На правах рукописи - Институт молекулярной патологии и

На правах рукописи
МИНИКЕЕВ Ильдар Масхутович
ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ
ПОЛОСТИ РТА И РЕГИОНАРНЫХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ
ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ХРОНИЧЕСКОЙ
ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ
14.03.02 – патологическая анатомия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Новосибирск – 2016
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (Новосибирск)
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор
Майбородин Игорь Валентинович
Официальные оппоненты:
Авдалян Ашот Меружанович, доктор медицинских наук, заведующий лабораторией исследований молекулярно-генетических характеристик опухолей ФГБУ Российского онкологического научного центра имени Н.Н.Блохина МЗ РФ, Алтайский филиал (Барнаул).
Горчаков Владимир Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий
лабораторией функциональной морфологии лимфатической системы ФГБНУ Научноисследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии (Новосибирск).
Ведущая организация:
ГБОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет МЗ РФ (Барнаул).
Защита состоится « _____ » ____________ 2016 г. в ______ часов на заседании диссертационного совета Д 001.037.01 в ФГБНУ «Институт молекулярной патологии и патоморфологии» по адресу: 630117, Новосибирск, ул. Тимакова, 2.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ФГБНУ «Институт молекулярной патологии и патоморфологии» http://pathomorphology.ru.
Автореферат разослан « _____ » ___________ 2016 г.
Ученый секретарь
Диссертационного совета
доктор биологических наук,
профессор
Молодых Ольга Павловна
2
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Хроническая почечная недостаточность (ХПН) представляет серьезную медицинскую, социальную и экономическую проблему (Go A.S., 2004). Распространение хронических заболеваний почек в промышленно развитых странах постоянно
растет. У больных с ХПН в результате уремии и медикаментозного лечения в значительном числе случаев развиваются патологические процессы в других тканях и органах
(например, в коже, печени, селезенке), что является серьезной медико-социальной проблемой, требующей для своего разрешения комплексных подходов.
Данные литературы о влиянии состояния почек на органы и ткани ротовой полости
разнородны и иногда противоречивы, их можно разделить на 3 большие группы: данные о
практическом отсутствии изменений слизистой оболочки полости рта при развитии почечной недостаточности (Vesterinen M. et al., 2007; Castillo A. et al., 2007; Garcez J. et al.,
2009); результаты исследований, свидетельствующие о средней степени реакций органов
и тканей полости рта на недостаточность функции почек (Khosravi M. et al., 2011; Bossola
M., Tazza L., 2011; Dirschnabel A.J. et al., 2011); результаты, свидетельствующие о выраженных изменениях тканей и органов полости рта при развитии почечной недостаточности (Cengiz M.I. et al., 2007, 2009; Dağ A. et al., 2010; Luczyszyn S.M. et al., 2012).
Развитие хронической почечной недостаточности и ее лечение могут опосредовать
множественные изменения зубов и тканей полости рта, которые сохраняются даже в терминальной стадии. Почечная заместительная терапия может влиять на состояние периодонтальных тканей, включая гингивальную гиперплазию при иммуносупрессии после
трансплантации почки, увеличение микробной контаминации, воспаление десен, отложение зубных камней и возможное увеличение распространенности и тяжести деструктивных пародонтозов (Davidovich E. et al., 2005; Dağ A. et al., 2010; Luczyszyn S.M. et al., 2012;
Braosi A.P. et al., 2012). Установлено, что длительность ХПН в терминальной стадии, проведение гемодиализа существенно влияют на состояние полости рта (Davidovich E. et al.,
2005).
Еще в 40-х годах прошлого века было отмечено, что ХПН у человека сочетается с
лимфопенией и атрофией лимфоидной ткани (Holman R.L., 1945). Гиперазотемические
болезни почек сопровождаются склеротическими и атрофическими процессами в лимфатических узлах (Fiore-Donati L., Marinaccio L., 1955). При развитии почечной недостаточности обязательно вовлекается в процесс лимфатическая система, происходит снижение
общей дренажно-детоксикационной функции лимфатического региона почки, что может
рассматриваться как лимфо-ренальная недостаточность. Морфологическим отражением
почечной недостаточности со стороны структурно-функциональной организации почечного лимфатического узла является уменьшение его «компактизации» за счет прогрессивного уменьшения площади паракортекса, лимфоидных узелков с герминативным центром
на фоне снижения соотношения Т- и В-зависимых зон и увеличения мозгового вещества
(Анохин С.И., Горчаков В.Н., 2011; Анохин С.И., 2012; Бородин Ю.И. и др., 2012).
Почечная недостаточность характеризуется дисбалансом биоэлементного состава в
лимфатическом регионе почки, что выражается в аккумуляции основных микроэлементов
тканью почки в большей степени, чем лимфатическими узлами, особенно в ранние сроки,
и связано со структурно-функциональными изменениями органов.
Степень разработанности темы исследования. В экспериментах на крысах изучено
влияние нарушений лимфооттока на состояние нормальных почек и при односторонней
нефрэктомии (Zhang T. et al., 2008, 2009). Хотя ХПН приводит к снижению иммунных показателей всего организма (Raskova J. et al., 1986; Marakoglu I. et al., 2003; Nairn J. et al.,
2005) и, как минимум, локальным изменениям лимфотока (Анохин С.И., Горчаков В.Н.,
2011; Анохин С.И., 2012; Бородин Ю.И. и др., 2012), большинство научных работ основано на изучении почечных лимфатических узлов. Однако в таких случаях на состояние
3
этих органов оказывает влияние патологический процесс, идущий в почках и являющийся
основной причиной ХПН. Данные исследований о воздействии почечной недостаточности
на состояние лимфатической системы в целом и, в частности, на отдаленные лимфатические узлы, малочисленны. Следует отметить, что в некоторых исследованиях отрицается
влияние уремии на состояние лимфатических узлов (Touraine J.L. et al., 1975; Raskova J. et
al., 1986). Также недостаточно данных о состоянии слизистой оболочки полости рта при
ХПН (Mandalunis P.M. et al., 2003).
Цель исследования – установить особенности структурной реорганизации слизистой
оболочки полости рта и регионарных лимфатических узлов в зависимости от тяжести
процесса при моделировании хронической почечной недостаточности.
Задачи исследования:
1. Методами световой микроскопии исследовать патоморфологические изменения слизистой оболочки ротовой полости крыс при ХПН различной степени тяжести.
2. Изучить основные структурные и клеточные реакции субмандибулярных лимфатических узлов при различной степени тяжести ХПН.
3. Выявить взаимосвязь степени тяжести ХПН с изменениями слизистой оболочки ротовой полости и регионарных к ней лимфатических узлов.
Научная новизна. Впервые проведено патоморфологическое исследование отдаленных от почки лимфатических узлов при хронической почечной недостаточности различной степени тяжести.
Впервые показано, что у крыс при хронической почечной недостаточности легкой степени происходит диффузная лейкоцитарная инфильтрация собственной пластинки слизистой оболочки полости рта, увеличение в ней относительной площади кровеносных и
лимфатических сосудов. При средней и тяжелой хронической почечной недостаточности
происходит атрофия эпителия полости рта на фоне гиперкератоза, собственная пластинка
слизистой оболочки склерозируется, там формируются мелкие лейкоцитарные инфильтраты. Воспалительные изменения, атрофия эпителия и склеротическая трансформация
собственной пластинки слизистой оболочки полости рта усиливаются по мере нарастания
степени тяжести хронической почечной недостаточности.
Впервые установлено, что в субмандибулярных лимфатических узлах крыс с хронической почечной недостаточностью через 6 мес после нефрэктомии развивается гипотрофия
лимфоидных фолликулов с центрами размножения и без них, снижается относительная
площадь мякотных тяжей и мозговых синусов. При этом значительно возрастает выраженность склероза как в корковом, так и в мозговом веществе. Во всех зонах лимфатических узлов уменьшается число фигур митозов и лимфоцитов при увеличении количества
ретикулярных клеток, моноцитов, макрофагов, эритроцитов и эозинофилов.
Впервые показано, что при хронической почечной недостаточности средней и тяжелой
степени в собственной пластинке слизистой оболочки полости рта возрастает количество
эозинофилов и плазматических клеток. Такие особенности лейкоцитарной инфильтрации
в сочетании со значительным увеличением численности эозинофильных гранулоцитов в
просвете мозговых синусов субмандибулярных лимфатических узлов указывают на присутствие значительного аллергического компонента в инициации и поддержании воспаления в тканях полости рта при хронической почечной недостаточности.
Теоретическое и практическое значение работы. Получены новые знания об особенностях структурной реорганизации слизистой оболочки полости рта и субмандибулярных лимфатических узлов при хронической почечной недостаточности. Выявление в слизистой оболочке полости рта воспалительных процессов, нарушений микроциркуляции и
отека обусловливают необходимость проведения мероприятий, направленных на профилактику явлений лимфостаза и воспалительных осложнений при стоматологических процедурах у больных с хронической почечной недостаточностью.
Необходимо учитывать выраженность изменений субмандибулярных лимфатических
4
узлов при почечной недостаточности при выборе методов лечения и определении прогноза заболевания. Целесообразно проводить лечение хронической почечной недостаточности с учетом не только ее тяжести, но и принимая во внимание изменения лимфоидных
органов. Необходима совместная работа стоматологов и нефрологов для своевременной и
адекватной помощи пациентам с хронической почечной недостаточностью.
Методология и методы исследования. Методология исследования основана на применении принципов и методов морфологического анализа патологических процессов, использования теоретических разработок и обобщений о типовых патологических процессах. В работе использованы современные методы морфологического анализа и обработки
полученных данных. Объект исследования – слизистая оболочка полости рта и субмандибулярные лимфатические узлы крыс при моделировании хронической почечной недостаточности различной тяжести. Предмет исследования – особенности структурной реорганизации слизистой оболочки полости рта и регионарных лимфатических узлов в зависимости от тяжести патологического процесса.
На защиту выносятся следующие основные положения:
1. При нарастании тяжести ХПН у крыс в собственной пластинке слизистой оболочки
полости рта увеличивается выраженность склероза при одновременном формировании
лейкоцитарных инфильтратов, эпителий атрофируется на фоне гиперкератоза.
2. В субмандибулярных лимфатических узлах крыс с ХПН все структуры прогрессивно
замещаются соединительной тканью. Во всех зонах коркового и мозгового вещества
уменьшается численность иммунокомпетентных клеток, а возрастает – макрофагов и клеточных элементов стромы.
Степень достоверности результатов диссертации. Все использованные методические (морфологический и морфометрический анализ) приемы и способы статистической
обработки соответствуют поставленным цели и задачам и позволяют получить достоверные результаты. Диссертация выполнена на достаточном экспериментальном материале
(138 крыс-самцов инбредной линии Wag) с использованием сертифицированного оборудования. Сформулированные научные положения, выводы и практические рекомендации
основаны на результатах собственных исследований, не носят характера умозрительных
заключений и вытекают из результатов работы.
Апробация результатов диссертации. Основные положения диссертации доложены
на 7-й межрегиональной конференции, посвященной памяти акад. РАМН проф. Л.В. Полуэктова (Омск, 2013); международной научно-практической конференции «Фундаментальные проблемы науки» (Уфа, 2013); XII Евразийском симпозиуме «Проблемы саногенного и патогенного эффектов эндо- и экзоэкологического воздействия на внутреннюю
среду организма» (Чолпон-Ата, 2014) и на заседании научных сотрудников лабораторий
стволовой клетки, инвазивных медицинских технологий и персонализованной медицины
ФГБУН Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск, 2015).
Публикации. По теме диссертации опубликованы 9 печатных работ, из них 6 – в ведущих научных изданиях, рекомендованных ВАК для публикации результатов диссертационных исследований
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, собственных результатов, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованных источников и 5 приложений. Работа изложена на 158 страницах компьютерного текста, содержит 16 таблиц, иллюстрирована 35 многокомпонентными комбинированными
рисунками. Библиография включает 274 источника (73 отечественных и 201 иностранный). Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.
5
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Проведено патоморфологическое исследование слизистой оболочки полости рта и регионарных к ней субмандибулярных лимфатических узлов через 6 мес после моделирования ХПН различной степени тяжести у крыс-самцов инбредной линии Wag возрастом 6
мес и массой 180 – 200 г. Для морфологического исследования было использовано 48
крыс. Для контроля тяжести ХПН и выбора сроков морфологических исследований применяли биохимический контроль плазмы крови в различные сроки после нефрэктомии,
для этого было использовано 90 крыс. Всего в экспериментах было использовано 138 животных.
Все животные получены из вивария Института цитологии и генетики СО РАН, виварий соответствует категории SPF. Крыс содержали при естественном освещении при свободном доступе к воде и стандартному рациону. Все манипуляции с животными осуществляли под эфирным наркозом в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных».
Для моделирования ХПН в работе был использован метод нефрэктомии (из множества
моделей ХПН, содержащихся в литературе) (Raskova J. et al., 1986; Zhang T. et al., 2008,
2009; Satirapoj B. et al., 2012), позволяющий максимально избавиться от индивидуальных
реакций каждого животного на введение того или иного вещества.
В асептических условиях выполняли послойную срединную лапаротомию. В группе
крыс с моделированием ХПН легкой степени удаляли нижнюю половину левой почки, для
создания ХПН средней степени полностью удаляли левую почку, при моделировании тяжелой ХПН удаляли левую почку и нижнюю половину правой.
Оценка биохимических показателей крови. Для контроля тяжести ХПН и выбора
сроков морфологических исследований применяли биохимический контроль плазмы крови в различные сроки после нефрэктомии (1, 2, 3, 6 и 9 мес). Забор крови для биохимического анализа осуществляли утром до кормления крыс из сонных артерий при декапитации в количестве 5 – 8 мл с использованием гепарина в качестве антикоагулянта. После
охлаждения кровь центрифугировали на протяжении 15 мин (при 3000 оборотов в минуту). Полученную сыворотку отбирали в сухую, химически чистую пробирку. Определяли
содержание мочевины (по цветной реакции с использованием парадиметиламинобензальдегида) («Spekol», l=343 нм) и креатинина (по интенсивности цветной реакции Яффе
(«Spekol», l=490 нм) (Герасев А.Д. и др., 2000; Кавешникова С.В., Иванов В.М., 2011).
Патоморфологический анализ. Животных выводили из эксперимента передозировкой эфирного наркоза через 6 мес после нефрэктомии. Фрагменты слизистой оболочки
полости рта крыс, биоптированные из области переходной складки нижних резцов, и субмандибулярные лимфатические узлы фиксировали в 4% растворе параформальдегида на
фосфатном буфере (рН 7,4) не менее 24 ч, обезвоживали в градиенте этанола возрастающей концентрации, просветляли в ксилоле и заключали в парафин. Срезы толщиной 5 – 7
мкм окрашивали гематоксилином и эозином и по ван Гизону. Исследования проводили в
световом микроскопе Axioimager M1 при увеличении до 1500 раз.
Морфометрические исследования. Для исследования структурной организации слизистой оболочки ротовой полости, субмандибулярных лимфатических узлов и клеточных
элементов в их зонах проводили измерения изображений, полученных при помощи цифровой видеокамеры микроскопа, на экране компьютера с использованием программного
обеспечения морфологического модуля Axiovision (Zeiss, Германия). При использовании
объектива с увеличением х5 конечная площадь тестового прямоугольника была равна
5 600 000 мкм2 (стороны 2800х2000 мкм), при объективе х10 – 1 400 000 мкм2 (стороны
1400х1000 мкм), при объективе х20 – 350 000 мкм2 (стороны 700х500 мкм), при подсчете
цитограммы клеток (применение объектива с увеличением х40) – 87 500 мкм2 (стороны
350х250 мкм). С каждого среза проводили 3 – 5 измерений, в соответствии с рекоменда-
6
циями (Head J.R., Seeling L.L., 1984).
На срезах слизистой оболочки полости рта определяли количество эпителиоцитов на
единицу длины профиля базальной мембраны, относительную площадь кровеносных,
лимфатических сосудов и интерстициальных пространств. На срезах лимфатических узлов оценивали относительную площадь капсулы, соединительнотканных прослоек отдельно в корковом и мозговом веществе, краевого синуса, коркового плато, паракортекса,
лимфоидных фолликулов без центров и с центрами размножения, мякотных тяжей и мозговых синусов.
Дифференцирование кровеносных и лимфатических сосудов в собственной пластинке
слизистой оболочки полости рта крыс проводили в соответствии с рекомендациями (Козлов В.И. и др., 1994; Casley-Smith J., 1983, 1987; Head J.R., Seeling L.L., 1984).
Для изучения цитограммы клеток (лимфоцитов, иммуно- и плазмобластов, нейтрофилов, эозинофилов, эритроцитов, моноцитов, макрофагов, тканевых базофилов, плазматических, делящихся клеток, клеток Мотта и клеток с пикнотически измененным ядром)
определяли от 500 до 1000 клеточных элементов в различных местах препарата в зависимости от однородности клеточного состава. Приняв общее количество клеток за 100%,
определяли относительное содержание каждого типа, которые верифицировали в соответствии с рекомендациями М.Г.Абрамова (1985), Ю.И.Бородина и В.Н.Григорьева (1986).
Статистическую обработку результатов проводили на прикладной статистической программе MS Excel 7.0 (Microsoft, USA), определяли среднее арифметическое и ошибку
среднего арифметического (стандартное отклонение). Достоверность различий определяли по критерию Стьюдента. Достоверным считали различие при p<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Через 6 мес после нефрэктомии содержание мочевины в крови у крыс с тяжелой ХПН
было выше, чем у интактных крыс и при ХПН легкой и средней степени соответственно в
10,3; 4,2 и 2,1 раза (табл. 1). Данный показатель у животных с ХПН средней степени был
больше в 5 и 2 раза, соответственно, по сравнению с интактным контролем и с состоянием
при ХПН легкой степени. При ХПН легкой степени концентрация мочевины была выше в
2,5 раза, относительно интактного уровня.
Таблица 1. Изменения содержания мочевины в крови крыс в различные сроки после нефрэктомии (ммоль/л, M±m)
Группы животных
Интактные
ХПН легкой степени
ХПН средней степени
Тяжелая ХПН
1 мес
Срок после нефрэктомии
2 мес
3 мес
6 мес
4,83±1,6
9 мес
10,2±1,72
10,8±1,47
12,5±1,05
12±1,41
17,8±1,47
11,2±1,47
18±1,41
22,7±2,34
24±2,97
29,7±2,42
14,8±1,33
25,8±1,47
34,8±2,48
49,8±2,68
58,3
Примечание: При тяжелой ХПН через 9 мес после нефрэктомии ошибка средней величины отсутствует, так как к этому времени осталось 1 животное, остальные погибли.
Содержание креатинина в крови спустя 6 мес после операции у крыс с тяжелой ХПН
было выше, чем у интактных крыс и при ХПН легкой и средней степени соответственно в
3,6; 2,4 раза и на 52,3% (табл. 2). Данный показатель у животных с ХПН средней степени
был больше в 2,4 раза и на 59,5%, соответственно, по сравнению с интактным контролем и
крысами с ХПН легкой степени. При ХПН легкой степени концентрация креатинина была
выше на 49,5% относительно интактного уровня.
7
Структурная организация слизистой оболочки полости рта. На фоне ХПН легкой
степени через 6 мес после нефрэктомии отмечены незначительные явления склероза собственной пластинки слизистой оболочки полости рта. При этом в ней возрастало количество тканевых лейкоцитов, происходило расширение просветов кровеносных и лимфатических сосудов.
Таблица 2. Изменения содержания креатинина крови крыс в различные сроки после нефрэктомии (мкмоль/л, M±m)
Группа животных
Интактные
ХПН легкой степени
ХПН средней степени
Тяжелая ХПН
Срок после нефрэктомии
3 мес
6 мес
54,5±3,51
1 мес
2 мес
9 мес
70,8±4,83
79,7±5,32
81,3±4,5
81,5±3,73
90,2±7,36
79,3±4,18
89,7±3,33
99,2±6,37
130±4,32
148±5,78
99,8±3,97
120±4,49
149±5,54
198±9,03
253
Примечание: При тяжелой ХПН через 9 мес после нефрэктомии ошибка средней величины отсутствует, так как к этому времени осталось 1 животное, остальные погибли.
При ХПН средней степени и тяжелой форме был обнаружен выраженный склероз всех
отделов слизистой оболочки. Эпителиальная выстилка имела признаки атрофии и гиперкератоза. Значительно уменьшалось количество сосудов всех типов, но резко возрастало
число тканевых лейкоцитов, можно отметить формирование мелких лейкоцитарных инфильтратов с преобладанием в их цитограмме лимфоцитов.
При ХПН средней и тяжелой степени количество эпителиальных клеток на единицу
длины профиля базальной мембраны было достоверно больше соответственно на 22,8 и
27,1%, чем у интактных животных (табл. 3). Относительная площадь кровеносных сосудов на срезе слизистой оболочки полости рта при ХПН средней и тяжелой степени была
меньше, чем при ХПН легкой степени, в 2,6 и 3 раза, соответственно.
Таблица 3. Структура слизистой оболочки полости рта крыс при ХПН различной степени
через 6 мес после нефрэктомии (M±m)
Показатель
Интактные
1
2
Число эпителиальных
клеток на единицу
длины (N)
118±8,024, 5
Группы животных
ХПН легкой
ХПН средней
степени
степени
3
4
Эпителий
132±2,355
Тяжелая ХПН
5
145±7,682
150±8,42, 3
Слизистая оболочка десны
Капилляры:
кровеносные (AA)
лимфатические (AA)
Интерстициальные
пространства (AA)
Клетки и межклеточное вещество (AA)
3,08±0,669
6±0,7393, 5
4,5±0,6744, 5
8,83±1,112, 4, 5
1,75±0,7543
5,67±0,6513, 5
1,5±0,6743
2,08±0,6692, 3, 4
2,67±0,6513
4,83±0,7182, 5
2,83±0,718
2,75±0,7543
88,3±1,293, 5
81,8±1,752, 4, 5
89,8±1,143, 5
93,7±1,562, 3, 4
Примечание: 2, 3, 4, 5 - величины, достоверно отличающиеся от соответствующих в данных колонках (р<0,05); N - число клеток на 103 мкм длины профиля среза базальной мембраны; AA – относительная площадь структур на срезе (% площади среза).
8
Относительная площадь лимфатических сосудов при ХПН легкой степени была выше
на 47,2, 55,7% и в 4,2 раза, соответственно, относительно интактного контроля и животных с ХПН средней и тяжелой степени. При тяжелой ХПН данный показатель был меньше в 2,9 и 2,7 раза, соответственно, чем у интактных крыс и при ХПН средней степени.
Относительная площадь интерстициальных пространств при ХПН легкой степени была
достоверно больше на 80,9 и 75,6%, соответственно, чем у интактного контроля и животных с тяжелой ХПН.
Особенности лейкоцитарной инфильтрации собственной пластинки слизистой
оболочки полости рта. При ХПН легкой, средней и тяжелой степени численная плотность всех клеток в слизистой оболочке полости рта была больше в 3,7; 4,3 и 4,3 раза, соответственно, чем у интактных животных (табл. 4).
Таблица 4. Цитограмма клеточных элементов собственной пластинки слизистой оболочки
полости рта крыс при ХПН различной степени через 6 мес после нефрэктомии (M±m)
Клетки
1
Численная плотность (NA)
Лимфоциты
(%)
(NA)
Нейтрофилы
(%)
(NA)
Эозинофилы
(%)
(NA)
Тканевые базофилы
(%)
(NA)
Эритроциты
(%)
(NA)
Моноциты
(%)
(NA)
Макрофаги
(%)
(NA)
Плазмоциты
(%)
(NA)
С кариопикнозом
(%)
(NA)
Группы животных
ХПН легкой
ХПН средней
степени
степени
3
4
333±77,82
383±71,82
Интактные
2
88,9±10,13, 4, 5
Тяжелая ХПН
5
383±93,72
69,8±3,93, 4, 5
62±7,383, 4, 5
56,6±3,152
189±46,32
52,1±2,972
199±37,82
47,5±3,942
184±55,32
22,5±3,06
20,1±4,023, 4, 5
27,7±2,23
91,7±20,82
28,9±2,07
111±24,82
29,6±2,35
112±22,32
0,5±0,522
0,439±0,465
1,42±1,31
4,83±4,71
1±1,13
3,92±4,54
1,58±1,16
5,42±3,9
0,75±0,622
0,663±0,5344, 5
1,42±1,31
4,25±4,07
1,67±0,651
6,33±2,612
1,42±0,515
5,42±2,192
0,667±0,778
0,597±0,6865
1±0,853
3,67±3,47
1,25±1,06
4,67±3,89
1,92±0,793
7,17±2,822
1,25±0,452
1,09±0,3453, 4
2,17±0,718
7,08±2,812
2,42±0,669
9,5±4,12
2,67±1,07
10,6±6,04
2,67±0,7784, 5
2,38±0,7263, 4, 5
4,67±0,888
15,5±4,762
4,92±0,7932
18,8±3,932
6,33±0,8882
24±5,412
1,33±0,4924, 5
1,19±0,4663, 4, 5
2,92±0,793
9,83±3,832
4,5±0,9052
17,4±5,212
5,08±1,082
19,3±5,612
0,5±0,5224, 5
0,451±0,4774, 5
2,17±0,835
7,25±3,41
3,25±0,7542
12,3±2,932
3,92±0,7932
15,5±6,422
Примечание: 2, 3, 4, 5 - величины, достоверно отличающиеся от соответствующих в данных колонках (р<0,05); NA - численная плотность клеток на 105 мкм2 площади среза.
Процентное содержание лимфоцитов на фоне ХПН легкой, средней и тяжелой степени
было достоверно ниже на 23,3; 34 и 46,9%, соответственно, относительно интактного контроля. Абсолютное количество этих лейкоцитов при ХПН легкой, средней и тяжелой сте-
9
пени, наоборот, было больше в 3; 3,2 и 3 раза, соответственно, по сравнению с интактным
контролем.
Следует отметить высокое содержание эозинофилов у отдельных особей со средней и
тяжелой ХПН, что обусловливает высокое значение ошибки средних величин значений
показателей численности такого типа лейкоцитов. Абсолютное содержание тканевых базофилов при ХПН средней и тяжелой степени было больше в 9,5 и 8,2 раза, соответственно, по сравнению с интактным контролем.
Количество эритроцитов на единицу площади среза слизистой оболочки только на
фоне тяжелой ХПН было больше в 12 раз, чем у интактных животных.
Относительное содержание макрофагов на фоне ХПН средней и тяжелой степени было
выше на 84,3% и в 2,4 раза, соответственно, относительно интактного контроля. Абсолютное количество этих лейкоцитов при ХПН легкой, средней и тяжелой степени было
больше в 6,5; 7,9 и 10,1 раза, соответственно, по сравнению с интактным контролем.
Процентное содержание плазматических клеток на фоне ХПН средней и тяжелой степени было достоверно выше в 3,4 и 3,8 раза, соответственно, относительно интактного
контроля. Абсолютное количество плазмоцитов при ХПН легкой, средней и тяжелой степени, было больше в 8,3; 14,6 и 16,2 раза, также соответственно, и также по сравнению с
интактным контролем.
Относительное содержание клеток с признаками кариопикноза на фоне ХПН средней и
тяжелой степени было статистически достоверно выше в 6,5 и 7,8 раза, соответственно,
относительно интактного контроля. Абсолютное количество таких клеточных элементов
при ХПН легкой, средней и тяжелой степени было больше в 27,3 и 34,3 раза, также соответственно, и также по сравнению с интактным контролем.
Структурная организация субмандибулярных лимфатических узлов. Относительная площадь соединительной ткани в корковом веществе при ХПН средней и тяжелой
степени была выше, чем у интактных крыс, в 29,8 и 22 раза, соответственно (табл. 5). Относительная площадь соединительной ткани в мозговом веществе при тяжелой ХПН была
выше, чем у интактных крыс, при ХПН легкой и средней степени, в 35; 7 раз и на 65,9%,
соответственно.
Таблица 5. Структура субмандибулярных лимфатических узлов крыс при ХПН различной
степени через 6 мес после нефрэктомии (M±m)
Показатель
Капсула (АА)
Соединительная ткань в
корковом веществе (АА)
Соединительная ткань в
мозговом веществе (АА)
Краевой синус (АА)
Корковое плато (АА)
Паракортикальная зона
(АА)
Узелки без центра размножения (АА)
Узелки с центром размножения (АА)
Центры размножения
(АА)
Мантийная зона (АА)
Мякотные тяжи (АА)
Интактные
1,92±0,669
5
Группы животных
ХПН легкой
ХПН средней
степени
степени
3,5±0,674
3,25±0,622
Тяжелая ХПН
4,17±0,7182
0,583±0,7934, 5
2,83±0,8354, 5
12,8±0,9652, 3
17,4±5,712, 3
0,583±0,7933, 4, 5
2,92±0,6692, 4, 5
12,3±0,9852, 3, 5
20,4±2,942, 3, 4
1,42±0,515
14,5±1,73
0,417±0,515
12,6±0,669
0,333±0,651
12,4±0,9
0,167±0,389
12±0,853
32±3,333
42,2±2,952, 4, 5
27,8±2,043
22,7±6,573
5,33±0,8884, 5
3,58±0,6695
2,67±0,6512
1,08±0,92, 3
11,2±1,113, 4, 5
6,83±0,7182
5,58±0,92
2,67±2,152
5,83±0,7183, 4, 5
3,5±0,7982
3±0,6032
1,25±1,062
5,33±0,8884, 5
14,4±1,084, 5
3,33±0,651
11,8±0,7185
2,58±0,6692
10,7±1,152
1,42±1,162
8,67±0,7782, 3
10
Мозговые синусы (АА)
18,1±1,313, 4, 5
13,3±0,6512
12,2±0,8352
10,8±1,292
Примечание: 2, 3, 4, 5 - величины, достоверно отличающиеся от соответствующих в данных колонках (р<0,05); АА – относительная площадь структур на поперечном срезе (%).
Относительная площадь узелков с герминативными центрами в группе интактного
контроля была выше на 64%, в 2 и 4,2 раза, соответственно, относительно животных с
ХПН легкой, средней и тяжелой степени. Относительная площадь центров размножения у
интактных крыс был больше на 66,6; 94,3% и в 4,7 раза, соответственно, чем у животных
при ХПН легкой, средней и тяжелой степени.
Относительная площадь мякотных тяжей у животных с ХПН легкой, средней и тяжелой степени была снижена соответственно на 18,0; 25,6 и 39,8% по сравнению с интактными животными. Относительная площадь мозговых синусов у крыс с ХПН легкой, средней и тяжелой степени была снижена соответственно на 26,5; 32,5 и 40,3% по сравнению с
интактным контролем.
Цитоархитектоника коркового плато. Через полгода после операции при ХПН средней и тяжелой степени численная плотность всех клеток была меньше на 41,7 и 48,7%, соответственно, чем у интактных животных.
Процентное содержание лимфоцитов при ХПН легкой, средней и тяжелой степени было статистически достоверно ниже на 10,4; 16 и 26,3%, соответственно, относительно интактного контроля. Численная плотность этих лейкоцитов при ХПН легкой, средней и тяжелой степени была меньше на 41,3; 64,3 и 87,6%, соответственно, чем в интактном контроле.
Процентное содержание ретикулярных клеток при тяжелой ХПН было выше в 2,2 раза,
на 83,9 и 28,5%, соответственно, относительно интактного контроля и крыс с ХПН легкой
и средней степени. Численная плотность клеточных элементов стромы при тяжелой ХПН
была больше на 44,5 и 57,9%, соответственно, чем в интактном контроле и при ХПН легкой степени.
Процентное содержание клеток с пикнотически измененным ядром на фоне ХПН
средней и тяжелой степени было выше в 2,3 и 2,6 раза, соответственно, относительно интактного контроля.
Следует отметить присутствие в корковом плато лимфатических узлов животных с тяжелой ХПН обширных участков геморрагий, также в некоторых случаях было отмечено
большое содержание в клеточном составе эритроцитов и эозинофилов.
Цитоархитектоника паракортикальной зоны. При тяжелой ХПН численная плотность всех клеток в паракортикальной зоне субмандибулярных лимфатических узлов была
меньше на 36,2%, чем у интактных животных.
Процентное содержание лимфоцитов при ХПН легкой, средней и тяжелой степени было достоверно ниже на 11,8; 32,4 и 49,7%, соответственно, относительно интактного контроля. Численная плотность этих лейкоцитов при ХПН средней и тяжелой степени была
меньше на 73,2% и в 2 раза, соответственно, чем в интактном контроле.
Процентное содержание ретикулярных клеток при тяжелой ХПН было выше на 92,9;
75,8 и 25,3%, соответственно, относительно интактного контроля и крыс с ХПН легкой и
средней степени. На фоне этого данный показатель у животных с ХПН средней степени
был больше на 54 и 40,3%, соответственно, по сравнению с состоянием у интактных крыс
и при ХПН легкой степени. Численная плотность клеточных элементов стромы при тяжелой ХПН была больше на 45,9%, чем при ХПН легкой степени.
Процентное содержание макрофагов при тяжелой ХПН было выше в 3,4; 2,4 раза и на
34,3%, соответственно, относительно интактного контроля и крыс с ХПН легкой и средней степени. На фоне этого данный показатель у животных с ХПН средней степени был
больше в 2,6 раза и на 78,3%, соответственно, по сравнению с состоянием у интактных
крыс и при ХПН легкой степени. Абсолютное содержание этих фагоцитов при тяжелой
11
ХПН было больше в 2,5 и 2 раза, соответственно, чем в интактном контроле и при ХПН
легкой степени. Кроме того, у животных с ХПН средней степени макрофагов было больше
на 95,9%, относительно интактных крыс.
Численная плотность фигур митозов при тяжелой ХПН была меньше в 6,3 раза, по
сравнению с состоянием в интактном контроле.
В паракортексе узлов животных с ХПН средней и тяжелой степени присутствовали
различные по размерам геморрагии, у некоторых особей в данной зоне было найдено значительное содержание в цитограмме эритроцитов и эозинофилов.
Цитоархитектоника центров размножения лимфоидных фолликулов. При ХПН
легкой и тяжелой степени процентное содержание лимфоцитов было статистически достоверно ниже на 22,1%, относительно интактного контроля.
Относительное число иммуно- и плазмобластов при ХПН средней и тяжелой степени
было меньше на 42,7 и 46,8%, соответственно, чем в интактном контроле.
Процентное содержание ретикулярных клеток на фоне ХПН легкой, средней и тяжелой
степени было выше на 58,3; 55,7 и 84,7%, соответственно, по сравнению с состоянием в
интактном контроле. Численная плотность клеточных элементов стромы при ХПН легкой,
средней и тяжелой степени была больше на 99,3; 95,9% и в 2,4 раза, также соответственно,
и также относительно интактного контроля.
Процентное содержание макрофагов на фоне ХПН легкой, средней и тяжелой степени
было выше в 2,8; 2,8 и 3,1 раза, соответственно, чем у интактных животных. Абсолютное
содержание таких фагоцитов при ХПН легкой, средней и тяжелой степени было больше в
3,5; 3,6 и 4,1 раза, также соответственно, и также относительно интактного контроля.
Относительное содержание делящихся клеток на фоне тяжелой ХПН было ниже в 4,7
раза, по сравнению с состоянием у интактных животных.
Процентное содержание клеток с признаками кариопикноза при ХПН средней и тяжелой степени было выше в 2,8 и 3 раза, соответственно, чем у интактных животных. Численная плотность клеток с явлениями кариопикноза при ХПН средней и тяжелой степени
была больше в 3,8 и 3,9 раза, соответственно, относительно интактного контроля.
Цитоархитектоника мякотных тяжей. При ХПН средней и тяжелой степени численная плотность всех клеток в мякотных тяжах была больше на 39,8 и 37%, соответственно,
чем у интактных животных.
Абсолютное количество лимфоцитов при тяжелой ХПН было статистически достоверно выше на 65,2%, относительно интактного контроля.
Относительное число иммуно- и плазмобластов при ХПН средней и тяжелой степени
было меньше в 3,6 раза, по сравнению с интактным уровнем.
Процентное содержание плазматических клеток при ХПН легкой, средней и тяжелой
степени было меньше на 42,5; 58,7 и 74,7%, соответственно, чем в интактном контроле.
Относительное содержание ретикулярных клеток при ХПН легкой степени было статистически достоверно выше на 40,5%, по сравнению с интактным контролем. Численная
плотность клеточных элементов стромы на фоне ХПН легкой, средней и тяжелой степени
была больше на 62,4; 96,8 и 97,7%, соответственно, чем в интактном контроле.
Содержание макрофагов на единицу площади среза мякотных тяжей при ХПН средней
и тяжелой степени было больше на 94,4 и 99,4%, соответственно, по сравнению с интактным уровнем. Абсолютное содержание эритроцитов при ХПН средней и тяжелой степени
было больше в 8,5 и 8,1 раза, соответственно, чем в интактном контроле.
Количество клеток с пикнотически измененным ядром на 105 мкм2 площади среза на
фоне ХПН средней и тяжелой степени было выше в 4,1 и 4,4 раза, соответственно, по
сравнению с интактным контролем.
Цитограмма клеток в просвете мозговых синусов. При ХПН средней и тяжелой
степени численная плотность всех клеток в просвете мозговых синусов лимфатических
узлов была больше в 3,8 и 3,5 раза, соответственно, чем у интактных животных.
12
Процентное содержание лимфоцитов при ХПН легкой, средней и тяжелой степени было меньше на 49,4%, в 2,1 раза и на 91,5%, соответственно, относительно интактного контроля. Относительное число плазматических клеток при ХПН средней и тяжелой степени
было меньше на 38,5 и 45,1%, соответственно, по сравнению с интактным уровнем. Абсолютное количество плазмоцитов при ХПН средней и тяжелой степени было меньше в 2,7
и 2,4 раза, соответственно, чем в интактном контроле.
Относительное содержание ретикулярных клеток при ХПН средней и тяжелой степени
было больше на 30,4 и 23,8%, соответственно, по сравнению с интактным контролем.
Численная плотность клеточных элементов стромы при ХПН легкой, средней и тяжелой
степени была больше в 3; 4,9 и 4,3 раза, соответственно, чем в интактном контроле.
Относительное количество макрофагов при ХПН легкой, средней и тяжелой степени
было больше в 2,6; 3,6 и 3,5 раза, соответственно, относительно интактного контроля. Содержание макрофагов на единицу площади среза просвета мозговых синусов при ХПН
легкой, средней и тяжелой степени было выше в 7,1; 13,3 и 12 раз, соответственно, по
сравнению с интактным уровнем.
Численная плотность эозинофилов при тяжелой ХПН была больше в 7,5 раза, по сравнению с уровнем интактного контроля. Абсолютное содержание эритроцитов при ХПН
средней и тяжелой степени было больше в 13,6 и 13,2 раза, соответственно, чем в интактном контроле.
Процентное содержание клеток с явлениями кариопикноза при ХПН средней и тяжелой степени был больше в 3,7 и 3,4 раза, соответственно, относительно уровня интактного
контроля. Количество клеток с пикнотически измененным ядром на 105 мкм2 площади
среза на фоне ХПН средней и тяжелой степени было выше в 14,6 и 12,4 раза, соответственно, по сравнению с состоянием в интактном контроле.
Следует отметить присутствие в мозговом веществе или соединительной ткани на его
месте у некоторых животных с ХПН средней и тяжелой степени большого числа тканевых
базофилов, эритроцитов и эозинофилов.
Известно, что ХПН сопровождается иммуносупрессией (Touraine J.L. et al., 1975;
Raskova J. et al., 1986; Marakoglu I. et al., 2003; Nairn J. et al., 2005), в некоторых случаях
отмечен сниженный уровень IgA в слюне (Souza C.R. et al., 2005), что приводит к снижению защитных свойств эпителиальной выстилки и собственно слизистой оболочки ротовой полости, в которую может проникать множество микроорганизмов.
Кроме того, ХПН приводит к нарушениям водно-солевого баланса, задержке воды в
организме и отечным изменениям различных тканей (Sakallioğlu E.E. et al., 2007). Отек и
изменения водно-солевого обмена нарушают питание и оксигенацию эпителия, и способствуют снижению его защитных свойств. Следует отметить, что сама отечная жидкость,
имеющаяся в собственной пластинке слизистой оболочки полости рта, является питательной средой для бактерий (Partsch H., 1988).
По нашим данным, при длительно протекающей ХПН средней и тяжелой степени происходит атрофия эпителия ротовой полости и усиливается слущивание эпителиальных
клеток с его поверхности, отмечается также гиперкератоз. О гиперкератозе при ХПН сообщают C.P. Bots и соавт. (2007). В литературе также имеется множество сообщений о
гингивальной гиперплазии (Nunn J.H. et al., 2000; Silverberg N.B. et al., 2001; Al-Nowaiser
A. et al., 2003; Nishide N. et al., 2005; Davidovich E. et al., 2005).
Процессы повреждения эпителиальной выстилки компенсируются повышенной митотической активностью клеток базального слоя. Новообразованные клетки, как правило,
небольших размеров, поэтому на единицу длины базальной мембраны их содержится
больше, чем у интактных крыс и, видимо, поэтому возрастает величина значения данного
показателя у всех животных с ХПН.
В норме в слизистой оболочке полости рта присутствует небольшое количество различных тканевых лейкоцитов, в основном лимфоцитов, осуществляющих функции мест-
13
ного иммунитета, контролирующих поступление антигена через эпителий и элиминирующих микроорганизмы. Массивное проникновение бактерий из полости рта через поврежденный эпителий в отечные ткани слизистой оболочки полости рта животных с ХПН
способствует миграции туда различных лейкоцитов, что приводит к резкому возрастанию
их численной плотности и даже формированию мелких лейкоцитарных инфильтратов.
Увеличение содержания плазматических клеток при ХПН средней и тяжелой степени,
скорее всего, свидетельствует о длительности и тяжести воспалительного процесса, а также о возможном наличии аллергического компонента (Gemmell E. et al., 2001; Lappin D.F.
et al., 2003; Майбородин И.В. и др., 2009). У некоторых животных с ХПН средней и тяжелой степени отмечено значительное увеличение численности эозинофилов, что подтверждает присутствие значительного аллергического компонента в инициации и поддержании воспаления в тканях полости рта. Можно говорить о длительно протекающем стоматите и гингивите различной степени выраженности. Эти изменения в меньшей степени
выражены у крыс с легкой степенью ХПН и нарастают по мере прогрессирования недостаточности функции почек. Подобные воспалительные изменений слизистой оболочки
полости рта отмечают другие исследователи (Dağ A. et al., 2010; Luczyszyn S.M. et al.,
2012; Braosi A.P. et al., 2012).
Длительно протекающий (хронический) воспалительный процесс, сопровождающийся
постоянным повреждением и регенерацией ткани, в ряде случаев завершается ее склеротической трансформацией, что было отмечено в слизистой оболочке полости рта животных со средней и тяжелой степенью ХПН. В пользу этого свидетельствует и атрофия эпителия, о которой сообщают и другие авторы (Martins C. et al., 2008; Bossola M., Tazza L.,
2011; Dirschnabel A.J. et al., 2011).
Это подтверждается повышением численности тканевых базофилов в собственной
пластинке слизистой оболочки полости рта у указанных групп крыс. Эти клетки принимают непосредственное участие в формировании соединительной ткани как с помощью
самостоятельного синтеза некоторых типов коллагена, так и через образование ростовых и
трансформирующих факторов для фибробластов и других биологически активных веществ (Ruger B. et al., 1994, 1996; Chyczewska E. et al., 1995; Hoshi K. et al., 2001).
Любая воспалительная реакция, в том числе и протекающая в полости рта, сопровождается сосудистыми нарушениями: кровеносные и лимфатические сосуды сначала расширяются, а затем ток крови и лимфы в них останавливается. Это процесс необходим для
предотвращения гематогенной (Кузин М.И., Костюченок Б.М., 1990) и лимфогенной (Поликар А., 1965; Rusznyak I. et al., 1967; Casley-Smith J.R., 1973; Elias R.M. et al., 1987; Isling
L.K. et al., 2010) диссеминации инфекции из воспалительного очага.
При легкой степени ХПН отмечено выраженное повышение относительной площади
кровеносных и лимфатических сосудов в слизистой оболочке полости рта. Однако при
ХПН средней и тяжелой степени относительная площадь сосудов находится на уровне интактного контроля или даже меньше его. По-видимому, это связано со склеротической
трансформацией тканей полости рта в группах крыс с выраженной ХПН. Вместе с этим,
воспаление и сосудистые изменения имеют место даже в этих группах, на что указывает
увеличение численности эритроцитов в тканях собственной пластинки слизистой оболочки при тяжелой ХПН.
Как свидетельствуют полученные нами результаты, ХПН, даже легкой степени, длительностью 6 мес, у крыс приводит к значительным изменениям слизистой оболочки полости рта, заключающимся в атрофии эпителия, склеротической трансформации собственной пластинки слизистой оболочки, сопровождающимися диффузной и очаговой
лейкоцитарной инфильтрацией и сосудистыми изменениями.
Можно согласиться с мнением некоторых авторов, что состояние полости рта может
являться статистически существенным фактором заблаговременного предсказания нарушений почечной фильтрации (Ioannidou E. et al., 2010).
14
В субмандибулярных лимфатических узлах всех крыс с ХПН к 6 мес после нефрэктомии снижается относительная площадь лимфоидных фолликулов, мякотных тяжей и мозговых синусов. При этом в несколько десятков раз возрастает относительная площадь соединительной ткани как в корковом, так и в мозговом веществе. Изменения прогрессируют по мере выраженности ХПН.
Очень многие исследователи отмечают процессы склеротической трансформации и
фиброза лимфоидных органов, в основном, лимфатических узлов, при ХПН. Однако
большинство этих работ основано на изучении почечных лимфатических узлов
(McLachlan M.S. et al., 1974, 1975; Фиськова Л.Б. и др., 1975; Анохин С.И., Горчаков В.Н.,
2011; Анохин С.И., 2012; Бородин Ю.И. и др., 2012), в таких случаях на состояние этих
органов оказывает влияние патологический процесс в почках, являющийся основной причиной ХПН. M.S.McLachlan и соавт. (1974, 1975) считают основной причиной изменений
почечных лимфатических узлов при ОПН уменьшение притока лимфы к ним.
Однако в наших экспериментах были изучены процессы в лимфатических узлах, даже
отдаленно не связанных с почками. Конечно, почечная недостаточность, отеки различных
тканей, азотемия и уремия оказывают определенное влияние на состояние субмандибулярных лимфатических узлов. Следует отметить существование работ, отрицающих влияние уремии на состояние лимфатических узлов (Touraine J.L. et al., 1975; Raskova J. et al.,
1986). Скорее всего, главной причиной их изменений являются процессы, обнаруженные в
регионе лимфосбора – в слизистой оболочке полости рта.
По-видимому, при развитии воспалительной реакции в полости рта в регионарные
субмандибулярные лимфатические узлы попадает множество антигенных и токсичных
веществ, которые вызывают сначала гипертрофию коркового плато, гиперплазию и расширение лимфоидных фолликулов. Длительный хронический воспалительный процесс в
регионе лимфосбора может способствовать декомпенсации защитных функций лимфатических узлов и замещению их лимфоидной паренхимы и синусной системы соединительной тканью (Kinmonth J.B., Wolfe J.H., 1980; Rada I.O. et al., 1983; Tudose N., Rada O.,
1984; Майбородин И.В. и др., 1998, 2001; Бородин Ю.И. и др., 2000).
Постепенно слизистая оболочка полости рта склерозируется, что сопровождается
уменьшением лимфотока к дренирующим лимфатическим узлам, что также способствует
их склерозу. Скорее всего, в данном случае причиной склеротической трансформации
субмандибулярных лимфатических узлов у крыс с ХПН служит сочетание хронического
воспаления в регионе лимфосбора с уменьшением лимфопритока.
Через 6 мес после нефрэктомии во всех зонах коркового вещества уменьшается численная плотность всех клеток, фигур митозов и лимфоцитов. При этом возрастает количество ретикулярных клеток, макрофагов и клеток с явлениями кариопикноза. Видимо, при
длительной хронической антигенной стимуляции (хронический воспалительный процесс в
регионе лимфосбора – в слизистой оболочке полости рта) в субмандибулярных лимфатических узлах постепенно истощается пул В-лимфоцитов, которые способны к делению и
являются предшественниками иммунобластов, плазмобластов и плазмоцитов. Поэтому во
всех структурах коркового вещества уменьшается общее число клеток (основная масса
которых является лимфоцитами), количество собственно лимфоцитов и делящихся клеток.
По мере уменьшения содержания этих клеточных элементов уменьшаются в размерах
и исчезают лимфоидные фолликулы. Все структуры коркового вещества лимфатических
узлов замещаются соединительной тканью. Это сопровождается возрастанием численности клеточных элементов стромы (Kinmonth J.B., Wolfe J.H., 1980; Rada I.O. et al., 1983;
Tudose N., Rada O., 1984; Майбородин И.В. и др., 1998, 2001; Бородин Ю.И. и др., 2000).
В мозговом веществе, где в основном расположены продуцирующие антитела плазматические клетки, с нарастанием тяжести ХПН уменьшаются относительное и абсолютное
количество плазматических клеток, процентное содержание иммуно- и плазмобластов.
Одновременно увеличивается численная плотность всех клеток, лимфоцитов, макрофагов,
15
эритроцитов, эозинофилов и клеточных элементов с пикнотически измененным ядром,
содержание ретикулярных клеток.
С развитием склероза в корковом веществе лимфатических узлов созревающие в лимфоидных узелках плазматические клетки не могут мигрировать в мякотные тяжи и мозговые синусы. Видимо, поэтому в мякотных тяжах снижается численность плазмоцитов, место которых занимают недифференцированные лимфоциты. Можно предположить, что
снижение численности плазматических клеток в мозговом веществе лимфатических узлов
служит одной из возможных причин иммуносупрессии при ХПН (Raskova J. et al., 1986;
Marakoglu I. et al., 2003; Nairn J. et al., 2005), даже без приема иммунодепрессантов.
Следует обратить внимание на статистически достоверное увеличение численности
эозинофильных лейкоцитов среди клеток в просвете мозговых синусов. Выше уже была
отмечена эозинофилия собственной пластинки слизистой оболочки полости рта. Присутствие большого числа такого типа гранулоцитов в субмандибулярных лимфатических узлах еще раз доказывает важную роль аллергического компонента при развитии воспалительного процесса в тканях (и реакций регионарных лимфатических узлов) на фоне ХПН.
В мякотных тяжах и мозговых синусах субмандибулярных лимфатических узлов резко
возросло содержание эритроцитов. Другие исследователи также отмечают нарушения
свертываемости крови и сосудистой проницаемости в различных тканях при ХПН (AlNowaiser A. et al., 2003; Nishide N. et al., 2005; Davidovich E. et al., 2005). Обнаруженные и
описанные выше различные сосудистые реакции в слизистой оболочке полости рта сопровождаются диапедезом эритроцитов или даже геморрагиями. Эритроциты из тканей собственной пластинки слизистой оболочки вместе с током лимфы попадают в дренирующие
лимфатические узлы (субмандибулярные), где за счет этого, в первую очередь, в синусной
системе происходит заметное возрастание числа клеток красной крови.
Возможно и возрастание численности эритроцитов в структурах лимфатических узлов,
не связанное с поступлением этих клеток из региона лимфосбора. Не исключено, что поступление большого объема антигенных веществ из полости рта вызывает такие же сосудистые реакции внутриузловых сосудов, как и в собственной пластинке слизистой оболочки, – расширение вен и артерий, сопровождающееся остановкой тока крови. Такое
объяснение кажется правдоподобным, особенно, если учитывать однонаправленность клеточных реакций в слизистой оболочке полости рта и дренирующих лимфатических узлах.
Причины, действующие на сосудистую проницаемость в слизистой оболочке полости рта,
точно так же изменяют состояние стенки внутриузловых кровеносных сосудов и способствуют появлению эритроцитов в структурах лимфатических узлов.
Все вышеизложенное может свидетельствовать о нарушениях функций субмандибулярных лимфатических узлов при ХПН, как высокоспециализированной иммунокомпетентной ткани. Несомненно, что функциональная способность данных органов по мере
прогрессирования склеротических проявлений быстро снижается.
ВЫВОДЫ
1. По данным патоморфологического анализа, через 6 мес после моделирования хронической почечной недостаточности легкой и средней степени слизистая оболочка полости рта крыс диффузно инфильтрируется лейкоцитами, в ней возрастает относительная
площадь кровеносных и лимфатических сосудов (соответственно на 46 и 47%) по сравнению с интактными животными. При средней и тяжелой степени хронической почечной
недостаточности происходит атрофия эпителия полости рта в сочетании с гиперкератозом, в собственной пластинке нарастают явления склероза при одновременном увеличении диффузной и очаговой лейкоцитарной инфильтрации.
2. В субмандибулярных лимфатических узлах у всех крыс с хронической почечной недостаточностью через 6 мес после нефрэктомии происходит гипотрофия лимфоидных
16
фолликулов с центрами размножения и без них, уменьшается относительная площадь мякотных тяжей (на 18 – 40%) и мозговых синусов (на 26 – 40%) с развитием выраженного
склероза как в корковом, так и в мозговом веществе. Во всех зонах лимфатических узлов
уменьшается число фигур митозов и лимфоцитов (до 65%) при одновременном увеличении содержания ретикулярных клеток (до 2 раз), макрофагов (до 3 – 13 раз), эритроцитов
(до 13 раз) и эозинофилов (до 7 раз).
3. Основной причиной склеротической трансформации и изменений клеточного состава субмандибулярных лимфатических узлов при хронической почечной недостаточности
является сочетание хронического воспаления в регионе лимфосбора (слизистая оболочка
полости рта) с уменьшением лимфопритока (склероз собственной пластинки слизистой
оболочки полости рта).
4. При хронической почечной недостаточности средней и тяжелой степени в собственной пластинке слизистой оболочки полости рта возрастает количество эозинофилов (до 4
раз) и плазматических клеток (до 8 – 16 раз). Такие особенности лейкоцитарной инфильтрации в сочетании со значительным увеличением численности эозинофильных гранулоцитов в просвете мозговых синусов субмандибулярных лимфатических узлов указывают
на возможность развития аллергических реакций и их роль в инициации и поддержании
воспаления в тканях полости рта при хронической почечной недостаточности.
5. Патоморфологические изменения собственной пластинки слизистой оболочки полости рта и регионарных к ней субмандибулярных лимфатических узлов менее выражены у
крыс с легкой степенью хронической почечной недостаточности и прогрессируют по мере
выраженности недостаточности функции почек.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. В связи с тем, что на фоне хронической почечной недостаточности в тканях полости
рта имеются признаки воспаления и нарушений микроциркуляции, во время и после стоматологических процедур у данной категории больных необходимо проведение мероприятий, направленных на профилактику воспалительных осложнений.
2. Обнаруженные изменения субмандибулярных лимфатических узлов позволяют
предполагать нарушения их некоторых специфических функций при хронической почечной недостаточности. Необходим поиск методов сохранения и восстановления нарушенных функций данных органов. Любое проводимое лечение недостаточности функций почек (консервативное, гемодиализ и трансплантация) может улучшить лимфоток, но не
приводит к обратному развитию соединительной ткани в лимфатических узлах.
3. Необходима совместная работа стоматологов и нефрологов для своевременной и
адекватной помощи пациентам с хронической почечной недостаточностью.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Майбородин И.В., Рагимова Т.М., Миникеев И.М., Ким С.А. Хроническая почечная
недостаточность и изменения ротовой полости (Обзор литературы) // Нефрология и диализ. – 2013. – Т. 15, № 3. – С. 191-199.
2. Миникеев И.М., Ким С.А., Рагимова Т.М., Майбородин И.В. Слизистая оболочка
полости рта при экспериментальной хронической почечной недостаточности // Вестник
экспериментальной и клинической хирургии. – 2013. – Т. 6, № 4. – С. 439-445.
3. Миникеев И.М., Склянов Ю.И., Майбородин И.В., Елясин П.А., Равилова Ю.Р.
Морфологические изменения слизистой оболочки полости рта при хронической почечной
недостаточности в эксперименте // Медицина и образование в Сибири (электронный
журнал). – 2013. – № 6. – доступ: http://www.ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php?id=1221
4. Майбородин И.В., Миникеев И.М., Ким С.А., Рагимова Т.М. Состояние полости рта
17
при почечной недостаточности // Стоматология. – 2014. – Т. 93, № 1. – С. 72-79.
5. Майбородин И.В., Миникеев И.М., Ким С.А., Рагимова Т.М. Влияние хронической
почечной недостаточности на состояние слизистой оболочки полости рта в эксперименте.
// Российский стоматологический журнал. – 2014. – № 3. – С. 10-14.
6. Майбородин И.В., Миникеев И.М., Ким С.А., Рагимова Т.М. Изменения слизистой
оболочки полости рта при хронической почечной недостаточности (экспериментальное
исследование) // Морфология. – 2015. – Т. 147, № 1. – С. 36-41.
7. Миникеев И.М., Ким С.А., Майбородин И.В. Десна крыс при почечной недостаточности // Актуальные проблемы хирургии: Сб. науч. тр. 7-й межрегион. конф., посвящ. памяти акад. РАМН проф. Л.В.Полуэктова: 7 вып. – Омск, 2013. – С. 388-389.
8. Миникеев И.М., Ким С.А. Структурная организация слизистой оболочки полости
рта крыс при хронической почечной недостаточности // Фундаментальные проблемы
науки: Сб. статей Международ. науч.-прак. конф.: Часть 2. – Уфа: РИЦ БашГУ, 2013. – С.
196-199.
9. Миникеев И.М., Майбородин И.В., Ким С.А. Изменения слизистой оболочки полости рта и регионарных лимфатических узлов при хронической почечной недостаточности
в эксперименте // Хирургия, морфология, лимфология. – 2014. – Т. 11, № 21. – С. 108-109.
Соискатель
И.М.Миникеев
18