РАСПРОСТРАНЁННОСТЬ МОБИЛЬНЫХ ГЕНЕТИЧЕСКИХ

284
Оригинальные исследования
РАСПРОСТРАНЁННОСТЬ МОБИЛЬНЫХ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ЭЛЕМЕНТОВ
SCCmec-ТИПА У ШТАММОВ STAPHYLOCOCCUS AUREUS,
ИЗОЛИРОВАННЫХ С КОЖИ И СЛИЗИСТЫХ ПАЦИЕНТОВ
С АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИЕЙ
А.Ф. Шамсутдинов 1, 2, А.А. Тойменцева 1, Ю.А. Тюрин 2, 3, Л.Т. Баязитова 2
1
Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Россия
2
Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии,
Казань, Россия
3
Казанский государственный медицинский университет, Казань, Россия
The spread of mobile genetic elements SCCmec-type strains staphylococcus aureus,
isolated with skin and mucous of patients with allergic pathology
A.F. Shamsutdinov 1, 2, A.A. Toymentseva 1, Yu.A. Tyurin 2, 3, L.T. Bayazitova 2
1
Kazan (Volga region) Federal University, Kazan, Russia
2
Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Kazan, Russia
3
Kazan State Medical University, Kazan, Russia
Золотистый стафилококк – повсеместно распространенный микроорганизм, вызывающий инфекционные заболевания у человека и животных. В настоящее время наблюдается рост встречаемости метициллин-резистентных
штаммов Staphylococcus aureus. Устойчивость штаммов
Staphylococcus aureus к метициллину определяется присутствием в геноме стафилококковых хромосомных кассет
SCCmec типа.
В работе были исследованы 60 клинических штаммов
MRSA, выделенных с кожи и слизистых пациентов с аллергической патологией. Изучение штаммов Staphylococcus
aureus было проведено на дифференциальных средах.
Дополнительно видовая идентификация была проведена
с помощью MALDI-TOF. Специфические участки генов
генного комплекса mec были выявлены с помощью метода ПЦР. В результате типирования было установлено, что
47% исследованных штаммов фенотипически характеризовались устойчивостью к оксациллину, но не содержали
праймер-специфических участков относящихся к mecгенному комплексу I–IV типов. В остальных 53% штаммов были выявлены праймер-специфические ампликоны.
Фенотипически эти штаммы также обладали устойчивостью к оксациллину. Проведенное исследование показало,
что MRSA штаммы в составе своего генетического аппарата несут несколько различных типов SCCmec кассет.
Это свойство позволяет им проявлять полирезистентность
к нескольким антибактериальным препаратам.
Ключевые слова: золотистый стафиллокок, штаммы
MRSA, стафилококковые хромосомные кассеты.
Staphylococcus aureus is widespread bacterium
that causes inflectional diseases of humans and animals.
Currently, there is growing incidence of methicillinresistant strains of Staphylococcus aureus. Resistance of
Staphylococcus aureus strains to methicillin is detected by
the presence in the genome of staphylococcal chromosomal
cassette of SCCmec type.
In this work 60 clinical strains of MRSA isolated from
the skin and mucous of patients with allergic pathology were
examined. The analysis of Staphylococcus aureus strains
was performed in differential mediums. Additionally, specific
identification was carried out by MALDI-TOF.
Specific regions of the genes of mec gene complex were
identified by PCR. As a result of typing we determined
that 47% of tested strains were resistant to oxacillin
phenotypically, but did not contain the specific primer sites
related to mec- gene complex types I–IV. The remaining
53% of the strains were contained primer-specific
amplicons. These strains were also phenotypically resistant
to oxacillin. This study showed that MRSA strains as part
of its genetic apparatus are several different types of
SCCmec cassettes. This property allows them to express
multidrug resistance.
Золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus)
является повсеместно распространенным микроорганизмом, вызывающим широкий спектр инфекционных заболеваний человека и животных. Наряду
с инфекционной патологией, вызванной данным
микроорганизмом, достаточно широко распространено бессимптомное носительство этого таксона
у здоровых лиц (15–20% населения являются колонизированными этим микроорганизмом), а у лиц
с различной патологией верхних дыхательных путей
и кожи распространённость носительства ещё выше
(до 30%) [1–3]. На современном этапе наблюдается неуклонный рост встречаемости метициллинрезистентных штаммов золотистого стафилококка
(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA).
Так, согласно установленным особенностям, наличие у штаммов SCCmec I, IV и V типов формирует
устойчивость исключительно к β-лактамным антибиотикам, наличие SCCmec II и III типов обуслав-
ливают множественную устойчивость, так как эти
кассеты содержат дополнительные детерминанты
устойчивости, расположенные на интегрированных
плазмидах. Необходимо отметить, что до конца 90-х
годов MRSA был исключительно внутрибольничной
проблемой. В последующие десятилетия, благодаря внедрению программ инфекционного контроля в
больницах и домах престарелых, уровень заболеваемости внутрибольничной MRSA-инфекцией существенно снизился. В то же время были обнаружены
другие, внебольничные резервуары MRSA, которые
поддерживают циркуляцию мультирезистентного
возбудителя и труднее поддаются контролю. Речь
идет о внебольничном MRSA, о котором заговорили
в начале 2000-х годов, и стафилококке зоонозного
происхождения, который оказался в центре внимания всего несколько лет назад. Внегоспитальные
штаммы MRSA способны вызывать некротизирующую форму пневмонии, характеризующуюся крайне
е-mail: shamsutdinov2006@yandex.ru
гены & клетки Том IX, № 3, 2014
Key words: staphylococcus aureus, MRSA strains,
staphylococcal chromosomal cassette.
285
Оригинальные исследования
тяжелым течением и требующей госпитализации
пациента, в связи с чем возникает угроза заноса и
распространения таких штаммов в стационарах.
Мировое распространение MRSA, как считается,
обусловлено диссеминацией нескольких клональных линий со специфической генетикой [4]. Согласно данным В. Воробьевой с соавт. (2008), каждая
клональная линия имеет особенности патогенности
и устойчивости к лекарственным препаратам, причем распространение некоторых из них принимает
эпидемический характер [5]. Устойчивость штаммов
S. aureus к метициллину определяется присутствием в них стафилококковых хромосомных кассет
SCCmec типа. SCCmec – это мобильный генетический элемент, который несет основной детерминант
устойчивости к β-лактамным антибиотикам широкого спектра действия с помощью гена mecA, который кодирует пенициллин-связывающий белок-2
(ПСБ-2) и расположен на мобильном генетическом
элементе – SCCmec [6].
Метициллин и другие β-лактамные антибиотики являются структурными аналогами D-аланилаланина, и поэтому ингибируют фермент транспептидазу. Как известно, β-лактамные антибиотики
являются субстратными аналогами и ковалентны серин-активному центру ПСБ, которые необходимы для
построения клеточной стенки стафилококка. Связь
ПСБ с β-лактамами необратима и приводит к гибели
стафилококков.
При подавлении β-лактамным антибиотиком активности основных пенициллинсвязывающих белков, ПСБ-2, кодируемый mecA геном, в силу своего
более низкого сродства к препаратам данной группы,
продолжает функционировать и сохраняет микробной клетке жизнеспособность. Однако фенотипическая экспрессия гена mecA очень вариабельна и зависит от многих факторов, например, от питательной
среды, температуры и т.д.
Вскоре после первого упоминания о SCCmec,
были описаны несколько других, структурно отличающихся между собой SCCmec [7]. Их разделили по
нескольким характеристикам: 1) наличие гена mecA
в генном комплексе mec; 2) наличие гена рекомбиназы ccr (ccrA, B и/или ccrC) в комплексе генов
ccr; 3) способность внедрения в определенный сайт
стафилококковой хромосомы, который называется
последовательностью сайта интеграции (integration
site sequence, ISS) и служит мишенью для ccrопосредованной рекомбинации; 4) наличие примыкающих прямых повторяющихся последовательностей, содержащих ISS [8]. Примыкающие гены
рекомбиназ (ccrA/ccrB или ccrC) позволяют осуществлять внутри- и межвидовой горизонтальный
перенос SCCmec. Происхождение SCCmec неясно,
но, возможно, они берут начало из коагулаза-отрицательных разновидностей стафилококка [9]. Также
SCCmec были классифицированы на типы и подтипы. Типы определяются комбинацией разных типов
генных комплексов ccr с генными комплексами mec
(табл. 1). Это ключевые элементы кассеты, отвечающие за встраивание и вырезание SCCmec в геном и
фенотипическую устойчивость к β-лактамным антибиотикам [10].
До недавнего времени существовали две альтернативные теории, объясняющие распространение
SССтес кассет у S.aureus. В то время как одноклональная теория предполагала, что все клоны МRSА
имеют одного предка и что SССmес кассета была
приобретена однократно, мультиклональная теория
утверждает, что SССтес кассета была независимо
приобретена штаммами, относящимися к разным
генетическим линиям золотистого стафилококка.
Именно вторая теория в настоящее время подтверждена многочисленными исследованиями [11, 12].
Таблица 1. Типы SCCmec, показанные
для S. aureus [10 с изменениями]
Тип
SCCmec
Тип генного
комплекса ccr
Тип генного
комплекса mec
I
1 (A1B1)
B
II
2 (A2B2)
A
III
3 (A3B3)
A
IV
2 (A2B2)
B
V
5 (C)
C2
VI
4 (A4B4)
B
VII
5 (C)
C1
VIII
4 (A4B4)
A
Классификация SCCmec осуществляется по присутствию в ней некоторых генных комплексов, таких
как ccr и mec. Генный комплекс ccr состоит из генов
ccr, окруженных открытыми рамками считывания
(open reading frames ORF), функции некоторых из
них до сих пор остаются неизвестными. К настоящему времени для S. aureus были определены 3 типа
генов комплекса ccr: ccrA, ccrB, и ccrC, – у которых
совпадения в последовательности нуклеотидов ДНК
ниже 50%. Гены ccrA и ccrB были классифицированы в четыре аллотипа, так как их генетические
последовательности имеют совпадения 60–82%.
А ccrC представлен только одним аллотипом, так
как совпадения в последовательности ДНК у него
составляет больше 85%. Генные комплексы ccr,
присутствующие в клетках S. aureus, включают несколько типов: тип 1 (несет ген ccrA1B1), тип 2
(несет ccrA2B2), тип 3 (несет ccrA3B3), тип 4 (несет ccrA4B4) и тип 5 (несет ccrC), которые могут
быть обнаружены с помощью обычного анализа ПЦР
в присутствии пары необходимых праймеров [13].
Генный комплекс mec состоит из гена mecA, его
регуляторных генов и соединенных с ними инсерционных последовательностей. Генный комплекс mec
класса A представляет собой прототип, который содержит mecA, его регуляторные гены mecR1 и mecI,
расположенные выше самого mecA, гипервариабельную область (hypervariable region, HVR) и инсерционную последовательность IS431, расположенную ниже гена mecA. Генный комплекс mec класса
B состоит из гена mecA, гена mecR1, укороченного
в результате вставки последовательности IS7272 и
расположенного выше, чем ген mecA, а также HVR и
инсерционной последовательности IS431 ниже гена
mecA. Генный комплекс mec класса C включает в
себя ген mecA, ген mecR1, укороченный в результате
вставки последовательности IS431 и расположеный
выше гена mecA, а также HVR и последовательность
IS431 внизу по отношению к гену mecA [14]. Генный
комплекс mec класса D состоит из гена mecA и гена
гены & клетки Том IX, № 3, 2014
286
Оригинальные исследования
ΔmecRI и имеет в своем составе вставку инсерционных последовательностей ниже гена ΔmecRI [15].
К настоящему времени для S. aureus описано 8 типов SCCmec. Первые три типа SCCmec именуются
как типы I, II, и III, соответственно [6]. Последующие новые типы SCCmec пронумерованы от IV до VIII
[16]. Эта номенклатура была сохранена. Наряду с
ней появилась новая, более информативная система
обозначения типа SCCmec, основанная на типах ccr и
классах mec. Например, тип I (1B) SCCmec указывает на то, что данная SCCmec имеет комплекс 1 типа
ccr и генный комплекс mec класса B. Поэтому типы
SCCmec обозначаются римскими цифрами, за которыми следует указывать тип генного комплекса ccr
и генного комплекса mec вместе в круглых скобках,
например, тип II (2A), тип III (3A), тип IV (2B), тип V
(5C2), тип VI (4B), тип VII (5C1) и тип VIII (4A) [17].
В большинство SCCmec входит множество различных структур: помимо генных комплексов ccr и mec,
включаются инсерционные последовательности (IS)
и транспозоны (Tn). На основе данных о различиях
внутри J-областей каждый тип SCCmec был разделен на подтипы, при наличии тех же самых генных
комплексов ccr и mec [18].
Целью исследования являлось определение распространённости и типирование в геноме штаммов
S. aureus, выделенных с кожи и слизистых оболочек
групп риска с аллергической патологией, SCCmecкассеты первых пяти типов.
Материал и методы
лонные штаммы S. aureus ATCC 38591 (является
чувствительным к метициллину и не несет SCCmec)
и ATCC 29213 (является MRSA, несет гены mecA, I,
II, IVb, IVc и IVd типов [19]), предоставленные ГИСК
им. Тарасевича.
Выделение бактерий с кожи и слизистых проводили в соответствии с регламентирующим документом [20] и требованиями, предъявляемыми к сбору
и транспортировке биологического материала [21].
Идентификацию золотистого стафилококка начинали с изучения колоний на желточно-солевом агаре,
обладающим
дифференциально-диагностическим
свойством к данному виду стафилококка. В качестве
дополнительной среды была использована среда
с кровяным агаром. На выбранных средах проводили учет наличия лецитиназы и пигмента (МЖСА) и
способности к гемолизу (кровяной агар) и отбирали
выпуклые, ровные непрозрачные колонии S. aureus
средней величины белого, лимонно-желтого или золотистого цвета. Дополнительная видовая идентификация штаммов была проведена с применением
матрично-активированной лазерной десорбции/ионизации (matrix assisted laser desorbtion/ionization,
MALDI-TOF).
Выделение бактериальной ДНК
Выделение ДНК из биомассы S. aureus было произведено с помощью стандартного набора реагентов
компании ООО «Omnix» (Россия).
Детекция SCCmec и их типирование
Используемые штаммы и среды
В работе были исследованы 60 клинических
MRSA штаммов S. aureus, выделенных с кожи и
слизистых пациентов с аллергической патологией
(сезонный аллергический ринит, персистирующий
аллергический ринит, атопическая экзема и дерматит (младенческая форма), предоставленные ФБУН
«КНИИЭМ Роспотребнадзора» из коллекции лаборатории микробиологии (зав. лаб. к.м.н. Баязитова
Л.Т.). В качестве контроля были использованы эта-
Специфические участки генов генного комплекса
mec были выявлены с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием 10 пар
специфических праймеров (прямых и обратных), синтезированных и лиофилизированных ЗАО «Синтол»
(Россия). Праймеры комплементарны концевым последовательностям ДНК-специфического фрагмента
и ориентированы таким образом, что синтез ДНК протекает только между ними (табл. 2).
Таблица 2. Праймеры, используемые для типирование и детекции SCCmec кассет
(по [22] с изменениями)
Праймер
5’-3’ последовательность
TypeI-F
gct-tta-aag-agt-gtc-gtt-aca-gg
TypeI-R
gtt-ctc-tca-tag-tat-gac-gtc-c
TypeII-F
cgt-tga-aga-tga-tga-agc-g
TypeII-R
cga-aat-caa-tgg-tta-atg-gac-c
TypeIII-F
cca-tat-tgt-gta-cga-tgc-g
TypeIII-R
cct-tag-ttg-tcg-taa-cag-atc-g
TypeIVa-F
gccttattcgaagaaaccg
TypeIVa-R
cta-ctc-ttc-tga-aaa-gcg-tcg
TypeIVb-F
tct-gga-att-act-tca-gct-gc
TypeIVb-R
aaa-caa-tat-tgc-tct-ccc-tc
TypeIVc-F
aca-ata-ttt-gta-tta-tcg-gag-agc
TypeIVc-R
ttg-gta-tga-ggt-att-gct-gg
гены & клетки Том IX, № 3, 2014
Размер ампликона (п.о.)
Детектируемый тип SCCmec
613
SCCmec I
398
SCCmec II
280
SCCmec III
776
SCCmec IVa
493
SCCmec IVb
200
SCCmec IVc
287
Оригинальные исследования
Окончание таблицы 2
Праймер
5’-3’ последовательность
Размер ампликона (п.о.)
Детектируемый тип SCCmec
TypeIVd-F5
ctc-aaa-ata-cgg-acc-cca-ata-ca
881
SCCmec IVd
TypeIVd-R6
tgc-tcc-agt-aat-tgc-taa-ag
TypeV-F
gaa-cat-tgt-tac-tta-aat-gag-cg
325
SCCmec V
TypeV-R
tga-aag-ttg-tac-cct-tga-cac-c
mecI-F
ccc-ttt-tta-tac-aat-ctc-gtt
146
mec A генного комплекса
mecI-R
ata-tca-tct-gca-gaa-tgg-g
IS1272-F
tat-ttt-tgg-gtt-tca-ctc-gg
1,305
mec B генного комплекса
mecR1-R
ctc-cac-gtt-aat-tcc-att-aat-acc
F – прямой праймер; R – обратный праймер.
Амплификация была проведена с помощью термоциклера «Терцик» (Россия) по методике, предложенной Zhang K. et al. (2002) [22].
Анализ ампликонов был проведен методом горизонтального электрофореза в 2% агарозном геле с
напряжоннестью электрического поля 5 В/см [23].
Для измерения размера ампликонов были использованы маркеры: 1Kb Ladder DNA marker (300–
10000 п.о.) и Ladder DNA marker (100–3000 п.о.)
(Axygen, США).
Для визуализации был использован интеркалирующий краситель этидиум бромид в концентрации
10 мг/мл (Helicon, Россия). Визуализация и фотосъёмка гелей были проведены с использованием
трансиллюминатора Vilber Lourmat (Франция) и системы обработки изображений Биотест-1 (Россия).
Результаты и обсуждение
С помощью методов классической микробиологии идентификации бактерий по характерному росту
колоний на двух различных дифференциальных средах и пигментации на ЖСА, а также по способности
к гемолизу на кровяном агаре 60 отобранных изолятов принадлежали к виду S. aureus.
Идентификация 60 образцов стафилококка с помощью метода MALDI-TOF показала гомологию со
штаммами S. aureus, входящими в базу данных NCBI.
Cравнение результатов, полученных с помощь
классического микробиологического метода и методом биотипирования MALDI-TOF, показало, что все
изоляты относились к золотистому стафилококку.
Данные о наличии различных типов SCCmec-кассет
были получены на основе информации о длине генспецифичных праймеров, по сравнению со специальными ДНК-маркерами (рис.).
В результате типирования нами было установлено, что 28 (47%) штаммов из 60 исследованных не
содержали праймер-специфических участков, относящихся к пяти типам (I, II, III, IV a, b, d, V) SCCmecкассет и mec-генным комплексам класса А и B.
Фенотипически данные штаммы характеризовались
устойчивостью к оксациллину на MRSA-агаре и были
отнесены к метициллин-резистентной группе штаммов, 17 из них выделены со слизистой носа и 11
с кожи детей с атопическим дерматитом. Возможно
устойчивость к антибиотикам связана с наличием
в геноме этих штаммов других типов mec-кассет –
Type VI–VIII, которые не были нами рассмотрены
в данном исследовании.
Длина, п.о.
1500
1000
800
700
600
500
400
1
2
3
4
5
6
Продукты ДНК- амплификации mec-кассет
штаммов S. aureus:
1 – ДНК-маркер; 2, 3, 6 – образцы ДНК типа V;
4 – образец ДНК типа mecA;
5 – образец ДНК типа IVb
В других 32 (53%) из 60 штаммов, были выявлены праймер-специфические-ампликоны, характерные для SCCmec кассет и mec-генных комплексов
класса А и B. Фенотипически данные штаммы обладали устойчивостью к оксациллину, и рост данных
штаммов оксациллином не ингибировался. Все эти
метициллин-резистентные штаммы, в зависимости
от генетических особенностей, были разделены на
две группы, представленные ниже.
Группа 1 (4 из 32): содержит в своем геноме генные комплексы mecА класса (2 штамма) и генные
комплексы mecA и mecB классов (2 штамма). При
этом праймер-специфических ампликонов, характерных для SCCmec кассет I-V типов в данных штаммах не выявлено. Можно предположить, что данные
штаммы могут содержать SCCmec VI и VIII.
Группа 2 (28 из 32): штаммы, в геноме которых
выявлены ампликон-специфические участки, характерные для SCCmec I-V типов. Данная группа является гетерогенной и состоит из 12 штаммов, которые содержат в геноме 2 и более типов различных
SCCmec, и 16 штаммов, которые содержали только
один тип SCCmec.
Таким образом, проведенное исследование по
определению распространенности типовой структуры стафилококковых хромосомных кассет mec
(SCCmec) показало, что штаммы, колонизирующие кожу и слизистые оболочки у пациентов с нарушением целостности этих органов в результате
развития аллергического воспаления и проявляющие устойчивость к β-лактамным антибиотикам,
в составе своего генетического аппарата несут
несколько различных типов SCCmec кассет. Дангены & клетки Том IX, № 3, 2014
288
Оригинальные исследования
ное приобретённое свойство позволяет штаммам
S. aureus проявлять полирезистентность к нескольким антибактериальным препаратам благодаря дополнительным детерминантам, интегрированным в
плазмидах, присутствующих в SCCmec II и III типов.
Работа частично была финансирована из средств
субсидии, выделенной в рамках государственной
поддержки Казанского (Приволжского) федерального университета в целях повышения его конкурентоспособности среди ведущих мировых научно-
образовательных центров. Работа по MALDI-TOF
биотипированию выполнена на оборудовании междисциплинарного центра протеомных исследований
Казанского (Приволжского) федерального университета (к.б.н. Тойменцева А.А.).
Авторы выражают благодарность: Альберту Анатольевичу Ризванову, д.б.н., г.н.с., профессору кафедры генетики Института фундаментальной медицины
и биологии Казанского (Приволжского) федерального университета; Рустему Салаховичу Фассахову,
д.м.н., профессору, директору Казанского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора.
Литература:
1. Wertheim H.F., Melles D.C., Vos M.C. et al. The role of nasal
carriage in Staphylococcus aureus infections. Lancet Infect Dis. 2005;
5: 751–62.
2. von Eiff C., Becker K., Machka K. et al. Nasal carriage as a
source of Staphylococcus aureus bacteremia. Study Group. N. Engl. J.
Med. 2001; 344: 11-6.
3. Wertheim H.F., van Kleef M., Vos M.C. et al. Nose picking
and nasal carriage of Staphylococcus aureus. Infect Control. Hosp.
Epidemiol. 2006; 27: 863-7.
4. Дмитренко О.А. Молекулярно-генетические аспекты эпидемиологии внутрибольничных инфекций, вызванных представителями вида Staphylococcus aureus, устойчивыми к метициллину/
оксациллину [диссертация]. Москва: ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи
РАМН; 2008.
5. Vorobieva V., Bazhukova T., Hanssen A.M. et al. Clinical isolates
of Staphylococcus aureus from the Arkhangelsk region, Russia:
antimicrobial susceptibility, molecular epidemiology, and distribution of
Panton-Valentine leukocidin genes. APMIS 2008; 116(10): 877-87.
6. Ito T., Katayama Y., Hiramatsu K. Cloning and nucleotide
sequence determination of the entire mec DNA of pre-methicillinresistant Staphylococcus aureus N315. Antimicrob. Agents
Chemother. 1999; 43(6):1449-58.
7. Ito T., Katayama Y., Asada K. et al. Structural comparison of
three types of staphylococcal cassette chromosome mec integrated
in the chromosome in methicillin- resistant Staphylococcus aureus.
Antimicrob. Agents Chemother. 2001; 45: 1323-36.
8. Katayama Y., Ito T., Hiramatsu K. A new class of genetic
element, staphylococcal cassette chromosome mec, encodes
methicillin resistance in Staphylococcus aureus. Antimicrob. Agents
Chemother. 2000; 44: 1549-55.
9. Hiramatsu K., Cui L., Kuroda M. et al. The emergence and
evolution of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Trends
Microbiol. 2001; 9: 486-93.
10. International Working Group on the Staphylococcal Cassette
Chromosome elements. http://www.sccmec.org/Pages/SCC_HomeEN.
html; 2010.
11. Shore A., Rossney A.S., Keane C.T. et al. Seven novel variants
of the staphylococcal chromosomal cassette mec in methicillinresistant Staphylococcus aureus isolates from Ireland. Antimicrob.
Agents Chemother. 2005; 49: 2070-83.
12. Stephens A.J., Huygens F., Giffard P.M. Systematic derivation
of marker sets for staphylococcal cassette chromosome mec typing.
Antimicrob. Agents Chemother. 2007; 51: 2954-64.
13. Wisplinghoff H., Rosato A.E., Enright M.C. et al. Related clones
containing SCCmec type IV predominate among clinically significant
Staphylococcus epidermidis isolates. Antimicrob. Agents Chemother.
2003; 47: 3574-79.
14. Wu S., Piscitelli C., Tomasz A. Tracking the evolutionary origin of
the methicillin resistance gene: cloning and sequencing of a homologue
of mecA from a methicillin susceptible strain of Staphylococcus sciuri.
Microb. Drug Resist. 1996; 2: 435-41.
15. Katayama Y., Ito T., Hiramatsu K. Genetic organization of the
chromosome region surrounding mecA in clinical staphylococcal strains:
role of IS431-mediated mecI deletion in expression of resistance
in mecA-carrying, low-level methicillin-resistant Staphylococcus
haemolyticus. Antimicrob. Agents Chemother. 2001; 45: 1955-63.
16. Berglund C., Ito T., Ikeda M. et al. Novel type of staphylococcal
cassette chromosome mec in a methicillin-resistant Staphylococcus
aureus strain isolated in Sweden. Antimicrob. Agents Chemother.
2008; 52(3): 512-6.
17. Zhang K. , McClure J. A., Elsayed S. et al. Novel staphylococcal
cassette chromosome mec type, tentatively designated type VIII,
harboring class A mec and type 4 ccr gene complexes in a Canadian
epidemic strain of methicillin - resistant Staphylococcus aureus.
Antimicrob. Agents Chemother. 2009; 53: 531-40.
18. Oliveira D.C., Milheirico C., de Lencastre H. Redefining a
structural variant of staphylococcal cassette chromosome mec,
SCCmec type VI. Antimicrob. Agents Chemother. 2006; 50: 3457-59.
19. Carson K.C., Bartlett J.G., Tan T.J. et al. In Vitro Susceptibility
of Methicillin – Resistant Staphylococcus aureus and Methicillin Susceptible Staphylococcus aureus to a New Antimicrobial, Copper
Silicate. Antimicrob. Agents Chemother. 2007; 51(12): 4505-7.
20. Приказ Министерства Здравоохранения СССР №535 от 22
апреля 1985 г. Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений.
21. Зубков М.Н. Сбор, транспортировка биологического материала и трактовка результатов микробиологический исследований.
Клин. Микробиол. Антимикроб. Химиотер. 2004; 6(2): 147-50.
22. Zhang K., McClure J.A., Elsayced S. et al. Novel multiplex
PCR assay for characterisation and concomitant subtyping of
staphylococcal cassette chromosome mec types I to V in methicillinresistant Staphylococcus aureus. J Clin. Microbiol. 2005; 43:
5026-33.
23. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых
кислот: электрофорез и ультрацентрифугирование. Практическое
пособие. М.: Наука; 1981.
Благодарности
Поступила: 15.09.2014
гены & клетки Том IX, № 3, 2014