official eppo translations of international

EUROPEAN AND MEDITERRANEAN PLANT PROTECTION ORGANIZATION
ORGANISATION EUROPEENNE ET MEDITERRANEENNE POUR LA PROTECTION DES PLANTES
ЕВРОПЕЙСКАЯ И СРЕДИЗЕМНОМОРСКАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПО КАРАНТИНУ И ЗАЩИТЕ РАСТЕНИЙ
12/17949
Translation № 74
Перевод № 74
OFFICIAL EPPO TRANSLATIONS OF
INTERNATIONAL PHYTOSANITARY TEXTS
TRADUCTIONS OFFICIELLES DES TEXTES
PHYTOSANITAIRES INTERNATIONAUX
ОФИЦИАЛЬНЫЕ ПЕРЕВОДЫ ЕОКЗР
МЕЖДУНАРОДНЫХ ФИТОСАНИТАРНЫХ ТЕКСТОВ
REGIONAL STANDARDS FOR PHYTOSANITARY MEASURES
EPPO STANDARD PM 7/98 (1)
SPECIFIC REQUIREMENTS FOR LABORATORIES PREPARING
ACCREDITATION FOR PLANT PEST DIAGNOSTIC ACTIVITY
NORMES REGIONALES POUR LES MESURES PHYTOSANITAIRES
NORME DE L’OEPP PM 7/98 (1)
EXIGENCES SPECIFIQUES POUR LES LABORATOIRES SE PREPARANT
A L'ACCREDITATION POUR UNE ACTIVITE DE DIAGNOSTIC
PHYTOSANITAIRE
РЕГИОНАЛЬНЫЕ СТАНДАРТЫ ПО ФИТОСАНИТАРНЫМ МЕРАМ
СТАНДАРТ ЕОКЗР PM 7/98 (1)
СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ К ЛАБОРАТОРИЯМ, ВЕДУЩИМ
ПОДГОТОВКУ К АККРЕДИТАЦИИ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ В СФЕРЕ
ДИАГНОСТИКИ ВРЕДНЫХ ДЛЯ РАСТЕНИЙ ОРГАНИЗМОВ
(Russian text / Texte en russe / Текст на русском языке)
2012 – 06
OEPP/EPPO
21 Boulevard Richard Lenoir
75011 PARIS

Стандарты EОКЗР

ФИТОСАНИТАРНЫЕ ПРОЦЕ ДУРЫ
СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ К ЛАБОРАТОРИЯМ,
ВЕДУЩИМ ПОДГОТОВКУ К АККРЕДИТАЦИИ
ДЕЯТЕЛЬНОСТИ В СФЕРЕ ДИАГНОСТИКИ ВРЕДНЫХ
ДЛЯ РАСТЕНИЙ ОРГАНИЗМОВ
PM 7/98 (1)
oepp
eppo
Европейская и Средиземноморская организация по карантину и защите растений
Франция, 75011, Париж, бульвар Ришар Ленуар, 21
Сентябрь, 2009 года
2
Серия РМ 7 – Диагностические протоколы для регулируемых вредных
организмов / Diagnostic protocols for regulated pests /
Protocoles de diagnostic pour les organismes réglementés
РМ 7/98 (1)
Европейская и Средиземноморская организация по карантину и защите растений
European and Mediterranean Plant Protection Organization
Organisation Européenne et Méditerranénne pour la Protection des Plantes
Специфические требования к лабораториям, ведущим подготовку к аккредитации
деятельности в сфере диагностики вредных для растений организмов1 / Specific
requirements for laboratories preparing accreditation for a plant pest diagnostic activity /
Exigences spécifiques pour les laboratoires se préparant à l'accréditation pour une activité de
diagnostic phytosanitaire
Особая сфера применения
Настоящее руководство содержит специфические требования к управлению качеством
для лабораторий, ведущих подготовку к аккредитации в соответствии со Стандартом ISO/IEC
17025 «Общие требования к компетенции испытательных и калибровочных лабораторий»
(приводятся ссылки на соответствующие пункты Стандарта ISO/IEC 17025). Следует
отметить, что в стандартах ЕОКЗР глагол «следует» обозначает наивысшую степень
долженствования.
Утверждение и пересмотр
Настоящий стандарт впервые утверждѐн в сентябре 2009 года.
1. Введение
Разработка систем управления качеством (которые также упоминаются как системы
управления или системы качества) и аккредитация стали проблемными вопросами для
многих лабораторий в регионе ЕОКЗР. Стандарт PM 7/84 «Основные требования к
управлению качеством в лабораториях по диагностике вредных для растений организмов»
был утвержден в 2007 году. В Стандарте PM 7/84 описываются основные требования с целью
оказания помощи лабораториям, проводящим диагностику вредных для растений
организмов, в создании системы управления качеством. В настоящем новом стандарте
описываются дополнительные требования для лабораторий, подающих заявку на
аккредитацию. Он основывается на Стандарте ISO/IEC 17025 «Общие требования к
компетенции исследовательских и калибровочных лабораторий», и его следует использовать
вместе со Стандартом PM 7/84. Как правило, лаборатории подают заявку только на
Аккредитация в сфере диагностики вредных для растений организмов – это новая развивающаяся
сфера, поэтому настоящий стандарт пересматривается начиная с 2011 года с учѐтом опыта его
использования в лабораториях до этого срока.
1
3
аккредитацию проведения диагностики наиболее значимых для них вредных организмов, а не
всех вредных организмов, диагностику которых они могут проводить.
Аккредитация на соответствие Стандарту ISO/IEC 17025 проводится национальными
органами по аккредитации. Важно, чтобы лаборатории разработали эффективные процедуры
осуществления коммуникации и установили постоянный контакт со своим национальным
органом по аккредитации на время всего процесса.
Настоящий документ касается качества диагностики, а вопросы здоровья и
безопасности особым образом в нѐм не рассматриваются. Однако деятельность лаборатории
должна соответствовать национальным регламентациям в области здоровья и безопасности.
2. Сфера применения аккредитации: фиксированная и гибкая
Исторически сложилось так, что аккредитация лабораторий, как правило, основывается
на фиксированной сфере применения, которая чѐтко и однозначно определяет серию тестов,
на которые распространяется аккредитация (например, иммунофлюоресцентный анализ на
выявление Ralstonia solanacearum в клубнях картофеля). Однако это не позволяет с
легкостью добавлять новые или модифицированные тесты в сферу деятельности лаборатории
даже в том случае, если компетентность лаборатории в проведении и валидации сходных
тестов уже была оценена органом по аккредитации. Несмотря на то, что заявки на
расширение сферы деятельности можно подавать в любое время, сроки проведения
аккредитации в действительности могут помешать быстрому реагированию на требования
клиента. Вследствие этого была разработана концепция гибкой сферы применения
аккредитации.
Гибкая сфера применения аккредитации позволяет лаборатории выполнять
определѐнные тесты и сообщать о результатах, как об аккредитованных, даже в том случае,
если эти тесты чѐтко не указаны в сфере деятельности лаборатории («Требования к
аккредитации с гибкой сферой применения» EA-2/15, 2008). Примерами ситуаций, когда
может возникнуть необходимость в гибкой сфере применения аккредитации, являются
нижеследующие:
 оптимизация исходного теста;
 модификация существующего теста с целью расширения области его применения
(например, для работы с новыми природными субстратами);
 включение теста, эквивалентного уже аккредитованному.
Концепция гибкой сферы применения аккредитации предполагает такую степень
гибкости, которая, как правило, согласовывается с органом по аккредитации. Тем не менее,
следует отметить, что эта степень гибкости по-разному интерпретируется на национальном
уровне. В настоящее время опыт фитосанитарных лабораторий показывает, что при гибкой
сфере применения аккредитации лаборатория несѐт больше ответственности за
подтверждение надѐжности и достоверности тестов, их соответствия обстоятельствам
использования и подтверждение того, что они проводятся компетентно и единообразно. Если
лаборатория принимает решение заявить, что тест аккредитован, а проведѐнный
впоследствии аудит выявляет проблемы с используемыми процедурами, результаты тестов
могут быть недостоверными, и может возникнуть необходимость в отмене всех выданных
результатов диагностики. Поэтому настоятельно рекомендуется наработать опыт с
фиксированной сферой применения аккредитации перед тем, как лаборатория подаст заявку
на аккредитацию с гибкой сферой применения, поскольку в обоих случаях должны
4
выполняться все требования Стандарта ISO/IEC 17025. Однако лаборатория уже может быть
аккредитована на выполнение другой деятельности отличной от диагностики вредных для
растений организмов. Опыт с фиксированной сферой применения аккредитации в
выполнении другой деятельности может быть достаточным для прямой подачи заявки на
аккредитацию с гибкой сферой применения в отношении деятельности, связанной с
диагностикой вредных для растений организмов.
3. Термины и определения
Определения терминов, используемых в настоящем стандарте, приведены в Стандарте
PM 7/76 «Использование диагностических протоколов ЕОКЗР» (пересмотренная версия
находится на стадии подготовки). Определения критериев эффективности приведены во
введении к стандартам ЕОКЗР серии РМ 7.
В настоящем стандарте термин «тест» подразумевает применение метода по
отношению к определѐнному вредному организму и определѐнному природному субстрату.
Методы, о которых идет речь, включают в себя биотесты, биохимические методы, методы
пептидных карт, методы выделения или экстрагирования, молекулярные методы,
морфологические и морфометрические методы, оценку патогенности и серологические
методы.
4. Требования к управлению (Стандарт ISO 17025, пункт 4)
Лаборатория должна установить, и далее применять и поддерживать систему
управления качеством, охватывающую все материально-технические средства и
деятельность, находящуюся в сфере аккредитованной диагностики вредных для растений
организмов.
Система управления должна включать описания материально-технических средств и
мероприятий (включая подробную информацию о клиентах и диагностируемых вредных
организмах), на которые она распространяется. Система качества должна быть оформлена
документально, а документы, касающиеся качества, должны храниться в архиве (смотрите
также ниже).
Как указано в Стандарте PM 7/84, система управления в лаборатории должна
обеспечивать, чтобы:
 имелись ресурсы, подходящие для проведения диагностики, например, персонал,
материально-технические средства и расходные материалы (также смотрите
раздел «Технические требования»);
 приобретѐнные ресурсы, реагенты и расходные материалы соответствовали их
предполагаемому использованию;
 обязанности и задачи персонала были чѐтко определены (например,
организационными схемами) и соответствующим образом распределены;
 возможные конфликты интересов между персоналом и выполняемой
деятельностью вовремя распознавались и предотвращались;
 обучение документировалось и оценивалось (также смотрите раздел
«Технические требования»);
 персонал имел доступ к процедурам и инструкциям и применял их; это
относится и к стандартным операционным процедурам (СОП);
5






заказчик информировался по запросу о значимой для него информации,
касающейся диагностики его образца;
любая субподрядная работа выполнялась такой лабораторией, которая бы
соблюдала требования настоящего стандарта, что должно проверяться основной
аккредитованной лабораторией (как минимум, должна быть составлена
декларация о соответствии);
заказчику гарантировалась конфиденциальность результатов диагностики2;
существовал и применялся механизм работы с жалобами;
существовали и применялись механизмы записи, анализа и исправления всех
отклонений от процедур или требований заказчика;
вся документация, указанная выше, хранилась и архивировалась. Система
управления качеством должна периодически пересматриваться руководителями.
Это означает периодическое проведение оценки всех компонентов системы, а
также повседневный учѐт отклонений в системе и последующих
корректирующих действий, которые были предприняты.
4.1 Обязанности руководителей (Стандарт ISO 17025, пункт 4.2.3)
Руководители лаборатории должны выполнять обязанности по достижению целей
управления качеством и постоянно совершенствовать эффективность системы управления.
Они должны предоставлять подтверждение выполнения этих обязанностей.
4.2 Постоянное совершенствование (Стандарт ISO 17025, пункт 4.10)
Руководители
должны
периодически
пересматривать
систему
управления
лабораторией, включая проведение тестов, для обеспечения того, чтобы эта система
продолжала быть пригодной и эффективной, а также для того, чтобы вносились необходимые
изменения или усовершенствования. Лаборатория должна применять программу
непрерывного совершенствования. Внутренние механизмы и внешняя оценка могут
предоставлять необходимую информацию. Внутренние механизмы включают в себя:
 Определение задач в сфере качества и соответствующих индикаторов качества
(например, уменьшение количества жалоб в следующем году на Х %). Эти
показатели должны пересматриваться руководителями.
 Организацию собраний персонала для того, чтобы:
o запланировать профилактические мероприятия и оценить эффективность
корректирующих действий;
o провести тщательный анализ результатов внутреннего аудита;
o провести анализ жалоб и связанных с ними корректирующих действий и т.п.;
o определить потребности в обучении;
o собрать предложения персонала по совершенствованию работы.
 Процедуры получения обратной связи от заказчиков.
Для постоянного совершенствования важными элементами также являются оценка с
помощью внешнего аудита и результаты квалификационных или других межлабораторных
тестов.
Тем не менее, лабораториям рекомендуется разработать процедуру уведомления НОКЗР об
обнаружении регулируемых вредных организмов в том случае, если НОКЗР не является заказчиком.
2
6
5 Технические требования (Стандарт ISO 17025, пункт 5)
5.1 Общие положения (Стандарт ISO 17025, пункт 5.1)
Смотрите тот же раздел в Стандарте PM 7/84.
5.2 Персонал (Стандарт ISO 17025, пункт 5.2)
Смотрите тот же раздел в Стандарте PM 7/84.
5.3 Помещения и условия окружающей среды (Стандарт ISO 17025,
пункт 5.3)
Смотрите тот же раздел в Стандарте PM 7/84.
5.4 Методы диагностики (Стандарт ISO 17025, пункт 5.4)
5.4.1 Общие положения (Стандарт ISO 17025, пункт 5.4.1)
Лаборатория должна применять подходящие методы и процедуры для всех тестов в
рамках своей сферы деятельности. Это относится к методам отбора образцов (в
соответствующих случаях), способам обращения с образцами, транспортировке, хранению,
приготовлению препаратов и проведению анализов образцов. Предполагается, что
диагностические лаборатории должны понимать биологию организмов и принимать еѐ во
внимание при вторичной выборке образцов и/или при подготовке образца для анализа.
Приобретѐнные реагенты и расходные и другие материалы должны соответствовать их
предполагаемому использованию.
Все инструкции, стандарты, технические руководства и справочная информация,
необходимые для работы лаборатории, должны постоянно обновляться, и у персонала всегда
должен быть к ним доступ. Отклонение от СОП при применении тестов может иметь место
только в том случае, если оно оформлено документально, технически обосновано и
разрешено соответствующим лицом.
5.4.2 Выбор тестов (Стандарт ISO 17025, пункт 5.4.2)
Лаборатория должна использовать диагностические тесты, которые соответствуют
имеющимся условиям (смотрите Стандарт ЕОКЗР PM 7/76 «Применение диагностических
протоколов ЕОКЗР»). Тесты, описанные законодательно (например, в законодательстве ЕС
или национальном законодательстве), являются обязательными для соответствующей страны.
Если обязательный тест отсутствует, то предпочтение следует отдавать тестам,
опубликованным в качестве международных, региональных или национальных стандартов. В
тех случаях, когда такие тесты отсутствуют, или если они могут быть усовершенствованы, то
можно использовать разработанные в лаборатории или адаптированные тесты.
Лаборатория должна обеспечить, чтобы использовалась последняя и признанная
надѐжной и достоверной версия теста, если это соответствует ситуации и является
возможным. В случае необходимости к тесту должна прилагаться дополнительная подробная
информация для обеспечения последовательности в его применении.
Лаборатория, проводящая подготовку к аккредитации, должна использовать только те
тесты, которые прошли валидацию. Тесты могли пройти валидацию, если для этого имелись
подходящие данные. В противном случае тесты должны пройти процедуру валидации в
7
лаборатории (смотрите пункт 5.4.3). При использовании прошедшего валидацию теста,
лаборатория должна предоставить объективное подтверждение того, что она может
проводить этот тест в соответствии с установленными характеристиками эффективности
(смотрите пункт 5.4.4). Тест считается полностью прошедшим валидацию, если он даѐт
данные, соответствующие следующим критериям эффективности: аналитической
чувствительности,
аналитической
специфичности,
воспроизводимости
и
повторяемости. В зависимости от сферы применения теста может также возникнуть
необходимость в определении его селективности. Если лаборатория вносит изменения в
тест, прошедший валидацию, следует проанализировать и документально оформить решение,
требуется ли проведение валидации или проверки этого изменения.
Не все тесты, включѐнные в диагностические протоколы ЕОКЗР, имеют критерии
эффективности. Проведѐнная в 2008 году проверка по использованию тестов, включѐнных в
диагностические протоколы ЕОКЗР (Petter et al., 2009), показала, что широко используются
те тесты, которые представлены в Дополнении 1 (в стадии подготовки). Следовательно,
можно считать, что эти тесты имеют подходящий уровень надѐжности в отношении
повторяемости, воспроизводимости и селективности. Лаборатория, применяющая эти тесты,
должна, по меньшей мере, предоставить данные для валидации в отношении аналитической
чувствительности. Также может понадобиться предоставить дополнительные данные по
аналитической специфичности в зависимости от местных условий (например, вероятность
ложных реакций на близкородственных организмах). Как только такие данные
предоставляются, эти тесты считаются прошедшими валидацию. Программа регулярного
пересмотра диагностических протоколов ЕОКЗР включает в себя добавление данных о
валидации.
Тесты, прошедшие валидацию и имеющие предоставленные критерии эффективности, в
настоящем документе считаются «стандартными тестами», а в стандарте ISO 17025 они
называются «стандартными методами».
5.4.3 Валидация тестов (Стандарт ISO 17025, пункт 5.4.5)
Валидация проводится для предоставления объективных данных о том, что данный тест
подходит к условиям его использования (смотрите Стандарт ЕОКЗР PM 7/76, в котором
описаны разные типы предполагаемого использования). В сфере диагностики вредных для
растений организмов тест должен быть подходящим для проведения повседневной
диагностики. Как уже говорилось ранее, минимальными критериями эффективности теста,
которые должны быть определены, являются аналитическая чувствительность, аналитическая
специфичность, повторяемость, воспроизводимость и, в соответствующих случаях,
селективность. В том случае, если значения для этих критериев отсутствуют, или к ним нет
доступа (например, к опубликованным источникам), лаборатория должна сама восполнить
недостающие данные или обосновать, почему они не могут быть получены. Если значения
критериев эффективности доступны частично, лаборатория должна проверить, что она может
проводить тест в соответствии с ними (смотрите пункт 5.4.4). Валидация должна проводиться
на справочном материале (смотрите определение в Стандарте PM 7/84), включая
искусственно заражѐнные («обогащенные») образцы. При использовании культур или
изолятов для биологических тестов необходимо обеспечить подтверждение их
вирулентности.
Также можно проводить валидацию теста путѐм сравнения со «стандартным тестом».
Руководство по процедуре такого рода валидации приводится в Дополнении 2. Тем не менее,
8
в таком случае валидируемый тест нельзя принимать в качестве «стандартного теста»,
поскольку он не имеет всех критериев эффективности. Данный процесс может только
показать, что этот тест является настолько же хорошим, как и стандартный тест.
Собранные данные и результаты проведѐнных лабораторией валидаций (в особенности
в отношении воспроизводимости), а также результаты межлабораторного сравнения (оценка
эффективности того, как тест работает), также могут свидетельствовать о стабильности теста,
например, до какой степени смена реагентов или изменение условий влияют на
установленные значения эффективности теста. Также они могут предоставить данные о
диагностической чувствительности и диагностической специфичности путѐм сравнения с
альтернативным(и) тестом(ами).
Процедуры валидации, описанные в настоящем документе (и в особенности пояснения,
приведѐнные в таблицах 4-9 в Дополнении 5) следует рассматривать как общее руководство,
в соответствии с которым можно проводить валидацию теста. Данные, приведѐнные в этих
таблицах, основаны на опыте, который специалисты Группы экспертов ЕОКЗР по
диагностике приобрели в процессе проведения валидаций. Может возникнуть
необходимость в отклонении от настоящего руководства в зависимости от сочетаний
вредных организмов и растений. В таких случаях следует документально фиксировать
причины таких отклонений. В настоящем документе невозможно предоставить подробное
описание для каждого сочетания.
Тесты по диагностике вредных для растений организмов могут быть качественными
или количественными. Качественный тест устанавливает присутствие или отсутствие
вредного для растений организма в образце. Количественный тест устанавливает количество
особей вредного для растений организма в образце. Во всех возможных случаях для теста
необходимо определить порог возможностей обнаружения. Однако при выявлении вредных
для растений организмов эти пороги не всегда могут быть точно установлены. Существуют
организмы, которые невозможно выделить в культуру (облигатные патогены), количество
которых нельзя определить (грибы), которые присутствуют только в растении, или которые
нельзя выделить в чистом виде (например, фитоплазмы). По этой причине точная
концентрация этих организмов не может и едва ли когда-нибудь сможет быть установлена
точно, и поэтому необходимо использовать приблизительные подсчѐты. Даже в отношении
организмов, которые можно выделить в чистую культуру (многие бактерии и вирусы),
концентрация может быть подсчитана только приблизительно (например, КОЕ или мг/мл).
Такая оценка часто бывает основана на непрямом измерении.
Процесс валидации
Как указано в Стандарте ISO 17025 «лаборатория должна вести официальные записи о
полученных результатах и процедурах, использованных для валидации».
Общий процесс валидации описан ниже (также смотрите Рисунок 1). Более подробное
руководство приводится в таблицах 4-9 в Дополнении 5.
1. Определите область использования теста, например, выявление и/или идентификация
организма Х в природном субстрате У методом Z с учѐтом всех специфических
требований, связанных с условиями применения теста (примеры описаны в Стандарте
PM 7/76).
2. Рассмотрите технические требования для определения рабочих характеристик
эффективности: аналитической специфичности, селективности, воспроизводимости и
повторяемости, принимая во внимание руководство, приведенное в таблицах 1-6,
9
согласно требованиям. Затем определите тип и состав образцов, необходимых для
валидации.
3. Запланируйте и проведите валидацию по отдельным или комбинированным
характеристикам эффективности. Рекомендуется следовать этапам, приведѐнным на
Рисунке 1.
4. Представьте результаты в отчѐте по валидации с заключением о соответствии теста
требованиям, определѐнным в пункте 1.
5. Использование бланка «Заявление о валидации теста» может быть важным, и его можно
представить по форме, приведѐнной в Дополнении 3.
10
Определите организм
Рис. 1 Процесс валидации
Определите природный субстрат
Определите тест
Определите предполагаемые критерии характеристик эффективности
Сверьтесь с таблицами 1-6
Определите тип/состав материала для проведения валидации
Составьте план проведения валидации
Аналитическая специфичность/селективность*
хорошая
плохая
совершенствование
путем корректировки
теста
Выберите
новый тест
СТОП
тест не может быть признан валидным
Аналитическая чувствительность*
хорошая
плохая
совершенствование
путем корректировки
теста
СТОП
Выберите
новый тест
тест не может быть признан валидным
Повторяемость/воспроизводимость
хорошая
плохая
совершенствование
путем корректировки
теста
Выберите
новый тест
СТОП
Отчет о валидации
Заявление о том, что тест успешно охватывает
сферу его применения
тест не может быть признан валидным
*в зависимости от предполагаемого
использования теста оценка аналитической
чувствительности может проводиться до
оценки специфичности и селективности
11
5.4.4 Проверка эффективности работы лаборатории по проведению
определѐнного теста (ISO пункт 5.4.2, второй параграф, последнее
предложение)
Лаборатория должна подтвердить, что она может должным образом проводить
выбранный стандартный тест для предполагаемого использования. В случае внесения какихлибо изменений в стандартный тест, проверка должна быть проведена повторно.
Процесс, необходимый для предоставления объективного подтверждения того, что
лаборатория является компетентной для проведения стандартного теста в соответствии с
установленными для него характеристиками эффективности, описан ниже.
Тесты, которые выходят за рамки первоначальной сферы применения, требуют
повторной валидации согласно пункту 5.4.3 (например, при выявлении на новом хозяине).
Если лаборатория вносит существенные изменения в стандартный тест, он должен вновь
пройти валидацию. Проверка может быть осуществлена путѐм участия в квалификационных
тестах или в межлабораторных сравнительных тестах (например, ринг-тестах и совместных
исследованиях), при условии, что они позволяют выполнять требования, приведѐнные в
Таблице 1.
Выбор реактива может иметь решающее значение для эффективности теста. Изменение
реактива (или его марки или партии) или получение реактива у другого поставщика может
повлиять на эффективность теста. В таких случаях проверка эффективности реактива должна
проводиться путѐм сравнения с ранее использовавшимся реактивом или в соответствии с тем,
что указано в колонке 1 и 2 Таблицы 1.
Таблица 1 Руководство по проверке рабочих критериев
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Повторяемость
Проведите анализ не
менее 5-10 образцов
с установленным
порогом
возможностей
выявления.
Эту проверку можно
сочетать с проверкой
повторяемости и
воспроизводимости
Выберите несколько из
наиболее значимых
организмов-мишеней
(например, разные
штаммы) и организмов,
не являющихся
мишенями. Тесты
должны проводиться со
средними уровнями
численности
организмов.
Проведите не менее 2
опытов с 3 уровнями
численности
организма-мишени1
(низким2/средним/
высоким), причем
тесты должны
проводиться одним и
тем же лицом, на
одном оборудовании и
в один и тот же день.
1
2
Воспроизводимость
Проведите не менее 3
опытов с 3 уровнями
численности организмамишени1
(низким2/средним/
высоким), но в разное
время, по возможности
разными лицами, а в
случае, когда это
существенно, - с
использованием разного
оборудовании.
можно использовать искусственные выборки, созданные из одного образца
около порога возможностей выявления
Процесс проверки (Рис. 2)
1. Проведите валидированный тест согласно описанию или с небольшими
изменениями для того, чтобы учесть местные условия (например, поставщика
реактива или оборудования, если на этот счѐт нет специфических требований для
проведения валидированного теста) с целью оценить соответствие лаборатории
значениям критериев эффективности, приведѐнным в сведениях по валидации
12
2.
3.
4.
5.
6.
7.
(смотрите руководство в Таблице 1). Необходимость проведения проверки
селективности отсутствует.
Результаты проверочного теста:
Несоответствие значениям критериев эффективности: переходите к пункту 3;
Соответствие значениям критериев эффективности: лаборатория может применять
этот тест в повседневном режиме – переходите к пункту 4.
Если отклонение от условий, описанных в прошедшем валидацию тесте, влияет на
результаты, изучите причины этого отклонения. Откорректируйте и выполните
повторную проверку теста или, если потребуется, повторную валидацию в
соответствии с процедурой, описанной в разделе «Валидация тестов». Если
соответствие значениям критериев эффективности отсутствует, исследуйте,
являются ли причиной этого те минимальные изменения, которые были внесены в
тест. Если это не так, займитесь поиском консультации извне (например, свяжитесь
с автором теста).
Представьте результаты в отчѐте о проверке с заключением, соответствует ли
проверенный тест требованиям, указанным в пункте 1.
Использование бланка «Заявление о проверке теста» может быть важным, и его
можно представить в форме, приведѐнной в Дополнении 4.
5.4.5 Ненадѐжность измерения (ISO 17025 5.4.6)
Лаборатории должны стараться определить факторы, влияющие на ненадѐжность теста,
такие как персонал, оборудование и биологические свойства (например, серотипы,
патотипы). Во всех возможных случаях, должны применяться подходящие меры для
контроля возможной ненадѐжности. Если меры не приняты, должны фиксироваться причины
такой ситуации, а заказчик должен быть полностью информирован о ненадѐжности в тесте.
Несмотря на то, что в большинстве случаев тесты, используемые для диагностики вредных
для растений организмов, дают не количественные результаты, эти результаты могут
основываться на измерениях (морфометрических данных, подсчѐте клеток). Они могут
представлять собой всего лишь часть диагностического процесса, но если это является
важным с точки зрения диагностики, то еѐ ненадѐжность должна быть оценена.
5.5 Оборудование (ISO пункт 5.5)
Смотрите тот же раздел в Стандарте PM 7/84.
5.6 Справочные материалы (ISO пункт 5.5.3)
Смотрите тот же раздел в Стандарте PM 7/84
5.7 Отбор образцов (ISO пункт 5.7)
Смотрите тот же раздел в Стандарте PM 7/84
5.8 Обращение с образцами (ISO пункт 5.8)
Смотрите тот же раздел в Стандарте PM 7/84
13
Рис.2 Процесс проверки
Выберите прошедший валидацию (стандартный) тест
Определите изменѐнные реагенты или условия проведения теста
Проведите тест
Определите, являются ли значения
эффективности такими же, как и в
тесте, прошедшем валидацию
Соответствие
значениям
эффективности
есть
нет
Выясните
причины
Отчет о проверке
Лаборатория может проводить
тест в соответствии с
установленными критериями
эффективности
не выяснены
проведите
корректировку
выяснены
Консультация
извне
Лаборатория не может
проводить тест в соответствии
с установленными критериями
эффективности
14
5.9 Обеспечение качества диагностики (ISO пункт 5.9)
Смотрите тот же раздел в Стандарте PM 7/84
6 Оповещение о результатах (ISO пункт 5.10.3)
Смотрите Стандарт ЕОКЗР РМ 7/77 «Ведение документации и оповещение о
диагностике».
Справочная литература
Группа AFNOR (1995). XP V03-111 «Анализ сельскохозяйственных и продовольственных
продуктов: протокол внутрилабораторной оценки альтернативного метода
качественного анализа по сравнению со справочным методом», Французская ассоциация
стандартизации/Association Française de Normalisation, La Plaine Saint-Denis (FR).
Европейская ассоциация по аккредитации / EA (2008) EA-2/15 «Требования к аккредитации с
гибкой сферой применения», http://www.eurolab.org/docs/EA/EA-2_15.pdf. (по состоянию
на 16 сентября 2009 года).
Петтер Ф. / Petter F, Сюффер М. / Suffert M и Мак Мюллен М. А. С. / McMullen MAS (2010):
Результаты опроса по использованию диагностических протоколов ЕОКЗР. Бюллетень
ЕОКЗР, т. 40, стр. 121 6 126.
Хьюз К. Дж. Д. / Hughes KJD, Гриффин Р. Л. / Griffin RL, Томлинсон Дж. А. / Tomlinson JA,
Бунхэм Н. /Boonham N, Инман А. Дж. / Inman AJ и Лейн С. / Lane C (2006) «Разработка
одноэтапного анализа ПЦР в реальном времени для диагностики Phytophthora ramorum».
Фитопатология/Phytopathology 96: 975-981.
ISO/IEC (2005) Стандарт 17025 «Общие требования к компетенции испытательных и
калибровочных лабораторий» (доступен на сайте: http://www.iso.org).
ISO (2003) ISO 16140 «Микробиология продуктов питания и кормов животных: протокол по
валидации альтернативных методов» (доступен на сайте: http://www.iso.org).
15
Дополнение 1 (в процессе подготовки): перечень тестов, внесѐнных в
диагностические протоколы ЕОКЗР и имеющих широкое применение
Этот перечень будет подготовлен совместно с соответствующими группами экспертов
ЕОКЗР по диагностике.
Дополнение 2: Процедура валидации теста путѐм его сравнения со
«стандартным тестом»
Сравнение теста со «стандартным тестом» должно проводиться следующим образом:
Проведите тест 3 раза с организмом-мишенью и 3 раза с организмами, не являющимися
мишенями, как это указано в Таблице 2. Образцы обрабатываются двумя тестами
одновременно. Следует отметить, что данная процедура может быть не применима ко всем
областям, например, к морфологической идентификации насекомых.
Количество образцов, указанное в этой таблице, было определено путѐм сравнения с
опубликованными стандартами, например, Стандартом ISO 16140 «Микробиология
продуктов питания и кормов для животных: протокол по валидации альтернативных
методов» (ISO, 2003 г.) и Стандарта AFNOR XP V03-111 «Анализ сельскохозяйственных и
продовольственных продуктов. Протокол по внутрилабораторной оценке альтернативного
метода качественного анализа по сравнению со справочным методом» (AFNOR, 1995 г.).
Соотношение результатов, полученных при помощи стандартного теста и нового теста,
должны оцениваться для различных уровней численности вредных организмов. Результаты
могут быть представлены так, как показано в Таблице 3, и могут быть рассчитаны
сравнительные характеристики эффективности.
Таблица 2: Минимальное количество образцов, необходимое при
проведении сравнения теста со «стандартным тестом».
Тип материала
Низкий
Уровень численности организма
Средний
Высокий
Изоляты чистых культур
организма-мишени или образцы,
10
7
5
искусственно
заражѐнные
организмом-мишенью
Изоляты чистых культур
организма,
не
являющегося
от 22 до 44*
мишенью, или образцы, искусственно заражѐнные организмом,
не являющимся мишенью
Образцы,
заражѐнные Готовятся соответствующие серии разбавлений с 15
организмом-мишенью
положительными образцами, которые были предварительно
естественным образом
идентифицированы при помощи стандартных тестов, с целью
достижения порога возможностей выявления стандартного теста.
* общее количество образов организмов, не являющихся мишенью, не должно превышать
общее количество образцов организма-мишени более чем в два раза.
16
Дополнение 3
Заявление о валидации теста
Название теста:
Сфера применения теста:
Дополнительные комментарии :
Документы по прохождению теста валидации и требования, которым он должен
соответствовать, имеются и хранятся в лаборатории. Документы включают в себя
лабораторные справочники и прочую информацию, указанную ниже, которая демонстрирует,
каким образом процедуры проходили валидацию в этом исследовании.
Характеристики
эффективности
A
B
C
Где найти документацию
D
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Селективность (в
соответствующих случаях)
Повторяемость
Воспроизводимость
Прочая информация (не
обязательна)
A = Данные, полученные в экспериментах, проведѐнных самой лабораторией.
B = Данные, полученные при проведении квалификационных тестов или ринг-тестов.
C = Информация, полученная от производителей.
D = Внешняя информация (литература и т.д.).
Таблица 3: Пример результатов сравнения стандартного и нового теста
Стандартный тест
+
Новый тест
+
69
-
6
Итого
75
ПС
ПО
ОО
ОС
Итого
3
72
12
18
15
90
17
Таблица 3 основана на работе Хьюза и др. / Hughes et al., 2006. Цифры в таблице
приведены для наглядности.
ПС (положительное совпадение), ПО (положительное отклонение), ОО (отрицательное
отклонение), ОС (отрицательное совпадение).
Положительные (+) и отрицательные (-) результаты для 90 образцов,
проанализированных при помощи обоих тестов, показывают диагностическую
чувствительность (ПС/(ПС+ND)), диагностическую специфичность (ОС/(ОС+ПО)) и
относительную точность (ПС+ОС)/(ПС+ПО+ОО+ОС). Диагностическая чувствительность =
92 %, Диагностическая специфичность = 80%; Относительная точность = 90%.
Где найти документацию
Диагностическая чувствительность
Диагностическая специфичность
На основании приведѐнного выше заявления тест считается прошедшим валидацию и
соответствующим сфере его применения.
Имя заглавными буквами:
Подпись:
Имя заглавными буквами:
Подпись:
Должность эксперта в лаборатории:
Дата:
Должность эксперта в лаборатории:
Дата:
18
Дополнение 4
Заявление о проверке теста
Название теста:
Стандартный тест:
Область применения стандартного теста:
Небольшие изменения:
Документы по прохождению теста валидации и требования, которым он должен
соответствовать, имеются и хранятся в лаборатории. Документы включают в себя
лабораторные справочники и прочую информацию, указанную ниже, которая демонстрирует,
каким образом проводился проверочный тест в этом исследовании.
Критерии
эффективности
Значения, Соответствует
полученные требованиям
в
стандартного
стандартном
теста
тесте
(да или нет)
Где найти документацию
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Повторяемость
Воспроизводимость
На основании приведѐнного выше заявления проверка теста считается подтверждающей
его соответствие сфере его применения.
Имя заглавными буквами:
Подпись:
Имя заглавными буквами:
Подпись:
Должность эксперта в лаборатории:
Дата:
Должность эксперта в лаборатории:
Дата:
19
Дополнение 5 – Таблицы, в которых даѐтся подробное руководство для процесса валидации по сфере
деятельности (бактериология, ботаника, энтомология, нематология и вирусология)
Таблица 4. Бактериология
Данные, приведѐнные в таблицах, основаны на опыте по валидации, полученном специалистами групп
экспертов ЕОКЗР, занимающихся вопросами диагностики. Может возникнуть необходимость в отклонении от
данного руководства в зависимости от сочетаний вредных организмов и растений. В таких случаях следует
документально фиксировать причины этих отклонений.
Метод выделения организма-мишени из природного субстрата
Примечание: валидация метода выделения всегда проводится при помощи теста.
Аналитическая
Метод должен позволять выделить жизнеспособные клетки бактерии-мишени из материала образца
чувствительность
для обеспечения чувствительного выявления. Проведите выделение из не менее трех образцов с
высоким, средним и низким уровнями заражѐнности.
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Образцы могут состоять из материала с явными признаками заражения (диагностика), или они могут
быть подготовлены путѐм добавления заражѐнного материала с известной концентрацией клеток
бактерии-мишени к материалу образца (выявление латентного заражения или засорения)
Данный параметр не является важным. Выделение организма-мишени из образца является
неспецифичным по определению.
Данный параметр не является важным. Выделение организма-мишени из образца по определению не
является специфичным.
Проведите выделение из 8-и репликатных образцов. Для выявления латентного заражения,
повторяемость должна быть подтверждена около порога аналитической чувствительности.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и,
в соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Молекулярные методы, например, гибридизация, ПЦР и ПЦР в реальном времени
Примечание: этот этап также включает в себя методы выделения ДНК из материала образцов.
Аналитическая
Проведите анализ не менее 3-х серий экстрактов заражѐнных образцов в пределах от 10 до 106 клеток
чувствительность
организма-мишени на миллилитр. Предпочтительно проводить данную процедуру путѐм
десятикратного разбавления суспензий клеток бактерии-мишени в экстрактах образцов. Определите
наименьшую концентрацию клеток, обеспечивающую положительный результат теста.
Если после трех серий не получены стойкие результаты, следует подготовить дополнительные серии и
провести их анализ. Аналитическая чувствительность связана со специфическим рядом параметров
теста, которые необходимо точно определить и стандартизировать, например, с торговой маркой
20
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
реагентов для ПЦР (в частности, ДНК-полимеразы), а также с условиями проведения цикла ПЦР.
Проведите анализ (во-первых) штаммов бактерии-мишени, распространяющийся на генетическое
разнообразие, разное географическое происхождение и растения-хозяева и (во-вторых) ряда бактерий,
не являющихся мишенями, в особенности тех бактерий, которые встречаются в образцах. Используйте
суспензии клеток чистых культур в соотношении, примерно, 106 клеток на миллилитр.
Кроме того, результаты теста могут быть подтверждены компьютерным (in silico) сравнением
последовательностей зонда и праймера с последовательностями в геномных библиотеках.
Определите относительную нечувствительность теста к вариациям материала образца, например,
используя различные сорта растения-хозяина.
Проведите анализ 8-и репликатов экстрактов заражѐнных образцов со средним и низким уровнями
заражѐнности. Для выявления латентной инфекции, повторяемость должна быть подтверждена около
порога аналитической чувствительности.
Эта оценка позволяет получить данные об уровне недостоверности результата теста.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Серологические методы: IF и ELISA
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Проведите анализ не менее 3-х серий экстрактов заражѐнных образцов в пределах от 100 до 106 клеток
организма-мишени на миллилитр. Предпочтительно проводить данную процедуру путѐм
десятикратного разбавления суспензии клеток бактерии-мишени в экстрактах образцов. Определите
наименьшую концентрацию клеток, обеспечивающую положительный результат теста при рабочем
значении разбавления антисыворотки или антител.
Если после трех серий не получены стойкие результаты, следует подготовить дополнительные серии и
провести их анализ. Аналитическая чувствительность связана со специфическим рядом параметров
теста, которые необходимо точно определить и стандартизировать, например, с количеством
микроскопических полей для чтения в IF-анализе, а также с порогом оптической плотности в анализе
ELISA.
Проведите анализ специфичности антител (во-первых) на штаммах бактерии-мишени,
распространяющийся на генетическое разнообразие, разное географическое происхождение и
растения-хозяева и (во-вторых) на ряде бактерий, не являющихся мишенями, в особенности тех
бактерий, которые встречаются в материале образцов. Используйте суспензию чистых культур клеток
в концентрации примерно 106 клеток на миллилитр, а также разбавленные в рабочей концентрации
антитела или антисыворотку.
Определите относительную нечувствительность теста к вариациям материала образца, например,
используя различные сорта растения-хозяина.
Проведите анализ 8-и репликатов экстрактов заражѐнных образцов со средним и низким уровнями
заражѐнности. Для выявления латентного заражения, повторяемость должна быть подтверждена около
21
Воспроизводимость
порога аналитической чувствительности.
Эта оценка позволяет получить данные об уровне недостоверности результатов теста.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Методы посева на питательную среду: выделение на селективной среде
Аналитическая
чувствительность
Проведите анализ не менее 3-х серий экстрактов искусственно зараженных образцов в пределах от 10
до 106 клеток организма-мишени на миллилитр.
Предпочтительно проводить данную процедуру путѐм десятикратного разбавления суспензии клеток
бактерии-мишени в экстрактах образцов. Определите наименьшую концентрацию клеток,
обеспечивающую положительный результат.
Если после трех серий не получены стойкие результаты, следует подготовить дополнительные серии и
провести их анализ.
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Аналитическая чувствительность связана с рядом специфических параметров теста, которые
необходимо точно определить и стандартизировать, например, с торговой маркой ингредиентов для
приготовления среды (в особенности антибиотиков и препаратов исходных растворов), а также с
условиями инкубации.
Определите специфичность питательной среды (во-первых) на штаммах бактерии-мишени, с учѐтом
генетического разнообразия, разного географического происхождения и разных растений-хозяев и (вовторых) на ряде бактерий, не являющихся мишенями, в особенности на тех бактериях, которые
встречаются в материале образцов. Используйте суспензию клеток в концентрации примерно 10 6
клеток на миллилитр и проведите анализ путѐм разбавления посева раствора.
Определите относительную нечувствительность теста к вариациям материала образца, например,
используя различные сорта растения-хозяина.
Проведите анализ 8-и репликатов экстрактов заражѐнных образцов со средним и низким уровнями
заражѐнности.
Для выявления латентного заражения, повторяемость должна быть подтверждена около пределов
аналитической чувствительности.
Воспроизводимость
Эта оценка позволяет получить данные об уровне недостоверности результатов теста.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Методы биоопытов: селективное обогащение в растениях-хозяевах
Аналитическая
чувствительность
Проведите анализ не менее 3-х серий экстрактов заражѐнных образцов в пределах от 100 до 106 клеток
организма-мишени на миллилитр. Предпочтительно проводить данную процедуру путѐм
десятикратного разбавления суспензии клеток бактерии-мишени в экстрактах образцов. Определите
22
наименьшую концентрацию клеток, обеспечивающую положительный результат. Это требует
выделения из тестируемых растений с симптомами инфекции и без.
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Если после трех серий не получены стойкие результаты, следует подготовить дополнительные серии и
провести их анализ. Аналитическая чувствительность связана со специфическим рядом параметров
анализа, которые необходимо точно определить и стандартизировать, например, со стадией развития
подопытных растений, методом инокуляции и условиями инкубации.
Определите специфичность биотеста (во-первых) на штаммах бактерии-мишени, с учѐтом
генетического разнообразия, разного географического происхождения и растений-хозяев и (во-вторых)
на ряде бактерий, не являющихся мишенями, в особенности на тех бактериях, которые встречаются в
материале образцов. Используйте суспензию клеток в концентрации около 106 клеток на миллилитр.
Определите относительную нечувствительность анализа к вариациям материала образцов, например,
используя различные сорта растения-хозяина, включая наиболее восприимчивые сорта.
Проведите анализ 8-и репликатов экстрактов заражѐнного образца со средним и низким уровнями
заражѐнности. Для выявления латентного заражения повторяемость должна быть подтверждена около
пределов аналитической чувствительности.
Эта оценка позволяет получить данные об уровне недостоверности результатов теста.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Тест на патогенность
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Данный параметр не является существенным при проведении теста на патогенность, который обычно
проводится с суспензиями, содержащими около 106 клеток на миллилитр. Тем не менее, аналитическая
чувствительность может рассматриваться при инокуляции на различных стадиях роста растенияхозяина.
Определите специфичность теста на патогенность на ряде штаммов бактерии-мишени, с учѐтом
генетического разнообразия, разного географического происхождения и растений-хозяев, а также на
ряде бактерий, не являющихся мишенями, в особенности на тех бактериях, которые встречаются в
материале образцов. Используйте суспензии клеток в концентрации около 106 клеток на миллилитр.
Положительный результат предполагает проявление симптомов и повторное выделение бактериимишени (постулаты Коха).
Определите относительную нечувствительность анализа к вариациям материала образцов, например,
используя различные сорта растения-хозяина.
Проведите анализ 3-х репликатов ряда штаммов бактерии-мишени, учитывая вариабельность
идентификационных тестов и вирулентность. Используйте суспензию клеток в соотношении примерно
106 клеток/мл−1.
Положительный результат предполагает проявление симптомов и повторное выделение бактерии23
Воспроизводимость
мишени (постулаты Коха).
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Методы генетической экспертизы: анализ профиля белков, жирных кислот и ДНК
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Определите минимально необходимое количество бактерий, отобранных из селективной среды, для
проведения надѐжного анализа.
Параметры теста должны быть точно определены и стандартизированы, например, параметры
питательной среды и стадии выращивания культуры для сбора клеток.
Определите специфичность методов генетической экспертизы (во-первых) на штаммах бактериимишени, с учѐтом генетического разнообразия, разного географического происхождения и разных
растений-хозяев и (во-вторых) на ряде бактерий, не являющихся мишенями, в особенности на тех
бактериях, которые встречаются в материале образцов.
Предоставьте маркѐры для дифференциации на уровне подвида или патотипа.
Не применяется.
Проведите анализ 3-х репликатов экстракта белка, жирной кислоты или ДНК.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
24
Таблица 5. Ботаника
Данные, приведѐнные в таблицах, основаны на опыте по валидации, полученном специалистами групп
экспертов ЕОКЗР, занимающихся вопросами диагностики. Может возникнуть необходимость в отклонении от
данного руководства в зависимости от сочетаний вредных организмов и растений. В таких случаях следует
документально фиксировать причины этих отклонений.
Метод выделения организма-мишени из природного субстрата
Примечание: валидация метода выделения всегда проводится при помощи теста.
Аналитическая
Определите количество семян сорняков, полученных с использованием этого метода выделения.
чувствительность
Аналитическая
Не применяется
специфичность
Селективность
Не применяется
Повторяемость
Используйте не менее 8-и образцов из партий семян или зерна, или других растительных продуктов для
выделения тех же организмов-мишеней.
Воспроизводимость
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Морфологические и морфометрические методы, предназначенные для идентификации
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Определите минимальное количество организма-мишени (семян или растений), необходимое для проведения
надежного анализа. Наименьшее количество организма-мишени зависит от состояния образца (от хорошего до
очень плохого), стадии развития, известной межвидовой изменчивости, сложности интерпретации
характеристик и т.д.
Проведите скрининг по отношению к схожим организмам, являющимся и не являющимся мишенями.
Не применяется.
Проведите не менее 8-и идентификаций одного и того же организма-мишени (семян или растений) в качестве
контрольного опыта в пределах ряда морфологически схожих организмов, являющихся и не являющихся
мишенями. Контрольный опыт может быть проведѐн следующим образом: один и тот же организм-мишень
помещается среди нескольких организмов, не являющихся мишенями. Этот процесс повторяется 8 раз.
Организмы, не являющиеся мишенями, в разных повторностях могут быть разными.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
25
Таблица 6. Энтомология
Данные, приведѐнные в таблицах, основаны на опыте по валидации, полученном специалистами групп
экспертов ЕОКЗР, занимающихся вопросами диагностики. Может возникнуть необходимость в отклонении от
данного руководства в зависимости от сочетаний вредных организмов и растений. В таких случаях следует
документально фиксировать причины этих отклонений.
Метод выделения организма-мишени из природного субстрата
Примечание: валидация метода выделения всегда проводится при помощи теста.
Аналитическая
Выделение насекомых: если возможно, определите процент насекомых, полученных с использованием
чувствительность
этого метода выделения. Выделение ДНК: эта валидация включена в валидацию молекулярных
методов.
Аналитическая
Не применяется
специфичность
Селективность
Не применяется
Повторяемость
Не применяется
Воспроизводимость
Не применяется.
Морфологические и морфометрические методы, предназначенные для идентификации
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Если возможно, установите минимальное количество особей или признаков для проведения надѐжного
анализа, как минимум, с 3-я повторами. Наименьшее количество особей-мишеней зависит от
состояния образца (от хорошего до очень плохого), стадии развития, известной межвидовой
изменчивости, сложности интерпретации характерных признаков и т.д.
Если возможно, проведите скрининг по отношению к морфологически схожим организмам,
являющимся и не являющимся мишенями.
Не применяется.
Проведите не менее 8-и идентификаций одного и того же препарата-мишени в качестве контрольного
опыта в пределах морфологически схожих организмов, не являющихся мишенями. Контрольный опыт
может быть проведен следующим образом: один и тот же образец-мишень помещается среди
нескольких организмов, не являющихся мишенями. Этот процесс повторяется 8 раз. Используемые
образцы, не являющиеся мишенями, в разных повторностях могут быть разными.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Молекулярные методы, например, гибридизация, ПЦР
Примечание: этот этап также включает в себя методы выделения ДНК из материала образца.
Аналитическая
Подготовьте необходимое количество особей. Это количество зависит от рода, вида и стадии развития.
чувствительность
Определите минимальное количество особей или частей особей, необходимых для их выявления.
26
Проведите не менее 3-х экспериментов. Если после трех серий не получены стойкие результаты,
следует подготовить дополнительные серии и провести их анализ.
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Аналитическая чувствительность связана с рядом специфических параметров теста, которые
необходимо точно определить и стандартизировать, например, с торговой маркой реагентов для ПЦР
(в частности, ДНК-полимераза) и с условиями проведения цикла ПЦР.
Проведите, как минимум, один скрининг по отношению к ряду организмов-мишеней, с учѐтом
генетического разнообразия, разного географического происхождения и разных растений-хозяев, и по
отношению к релевантным организмам, не являющимся мишенями, особенно к тем, которые могут
быть обнаружены в материале образцов.
Кроме того, результаты теста могут быть подтверждены компьютерным (in silico) сравнением
последовательностей зондов и праймеров с последовательностями в геномных библиотеках.
Определите относительную нечувствительность теста к вариациям материала образца, например,
используя различные сорта растения-хозяина.
Проведите анализ одного образца для каждого из 2-х уровней модальности (на границе порога
выявления организма-мишени и выше), с использованием не менее 8-и репликатов экстракта образца.
Этот анализ позволяет получить данные об уровне недостоверности результатов теста.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
27
Таблица 7. Микология
Данные, приведѐнные в таблицах, основаны на опыте по валидации, полученном специалистами групп
экспертов ЕОКЗР, занимающихся вопросами диагностики. Может возникнуть необходимость в отклонении от
данного руководства в зависимости от сочетаний вредных организмов и растений. В таких случаях следует
документально фиксировать причины этих отклонений.
Метод выделения/изоляции организма-мишени из природного субстрата/методы приманок
Примечание: валидация метода выделения всегда проводится при помощи теста.
Аналитическая
Метод должен позволять выделить и изолировать достаточное количество организма-мишени для
чувствительность
дальнейшего выращивания в культуре и проведения анализа. Во всех возможных случаях определите
путѐм смешивания здоровой и заражѐнной тканей минимальное количество заражѐнной ткани или
организмов (или их частей), необходимых либо для посева на питательную среду перед
идентификацией, либо для непосредственной идентификации с тем, чтобы провести надѐжный анализ.
Выделите или изолируйте организм-мишень из не менее, чем 3-х образцов (образцов, заражѐнных
естественным или искусственным образом).
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Данная процедура может включать в себя промывание и использование мембран для улавливания
спор.
Данный параметр не является важным. Выделение организма-мишени из образца является
неспецифичным по определению.
Данный параметр не является важным. Выделение организма-мишени из образца является
неселективным по определению.
Используйте один образец с низкой концентрацией организма-мишени и подготовьте 8 подвыборок
(экстрактов). Оцените эффективность метода выделения при помощи соответствующего теста.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Морфологические и морфометрические методы для идентификации:
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Определите минимальное количество характеристик, необходимое для проведения надѐжной
идентификации, причем минимальное количество повторностей, по возможности, должно составлять
3. Наименьшее количество характеристик зависит от состояния образца (от хорошего до очень
плохого), стадии развития, известной межвидовой изменчивости, сложности интерпретации
характеристик и т.п.
Проведите скрининг по отношению к ряду морфологически схожих организмов, являющихся и не
являющихся мишенями.
Не применяется.
Не менее 8-и идентификаций одного и того же организма-мишени в качестве контрольного опыта в
28
Воспроизводимость
пределах ряда морфологически схожих организмов, являющихся и не являющихся мишенями.
Контрольный опыт может быть проведен следующим образом: один и тот же организм-мишень
помещается среди нескольких организмов, не являющихся мишенями. Этот процесс повторяется 8 раз.
Организмы, не являющиеся мишенями, в разных повторностях могут быть разными.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Молекулярные методы, например, гибридизация и ПЦР
Примечание: этот этап также включает в себя методы выделения ДНК из материала образцов.
Аналитическая
Определите минимальное количество организма-мишени (например, количество конидий или
чувствительность
пропорцию заражѐнного материла в здоровом материале), из которого можно получить поддающееся
выявлению количество ДНК организма-мишени. Проведите не менее 3-х экспериментов при помощи
8-и последовательных разбавлений, предпочтительно в ДНК растения-хозяина. Если после трѐх серий
не получены стойкие результаты, следует подготовить дополнительные серии и провести их анализ.
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Аналитическая чувствительность связана с рядом специфических параметров теста, которые
необходимо точно определить и стандартизировать, например, с торговой маркой реагентов ПЦР (в
особенности, ДНК-полимеразы) и условиями проведения цикла ПЦР.
Проведите, как минимум, один скрининг по отношению к ряду организмов-мишеней и значимых
организмов, не являющихся мишенями (например, филогенетически близких грибов), которые могут
присутствовать в образце и экстракте образца.
Кроме того, результаты анализа могут быть подтверждены компьютерным (in silico) сравнением
последовательностей зондов или праймеров с последовательностями в геномных библиотеках.
Определите относительную нечувствительность анализа к вариациям образцов, например, с
использованием различных сортов растений-хозяев.
Проведите 3 эксперимента выше порога выявления и около порога выявления, как минимум, с 8-ю
репликатами. Эта процедура может показать уровень недостоверности измерений.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Серологические методы: ELISA
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Определите порог выявления, например, количество конидий или массу заражѐнного материла в
здоровом материале, путѐм проведения не менее 3-х экспериментов. Определите пороговый уровень,
при котором достигается постоянная правильная диагностика (как правило, это в 2-3 раза превышает
уровень отрицательного контроля). Если после трѐх экспериментов не получены стойкие результаты,
следует провести дополнительные серии экспериментов.
Проведите скрининг один раз по отношению к ряду родственных организмов-мишеней и к ряду
неродственных организмов, не являющихся мишенями (например, филогенетически близких грибов),
которые могут присутствовать в образце и экстракте образца.
29
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Определите относительную нечувствительность теста к вариациям образца, например, с
использованием различных сортов растений-хозяев.
Проведите 3 эксперимента выше порога выявления и около порога выявления, как минимум, с 8-ю
репликатами в тот же день, тем же оператором и на той же среде. Данная проверка позволяет получить
данные об уровне недостоверности результатов теста.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Методы биоопытов: метод приманок
Аналитическая
чувствительность
Определите необходимое количество природного субстрата или экстракта субстрата (например,
граммов листьев или почвы) для получения симптомов. Проведите 3 эксперимента с 8 сериями
разбавлений с 10-ю растениями.
Если после трѐх циклов не получены стойкие результаты, следует подготовить дополнительные серии
и провести их анализ.
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Аналитическая чувствительность связана с рядом специфических параметров теста, которые
необходимо точно определить и стандартизировать, например, со стадией развития подопытного
растения, с методом инокуляции и условиями инкубации.
Определите специфичность биотеста (во-первых) на штаммах гриба-мишени, с учѐтом генетического
разнообразия, разного географического происхождения, (во-вторых) на ряде грибов, не являющихся
мишенями, в частности, на грибах, связанных с материалом образцов.
Определите относительную нечувствительность теста к вариациям материала образца, например, с
использованием различных сортов растений-хозяев.
Проведите 3 эксперимента не менее, чем с 8-ю репликатами при минимальном и превышающем
минимум количестве инокулята для получения симптомов.
Для выявления латентного заражения, повторяемость должна быть подтверждена около предела
аналитической чувствительности.
Воспроизводимость
Данная проверка позволяет получить данные об уровне недостоверности результатов теста.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
30
Таблица 8. Нематология
Данные, приведѐнные в таблицах, основаны на опыте по валидации, полученном специалистами групп
экспертов ЕОКЗР, занимающихся вопросами диагностики. Может возникнуть необходимость в отклонении от
данного руководства в зависимости от сочетаний вредных организмов и растений. В таких случаях следует
документально фиксировать причины этих отклонений.
Метод выделения организма-мишени из природного субстрата
Примечание: метод выделения всегда проходит валидацию при помощи теста.
Аналитическая
Определите процент нематод, полученных путем выделения, с использованием не менее 3-х образцов.
чувствительность
Аналитическая
Не применяется.
специфичность
Селективность
Оцените селективность теста по отношению к разным природным субстаратам (например, для
цистовыделителей – к типу почв)
Повторяемость
Используйте один образец организма-мишени и сделайте 8 подвыборок (экстрактов). С помощью
соответствующего метода анализа оцените, колеблется ли процент выделений в этих подвыборках в
одинаковых пределах.
Воспроизводимость
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Морфологические и морфометрические методы, предназначенные для идентификации
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Определите минимальное количество особей для проведения надежной идентификации не менее чем в
трѐх повторностях при возможности. Минимальное количество особей-мишеней зависит от состояния
образца (от хорошего до очень плохого), стадии развития, известного межвидового разнообразия,
сложности по интерпретации характерных признаков и т.п.
Проведите скрининг по отношению к ряду морфологически сходных организмов, являющихся и не
являющихся мишенями.
Не применяется.
Проведите не менее 8-и идентификаций как «тест вслепую» одного и того же микроскопического
препарата в ряде морфологически схожих организмов, являющихся и не являющихся мишенями. Тест
вслепую должен проводиться следующим образом: один и тот же препарат с организмом-мишенью
представлен среди нескольких препаратов организмов, не являющихся мишенями. Тест вслепую
повторяется 8 раз, а организмы, не являющиеся мишенями могут быть разными в разных
повторностях.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
31
Молекулярные методы, например, гибридизация и ПЦР
Примечание: этот этап включает в себя методы выделения ДНК из материала образцов.
Аналитическая
Подготовьте необходимое количество особей. Это количество зависит от рода, вида и стадии развития.
чувствительность
Определите минимальное количество особей или частей особей для выявления или идентификации.
Проведите не менее 3-х опытов. Если после 3-х серий опытов не получены согласующиеся результаты,
то необходимо подготовить дополнительные серии и провести тестирование. Аналитическая
чувствительность связана со специфической группой параметров теста, которые должны быть чѐтко
определены и стандартизированы, например, с торговой маркой реагентов для ПЦР (в особенности,
полимеразы ДНК) и с условиями циклов ПЦР.
Аналитическая
Проведите скрининг, как минимум, один раз по отношению к ряду организмов-мишеней, с учѐтом
специфичность
генетического разнообразия, разного географического происхождения и разных растений-хозяев, а
также подходящих организмов, не являющихся мишенями, в особенности тех, которые могут быть
связаны с материалом образцов.
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Кроме того, результаты анализа могут быть подтверждены компьютерным (in silic) сравнением
последовательностей зондов и праймеров с последовательностями в геномных библиотеках.
Не является существенным для идентификации нематод, поскольку их заранее выделяют из субстрата.
Если применяется ПЦР-тест в качестве теста на выявление, необходимо определить интенсивность
теста в зависимости от природного субстрата (например, почвы или растения).
Проведите анализ одного образца на каждом их двух уровней модальности (около порога выявления
вредного организма и выше) как минимум с 8-ю репликатами экстракта образца.
Этот анализ предоставит информацию об уровне недостоверности результата теста.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Биохимические методы: например, энзимный электрофорез, анализ протеинового профиля,
Примечание: этот этап также включает в себя подготовку препарата образца.
Аналитическая
Определите минимальное количество особей для выявления, чтобы провести надѐжный анализ по
чувствительность
возможности с не менее чем тремя образцами. Минимальное количество особей-мишеней зависит от
состояния образца (от хорошего до очень плохого), стадии развития, известного межвидового
разнообразия, сложности интерпретации характерных признаков и т.п.
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Параметры теста должны быть чѐтко определены и стандартизированы.
Проведите скрининг по отношению к ряду организмов-мишеней и организмов рода и/или вида, не
являющихся мишенями.
Не применяется.
Проведите анализ 1 образца для каждого из двух уровней численности: выше минимального
количества особей или соответствующего ему. Сделайте не менее 8-и репликатов из одного и того же
экстракта образца.
32
Воспроизводимость
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Биотесты: включая методы приманок и тесты на патогенность
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Определите минимальное количество особей для получения симптомов или для размножения в
растительном материале как минимум с 3-я повторностями по возможности.
Аналитическая чувствительность связана с рядом специфических параметров теста, которые
необходимо точно определить и стандартизировать, например, со стадией развития подопытного
растения и с методом инокуляции.
Проведите скрининг по отношению к ряду организмов-мишеней.
Определите относительную нечувствительность теста к вариациям материала образцов, например, с
использованием различных сортов растений-хозяев.
Используйте не менее 3-х репликатов с минимальным количеством особей для получения симптомов.
Эта проверка позволяет получить данные об уровне недостоверности результатов теста.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
33
Таблица 9. Вирусология
Эта таблица распространяется на вирусы, вироиды и фитоплазмы.
Данные, приведѐнные в таблицах, основаны на опыте по валидации, полученном специалистами групп
экспертов ЕОКЗР, занимающихся вопросами диагностики. Может возникнуть необходимость в отклонении от
данного руководства в зависимости от сочетаний вредных организмов и растений. В таких случаях следует
документально фиксировать причины этих отклонений.
Метод выделения организма-мишени из природного субстрата (геномного материала или организма)
Примечание: метод выделения всегда проходит валидацию при помощи теста.
Аналитическая
Метод должен быть способен выделить достаточное количество организма-мишени или его ДНК, РНК
чувствительность
или белка из соответствующего опытного образца. Выделите организм-мишень не менее чем из 3-х
образцов.
Аналитическая
Данный параметр не является важным. Выделение организма-мишени из образца является
специфичность
неспецифичным по определению.
Селективность
Селективность теста определяется так же, как описано для чувствительности, на различных сортах
растений-хозяев.
Повторяемость
Используйте один образец с низкой концентрацией организма-мишени и подготовьте 8 подвыборок
(экстрактов). Оцените эффективность выделения при помощи соответствующего теста.
Воспроизводимость
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Молекулярные методы, например, гибридизация, ПЦР и ПЦР в реальном времени.
Примечание: этот этап включает в себя методы выделения ДНК или РНК из материала образца.
Аналитическая
Так как концентрация вирусов, вироидов и фитоплазм никогда не является известной, определите
чувствительность
максимальное разбавление выявленной ДНК или РНК. Определѐнная чувствительность является
относительной чувствительностью, а не абсолютной.
Проведите не менее 3-х экспериментов при помощи 8-и серий разбавлений. Если после трѐх серий не
получены стойкие результаты, следует подготовить дополнительные серии и провести их анализ.
Аналитическая
специфичность
Аналитическая чувствительность связана с рядом специфических параметров теста, которые
необходимо точно определить и стандартизировать, например, с торговой маркой реагентов ПЦР (в
особенности, ДНК-полимеразы) и с условиями проведения цикла ПЦР.
Проведите скрининг по отношению к ряду организмов, являющихся и не являющихся мишенями,
которые могут присутствовать в образце.
Кроме того, результаты анализа могут быть подтверждены компьютерным (in silico) сравнением
последовательностей зондов и праймеров с последовательностями в геномных библиотеках.
34
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Необходимо учитывать возможные воздействия на аналитическую чувствительность. Определите
влияние природного субстрата путѐм добавления положительного образца в живицу различных сортов
культуры.
Используйте не менее одного образца для каждой из 2-х модальностей (с учѐтом результатов по
аналитической чувствительности) с низким и средним уровнями численности организма-мишени, с
минимумом в две подвыборки от каждой модальности, с не менее чем тремя, но предпочтительно, с
восьмью репликатами в каждой подвыборке.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Серологические методы: ELISA и прямой иммунологический блот-анализ ткани.
Аналитическая
чувствительность
Так как концентрация вирусов никогда не является известной, то используйте один здоровый образец
(того же природного субстрата, который должен пройти валидацию), подготовьте не менее 8-и
подвыборок для определения стандартного отклонения оптической плотности (ОП) для определения
фоновой реакции.
Проведите не менее 3-х экспериментов с 8-ю сериями разбавлений положительного образца в
здоровом материале. В каждом эксперименте проведите две повторности для каждого
последовательного разбавления.
Определите максимальное разбавление экстрактов образца, при котором организм-мишень может быть
выявлен. Если после трѐх серий не получены стойкие результаты, следует подготовить
дополнительные серии и провести их анализ.
Чувствительность, установленная при этом, является относительной, а не абсолютной.
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Аналитическая чувствительность связана с рядом специфических параметров теста, которые
необходимо точно определить и стандартизировать, например, с порогом оптической плотности (ОП) в
тесте ELISA.
Проведите скрининг антител по отношению к ряду родственных организмов-мишеней и значимых
организмов, не являющихся мишенями, которые могут присутствовать в образце.
Следует учитывать возможные воздействия на аналитическую чувствительность. Определите
воздействие природного субстрата путѐм добавления положительного образца в живицу различных
сортов культуры.
Используйте не менее 2-х подвыборок для каждого организма-мишени.
Используйте не менее 3-х образцов при низком уровне численности организма-мишени (с учѐтом
результатов по аналитической чувствительности), с двумя подвыборками от каждого образца, а также с
8-ю различными чашками (тестами) в каждой подвыборке.
Этот анализ позволяет получить данные об уровне недостоверности результатов теста.
35
Воспроизводимость
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Методы биоопытов: анализ растений (главным образом используется в качестве анализа на подтверждение присутствия
вирусов и вироидов, но не фитоплазм) заражѐнных непосредственно и путѐм прививки.
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Воспроизводимость
Определите максимальное разбавление инокулята в буфере для получения симптомов или
размножения в растении. Это всего лишь приблизительный расчѐт разбавлений, которые могут быть
использованы. Используйте 1 репрезентативный образец и 3 подвыборки для каждого разбавления.
Чувствительность, установленная при этом, является относительной, а не абсолютной.
Аналитическая чувствительность связана с рядом специфических параметров теста, которые
необходимо точно определить и стандартизировать, например, со стадией развития подопытных
растений, с методом инокуляции и условиями инкубации. Она не существенна для прививок.
Определите специфичность теста (во-первых) на штаммах организма-мишени, с учѐтом генетического
разнообразия, разного географического происхождения и разных растений-хозяев, и (во-вторых) на
ряде организмов, не являющихся мишенями, в частности, на тех, которые встречаются в материале
образцов.
Определите относительную нечувствительность теста к вариациям материала образца, например, с
использованием различных сортов растений-хозяев.
Используйте один репрезентативный образец (с восьмью растениями для каждого хозяина)
соответствующего разбавления, определѐнного в анализе на чувствительность, и используйте
растения-хозяева, определѐнные в анализе на специфичность.
Этот анализ позволяет получить данные об уровне недостоверности результатов теста.
Так же, как и для повторяемости, но, по возможности, с другим(ми) оператором(ами), в другие дни и, в
соответствующих случаях, с другим оборудованием.
Биохимические методы: например, электрофорез и R-PAGE.
Аналитическая
чувствительность
Аналитическая
специфичность
Селективность
Повторяемость
Определите максимальное разбавление особей-мишеней, нуклеиновой кислоты или белка для
проведения надѐжного анализа. Чувствительность, установленная при этом, является относительной, а
не абсолютной. Отметьте положительные и отрицательные реакции.
Параметры теста должны быть чѐтко определены и стандартизированы.
Сравните со значимыми организмами, белками или засоряющими веществами и покажите, что можно
проводить дифференциацию. Также исследуйте межвидовую изменчивость. Определите, какие
характеристики следует идентифицировать.
Не применяется.
Сделайте анализ не менее 8-и репликатов одного и того же экстракта образца с низкими уровнями
численности организма-мишени. Эти уровни следует определять как пропорциональные
аналитической чувствительности.
36
Воспроизводимость
Определяют, как и для повторяемости, но соответствующие условия, например, оператор, время
проведения, задержка проведения и условия хранения после приготовления образца, варьируют для
оценки гибкости теста. Для этого требуется не менее 8-и репликатов. Также можно варьировать
реагенты и оборудование.
Эти условия требуют не менее 3-х репликатов со сравнимыми результатами.
37