Генетическое исследование эмбрионов у пациентов с многократными неудачными попытками.
реклама
Генетическое исследование эмбрионов у пациентов с многократными неудачными попытками. Маслий Ю.В Многократные неудачные программы вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ)– это одна из наиболее серьезных проблем в репродуктологии. Существует много причин данной проблемы. Используется множество методик коррекции. Существует два обобщенных фактора неудач лечения методами ВРТ: Имплантационный -20-30% Эмбриональный 70- 80% Возможно сочетание обоих факторов Эндометрий- это внутренний слой клеток, выстилающих внутреннюю полость матки. После попадания эмбриона в полость матки происходит сложный процесс синхронизации развития эмбриона и его прикрепления к стенке матки. Какие наиболее частые причины эндометриальных нарушений? гиперплазия эндометрия гипоплазия, гипотрофия эндометрия полипы эндометрия функциональная неполноценность клеток эндометрия или десинхронизация (несовпадение во времени) развития эндометрия и эмбриона. Эмбриональный фактор Качество и жизнеспособность эмбрионов зависит от следующих факторов: прежде всего, от возраста женщины. от биологических особенностей женского организма спермограммы, FISH спермы Кариотипа (отсутствие сбалансированных транслокаций) Показания для проведения CGH Возраст старше 38-40 лет Многократные неудачные попытки Привычное невынашивание беременности невыясненной этиологии Сбалансированная хромосомная транслокация (у одного или обоих супругов) Методы биопсии эмбриона Polar Body Day 1,PB2 Cleavage stage Day 3 Blastocyst Day 5/6 Сравнительный анализ биопсии эмбриона на различных этапах Полярное тельце Биопсия бластомера Трофоэктодермал ьная биопсия Учет мужского фактора Нет Да Да Уровень мозаицизма Нет Высокий Ниже Количество образцов для исследовани я Максимальное Ниже Оптимальное Исследовани е материала Экстраэмбрионального Эмбрионального Экстраэмбриональног о Преселекция анеуплоидны Нет Нет Частота анеуплоидий снижается в 2 раза Ограничения FISH метода для доимплантационной генетической диагностики Анализ ограниченного количества хромосом ( до 9-12 , “gold standard”) 13, 16, 18, 21, Х, Y «Капризность» методики До 10% недиагносцированных эмбрионов «Наслоение» сигналов Мозаицизм 13 16 21 21 16 13 Array Comparative Genome Hybridization Normal DNA Embryo DNA Trisomy Monosomy Normal Принцип метода CGH 12 PGD-CGH Эмбрион с нормальным хромосомным набором 46, XY Анеуплоидный эмбрион 47, XY, +7 13 FISH или СГГ? PGSCGH PGSFISH Контроль P Кол-во циклов 56 41 134 Возраст Среднее кол-во яйцеклеток на пункцию 35,2 33,45 34,3 NS 12,8 13,6 12,8 NS Кол-во неудачных циклов 3,9 3,8 3,2 NS Эмбрионов на перенос 1,94 2,1 2,6 NS Переносов эмбрионов 29 32 132 78,0% 98,5% 9 18 Законченных циклов Клинических беременностей 14 22,0% 13,4% p< 0.05 Частота клин.бер-стей на перенос 48,3% 28,1% 13,6% p< 0.05 Частота клин.бер-стей на пункцию Из выступления Вильяма Скулкрафта, директора Центра Репрдуктивной Медицины Денвер, Колорадо ( ASRM, 2012) Источники генетического материала Что происходит если перенести анеуплоидный эмбрион? Отсутствие имплантации Самоаборт (замершая беременность) Рождение ребенка с хромосомной аномалией При переносе нормального и анеуплоидного эмбриона – проблемы имплантации и вынашивания беременности День 5: прогноз в зависимости от возраста и количества эмбрионов Кол-во % пациентов с нормальными эмбрионами (% нормальных эмбрионов) эмбрион 40-42 ов на 5-й доноры день я/клеток <35 лет 35-39 лет года >42 лет 1-3 99% 95% 79% 61% 37% 4-6 7-10 > 10 69% 68% 49% 34% 17% 100% 100% 97% 81% 67% 77% 73% 52% 31% 13% 100% 100% 100% 97% 95% 62% 58% 48% 27% 22% 100% 100% 100% 100% 100% 67% 59% 51% 41% 17% СГГ исключает влияния возраста на результативность 60% Implantation rate 50% 40% day 3 day 5 30% 20% 10% 0% 30-34 35-39 40-42 Maternal age Reprogenetics data. 819 cycles with follow up, 3726 embryos analyzed Also observed with CGH (Wells et al. ASRM 2010) and SNPs (Forman et al. ASRM 2011) Плохой овариальный резерв – выход? Embryo banking Несколько циклов стимуляции (3-6) ТЭБ бластоцист и криоконсервация Накопление бластоцист для исследования СГГ Диагностика и перенос эуплоидных эмбрионов Накопление эмбрионов для «плохих ответчиков» и пациентов с низким FOUR CYCLES OF IVF +прогнозом 1 OF PGD: Накопление эмбрионов для «плохих ответчиков» и пациентов с низким FOUR CYCLES OF IVF +прогнозом 1 OF PGD: Накопление эмбрионов для «плохих ответчиков» и пациентов с низким FOUR CYCLES OF IVF +прогнозом 1 OF PGD: Накопление эмбрионов для «плохих ответчиков» и пациентов с низким FOUR CYCLES OF IVF +прогнозом 1 OF PGD: Преимущества накопления эмбрионов Увеличение шансов получение собственного ребенка Уменьшение длительности – самоаборт задерживает проведение следующего цикла стимуляции до 6 месяцев, что особенно актуально для женщин старше 40 лет Минимализация затрат на рождение ребенка Результативность aCGH-PGD (общие даные) Из них Группа с множественными неудачными попытками ВРТ Множ неуд. Попытки ВРТ Патол. сперма Без мужского фактора Кол-во циклов 28 13 15 Возраст 35,2 36,8±4,4 33,4±5,8 Эуплоидные эмбрионы 52,8% 49% 55,6% Эмбрионов/перенос 1,94 (40) 1,25 (15) 1,92 (25) Переносов эмбрионов 25 12 13 Законченных циклов 89,3% 92,3% 86,7% Клинических беременностей 14 (1-дв) 4 10 (1-дв) Беременностей/ пункцию 50% 30,8% 66,7% Беременностей/ перенос 56% 33,3% 76,9% Показатель имплантации 37,5% 26,7% 44% Часто задаваемые вопросы пациентами Не повреждает ли биопсия эмбрион? Насколько уменьшаются шансы с проведением криоконсервации эмбрионов? Как можно увеличить шансы получения нормального эмбриона и достижения беременности? Не повреждает ли биопсия эмбрион? Имеющиеся данные свидетельствуют о безопасности биопсии для эмбриона и более того о более высокой выживаемости эмбриона при биопсии на 5-6 сутки по сравнению с биопсией на 3-е сутки. Насколько уменьшаются шансы с проведением криоконсервации эмбрионов? «Свежие» переносы Криопереносы Как можно увеличить шансы получения нормального эмбриона и достижения беременности? IMSI Введение внтуриматочно Мононуклеарных клеток Периферической Крови Гистероскопия Внутивенное введение иммуноглобулина Выводы Преимплантационная генетическая диагностика методом СГГ является эффективным клиническим опробованным методом селекции и диагностики эмбрионов. Ведение этой группы пациентов требует креативного подхода и применение самых современных методов диагностики и лечения
