инструкцию к набору

(812) 412-8380
www.olvex-d.ru
АСПАРТАТАМИНОТРАНСФЕРАЗА
Кат. №: 002.001 - 200 определений АСТ при конечном объеме реакционной смеси 3,05 мл
Кат. №: 002.002 - 400 определений АСТ при конечном объеме реакционной смеси 3,05 мл
Кат. №: 002.011 - 1000 определений АСТ при конечном объеме реакционной смеси 3,05 мл
ННАЗНАЧЕНИЕ
Набор «АСТ-РФ-ОЛЬВЕКС» предназначен для количественного определения активности аспартатаминотрансферазы (АСТ) в сыворотке крови человека с фиксированным
временем инкубации в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и в научно-исследовательской
практике.
Набор рассчитан на проведение 200, 400 и 1000 определений при конечном объеме реакционной смеси 3,05 мл.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Фермент АСТ катализирует реакцию переаминирования
между L-аспартатом и α-кетоглутаровой кислотой с
образованием оксалоацетата. Об активности фермента
судят по приросту оксалоацетата, образующего с 2,4-ДНФГ
(2,4-динитрофенил-гидразин) окрашенные гидразоны.
Активность АСТ пропорциональна количеству образовавшихся гидразонов, которое определяется фотометрически
при длине волны 537 (500-560) нм.
СХЕМА РЕАКЦИИ
АСТ
L-аспартат + α-кетоглутарат _____> оксалоацетат + L-глутамат
СОСТАВ НАБОРА
Реагент 1 (буфер-субстратная смесь).
Реагент 2 (раствор 2,4-ДНФГ).
Реагент 3 (натрия гидроокись).
Калибратор – раствор пирувата натрия, 1,0 ммоль/л.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Линейная область определения активности АСТ - в диапазоне от 0,03 до 1,67 мкмоль/с × л.
Отклонение от линейности - не более 10%.
Чувствительность определения - не более 0,01 мкмоль/с × л.
Коэффициент вариации результатов определений - не > 10%.
Окраска стабильна не менее 2-х часов.
Качество набора может проверяться на отечественных или
зарубежных контрольных сыворотках, с аттестованным по
данному методу показателем.
Нормальные величины активности АСТ в сыворотке крови:
0,03 - 0,19 мкмоль/с × л или 0,1 - 0,68 ммоль/ч × л
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон
нормальных величин для обследуемого контингента.
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Сыворотка крови без следов гемолиза.
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Реагенты 1, 2 и калибратор готовы к применению.
Содержимое флакона с Реагентом 3 (или аликвоту)
развести дистиллированной водой, свободной от
карбонатов, в соотношении 1:9. Полученный рабочий
раствор Реагента 3 хранить при комнатной температуре
(+18-25 °С) в плотно закрытом полиэтиленовом флаконе не
более 3 месяцев.
ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОГО ГРАФИКА
Подготовить пробы в соответствии с таблицей 1:
КОМПОНЕНТЫ
РЕАКЦИОННОЙ СРЕДЫ
Реагент 1, мл
ОПЫТНАЯ ПРОБА
КОНТРОЛЬН.ПРОБА
0.25
0.25
СОДЕРЖИМОЕ ПРОБИРОК ПРОГРЕТЬ
ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ +37 °С В ТЕЧЕНИЕ 5 МИНУТ
Сыворотка крови, мл
0.05
-
ПРОБЫ ТЩАТЕЛЬНО ПЕРЕМЕШАТЬ
И ИНКУБИРОВАТЬ В ТЕЧЕНИЕ 60 МИН ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ +37 °С
Реагент 2, мл
Сыворотка, мл
0.25
-
0.25
0.05
ПРОБЫ ТЩАТЕЛЬНО ПЕРЕМЕШАТЬ
И ИНКУБИРОВАТЬ 20 МИНУТ ПРИ КОМНАТНОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ (+18-25 °С)
Рабочий р-р Реагента 3, мл
2.5
2.5
ПРОБЫ ТЩАТЕЛЬНО ПЕРЕМЕШАТЬ
И ИНКУБИРОВАТЬ 10 МИНУТ ПРИ КОМНАТНОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ (+18-25 °С)
Измерить оптическую плотность опытной пробы против
соответствующей контрольной пробы при длине волны 537
нм (500-560 нм) в кювете с длиной оптического пути 1,0 см.
Окраска растворов стабильна не более 2 часов.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Приготовить пробы в соответствии с таблицей 2:
ВОДА
РЕАГЕНТ 2
ДИСТИЛЛ.
№
ПРОБЫ
КАЛИБРАТОР
мкл
мкл
мкл
1
2
3
4
5
6
контроль
5
20
50
100
200
300
-
595
580
550
500
400
300
600
500
500
500
500
500
500
500
ФЕРМЕНТАТИВНАЯ
АКТИВНОСТЬ
мкмоль/с x л ммоль/ч x л
0.014
0.056
0.139
0.278
0.556
0.834
-
0.05
0.20
0.50
1.00
4.00
3.00
-
ПРОБЫ ПЕРЕМЕШАТЬ И ИНКУБИРОВАТЬ 20 МИНУТ ПРИ +18-25 °С
ВНЕСТИ ВО ВСЕ ПРОБИРКИ ПО 5,0 МЛ РАБОЧЕГО РАСТВОРА РЕАГЕНТА 3
ПРОБЫ ПЕРЕМЕШАТЬ И ИНКУБИРОВАТЬ 10 МИНУТ ПРИ +18-25 °С
Измерить оптические плотности калибровочных растворов
против контрольной пробы (контр.) при длине волны 537 нм
(500-560 нм) в кювете с длиной оптического пути 1,0 см.
Построить график зависимости оптической плотности от
активности фермента.
По калибровочному графику рассчитать коэффициент
пересчёта активности фермента (К) по формуле: К = А / Е,
где: А – активность фермента, взятая из таблицы,
Е – экстинкция соответствующей калибровочной пробы.
РАСЧЕТ
Активность АСТ (А) найти по калибровочному графику,
сопоставляя на оси ординат значения оптической плотности
для каждой пробы, а на оси абсцисс соответствующие им
значения активности АСТ, или рассчитать по формуле:
А = К × Е, где: А – активность фермента; Е – экстинкция опытной пробы; К – коэффициент расчёта активности фермента.
Если активность АСТ в анализируемом образце сыворотки
крови превышает 1,67 мкмоль/(с×л), его следует развести
физиологическим раствором в 2 раза, повторить анализ и
полученный результат умножить на 2.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Набор должен храниться в упаковке предприятияизготовителя при +18-25 °С в течение всего срока годности.
Срок годности набора - 18 месяцев.
Вскрытые флаконы с Реагентом 1 и калибратором хранить
при +2-8 °С в плотно закрытой таре не более 6-ти месяцев.
Вскрытые флаконы с Реагентом 2 и Реагентом 3 хранить при
+18-25 °С в закрытой таре в течение всего срока годности.