ÓÄÊ 612.111 ÂËÈßÍÈÅ β-ÈÇËÓ×ÅÍÈß ÍÀ ÏÎÂÅÐÕÍÎÑÒÍÛÉ ÏÎÒÅÍÖÈÀË ÝÐÈÒÐÎÖÈÒΠ×ÅËÎÂÅÊÀ ÏÐÈ ÈÍÃÈÁÈÐÎÂÀÍÈÈ ÌÅÒÀÁÎËÈÇÌÀ ÝÉÊÎÇÀÍÎÈÄΠÂ. Â. ÆÈÐÍÎÂ1, Â. Í. ÃÀÂÈÉ1, À. Ñ. ÊÀÇÈÌÈÐÎÂ2 Èíñòèòóò áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè è íåôòåõèìèè ÍÀÍ Óêðàèíû, Êèåâ; 2 ÍÏÏ Àòîìêîìïëåêñïðèáîð, Êèåâ; å-mail: vic@bpci.kiev.ua 1 Ìåòîþ äîñë³äæåííÿ áóëî âèâ÷åííÿ âïëèâó β-âèïðîì³íþâàííÿ, çóìîâëåíîãî âíåñåííÿì â ñåðåäîâèùå ³íêóáàö³¿ ðàä³îàêòèâíîãî ëåéöèíó, íà çì³íó ïîâåðõíåâîãî ìåìáðàííîãî ïîòåíö³àëó çà 䳿 íà åðèòðîöèòè ³íã³á³òîð³â ôåðìåíò³â åéêîçàíî¿äíîãî ìåòàáîë³çìó öèêëîêñèãåíàçè, ë³ïîêñèãåíàçè ³ ôîñôîë³ïàçè À2. Ïîêàçàíî, ùî ³íã³á³òîðè ôîñôîë³ïàçè À2 (õ³íàêðèí, 10100 ìêÌ), öèêëîîêñèãåíàçè (àöåòèëñàë³öèëîâà êèñëîòà, 10100 ìêÌ) òà öèêëîîêñèãåíàçè ³ ë³ïîêñèãåíàçè (BW755c, 1100 ìêÌ) ³ñòîòíî çíèæóþòü åëåêòðîôîðåòè÷íó ðóõëèâ³ñòü (ÅÔÐ) åðèòðîöèò³â, ìàêñèìàëüíî íà 2030%. Àíàëîã³÷íèé åôåêò òàêîæ ñïðè÷èíþº β-âèïðîì³íþâàííÿ. Íåðàä³îàêòèâíèé ëåéöèí ó âèêîðèñòàíèõ êîíöåíòðàö³ÿõ íå çäàòåí çì³íþâàòè ÅÔÐ åðèòðîöèò³â. Ðåàêö³ÿ ÅÔÐ êë³òèí íà ä³þ ³íã³á³òîð³â çàëåæèòü â³ä ¿õíüîãî ð³âíÿ â ñåðåäîâèù³ ³íêóáàö³¿. Ðàä³îàêòèâíèé ëåéöèí çì³íþº ÅÔÐ êë³òèí çà íàÿâíîñò³ ³íã³á³òîðà öèêëîêñèãåíàçè ³ ë³ïîêñèãåíàçè, àëå íå õ³íàêðèíó. Îäíàê β-âèïðîì³íþâàííÿ ïîâí³ñòþ í³âåëþº ñòèìóëþâàëüíèé âïëèâ íà ÅÔÐ êë³òèí íåñïåöèô³÷íîãî àêòèâàòîðà êàëüö³éíåçàëåæíî¿ ôîñôîë³ïàçè À2Í2Î2. Ïðè öüîìó β-âèïðîì³íþâàííÿ ïîñèëþº ðåàêö³þ ÅÔÐ íà ä³þ àöåòèëñàë³öèëîâî¿ êèñëîòè ëèøå çà êîíöåíòðàö³¿ 100 ìêÌ. ijÿ BW755c íà ÅÔÐ çíèæóºòüñÿ ïðè îïðîì³íåí³ åðèòðîöèò³â ³ íàÿâíîñò³ â ñåðåäîâèù³ ïåðîêñèäó âîäíþ ó âñ³õ äîñë³äæóâàíèõ êîíöåíòðàö³ÿõ, êð³ì ð³âíîåôåêòèâíî¿ (10 ìêÌ). Îäåðæàí³ äàí³ ñâ³ä÷àòü ïðî ìîäèô³êàö³þ β-âèïðîì³íþâàííÿì åéêîçàíî¿äíîãî ìåòàáîë³çìó, éìîâ³ðíî, âíàñë³äîê ³íã³áóâàííÿ àêòèâíîñò³ ôîñôîë³ïàçè À2, ùî ï³äòâåðäæóºòüñÿ äàíèìè ñòîñîâíî çíÿòòÿ ðàä³àö³ºþ ñòèìóëþâàëüíî¿ ä³¿ ïåðîêñèäó âîäíþ íà ÅÔÐ. Íå âèêëþ÷åíèé òàêîæ âïëèâ ðàä³àö³¿ íà âåëè÷èíó ñï³ââ³äíîøåííÿ àêòèâíîñò³ öèêëîêñèãåíàçè ³ ë³ïîêñèãåíàçè, ÿêó, ìîæëèâî, îïîñåðåäêîâàíî ìåìáðàííèìè ñèãíàëüíèìè ñèñòåìàìè êë³òèíè. Ê ë þ ÷ î â ³ ñ ë î â à: ïîâåðõíåâèé ïîòåíö³àë, β-âèïðîì³íþâàííÿ, ³íã³á³òîðè åéêîçàíî¿äíîãî ìåòàáîë³çìó. Ð àíåå íàìè áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ïðè íèçêèõ ìîùíîñòÿõ äîç (0,510 ìêÃð/÷) β-èçëó÷åíèå, âûçâàííîå 14Ñ è 90Sr, èçìåíÿåò ôóíêöèîíàëüíûé îòâåò ëåéêîöèòîâ è ýðèòðîöèòîâ íà âåùåñòâà, ìîäèôèöèðóþùèå àêòèâíîñòü àäåíèëàòöèêëàçíîé è ïîëèôîñôîèíîçèòèäíîé ñèãíàëüíûõ ñèñòåì ìîäóëÿòîðîâ β-, α1-, α2-àäðåíî- è À1-ïóðèíîðåöåïòîðîâ, G-áåëêîâ, àäåíèëàòöèêëàçû, äèáóòèðèë-ñÀÌÐ, è ñÀÌÐ-ôîñôîäèýñòåðàçû [13]. Ïðè ýòîì óñòàíîâëåíî, ÷òî ðàäèàöèÿ â äèàïàçîíå äîç 1100 ìêÃð, ïîãëîùåííàÿ ñóñïåíçèåé êëåòîê, íå îêàçûâàþò âëèÿíèÿ íà ïðîöåññû íåôåðìåíòàòèâíîãî ïåðîêñèäíîãî îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ (ÏÎË) è ñîñòîÿíèå ãëóòàòèîíîâîé ñèñòåìû â êëåòêàõ.  òî æå âðåìÿ èíãèáèòîð ôîñôîëèïàçû À2 õèíàêðèí, êîòîðûé ïîñòàâëÿåò ñóáñòðàò äëÿ ýéêîçàíîèäíîãî ìåòàáîëèçìà è îïîñðåäóåòñÿ ôåðìåíòàòèâíûìè ïðîöåññàìè ÏÎË, óãíåòàåò õåìîêèíåç íåéòðîôèëîâ è ðîçåòêîîáðàçîâàíèå ýðèòðîöèòîâ. Ðàäèîíóêëèäû íèâåëèðóþò îáóñëîâëåííîå õèíàêðèíîì óãíåòåíèå õåìîòàê- ñèñà, íî íå âëèÿþò íà ðîçåòêîîáðàçîâàíèå. Ýòè äàííûå ïîçâîëÿþò ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ðàäèàöèîííîå èçëó÷åíèå â èçó÷åííîì äèàïàçîíå ïîãëîùåííûõ äîç ìîæåò âëèÿòü è íà ìåòàáîëèçì ýéêîçàíîèäîâ, íàõîäÿùèõñÿ ïîä êîíòðîëåì ìåìáðàííûõ ñèãíàëüíûõ ñèñòåì êëåòêè. Öåëüþ íàñòîÿùåãî èññëåäîâàíèÿ áûëî èçó÷åíèå âëèÿíèÿ β-èçëó÷åíèÿ íà âåëè÷èíó ïîâåðõíîñòíîãî ïîòåíöèàëà ýðèòðîöèòîâ â çàâèñèìîñòè îò äåéñòâèÿ èíãèáèòîðîâ íà ôåðìåíòû ýéêîçàíîèäíîãî ìåòàáîëèçìà, â ÷àñòíîñòè öèêëîêñèãåíàçû, ëèïîêñèãåíàçû è ôîñôîëèïàçû À2. ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 2 69 Ìàòåðèàëû è ìåòîäû Ýðèòðîöèòû âûäåëÿëè èç öåëüíîé êðîâè äîíîðîâ öåíòðèôóãèðîâàíèåì â ðàáî÷åì ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîì ðàñòâîðå (ììîëü/ë): ÊÑl 2,5; ÑàÑl2 2,0; ãëþêîçà 280,0; òðèñ-ÍÑl 10,0 (ðÍ 7,4). Äëÿ îöåíêè âåëè÷èíû çàðÿäà íà ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå êëåòîê îïðåäåëÿëè èõ ýëåêòðîôîðåòè÷åñêóþ ïîäâèæíîñòü (ÝÔÏ) ìåòîäîì ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ ìèêðîýëåêòðîôîðåçà [4]. Ýëåêòðîôîðåç êëåòîê êðîâè ïðîâîäèëè ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå, êàê îïèñàíî â ðàáîòàõ [4,5], ïîñëå âíåñåíèÿ â ñðåäó èíêóáàöèè ðàäèîàêòèâíîãî èçîòîïà 14Ñ-ëåéöèíà («Amersham», Âåëèêîáðèòàíèÿ; óäåëüíàÿ ðàäèîàêòèâíîñòü 340 ìÊè/ììîëü) â êîíöåíòðàöèè 0,1 ìÊè/ë (ìîùíîñòü äîçû 0,1 ìÃð/÷). Âðåìÿ èíêóáàöèè êëåòî÷íîé ñóñïåíçèè (1⋅106 ìë-1) ñ ðàäèîíóêëèäîì îäèí ÷àñ. Ïîãëîùåííûå êëåòêàìè äîçû èçëó÷åíèÿ ðàññ÷èòûâàëè ñîãëàñíî ðåêîìåíäàöèÿì, ïðèâåäåííûì â ñòàòüå [6]. Íåðàäèîàêòèâíûé ëåéöèí â èñïîëüçóåìûõ êîíöåíòðàöèÿõ íå îêàçûâàåò âëèÿíèÿ íà ÝÔÏ ýðèòðîöèòîâ. Àöåòèëñàëèöèëîâóþ êèñëîòó, BW-775c, õèíàêðèí («Sigma», ÑØÀ) è ïåðîêñèä âîäîðîäà ââîäèëè â ñðåäó èíêóáàöèè çà 10 ìèí äî âíåñåíèÿ ðàäèîíóêëèäà. Ñòàòèñòè÷åñêóþ îáðàáîòêó ðåçóëüòàòîâ ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì ïðîãðàììû Statistica v5.5 äëÿ Windows. Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå Äàííûå î âëèÿíèè β-èçëó÷åíèÿ íà ÝÔÏ ýðèòðîöèòîâ ïðè èíãèáèðîâàíèè àêòèâíîñòè ôîñôîëèïàçû À2, ëèïîêñèãåíàçû è öèêëîîêñèãåíàçû õèíàêðèíîì, BW-755ñ è àñïèðèíîì, à òàêæå ïðè ñòèìóëÿöèè êàëüöèéíåçàâèñèìîé ôîñôîëèïàçû À2 ïåðîêñèäîì âîäîðîäà ïðèâåäåíû â òàáëèöå è íà ðèñ. 14. Ïîëó÷åííûå íàìè ðåçóëüòàòû (òàáëèöà) ñâèäåòåëüñòâóþò, ÷òî èíãèáèòîð ôîñôîëèïàçû À2 õèíàêðèí â äèàïàçîíå êîíöåíòðàöèé 10100 ìêÌ óìåíüøàåò ÝÔÏ ýðèòðîöèòîâ. Èîíèçèðóþùàÿ ðàäèàöèÿ äåéñòâóåò ïîäîáíî èíãèáèòîðó, îäíàêî ïðè ñîâìåñòíîì äåéñòâèè ýòèõ ôàêòîðîâ âëèÿíèå õèíàêðèíà íà ÝÔÏ êëåòîê ñíèæàåòñÿ. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, õèíàêðèí â íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ (0,11 ìêÌ) íåñêîëüêî óìåíüøàåò ýôôåêòèâíîñòü β-èçëó÷åíèÿ. Íà ðèñ. 1 ïðèâåäåíû ýìïèðè÷åñêèå êðèâûå çàâèñèìîñòè óäåëüíîãî îòíîñèòåëüíîãî èçìåíåíèÿ ÝÔÏ ýðèòðîöèòîâ êàê îò ëîãàðèôìà êîíöåíòðàöèè òîëüêî èíãèáèòîðà, òàê è ïðè åãî ñîâìåñòíîì äåéñòâèè ñ β-èçëó÷åíèåì. Èç ïðèâåäåííîé êðèâîé ñëåäóåò, ÷òî ðàâíîýôôåêòèâíàÿ òî÷êà (òî÷êà ïåðåñå÷åíèÿ êðèâûõ) ñîîòâåòñòâóåò êîíöåíòðàöèè, ðàâíîé ïðèìåðíî 20 ìêÌ ïðè ýòîé êîíöåíòðàöèè èíãèáèòîðà β-èçëó÷åíèå íå îêàçûâàåò âëèÿíèÿ íà ýôôåêò õèíàêðèíà.  ñëó÷àå áîëåå íèçêîãî ñîäåðæàíèÿ åãî â ðàñòâîðå êðèâàÿ ñäâèãàåòñÿ âëåâî. Ñëåäîâàòåëüíî íàáëþäàåòñÿ ïîòåíöèðîâàíèå ðàäèàöèåé óäåëüíîé àêòèâíîñòè èíãèáèòîðà, à ïðè áîëåå âûñîêèõ îáðàòíûé ýôôåêò, õîòÿ è ñëàáî âûðàæåííûé. Ñëåäóåò òàêæå îòìåòèòü, ÷òî óäåëüíàÿ àêòèâíîñòü õèíàêðèíà (èçìåíåíèå ôóíêöèè ïî îòíîøåíèþ ê êîíöåíòðàöèè âåùåñòâà) ñ ïîâûøåíèåì êîíöåíòðàöèè ìîíîòîííî ñíèæàåòñÿ.  òàáëèöå è íà ðèñ. 2 (âñòàâêà) ïðèâåäåíû ðåçóëüòàòû âëèÿíèÿ Í2Î2 è åãî ñîâìåñòíîãî äåéñòâèÿ ñ β-èçëó÷åíèåì íà ÝÔÏ ýðèòðîöèòîâ. Êàê ñëåäóåò èç ïðåäñòàâëåííûõ äàííûõ, âî âñåì äèàïàçîíå èçó÷åííûõ êîíöåíòðàöèé ïåðîêñèä âîäîðîäà ñòèìóëèðóåò ÝÔÏ êëåòîê. Îäíàêî β-èçëó÷åíèå ïîëíîñòüþ íèâåëèðóåò ýòîò ýôôåêò, ò.å. Ðèñ. 1. Ìîäèôèêàöèÿ β-èçëó÷åíèåì ðåàêöèè ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîé ïîäâèæíîñòè ýðèòðîöèòîâ íà äåéñòâèå õèíàêðèíà: ó % ê êîíòðîëþ, õ êîíöåíòðàöèÿ õèíàêðèíà â íÌ. Çäåñü è íà ðèñ. 24 14Ñ ðàäèîàêòèâíûé ëåéöèí. 70 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 2 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 2 Âëèÿíèå β-èçëó÷åíèÿ (100 ìêÃð) è èíãèáèòîðîâ ýéêîçàíîèäíîãî ìåòàáîëèçìà íà ýëåêòðîôîðåòè÷åñêóþ ïîäâèæíîñòü ýðèòðîöèòîâ (â ìêì ⋅ñì/Â⋅ñ) Êîí ö åí òðàö è ÿ ìîäóëÿòîðîâ , Ì Óñëîâ è ÿ îï ûòà 14 Ñ 10 - 4 10 - 5 10 - 6 10 - 7 0 ,8 7 ± 0 ,0 6 * 7 3 ,7 0 ,9 2 ± 0 ,0 6 * 7 8 ,4 í .î . 0 ,9 2 ± 0 ,0 4 * 7 8 ,4 0 ,9 4 ± 0 ,0 6 * 8 0 ,2 0 ,7 8 ± 0 ,0 7 * 7 2 ,0 0 ,6 3 ± 0 ,0 6 * 5 8 ,0 1 ,2 6 ± 0 ,0 4 117 1 ,0 2 ± 0 ,0 4 0 ,9 2 ± 0 ,0 7 * 7 7 ,8 0 ,9 5 ± 0 ,0 5 * 8 6 ,3 0 ,7 9 ± 0 ,0 3 * 7 3 ,2 0 ,9 0 ± 0 ,0 7 * 8 3 ,2 1 ,1 8 ± 0 ,0 5 109 1,11 ± 0,04 1,11 ± 0,05 9 4 ,3 1 ,0 0 ± 0 ,0 6 8 4 ,6 0 ,9 7 ± 0 ,0 5 9 0 ,0 0 ,9 1 ± 0 ,0 6 * 8 3 ,9 1 ,2 8 ± 0 ,0 6 119 0 ,9 0 ± 0 ,0 5 1,11 ± 0,04 9 7 ,3 1 ,0 4 ± 0 ,0 8 8 8 ,7 1 ,0 2 ± 0 ,0 2 9 4 ,2 1 ,1 4 ± 0 ,0 6 1 0 5 ,7 1 ,3 0 ± 0 ,0 4 120 0 ,7 9 ± 0 ,0 5 94 0 ,8 7 ± 0 ,0 4 * 8 0 ,2 0 ,9 8 ± 0 ,0 6 9 1 ,1 103 0 ,7 6 ± 0 ,0 7 * 7 0 ,6 0 ,7 8 ± 0 ,0 7 * 7 2 ,6 83 0 ,8 0 ± 0 ,0 7 * 7 3 ,7 1 ,0 4 ± 0 ,0 8 9 6 ,5 − 0 ,8 7 ± 0 ,0 8 * 8 0 ,9 1 ,0 1 ± 0 ,0 6 9 3 ,5 í .î . . í .î . í .î . í .î . í .î . Î áëó÷åí í ûå ý ðè òðîö è òû 1 ,1 8 ± 0 ,0 7 0 ,9 3 ± 0 ,0 4 1 ,0 8 ± 0 ,0 3 0 ,8 4 ± 0 ,0 3 1 ,0 8 ± 0 ,0 4 0 ,8 4 ± 0 ,0 3 1 ,0 8 ± 0 ,0 3 0 ,8 4 ± 0 ,0 3 * Äàííûå îòíîñèòåëüíî ñîîòâåòñòâóþùåãî êîíòðîëÿ äîñòîâåðíû, ð < 0,05 (n = 5); í.î. äëÿ äàííîé êîíöåíòðàöèè ïðåïàðàòà ýëåêòðîôîðåòè÷åñêàÿ ïîäâèæíîñòü ýðèòðîöèòîâ íå îáíàðóæåíà, 14Ñ ìå÷åíûé ïî óãëåðîäó ëåéöèí. 71 Â. Â. ÆÈÐÍÎÂ, Â. Í. ÃÀÂÈÉ, À. Ñ. ÊÀÇÈÌÈÐΠÕè í à êðè í % ê êîí òðîëþ Õè í àêðè í + 14Ñ % ê êîí òðîëþ Àö åòè ëñàëè ö è ëîâ àÿ êè ñëîòà % ê êîí òðîëþ Àö åòè ëñàëè ö è ëîâ àÿ êè ñëîòà + % ê êîí òðîëþ Í2Î 2 % ê êîí òðîëþ Í2Î 2 + 14Ñ % ê êîí òðîëþ BW- 755ñ % ê êîí òðîëþ BW- 755ñ + 14Ñ % ê êîí òðîëþ 10 - 3 Ê îí òðîë ü (è í òàêòí ûå ý ðè òðîö è òû ) ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ ïðè íàëè÷èè â ñðåäå 0,11,0 ìêÌ Í2Î2 è ñîâìåñòíîì äåéñòâèè îáîèõ ôàêòîðîâ ïðîÿâëÿåòñÿ òîëüêî ðàäèàöèîííûé ýôôåêò. Ïðåäñòàâëåííûå íà ðèñ. 2 êðèâûå çàâèñèìîñòè óäåëüíîãî èçìåíåíèÿ ÝÔÏ (îòíîøåíèå èçìåíåíèÿ ÝÔÏ â çàâèñèìîñòè îò êîíöåíòðàöèé äåéñòâóþùåãî âåùåñòâà) êëåòîê õîðîøî îïèñûâàþòñÿ ëèíåéíûìè ôóíêöèÿìè. Ïîëó÷åííûå äàííûå ïîêàçûâàþò, ÷òî â îáîèõ ñëó÷àÿõ óäåëüíîå âîçðàñòàíèå ÝÔÏ ñíèæàåòñÿ ñ óâåëè÷åíèåì êîíöåíòðàöèè Í2Î2. Ïðè ýòîì îáëó÷åíèå áîëåå ÷åì â äâà ðàçà ñíèæàåò ýôôåêòèâíîñòü ýòîé çàâèñèìîñòè äëÿ ïåðîêñèäà âîäîðîäà íà ôîíå ðàâíîýôôåêòèâíîé òî÷êè, ñîîòâåòñòâóþùåé êîíöåíòðàöèè 100 ìêÌ. Èíãèáèòîð öèêëîêñèãåíàçû àöåòèëñàëèöèëîâàÿ êèñëîòà (10100 ìêÌ) òàêæå äîçîíåçàâèñèìî óãíåòàåò ÝÔÏ ýðèòðîöèòîâ, íî, â îòëè÷èå îò õèíàêðèíà, β-èçëó÷åíèå óâåëè÷èâàåò åãî ýôôåêòèâíîñòü ïðè êîíöåíòðàöèè 100 ìêÌ è íåñêîëüêî ñíèæàåò åå ïðè 10 ìêÌ.  ìèíèìàëüíîé äåéñòâóþùåé êîíöåíòðàöèè (1 ìêÌ) àöåòèëñàëèöèëîâàÿ êèñëîòà óìåíüøàåò ýôôåêò èîíèçèðóþùåé ðàäèàöèè íà ÝÔÏ êëåòîê è ïîëíîñòüþ óñòðàíÿåò åãî â íåäåéñòâóþùåé êîíöåíòðàöèè (0,1 ìêÌ). Êàê ñëåäóåò èç ðèñ. 3, êðèâûå èçìåíåíèÿ ÝÔÏ ýðèòðîöèòîâ ïðè äåéñòâèè íà íèõ ëèáî îäíîé àöåòèëñàëèöèëîâîé êèñëîòû, ëèáî ñîâìåñòíî ñ ðàäèàöèåé èìåþò ðàâíîýôôåêòèâíóþ òî÷êó, ñîîòâåòñòâóþùóþ ïðèìåðíî 2 ìêÌ èíãèáèòîðà, ò.å. íà ïîðÿäîê íèæå, ÷åì äëÿ õèíàêðèíà. Êðîìå òîãî, â îòëè÷èå îò õèíàêðèíà, β-èçëó÷åíèå èíãèáèðóåò îòâåò êëåòêè íà äåéñòâèå àöåòèëñàëèöèëîâîé êèñëîòû ïðè êîíöåíòðàöèÿõ íèæå ðàâíîýôôåêòèâíîé è óâåëè÷èâàåò ïðè ïîâûøåííûõ. Áîëåå òîãî, îáå êðèâûå õîðîøî îïèñûâàþòñÿ ýêñïîíåíöèàëüíîé ôóíêöèåé, ÷òî êîñâåííî ìîæåò óêàçûâàòü íà íàëè÷èå îáùåé ìèøåíè âçàèìîäåéñòâèÿ. Èíãèáèòîð öèêëîîêñèãåíàçû è ëèïîêñèãåíàçû BW755c óãíåòàåò ÝÔÏ ýðèòðîöèòîâ âî âñåì èçó÷åííîì äèàïàçîíå êîíöåíòðàöèé (0,1 100 ìêÌ).  ýòîì ñëó÷àå β-èçëó÷åíèå óìåíüøàåò äåéñòâèå BW755c ïðè ìàêñèìàëüíîé êîíöåíòðàöèè íà ÝÔÏ êëåòîê è íå âëèÿåò ïðè 10 ìêÌ ïðåïàðàòà â ñðåäå.  òî æå âðåìÿ 0,11,0 ìêÌ BW755c íèâåëèðóåò äåéñòâèå ðàäèàöèè, õîòÿ â îòëè÷èå îò õèíàêðèíà è àñïèðèíà, îáå ýòè äîçû ÿâëÿþòñÿ ýôôåêòèâíûìè. Êàê ñëåäóåò èç ðèñ. 4, êðèâûå îòíîñèòåëüíîãî èçìåíåíèÿ ÝÔÏ ýðèòðîöèòîâ ïðè ðàçäåëüíîì äåéñòâèè BW755c è ñîâìåñòíî ñ îáëó÷åíèåì èìåþò ðàâíîýôôåêòèâíóþ òî÷êó ïðè êîíöåíòðàöèè 30 ìêÌ, ñîîòâåòñòâóþùóþ òî÷êå êàñàíèÿ äàííûõ êðèâûõ. Ïðè ýòîì âî âñåõ îñòàëüíûõ êîíöåíòðàöèÿõ BW755c β-èçëó÷åíèå ñäâèãàåò ÝÔÏ êëåòîê âïðàâî, ò. å. ñíèæàåò ýôôåêòèâíîñòü èíãèáèòîðà. Êðîìå òîãî, ñìåíà êâàäðàòè÷íîé ôóíêöèè, îïèñûâàþùåé êðèâóþ, îòíîñÿùóþñÿ ê BW755c (äóàëüíîãî èíãèáèòîðà), ïîëèíîìîì òðåòüåé ñòåïåíè, â ñëó÷àå ñîâìåñòíîãî ïðèìåíåíèÿ äåéñòâóþùèõ ôàêòîðîâ êîñâåííî óêàçûâàåò íà âêëþ÷åíèå íåêîòîðîé äîïîëíèòåëüíîé ìèøåíè. Ðèñ. 2. Ìîäèôèêàöèÿ β-èçëó÷åíèåì ðåàêöèè ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîé ïîäâèæíîñòè ýðèòðîöèòîâ íà äåéñòâèå Í2Î2; ó % ê êîíòðîëþ; õ êîíöåíòðàöèÿ Í2Î2 â íÌ. 72 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 2 Â. Â. ÆÈÐÍÎÂ, Â. Í. ÃÀÂÈÉ, À. Ñ. ÊÀÇÈÌÈÐΠÀÑÊ ÀÑÊ Ðèñ. 3. Ìîäèôèêàöèÿ β-èçëó÷åíèåì ðåàêöèè ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîé ïîäâèæíîñòè ýðèòðîöèòîâ íà äåéñòâèå àñïèðèíà: ó % ê êîíòðîëþ, õ êîíöåíòðàöèÿ àöåòèëñàëèöèëîâîé êèñëîòû (ÀÑÊ), 14Ñ ðàäèîàêòèâíûé ëåéöèí â íÌ. Ïîëó÷åííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î ìîäèôèêàöèè β-èçëó÷åíèåì ýéêîçàíîèäíîãî ìåòàáîëèçìà, âåðîÿòíî, âñëåäñòâèå èíãèáèðîâàíèÿ ôîñôîëèïàçû À2, íà ÷òî óêàçûâàåò ñíÿòèå ðàäèàöèåé ñòèìóëèðóþùåãî äåéñòâèÿ ïåðîêñèäà âîäîðîäà íà ÝÔÏ ýðèòðîöèòîâ. Îäíàêî ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ýòîò ýôôåêò ìîæåò áûòü ñâÿçàí òàêæå ñ èçìåíåíèåì ñòðóêòóðû ëèïèäíîãî áèñëîÿ, ïîñêîëüêó ïåðîêñèä âîäîðîäà íå ÿâëÿåòñÿ èñòèííûì èíãèáèòîðîì ôîñôîëèïàçû À2 è âåðîÿòíî, òîëüêî óâåëè÷èâàåò äîñòóïíîñòü ñóáñòðàòà ê ôåðìåíòó [7]. Íå èñêëþ÷åíî òàêæå äåéñòâèå ðàäèàöèè íà ñîîòíîøåíèå ìåæäó àêòèâíîñòüþ öèêëîîêñèãåíàçû è ëèïîêñèãåíàçû, îïîñðåäîâàííîå, âîçìîæíî, ìåìáðàííûìè ñèãíàëüíûìè ñèñòåìàìè êëåòêè. Ðèñ. 4. Ìîäèôèêàöèÿ β-èçëó÷åíèåì ðåàêöèè ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîé ïîäâèæíîñòè ýðèòðîöèòîâ íà äåéñòâèå BW-755c: ó % ê êîíòðîëþ, õ êîíöåíòðàöèÿ BW-755c â íÌ. ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 2 73 ÅÊÑÏÅÐÈÌÅÍÒÀËÜͲ ÐÎÁÎÒÈ INFLUENCE OF β-RADIATION ON HUMAN ERYTHROCYTE SURFACE POTENTIAL UNDER EICOSANOID METABOLISM INHIBITION V. V. Zhirnov1, V. M. Gaviy1, À. S. Kazimirov2 Institute of Bioorganic Chemistry and Petrochemistry, National Academy of Sciences of Ukraine, Kyiv; 2 RPE ATOM COMPLEX PRYLAD, Kyiv; å-mail: vic@bpci.kiev.ua 1 Summary EPM response to aspirin only at concentration of 100 µM. The EPM response to BW755c is reduced by irradiation at all concentrations with the exception of equal-effective one (10 µM). Data obtained evidence for modification of eicosanoid metabolism by β-radiation, probably, as a result of phospholipase À2 inhibition, as evident from elimination by radiation of stimulated action of hydrogen peroxide on EPM. The radiation action can also affect the cyclooxygenase lipoxygenase activity ratio, this activity being mediated by cellular membrane signaling systems. The aim of the research consisted in the study of influence of β-radiation on response of erythrocyte surface potential to inhibitors of eicosanoid metabolism enzymes (cyclo-, lipoxygenase and phospholipase A2). It was shown, that inhibitors of phospholipase À2 (quinacrine, 10100 µM), cyclooxygenase (aspirin, 10100 µM) and cyclo- and lipoxygenase (BW755c, 1100 µM) lowered electrophoretic mobility (EPM) of erythrocytes by 2030%. An analogous effect can be exerted by β-radiation. Nonradioactive leucine in the studied concentrations cannot simulate EPM erythrocytes. Response of cellular EPM to these inhibitors depended on their concentration in the incubation medium. Addition of 14C to the incubation medium changed response of EPM of cells to inhibitors of cyclo- and lipoxygenase but not to quinacrine. However β-radiation fully abolished the stimulative action of nonspecific activator of phospholipase À2 (Ca-independent), Í2Î2, on cellular EPM. Under these conditions β-radiation enhanced K e y w o r d s: surface potential, β-radiation, eicosanoid metabolism, inhibitors. 74 ISSN 0201 8470. Óêð. á³îõ³ì. æóðí., 2004, ò. 76, ¹ 2 1. Zhirnov V. V., Luik A. I., Metelitsa L. A. et al. // Äîï. ÍÀÍ Óêðà¿íè. 2000. N 10. Ñ. 172176. 2. Æèðíîâ Â. Â., Êàëàøíèêîâà Ë. Å Ãàâèé Â. Í. // Óêð. á³îõ³ì. æóðí. 2002. 74, ¹ 5. Ñ. 35 37. 3. Æèðíîâ Â. Â., Ìåòåëèöÿ Ë. Î., ×àðî÷ê³íà Ë. Ë. òà ³í. // Òàì ñàìî. 2003. 75, ¹ 1. Ñ. 5458. 4. Õàðàìîíåíêî Ñ. Ñ., Ðàêèòÿíñêàÿ Í. À. Ýëåêòðîôîðåç êëåòîê â íîðìå è ïàòîëîãèè. Ìèíñê: Íàóêà. 1974. 150 ñ. 5. Äîëãàÿ Å. Â., Ìèðîíîâ Ñ. Ë. // Íåéðîôèçèîëîãèÿ. 1984. 16, ¹ 2. Ñ. 176182. 6. Loevinger R., Berman M. // Phys. Med. Biol. 1968. 13, N 2. P. 205217. 7. Balboa M. A. Balsinde J. // J. Biol. Chem. 2002. 277, N 43. P. 4038440389. Îòðèìàíî 12.11.2003