ПРОЦЕССЫ КЛЕТОЧНОЙ ДЕСТРУКЦИИ И АУТОИММУННЫХ

№ 6 - 2014 г.
14.00.00 медицинские и фармацевтические науки
УДК 616.723-006.4-097
ПРОЦЕССЫ КЛЕТОЧНОЙ
ДЕСТРУКЦИИ И АУТОИММУННЫХ
РЕАКЦИЙ ПРИ МЕЛАНОМЕ
ХОРИОИДЕИ
М. А. Чернявская1,2, А. В. Ефремов1, В. В. Черных2
1
ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава
России (г. Новосибирск)
2
Новосибирский филиал ФГБУ «Межотраслевой научно-технический комплекс
„Микрохирургия глаза“ имени академика С. Н. Фёдорова» Минздрава России
(г. Новосибирск)
Цель — изучить особенности аутоиммунных реакций и процессов клеточной деструкции
на локальном уровне у пациентов с меланомой хориоидеи. Материал и методы.
Исследование проводилось у 36-ти больных в возрасте от 34 до 83 лет с меланомой
хориоидеи. Результаты. Концентрация аутоантител к антигенам нативной ДНК
достоверно выше, а лактоферрина достоверно ниже показателей контрольной группы как
в глазу с меланомой хориоидеи, так и в «здоровом» парном глазу, p < 0,05. Меланома
хориоидеи характеризуется высоким уровнем лактоферрина у пациентов более молодого
возраста. Выводы. Развитие меланомы хориоидеи сопровождается активными процессами
клеточной деструкции и аутоиммунных реакций.
Ключевые слова: меланома хориоидеи, лактоферрин, аутоантитела к антигенам нДНК,
слезная жидкость, лактоферрин.
Чернявская Мария Александровна — аспирант кафедры патофизиологии ГБОУ ВПО
«Новосибирский государственный медицинский университет», врач 7-го
офтальмологического отделения НФ ФГБУ «МНТК „Микрохирургия глаза“ им. акад. С.Н.
Федорова», г. Новосибирск, рабочий телефон: 8 (383) 340-42-58, e-mail:
mach.mntk@gmail.com
Ефремов Анатолий Васильевич — заслуженный деятель науки РФ,
член-корреспондент РАН, профессор, заведующий кафедрой патофизиологии ГБОУ ВПО
«Новосибирский государственный медицинский университет», рабочий телефон: 8 (383)
225-39-78, e-mail: eav48@yandex.ru
Черных Валерий Вячеславович — доктор медицинских наук, профессор, директор
НФ ФГБУ «МНТК „Микрохирургия глаза“ им. акад. С.Н. Федорова», г. Новосибирск,
рабочий телефон: 8 (383) 340-45-57
Актуальность. По данным и сведениям, опубликованным в мировой литературе, общее
количество больных с новообразованиями органа зрения, ежегодно обращающихся
к врачам за помощью, составляет 110–120 человек на 1 млн населения [1, 8, 9]. Наиболее
распространенная локализация увеальной меланомы (УМ) — хориоидея (до 87,37 %) [10].
Общая заболеваемость меланомой хориоидеи (МХ) по всему миру варьируется от 2-х
до 10-ти человек на 1 млн населения [1, 2, 11, 12].
Функционирование иммунной системы обеспечивается физиологическим балансом
продукции и акцепции цитокинов клетками различного происхождения и различных
функций. Выработка цитокинов регулирует как интенсивность иммунных реакций, так
и процессы пролиферации, миграции и дифференцировки клеток [3, 5].
При опухолях различного гистогенеза имеют место разнообразные нарушения
в иммунной (противоопухолевой) защите. В то же время обнаружены однотипные
иммунные нарушения при различных опухолях [6]. Это подтверждает тот факт, что
иммунные нарушения являются не только следствием, но и причиной опухолевого роста
[4]. В последние годы работами многих офтальмологов доказана ведущая роль цитокинов
в иммунопатогенезе заболеваний глаз как активных биорегуляторов воспалительных
и репаративных процессов. Уровень содержания цитокинов может служить одним
из критериев иммунообусловленности воспаления [7].
Цель — изучить особенности аутоиммунных реакций и процессов клеточной деструкции
на локальном уровне путем исследования содержания лактоферрина и аутоантител (ААТ)
к антигенам (Аг) нативной ДНК (нДНК) в слезной жидкости (СЖ) у пациентов с МХ.
Материал и методы. Исследование маркера клеточной деструкции ААТ к Аг нДНК
и полифункционального острофазового белка лактоферрина проводилось в СЖ у 36-ти
больных в возрасте от 34 до 83 лет (средний возраст — 60,45 года) с МХ, находившихся
под наблюдением с 2010 по 2013 год в НФ ФГБУ «МНТК „Микрохирургия глаза“ им. акад.
С. Н. Федорова». Из них женщин — 21 (58,33 %), мужчин — 15 (41,67 %). Высота
МХ составляла от 1,68 до 15,0 мм, в среднем — 6,6 мм, максимальный диаметр от 4,73
до 20,0 мм, в среднем — 12,83 мм. Распределение МХ было следующим: стадии T1аN0M0
соответствовало 8 опухолей (22,22 %), стадии T2аN0M0 — 9 опухолей (25 %), 10 опухолей
(27,78 %) соответствовали стадии T3аN0M0 и 9 опухолей (25 %) стадии T4а,сN0M0.
Всем пациентам с МХ осуществлялся забор СЖ с обоих глаз микроканюлей из нижнего
конъюнктивального свода глаза до хирургического вмешательства.
В качестве нормативных значений были использованы данные обследования СЖ 20-ти
«практически здоровых» доноров-добровольцев. Определение концентраций ААТ к Аг
нДНК и лактоферрина проводилось при помощи метода иммуноферментного
твердофазного анализа (ELISA). Выполнялось исследование на тест-системах
Лактоферрин-стрип производства ЗАО «Вектор-БЕСТ» и MyBioSource соответственно
по инструкции производителя.
Для статистической обработки данных были использованы методы описательной
статистики и методики межгруппового сравнения. Количественные характеристики
представлены как медиана (25; 75 процентиль).
Результаты. В результате проведенного исследования было установлено, что
концентрация лактоферрина как в глазу с МХ (2650 [1944; 3563] нг/мл), так и в «здоровом»
парном глазу (2338 [1769; 3425] нг/мл) являлась достоверно ниже нормативных
показателей (12015 [11892; 12464] нг/мл, p < 0,01). Концентрация лактоферрина
во внутриглазной жидкости (463 [250; 700] нг/мл) достоверно ниже концентрации
лактоферрина в СЖ контрольной группы (12015 [11892; 12464] нг/мл, p < 0,01) (рис. 1).
Рис. 1. Концентрация лактоферрина в СЖ пациентов с МХ (больной глаз и парный
«здоровый») в сравнении с нормативными показателями контрольной группы; * — р <
0,01 по сравнению с контролем
Статистически достоверной зависимости уровня лактоферрина в СЖ пораженного органа
от стадии процесса не выявлено.
Концентрация лактоферрина в СЖ пораженного органа на каждой стадии (при стадии Т1 —
2800 (2513; 3450) нг/мл, при стадии Т2 — 3225 (2325; 3475) нг/мл, при стадии Т3 — 2613
(1869; 3994) нг/мл, при стадии Т4 — 2050 (1850; 2550) нг/мл) являлась достоверно ниже
контрольных значений (12015 [11892; 12464] нг/мл), р < 0,01 (рис. 2).
Концентрация лактоферрина в СЖ при преэкваториальной локализации (3575 [2867; 4219]
нг/мл) достоверно выше уровня лактоферрина в СЖ групп с МХ с постэкваториальным
(2550 [1950; 3225] нг/мл) и обширным расположением (1975 [1775; 3300] нг/мл), р < 0,05.
Уровень содержания лактоферрина при всех локализациях достоверно ниже контрольных
значений (12015 [11892; 12464] нг/мл), р < 0,01 (рис. 2).
Рис. 2. Концентрация лактоферрина (нг/мл) в СЖ пораженного глаза в зависимости
от локализации процесса и по сравнению с контролем; * — р < 0,01 по сравнению
с контролем; # — p < 0,05 по сравнению с постэкваториальной и обширной
локализациями
Обнаружена статистически достоверная отрицательная связь концентрации
лактоферрина в СЖ пораженного органа с возрастом, коэффициент корреляции (95 %
доверительный интервал — ДИ) —0,34 (—0,60; —0,02), р < 0,05. Это свидетельствует о том,
что концентрация лактоферрина в СЖ пораженного глаза выше у пациентов более
молодого возраста.
Выявлена прямая положительная связь между концентрацией ААТ к Аг нДНК в СЖ
пораженного и здорового глаз у пациентов с МХ (коэффициент регрессии (95 % ДИ) 0,65
(0,42; 0,89), р < 0,05, коэффициент корреляции (95 % ДИ) 0,69 (0,50; 0,83), р < 0,05.
В результате проведенного исследования было установлено, что в патогенезе МХ играет
важную роль выраженные деструктивные процессы, а также иммунные реакции. Это
подтверждается достоверным повышенным содержанием ААТ к Аг нДНК в СЖ как глаза
с МХ (1,56 [1,54; 1,75] усл. ед.), так и парного «здорового» глаза (1,56 [1,52; 1,69] усл. ед.),
р < 0,01 (рис. 3).
Рис. 3. Содержание ААТ к Аг нДНК (усл. ед.) в СЖ пациентов с МХ (больной и парный
«здоровый» глаз) в сравнении с нормативными показателями контрольной группы; * р <
0,05 по сравнению с контролем
Содержание ААТ к Аг нДНК в СЖ во всех стадиях (при стадии Т1 составила 1,53 (1,49; 1,6)
усл. ед., при стадии Т2 — 1,55 (1,55; 1,85) усл. ед., при стадии Т3 — 1,56 (1,55;1,65)
усл. ед., при стадии Т4 — 1,57 (1,56; 1,75) усл. ед.) достоверно выше значений
контрольной группы (0,5 [0,45; 0,54] усл. ед.), р < 0,01. Уровень концентрации ААТ к Аг
нДНК в СЖ пораженного органа всех локализаций (при преэкваториальной составило
1,57 (1,55;1,76) усл. ед., при постэкваториальной — 1,55 (1,47; 1,67) усл. ед. и обширной
локализации процесса — 1,57 (1,55; 1,59) усл. ед.) достоверно превышал значения
контрольной группы (0,47 [0,45;0,48] усл. ед., p < 0,01).
Выводы
1. Выявлена прямая положительная связь между концентрацией ААТ к Аг нДНК в СЖ
глаза с МХ и парного «здорового» глаза.
2. МХ характеризуется активностью аутоиммунных реакций и процессов клеточной
деструкции, проявляющихся высоким уровнем ААТ к Аг нДНК и низким уровнем
полифункционального белка лактоферрина в СЖ по сравнению с показателями группы
контроля.
3. У пациентов с МХ более молодого возраста концентрация лактоферрина в СЖ
пораженного глаза выше.
4. Преэкваториальная локализация МХ характеризуется достоверно более высоким
уровнем лактоферрина в СЖ относительно МХ с постэкваториальным и обширным
расположением.
Список литературы
1. Бровкина А. Ф. Офтальмоонкология : руководство для врачей / А. Ф. Бровкина. — М.,
2002.
2. Гришина Е. Е. Организация офтальмоонкологической службы в Москве / Е. Е.
Гришина // Сб. научн. тр. научно-практической конф. «Опухоли и опухолеподобные
заболевания органа зрения». — М., 2010. — С. 191–193.
3. Гусев Е. Ю. Системное воспаление с позиции теории типового патологического
процесса / Е. Ю. Гусев, В. А. Черешнев, Л. Н. Юрченко // Цитокины и воспаление.
— 2007. — № 4. — С. 9–21.
4. Малецкий А. П. Изменение иммунореактивности у больных с увеальной меланомой
в прцессе органосохранного лечения по данным рост-модифицирующих свойств
сыворотки крови / А. П. Малецкий, А. Л. Воронкова, Г. Б. Гаврина //
Офтальмологический журн. — 1997. — № 1. — С. 34–38.
5. Симбирцев А. С. Цитокины : классификация и биологические функции / А. С.
Симбирцев // Цитокины и воспаление. — 2004. — № 2. — С. 16–22.
6. Шабашова Н. В. Лекции по клинической иммунологии / Н. В. Шабашова. — СПб., 1998.
— 114 с.
7. Шаимова В. А. Роль провоспалительных цитокинов при заболеваниях глаз / В. А.
Шаимова // Цитокины и воспаление. — 2005. — Т. 4, № 2. — С. 13–15.
8. Intraocular collision tumour: case report and literature review / S. E. Coupland, A. Dodson,
H. Liu [et al.] // Graefes. Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. — 2013. — Vol. 251; N 5. — P.
1383–1388.
9. Age, survival predictors, and metastatic death in patients with choroidal melanoma:
tentative evidence of a therapeutic effect on survival / B. E. Damato, H. Heimann, H.
Kalirai, S. E. Coupland // JAMA Ophthalmol. — 2014. — Vol. 132, N 5. — P. 605–613.
10. Interleukin 6 in bile as an indicator of liver after hepatectomy in patients with biliary tract
carcinoma / A. Maeda, M. Nagino, E. Takeuchi, T. Sano // Br. J. Surg. — 1999. — Vol. 86,
N 4. — P. 458–464.
11. Incidence of uveal melanoma in Europe / G. Virgili, G. Gatta, L. Ciccolallo [et al.] //
Ophthalmology. — 2007. — Vol. 114 (12). — Р. 2309–15.
12. Petousis V. Current Methods for the Diagnosis and Treatment of Choroidal Melanoma / V.
Petousis, P. T. Finger // Touch Briefings. — 2012. — P. 62–69.
PROCESSES OF CELLULAR
DESTRUCTION AND AUTOIMMUNE
REACTIONS AT CHOROIDAL MELANOMA
M. A. Chernyavskaya1,2, A. V. Efremov1, V. V. Chernykh2
SBEI HPE «Novosibirsk State Medical University of Ministry of Health» (Novosibirsk c.)
Novosibirsk branch FSBE «Intersectoral Scientific and Technical Complex „Eye Microsurgery“
n. a. the academician S. N. Fedorov» of Ministry of Health (Novosibirsk c.)
1
2
The purpose is to study features of autoimmune reactions and processes of cellular destruction
at local level at patients with choroidal melanoma. Material and methods. Research was
conducted at 36 patients aged from 34 till 83 years with choroidal melanoma. Results.
Concentration of autoantibodies to antigens of native DNA is reliable above, and lactoferrin
is reliable below indicators of control group both in an eye with choroidal melanoma, and
in «healthy» didymous eye, p < 0,05. The choroidal melanoma is characterized by the high
level of lactoferrin at patients of younger age. Conclusions. Development of choroidal
melanoma is followed by active processes of cellular destruction and autoimmune reactions.
Keywords: choroidal melanoma, lactoferrin, autoantibodies to nDNA antigens, plaintive liquid,
lactoferrin.
About authors:
Chernyavskaya Maria Aleksandrovna — post-graduate student of pathophysiology chair
at SBEI HPE «Novosibirsk State Medical University of Ministry of Health», doctor of the 7th
ophthalmologic unit at Novosibirsk branch FSBE «Intersectoral Scientific and Technical
Complex „Eye Microsurgery“ n. a. the academician S. N. Fedorov» of Ministry of Health, office
phone: 8 (383) 340-42-58, e-mail: mach.mntk@gmail.com
Efremov Anatoly Vasilevich — honored scientist of the RF, corresponding member of the
RAMS, professor, head of pathological physiology and clinical pathophysiology chair at SBEI
HPE «Novosibirsk State Medical University of Ministry of Health», office phone: 8(383)
225-39-78, e-mail: e-mail: eav48@yandex.ru
Chernykh Valery Vyacheslavovich — doctor of medical science, professor, director
of Novosibirsk branch FSBE «Intersectoral Scientific and Technical Complex „Eye
Microsurgery“ n. a. the academician S. N. Fedorov» of Ministry of Health, office phone: 8 (383)
340-45-57
List of the Literature:
1. Brovkina A. F. Ophthalmooncology: guidance for doctors / A. F. Brovkina. — M, 2002.
2. Grishina E. E. Organization of ophthalmooncological service in Moscow / E. E. Grishina //
Col. scient. works of scientific and practical conf. «Tumors and tumor-like diseases
of organ of vision». — M, 2010. — P. 191-193.
3. Gusev E. Y. Systemic inflammation from a position of the theory of sample pathological
process / E. Y. Gusev, V. A. Chereshnev, L. N. Yurchenko // Cytokines and inflammation.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
— 2007. — № 4. — P. 9-21.
Maletsky A. P. Change of immunoreactivity] at patients with uveal melanoma in process
of organ-preservation treatment by data body height — modifying properties of blood
serum / A. P. Maletsky, A. L. Voronkova, G. B. Gavrina // Ophthalmologic journal. — 1997.
— № 1. — P. 34-38.
Simbirtsev A. S. Cytokines: classification and biological functions / A. S. Simbirtsev //
Cytokines and inflammation. — 2004. — № 2. — P. 16-22.
Shabashova N. V. Lectures on clinical immunology / N. V. Shabashova. — SPb., 1998.
— 114 P.
Shaimova V. A. Role of pro-inflammatory cytokines at diseases of eyes / V. A. Shaimova //
Cytokines and inflammation. — 2005. — V. 4, № 2. — P. 13-15.
Intraocular collision tumour: case report and literature review / S. E. Coupland, A. Dodson,
H. Liu [et al.] // Graefes. Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. — 2013. — Vol. 251; N 5. — P.
1383–1388.
Age, survival predictors, and metastatic death in patients with choroidal melanoma:
tentative evidence of a therapeutic effect on survival / B. E. Damato, H. Heimann, H.
Kalirai, S. E. Coupland // JAMA Ophthalmol. — 2014. — Vol. 132, N 5. — P. 605–613.
Interleukin 6 in bile as an indicator of liver after hepatectomy in patients with biliary tract
carcinoma / A. Maeda, M. Nagino, E. Takeuchi, T. Sano // Br. J. Surg. — 1999. — Vol. 86,
N 4. — P. 458–464.
Incidence of uveal melanoma in Europe / G. Virgili, G. Gatta, L. Ciccolallo [et al.] //
Ophthalmology. — 2007. — Vol. 114 (12). — Р. 2309–15.
Petousis V. Current Methods for the Diagnosis and Treatment of Choroidal Melanoma / V.
Petousis, P. T. Finger // Touch Briefings. — 2012. — P. 62–69.