини . . . . . . . . …24
14.4. Работа № 4: Реакция флоккуляции (РФ) для определения
силы анатоксина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … . .24
14.5. Работа №5: Реакция связывания комплемента (РСК) при
определении антител в сыворотке больного. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
14.
50
14.6. Работа №6: Реакция нейтрализации in vivo на белых мышах
при диагностике ботулизма … . . . . . . .. . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
14.7. Работа № 7: Диагностические препараты, используемые для
постановки изучаемых реакций. . . .. . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . .. . . . ..26
14.8. Вопросы для самоконтроля . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28
15.
Лабораторное занятие №15: Аллергия. Иммунодефициты.
Иммуномодуляторы. Иммуноферментный анализ (ИФА),
иммуноблотинг. Иммунные реакции, используемые в диагностике
вирусных инфекций. Оценка иммунного статуса организма . . . . . . . . ..29
15.1. Работа №1: Кожно-аллергические пробы (КАП) с инфекционными
аллергенами . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31
15.2. Работа №2: Иммуноферментный анализ (ИФА) для определения
антител в парных сыворотках. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
15.3. Работа №3: Реакции розеткообразования (Е-РОК, ЕАС-РОК)
и бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ). . . . . . . . . . . . . . . . . ..34
15.4. Работа №4: Оценка иммунного статуса человека
и иммунограмма здорового человека. . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34
15.5. Работа №5: Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
для идентификации вируса гриппа . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …36
15.6. Работа №6: РТГА в парных сыворотках на определение антител
при серодиагностике гриппа . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .. . . . . . . . . . . . . .36
15.7. Работа №7: Реакция нейтрализации по типу «цветной пробы»
при идентификации вируса полиомиелита . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
15.8. Работа №8: Реакция нейтрализации по типу «цветной пробы»
на определение антител при серодиагностике полиомиелита . . . . . . . 37
15.9. Работа №9: Диагностические препараты, используемые для
постановки изучаемых реакций. . . .. . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . .. . . . ..37
15.10.Вопросы для самоконтроля . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .39
Лабораторное занятие № 16: Иммунопрепараты. . . . . .. . . . . . . . ..40
Работа № 1: Классификация вакцин. . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . 42
Работа №2: Календарь профилактических прививок . . . . . . . . . . . . . 43
Работа №3: Приготовление убитой вакцины . . . . . . . . . . . . . .. . . . .. 43
Работа №4: Состав, получение и применение других
групп иммунопрепаратов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
16.5. Вопросы для самоконтроля . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47
16.
16.1.
16.2.
16.3.
16.4.
17.
Лабораторное занятие № 17: Коллоквиум по разделу
«Инфекция. Иммунитет». . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48
Рекомендуемая литература. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49
51
52