Ãåîê÷ÿí Í. Î. ÝÊÑÒÐÀÊÖÈÎÍÍÎ-ÀÁÑÎÐÁÖÈÎÌÅÒÐÈ×ÅÑÊÎÅ ÎÏÐÅÄÅËÅÍÈÅ ÌÈÊÐÎÃÐÀÌÌÎÂÛÕ ÊÎËÈ×ÅÑÒ ÁÅÍÇÈËÏÅÍÈÖÈËËÈÍÀ ÒÈÀÇÈÍÎÂÛÌ ÊÐÀÑÈÒÅËÅÌ ÌÅÒÈËÅÍÎÂÛÌ ÃÎËÓÁÛÌ Îñíîâíîé êðàñèòåëü ìåòèëåíîâûé ãîëóáîé (òåòðàìåòèëòèîíèí) - Ìà ïðåäñòàâèòåëü òèàçèíîãî ðÿäà. Êàê óæå îòìå÷àëîñü ðàííåå íàìè, ÷óâñòâèòåëüíûå è èçáèðàòåëüíûå ðåàêöèè îïðåäåëåíèÿ àíòèáèîòèêîâ (îñîáåííî ìèêðîãðàììîâûõ êîëè÷åñòâ) ýêñòðàêöèîííî-àáñîðáöèîìåòðè÷åñêèìè ìåòîäàìè îñíîâàíû íà âçàèìîäåéñòâèè ñ îðãàíè÷åñêèìè îñíîâíûìè êðàñèòåëÿìè, ñîäåðæàùèìè ðàçëè÷íûå ãåòåðîàòîìû, íî è ýòè ðàáîòû ïðåäñòàâëåíû îãðàíè÷åííûì ÷èñëîì [1-5]. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, èçâåñòíî, ÷òî îðãàíè÷åñêèå îñíîâàíèÿ, â ÷àñòíîñòè ñîäåðæàùèå îäíó èëè íåñêîëüêî àìèíîãðóïï (òèàçèíîâûå), îðãàíè÷åñêèå îñíîâíûå êðàñèòåëè ìîãóò îáðàçîâûâàòü â âîäíûõ ðàñòâîðàõ îíèåâûå êàòèîíû ÂÍ+, ñïîñîáíûå ñâÿçûâàòüñÿ ñ ðàçëè÷íûìè íåîðãàíè÷åñêèìè ïðîñòûìè è êîìïëåêñíûìè àíèîíàìè ñ îáðàçîâàíèåì ñîëåîáðàçíûõ ñîåäèíåíèé, ðàñòâîðèìûõ â îðãàíè÷åñêûõ ðàñòâîðèòåëÿõ. Êàê óæå óñòàíîâëåíî íàìè ïðè èñïîëüçîâàíèè ðàçëè÷íûõ ðåàãåíòîâ, êîòîðûå ñîäåðæàò â ñâîåé âíóòðåííåé ñòðóêòóðå ðàçëè÷íûå ïî ñîäåðæàíèþ ãåòåðîàòîìû, à òåïåðü óæå àìèíî-ãðóïïû, ìîæíî èñïîëüçîâàòü äëÿ îïðåäåëåíèÿ àêòèâíûõ êîìïîíåíòîâ â ëåêàðñòâåííûõ ïðåïàðàòàõ, ñîäåðæàùèõ â ñâîåé âíóòðåííåé ñòðóêòóðå -ëàêòàìíîå êîëüöî, êîòîðîå õàðàêòåðíî äëÿ ãðóïïû ïåíèöèëëèíà. Êàê óæå îòìå÷àëîñü íàìè, ýòî æå êîëüöî õàðàêòåðíî äëÿ ìîëåêóëû íåêîòîðûõ äðóãèõ ïðèðîäíûõ àíòèáèîòèêîâ öåëîãî ðÿäà èõ ïîëóñèíòåòè÷åñêèõ ïðîèçâîäíûõ. Äàííûå ïðåïàðàòû ñòàëè îáúåäèíÿòü â ãðóïïó -ëàêòàìíûõ àíòèáèîòèêîâ [6-11]. -ëàêòàìíîå êîëüöî Íàñòîÿùåå èññëåäîâàíèå ÿâëÿåòñÿ ïðîäîëæåíèåì ðàçðàáîòêè íîâîãî ýêñòðàêöèîííîàáñîðáöèîìåòðè÷åñêîãî ìåòîäà îïðåäåëåíèÿ ìàëûõ êîëè÷åñòâ áåíçèëïåíèöèëëèíà îðãàíè÷åñêèì îñíîâíûì êðàñèòåëåì òèàçèíîãî ðÿäà ìåòèëåíîâûì ãîëóáûì- ÌÃ, êîòîðûé äëÿ ýòîé öåëè íàìè ïðèìåíÿåòñÿ âïåðâûå.  äîñòóïíîé ëèòåðàòóðå ìû íå íàøëè àíàëîãè÷íîå ñîîáùåíèå. Ôîðìóëà ðåãåíòà-êðàñèòåëÿ: Ìåòèëåíîâûé ãîëóáîé, òåòðàìåòèëòèîíèí. Ýêñïåðèìåíòàëüíàÿ ÷àñòü Ìåòîäèêà èññëåäîâàíèÿ: Çàïàñíîé ðàñòâîð áåíçèëïåíèöèëëèíà (íàòðèåâàÿ ñîëü) ãîòîâèëè ðàñâîðåíèåì òî÷íîé íàâåñêè ïðåïàðàòà ïðîèçâîäñòâî ôèðìû ÎÀÎ ,,Áèîñèíòåç’’ (Ðîññèÿ), â äèñòèëëèðîâàííîé âîäå. Ðàáî÷èå ðàñòâîðû áåíçèëïåíèöèëëèíà-ÁÏÖ ãîòîâèëè åæåäíåâíî, ñîîòâåòñòâóþùèì ðàçáàâëåíèåì çàïàñíîãî ðàñòâîðà. Âîäíûé ðàñòâîð ìåòèëåíîãî ãîëóáîãî Ìà ãîòîâèëè ðàñòâîðåíèåì òî÷íîé íàâåñêè ðåàãåíòà – êðàñèòåëÿ ( êâàëèôèêàöèè ,, ÷.ä.à’’ ) â äèñòèëëèðîâàííîé âîäå è îòôèëüòðîâûâàëè. Îðãàíè÷åñêèå ðàñòâîðèòåëè êâàëèôèêàöèè ,,÷.ä.à’’ è ,,õ.÷.” èñïîëüçîâàëèñü áåç äîïîëíèòåëüíîé î÷èñòêè. Îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü (ÎÏ) èçìåðÿëè íà ñïåêòðîôîòîìåòðå ÑÔ-16, pH- ðàñòâîðîâ – íà ïîòåíöèîìåòðå ËÏÓ-01 ñî ñòåêëÿííûì ýëåêòðîäîì. Ïðåäâàðèòåëüíûìè îïûòàìè áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî íàòðèåâàÿ ñîëü áåíçèëïåíèöèëëèíà ñ êàòèîíîì êðàñèòåëÿ Ìà îáðàçóåò èîííûé àññîöèàò ( ÈÀ) ãîëóáîãî öâåòà. Îïòèìàëüíûå óñëîâèÿ îáðàçîâàíèÿ è ýêñòðàêöèè ÈÀ áûëè èññëåäîâàíû òàê: â êà÷åñòâå ðàñòâîðèòåëÿ èñïûòàíû õëîðïðîèçâîäíûå íàñûùåííûõ óãëåâîäîðîâ, áåíçîë è åãî ãîìîëîãè, ñëîæíûå ýôèðû óêñóñíîé êèñëîòû, à òàê æå èõ áèíàðíûå ñìåñû. Äëÿ èçâëå÷åíÿ îáðàçóþùåãîñÿ èîííîãî àññîöèàòà ÈÀ íàèáîëåå ýôôåêòèâíûì ýêñòðàãåíòîì îêàçàëñÿ äèõëîðýòàí (ÄÕÝ), êîòîðûé îáåñïå÷èâàåò ìàêñèìàëüíîå èçâëå÷åíèå ÈÀ è ìèíèìàëüíîå èçâëå÷åíèå ,,õîëîñòîãî” îïûòà. Îáúåìíîå ñîîòíîøåíèå âîäíîé è îðãàíè÷åñêèõ ôàç ñîñòîâëÿåò 2:1 (10ìë+5ìë). Áûëè ñíÿòû ñïåêòðû ñâåòîïîãëîùåíèÿ äèõëîðýòàíîâûõ îðãàíè÷åñêèõ ýêñòðàêòîâ îáðàçóþùåãîñÿ ÈÀ è ,,õîëîñòûõ”, à òàêæå âîäíûõ ðàñòâîðîâ êðàñèòåëÿ. Ïðè ñîïîñòàâëåíèè ñïåêòðîâ ïîãëîùåíèÿ âîäíûõ ðàñòâîðîâ êðàñèòåëÿ ñî ñïåêòðàìè ïîãëîùåíèÿ ýêñòðàêòîâ ÈÀ è ,,õîëîñòîãî”, îò÷åòëèâî âèäíî, ÷òî â îáðàçîâàíèè èîííûõ àññîöèàòîâ ïðèíèìàåò ó÷àñòèå îäíîïðîòîíèðîâàííàÿ ôîðìà êðàñèòåëÿ, îäíîâðåìåííî óñòàíîâëåíî, ÷òî èç ðàññìîòðåííûõ ñïåêòðîâ ïîãëîùåíèÿ ÈÀ, ,,õîëîñòîãî” è âîäíîãî ðàñòâîðà êðàñèòåëÿ, ñïåêòðû ïîãëîùåíèÿ ïðàêòè÷åñêè èäåíòè÷íû, à ïðîäóêòû âçàèìîäåéñòâèÿ îáíàðóæèâàåòñÿ òîëüêî â îðãàíè÷åñêîé ôàçå. Âî âñåõ òðåõ ñëó÷àÿõ ìàêñèìóì ñâåòîïîãëîùåíèÿ íàáëþäàåòñÿ ïðè îäíîé è òîé æå äëèíå âîëíû =675íì. Ïðè óñòàíîâëåíèè îïòèìàëüíîé êèñëîòíîñòè âîäíîé ôàçû îïûòû ïðîâîäèëè â øèðîêîì èíòåðâàëå êèñëîòíîñòè âîäíîé ôàçû îò pH=1.0-5.0 è 0.5 -1.0 ìîëü/ë ïî HCI, à òàê æå pH=5.7-5.8 ïî äèñòèëëèðîâàííîé âîäå, ïðè êîòîðîì íàáëþäàåòñÿ ìàêñèìàëüíîå èçâëå÷åíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè [ÎÏ] è çíà÷åíèå ýêñòðàêòà ÈÀ.  äàëüíåéøåì, èñõîäÿ èç ïðàêòè÷åñêèõ öåëåé, ýêñòðàêöèþ ïðîâîäèëè ïðè pH=5.8 ïî äèñòèëëèðîâàííîé âîäå. Êîëè÷åñòâåííîå èçâëå÷åíèå ÈÀ â îðãàíè÷åñêóþ ôàçó èìååò ìåñòî ïðè äîáàâëåíèè â âîäíóþ ôàçó 1.0-1.6ìë 0.1% ðàñòâîðà ÌÃ. ÁÏÖ ïðàêòè÷åñêè ïîëíîñòüþ èçâëåêàåòñÿ îäíîêðàòíîé ýêñòðàêöèåé â ïðè îäíîìèíóòíîì âñòðÿõèâàíèè èç pH=5.8 ïî äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ñòåïåíü èçâëå÷åíèÿ (R) ñîñòàâëÿåò 98%, ÷òî áûëî îïðåäåëåíî ìåòîäîì ïîâòîðíîãî ýêñòðàãèðîâàíèÿ. Îêðàøåííûå ýêñòðàêòû óñòîé÷èâû â òå÷åíèå 120 ìèíóò. Äèàïàçîí îïðåäåëÿåìîé êîíöåíòðàöèè áåíçèëïåíèöèëëèíà ñîñòàâëÿåò 4.2-400 ìêã ÁÏÖ / ìë âîäíîé ôàçû. Êàæóùèéñÿ ìîëÿðíûé êîýôôèöåíò ñâåòîïîãëîùåíèÿ îðãàíè÷åñêèõ ýêñòðàêòîâ ÈÀ áåíçèëïåíèöèëëèíà ñ Ìà 675=1400 (ë, ìîë-1, ñì-1). Ìîëüíîå ñîîòíîøåíèå ìåæäó àíèîíîì ÁÏÖ è êàòèîíîì êðàñèòåëÿ Ìà â îáðàçóþùåìñÿ ÈÀ áûëî îïðåäåëåíî ìåòîäîì ïðÿìîé ëèíèè Àñìóñà è îêàçàëîñü ðàâíûì 1:1. Ðåàêöèÿ âçàèìîäåéñòâèÿ è îáðàçîâàíèå ÈÀ åäåò ïî óðàâíåíèþ: Áåíçèëïåíèöèëëèí-ÁÏÖ ÁÏÖ-Na++ R+CI-= R+ ÁÏÖ-+ Na+ CIãäå RCI- ìîëåêóëà ìåòèëåíîãî ãîëóáîãî. Òàêèì îáðàçîì, èñõîäÿ èç ýêñïåðèìåíòàëüíûõ äàííûõ óñòàíîâëåíî: òèàçèíîâûå êðàñèòåëè îòëè÷àþòñÿ îò äðóãèõ êëàññîâ îñíîâíûõ êðàñèòåëåé òåì, ÷òî êàê âîäíûå ðàñòâîðû, òàê è ýêñòðàêòû òèàçèíîâûõ êðàñèòåëåé î÷åíü óñòîé÷èâû âî âðåìåíè (2÷àñà). Îíè íå ðàçëàãàãàþòñÿ äàæå ïðè äåéñòâèå äíåâíîãî ñâåòà, ÷òî ïðîÿâëÿåòñÿ íåèçìåííîñòüþ çíà÷åíèé ÎÏ ñîîòâåòñòâóþùèõ ýêñòðàêòîâ âî âðåìåíè, ýòèì è îáåñïå÷èâàþò âîñïðîèçâîäèìûå ðåçóëüòàòû îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ýêñòðàêòîâ ÈÀ. Ïîýòîìó â óñëîâèÿõ îáðàçîâàíèÿ ñîåäèíåíèé ÈÀ ïðîâåðèëè ãîäíîñòü ïðåïàðàòà áåíçèëïåíèöèëëèíà âî âðåìåíè. Ïîëó÷åííûå äàííûå ïðèâåäåíû â òàáëèöå: N 1 2 3 4 Íàòðèåâàÿ ñîëü áåíçèëïåíèöèëëèíà Ãîäåí äî 1/2009 ÷åðåç 1 ìåñÿö ÷åðåç 3 ìåñÿö ÷åðåç 4 ìåñÿö Îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü Àñîåä/õîë. 0.435 0.378 0.23 0.10 ÁÏÖ -1000000 ÅÄ (0.5988ã.) 100 / 20 / 100 / 2ìë 1ìë- 0.1% Ìà , =675íì, â=0.5ñì, pH=5.8 Êàôåäðà àíàëèòè÷åñêîé õèìèè ÅÃÓ. Ëèòåðàòóðà 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Ãåîê÷ÿí Í.Î. // Âåñòíèê õèðóðãèè Àðìåíèè èìåíè Ã.Ñ.Òàìàçÿíà 2007, N 4 (61), ñòð.113118. Ãåîê÷ÿí Í.Î., Ìèêàåëÿí Äæ. À., Ì.Ã. Àðóòþíÿí, Ì.Æ. Ãåã÷ÿí //  ñá.òåçèñû äîêëàäîâ ïåðâîé íàó÷íîé êîíôåðåíöèè Àðìÿíñêîãî õèìè÷åñêîãî îáùåñòâà// Àêòóàëüíûå ïðîáëåìû õèìè÷åñêîé íàóêè Àðìåíèè, Åðåâàí 2008, 17-18 èþëÿ, ñòð.58. Ãåîê÷ÿí Í.Î., Åãèàçàðÿí À.À. // Âåñòíèê õèðóðãèè Àðìåíèè èìåíè Ã.Ñ.Òàìàçÿíà 2009,, N 1(66), ñòð.30-37 Ãåîê÷ÿí Í.Î. // Âåñòíèê õèðóðãèè Àðìåíèè èìåíè Ã.Ñ.Òàìàçÿíà 2009, N 3 (68), ñòð.78-83. Ãåîê÷ÿí Í.Î., Ìèêàåëÿí Äæ. À.  ñáîðíèêå Òåçèñû äîêëàäîâ íàó÷íîé êîíôåðåíöèè, ïîñâÿùåííàÿ – 90ëåòèþ ÅÃÓ, Åðåâàí, 2009,14-17àïðåëÿ, ñòð.29. Àáäóëëèí È.Ì. ,, Àíòèáèîòèêè â êëèíè÷åñêîé ïðàêòèêå’’, Ñàëàìàò, 1997 Íàâàøèí Ï.Ñ., ,, Àíòèôóãàëüíàÿ õèìîòåðàïèÿ’’ / 1998 Ñïðàâî÷íèê Âèäàëü, ,,Ëåêàðñòâåííûå ïðåïàðàòû â Ðîññèè’’, ,,Àíòèáèîòèêè è õèìèîòåðàïèÿ” Ìîñêâà, Àñòðàôàðìñåðâèñ 2000, ñòð.1536. ßêîâëåâ Ñ.Â., ßêîâëåâ Â.Ï. ,,Êðàòêèé ñïðàâî÷íèê ïî àíàëèòè÷åñêîé õèìèîòåðàïèè ’’, Ì., Ìåäèöèíà,1998. Ôîìèíà È. Ï., ,,Êîìáèíèðîâàííûå ïðåïàðàòû áåòà-ëàêòàìàç è ïîëèñèíòåòè÷åñêèõ ïåíèöèëëèíîâ’’, Àíòèáèîòèêè è õèìèîòåðàïèÿ 1997, ñòð. 29-32 Íûñ Ï.Ñ., Êóðî÷êèíà Â. Á., Ñêëÿðåíêî À. Â., Âåéíáåðã Ò. À. ,,Áåòà-ëàêòàìíûå ñîåäèíåíèÿ. “Âçàèìîñâÿçü ñòðóêòóðû è áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè’’ / Àíòèáèîòèêè è õèìèîòåðàïèÿ 2000, ñòð. 36-42.