Среда культуральная EmbryoFreeze/Thaw™

Среда культуральная EmbryoFreeze/Thaw™
- для замораживания и размораживания ембрионов человека.Среда EmbryoFreeze и EmbryoThaw (EmbryoFreeze/EmbryoThaw) –
это комплект растворов для замораживания и размораживания ембрионов человека между 2ПН и 4 клеточными стадиями.
EmbryoFreeze и EnbryoThaw – это раствор для криоконсервации на основе пропандиола, который также содержит фосфатнобуферный солевой раствор, сахарозу и альбумин сыворотки крови человека.EmbryoFreeze та EnbryoThaw не содержит
антибиотики.EmbryoFreeze и EnbryoThaw можна использовать вместе с растворами FertiCult (середа FertiCult Flushing, среда
FertiCult ЭКО и среда FertiCult G3) перед размораживанием и после размораживания.
СОСТАВ КОМПЛЕКТА
EMF_30_P_F: 3-этапное замораживание EmbryoFreeze
3 флакона замораживающей среды EmbryoFreeze medium 1 (10мл)
3 флакона замораживающей среды EmbryoFreeze medium 2 (10мл)
6 флаконов замораживающей среды EmbryoFreeze medium 3 (10мл)
EMF30_P_T: 3-этапное размораживание EmbryoThaw
4 флакона размороживающей среды EmbryoThaw medium 1 (10мл)
4 флакона размороживающей среды EmbryoThaw medium 2 (10мл)
4 флакона размороживающей среды EmbryoThaw medium 3 (10мл)
НЕ ВХОДИТ В КОМПЛЕКТАЦИЮ





Стерильные пипетки
4-луночные планшеты
Соломинки для криоконсервации
Автоматический замораживатель
Водяная баня
МЕТОДИКА
Хорошо перемешайте все растворы перед употреблением.
Замораживание
1. Внесите по 1 мл замороживающей среды EmbryoFreeze 1,2 и 3 в центральную лунку планшета с помощью
стерильной пипетки (при комнатной температуре). Нагрейте растворы в инкубаторе до температуры 37⁰С.
2. Достаньте эмбрионы и замораживающие растворы из инкубатора одновременно, чтобы предотвратить
температурный шок, когда эмбрионы переносятся из одной среды в другую.
3. Промойте предварительно отобранные эмбрионы в замороживающей среде EmbryoThaw medium 1.
4. Перенесите эмбрионы в замороживающую среду Freezing medium 2, и дайте отстояться в течение 10-15
хвилин.
5. Перенесите эмбрионы в замороживающую среду Freezing medium 3, и дайте отстояться в течение 1-5 хвилин.
6. Поместите эмбрионы в соломинки, оставив примерно 1/5 воздуха.
7. Запечатайте соломинки и наклейте название, дату и номер эмбрионов.
8. Проводите программу замораживания в течение 5 – 10 хвилин.
Ниже приводится пример протокола замораживания
Размораживание
1. Внесите в 4х луночный планшет по 1мл каждого размораживающего раствора EmbryoThaw (1,2 и 3). Таким
образом у Вас останется одна пустая лунка для обновления замороженных/размороженных эмбрионов.
2. Приготовьте водяну баню с температурой 37⁰С для размораживания соломинок. Приготовьте туберкулиновый
шприц на 1мл, наполнив его сначала 0,8 мл воздуха, а затем 0,2 мл розморожувателя 1.
3. Достаньте соломинки из жидкого азота и оставьте при комнатной температуре примерно на 5 секунд.
4. Опустите соломинку в водяную баню при температуре 37⁰С еще на 5 секунд (в соломинке не должно оставаться
замороженных частичек).
5. Слейте соломинку, открыв обе стороны трубочки (над пустой чашкой) ,выдувая содержание шприца через
соломинку.
6. Достаньте эмбрионы с помощью микроскопа и переместите их в размораживающий раствор 1.
7. Через 3 - 5 минут переместите эмбрионы в размораживаюзий раствор 2.
8. Еще через 3-5 минут эмбрионы переместите в размораживающий раствор 3. Оставьте их еще 3-5 минут перед
дальнейшей обработкой.
9. На финальной стадии эмбрионы перемещаются в культуральную среду ЭКО IVF culture medium для промывания и
дальнейшего культивирования.
ХРАНЕНИЕ
Сохраняйте реагенты при температуре 4⁰С и 8⁰С.
Интервалы температур
Шаг 1
Шаг 2
Шаг 3
Шаг 4
Шаг 5
Комнатная темп. до +4⁰С
+4⁰С до -6⁰С
-6⁰С (авто оседание)
-6 ⁰С до -30 ⁰С
-30⁰С до -196 ⁰С
Пример протокола замораживания
Уровень
замораживания
-10⁰С/мин
-2⁰С/мин
0⁰С/мин
-0,3 ⁰С/мин
-199⁰С/мин
Время
2 мин.
5 мин.
10мин.
80мин.
1 мин.