ЭКСПРЕСС-АНАЛИЗ НА ВИРУС ГРИППА ТИПОВ А и B

28 Pierre Köenig St., Talpiot Industrial Area
P.O.B 53231 Jerusalem 91531 ISRAEL
Phone: 972-2-6781861; Fax : 972-2-6781852
e-mail: info@novamed.co.il
www.novamed.co.il
ЭКСПРЕСС-АНАЛИЗ НА ВИРУС ГРИППА ТИПОВ А и B
ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО ОДНОЭТАПНОГО ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
АНТИГЕНОВ ВИРУСА ГРИППА ТИПОВ А и B В МАТЕРИАЛЕ ИЗ НОСОГЛОТКИ ЧЕЛОВЕКА.
Номер Каталога: R-6036 (20 определений).
Инструкция по эксплуатации
НАЗНАЧЕНИЕ
Тест-система для выявления антигенов вируса гриппа типов А и
B производства компании Novаmed Ltd, Израиль представляет
собой бесприборный одношаговый иммунохроматографический
анализ проб мазков, смывов и и выделений из носоглотки
человека с целью качественного определения антигенов вируса
гриппа Influenza типа A (влючая подтипы A(H1N1) и A(H3N2)) и
типа B.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ
Грипп - это острая ви-русная болезнь, передается воздушнокапельным путем. Характеризуется острым началом, лихорадкой,
общей интоксикацией и поражением респираторного тракта.
Возбудители гриппа относятся к семейству ортомиксовирусов,
которые в зависимости от содержания отдельных белков в
оболочке подразделяется на типы А, В и С: А - встречается у
птиц и животных, В - только у человека, и С - у человека, свиньи,
собаки. Influenza A имеет 2 подтипа, имеющих клиническую
значимость для людей: (H3N2) и (H1N1), ответственных за
большинство смертельных случаев. С учетом антигенных
различий
поверхностных
белков
вируса,
называемых
гемагглютинин (Н) и нейраминидаза (N), выделяют подтипы
вирусов гриппа. Всего известно 15 подтипов Н (Н1- Н15) и 9
подтипов N (N1- N9). Благодаря такой генетической
разнородности структуры вирус гриппа чрезвычайно изменчив.
Каждое изменение антигенной структуры вируса гриппа
приводит к развитию новых эпидемий. Важнейшей функцией
белка Н является его способность «прикреплять» вирус к клетке
эпителия верхних дыхательных путей (полость носа, носоглотка,
трахея). Белок N в свою очередь облегчает выход новых вирусов
после размножения из зараженной клетки и обеспечивает их
дальнейшее распространение. Воротами инфекции являются
верхние отделы респираторного тракта. Вирус гриппа
избирательно поражает цилиндрический эпителий дыхательных
путей, особенно трахеи. По-вышение проницаемости сосудистой
стенки
привoдит
к
нарушению
микроциркуляции
и
возникновению геморрагического синдрома (кровохарканье,
носовые
кровотечения,
геморрагическая
пневмония,
энцефалопатия). Инкубационный период продолжается от 12 до
48 ч. Типичный грипп начинается остро, нередко с озноба или
познабливания, быстро повышается температура тела, и уже в
первые сутки лихорадка достигает максимального уровня (38–40
гр. С).
ПРИНЦИП
Тест-система для выявления антигенов вируса гриппа типов А и
B производства компании Novаmed Ltd, Израиль представляет
собой помещенную в пластиковый футляр (кассету) полоску
нитроцеллюлозной мембраны с фиксированными на ней в
области добавления пробы мышинными моноклональными
антителами к вирусам гриппа типов А и B конъюгированными с
окрашенными в красный (вирус гриппа типа А) и голубoй (вирус
гриппа типа B) цветa микросферами. В области тестового окошка
мембраны зафиксированы мышинные моноклональные антитела
специфические к вирусу гриппа типов А и B. Поликлональные
анти-антитела зафиксированы в контрольной зоне полоски.
Антигены вируса гриппа типов А и B содержащиеся в пробе
реагируют с меченными моноклональными антителами,
формируя комплекс антиген-антитело, который мигрирует по
мембране, образуя в тестовой зоне красную (вирус гриппа типа
А) или голубую (вирус гриппа типа В) цветную линию, что
оценивается как положительный результат. Непрореагировавший
конъюгат мигрирует далее к контрольной зоне, где
захватывается поликлональными анти-антителами, формируя
зеленую линию в контрольной зоне. Зеленая контрольная линия
появляется всегда. Наличие контрольной линии подтверждает
корректность результатов теста (правильный объем пробы,
необходимый темп миграции, требуемое качество реагентов).
КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА
В состав набора входит:
- 20 тест-систем (кассет) для выявления антигенов вируса гриппа
типов А и B производства компании Novаmed Ltd, Израиль,
упакованных в индивидуальные алюминиевые пакетики с
одноразовыми пластиковыми пипетками.
- Пластиковая бутылочка-капельница содержащая растворитель
пробы В;
- 20 одноразовых пластиковых пробирок для тестирования;
- 20 стерильных тампонов;
- инструкция к применению.
ХРАНЕНИЕ
Тест-система для выявления антигенов вируса гриппа типов А и
B производства компании Novаmed Ltd, Израиль должна
храниться при температуре 2-25оС.
Не замораживать!
При правильном хранении набор реагентов может быть
использован до конца срока годности, отпечатанного на упаковке.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
-Не допускается использование набора и его компонентов после
истечения срока годности.
-Набор предназначен только для проффессионального
использования in vitro в целях лабораторной диагностики.
-Исследование проб регламентируется правилами работы с
инфекционными агентами.
-Не проводить исследование, используя компоненты наборов
разных серий.
-Нарушение временного и температурного режимов инкубации
при проведении исследования может привести к получению
ошибочных результатов.
-Тест должен быть проведен в течение двух часов после вскрытия
индивидуальной упаковки.
_________________________________________________________
СБОР И РАБОТА С ИССЛЕДУЕМЫМ МАТЕРИАЛОМ
Мазки из носоглотки.
Мазки из носоглотки забирают сухими стерильными
стандартными тампонами для взятия мазков. Рекомендуются
тампоны с пластмассовой рукояткой и накрученными на одном
из ее концов синтетическими волокнами из вискозы или
дакрона. Не использовать тампоны из натуральной ваты или
тампоны помещенные в
какую-либо транспортную среду,
содержащую уголь, агар или желатин! Перед взятием материала
полость носа необходимо очистить от слизи, лейкоцитов,
слущенных клеток эпителия. Тампон ввести легким движением
по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины.
Затем тампон слегка опустить книзу, ввести в нижний носовой
ход под нижнюю носовую раковину, сделать вращательное
движение и удалить вдоль наружной стенки носа. Мазок берётся
из обеих полостей носа. Мазки должны быть забраны таким
образом, чтобы в них содержались клетки, имеющие
диагностическое значение - цилиндрический эпителий из
глубоких отделов носа, в котором размножаются вирусы. Мазки,
содержащие клетки плоского и переходного эпителия из
наружных отделов носа не информативны и исследованию не
подлежат. После взятия материала тампон следует исследовать
как можно скорее.
менее 10 раз, отжать содержимое тампона нажатием пальцев на
внешние стенки пробирки и утилизировать тампон в баке для
биологических отходов.
2. С помощью одноразовой пластиковой пипетки внести 4 капли
или 100 микролитров тестируемой суспензии в окошко для пробы
(S) тестовой кассеты.
3. Прочесть результат через 10 минут после внесения пробы.
Смывы из полости носа.
Сбор материала производят в положении больного сидя с
отклоненной назад головой. Для получения смыва из полости
носа в оба носовых хода поочередно с помощью одноразового
шприца вводят по 3-5 мл теплого стерильного 0,9 % раствора
натрия хлорида. Промывную жидкость из обоих носовых ходов
собирают через воронку в одну стерильную пробирку или
контейнер. Для этого пациент должен наклонить голову, и смыв
со слизью вытечет из полости носа в пробирку или контейнер.
Отрицательный результат: одна зеленая линия появляется в
контрольной зоне (С) тестовой кассеты;
Положительный результат на Influenza A: в дополнение к
зеленой контрольной линии появляется красная линия в тестовой
зоне (Т);
Положительный результат на Influenza В: в дополнение к
зеленой контрольной линии появляется голубая линия в тестовой
зоне (Т);
Положительный результат на Influenza A+В: в дополнение к
зеленой контрольной линии появляются красная (грипп типа А) и
голубая (грипп типа В) линии в тестовой зоне (Т).
Одновременное появление двух цветных линий (красной и
голубой) в тестовой зоне говорит об одновременном
инфицировании гриппом типов А и В.
Недействительный результат: отсутствие зеленой контрольной
линии (С) вне зависимости от наличия или отсутствия
окрашенных линий (красной и/или голубой) в тестовой зоне (Т).
Неправильный объем пробы, несоблюдение процедуры
тестирования или качество реагентов – наиболее частые причины
отсутствия контрольной линии. Проанализируйте процедуру
тестирования и повторите ее с использованием новой тесткассеты. Если проблема остается, следует прекратить
тестирование и связаться с местным дистрибьютором.
Носоглоточный аспират
Аспирировать
носоглоточные
секреты
через
катетер,
соединенный с контейнером-сборником для слизи и источником
вакуума. Влить несколько капель стерильного 0,9 % раствора
натрия хлорида в каждую ноздрю. Катетер вводится в ноздрю
параллельно небу. Привести в действие источник вакуума и
медленно вынуть катетер вращательными движениями. Слизь из
другой ноздри берется тем же катетером аналогичным способом.
После взятия слизи из обеих ноздрей катетер заливается 3 мл
транспортной среды.
Материал для исследования следует немедленно отправить в
лабораторию
(чувствительность теста снижается по
прохождении времени). Материал для исследования следует
хранить или транспортировать в лабораторию в условиях
охлаждения 2º-4ºC.
Образцы могут храниться в холодильнике при температуре 2-4°С
не более 8 часов.
ТЕХНИКА ВЫПОЛНЕНИЯ АНАЛИЗА
Перед началом тестирования тестовую кассету и материал для
исследованиа довести до комнатной температуры (15-30ºC). Не
вскрывать индивидуальную упаковку теста до начала
исследования. Маркировать тестовую кассету инициалами или
идентификационным номером пациента.
Исследование мазков из носоглотки
1. Поместить 15 капель расстворителя пробы В из прилагаемой к
набору пластиковой бутылочки-капельницы в пустую тестовую
пробирку;
2. Тампон с исследуемым материалом перенести в тестовую
пробирку содержащую растворитель В, тщательно перемешать
содержимое пробирки вращательными движениями тампона не
Исследование смывов из полости носа и носоглоточных
аспиратов
1.Поместить 6 капель или 300 микролитров смыва из полости
носа и носоглоточного аспирата в чистую тестовую пробирку.
2.Добавить 3 капли или 150 микролитров прилагаемого к набору
растворителя
В.
Суспендировать
пробу
энергичным
встряхиванием пробирки не менее 10 раз.
3.Поместить 4 капли или 100 микролитров приготовленной
суспензии в окошко для пробы (S) тестовой кассеты.
4.Прочесть результат через 10 минут после внесения пробы.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ (Рисунок 1):
Influenza A
Influenza B
Influenza A+B
NEGATIVE
INVALID
Замечания по интерпретации результатов
Интенсивность окраски красной и голубой линий в тестовой зоне
кассеты меняется в зависимости от концентрации антигенов в
образце. Однако ни количественное содержание антигенов, ни
степень их возрастания не могут быть установлены с помощью
данного качественного теста.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
1. Тест предусматривает внутренний контроль за правильностью
проведения процедуры. Зеленая линия появляющаяся в
контрольной зоне (C) тестовой кассеты, указывает
на
правильность проведения процедуры теста.
2. Результаты теста не учитывают в случае если неясный фон
мешает интерпретировать результаты.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Эпидемии гриппа случаются каждый год обычно в холодное
время года и поражают до 15% населения земного шара. Грипп и
ОРВИ составляют 95% всех инфекционных заболеваний в мире.
_________________________________________________________
Ежегодно в мире заболевают до 500 млн. человек, 2 миллиона из
которых умирают. В России ежегодно регистрируют от 27,3 до
41,2 млн. заболевших гриппом и другими ОРВИ.
ХАРАКТЕРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ТЕСТА
Чувствительность и специфичность теста
Различные разведения вирусов приготовленные в типовом
растворителе или в отрицательном материале из носа были
тестированы тест-системой для выявления антигенов вируса
гриппа типов А и B производства компании Novаmed Ltd,
Израиль в соответствии с инструкцией по эксплуатации.
Выявление вирусов гриппа типа А и/или гриппа типа В с
помощью тест-системы для выявления антигенов вируса гриппа
типов А и B производства компании Novаmed Ltd, Израиль
показало чувствительность> 99 % и специфичность > 99 % по
сравнению
с
другим
коммерческим
одношаговым
иммунохроматографическим тестом.
Перекрестное реагирование
При исследовании проб, содержащих
заведомо известные
антигены аденовируса и респираторно-синцитиального вируса
были получены отрицательные результаты в тест-системе для
выявления антигенов вируса гриппа типов А и B производства
компании Novаmed Ltd, Израиль .
ОГРАНИЧЕНИЯ
1.Тест-система для выявления антигенов вируса гриппа типов А и
B производства компании Novаmed Ltd, Израиль является
скрининговым
тестом
для
качественного
определения
присутствия вируса гриппа типов А и B в исследуемом материале
и применяется только для определения антигенов вируса гриппа
А и В в образцах из носоглотки человека ( мазки, смывы и
аспираты из носоглотки). Ни количественное содержание
антигенов, ни степень
их возрастания не могут быть
установлены с помощью данного качественного теста.
2.В случаях несовместимости результатов Тест-системы для
выявления антигенов вируса гриппа типов А и B производства
компании Novаmed Ltd, Израиль с клиническими проявлениями,
рекомендуется провести дополнительные иссследования с
помощью других клинических методов. Отрицательный
результат полученный с помощью Тест-системы для выявления
антигенов вируса гриппа типов А и B производства компании
Novаmed Ltd, Израиль не исключает возможность присутствия
инфекции гриппа А и В.
3.Тест-система для выявления антигенов вируса гриппа типов А и
B производства компании Novаmed Ltd, Израиль дает лишь
предполагаемый диагноз грипповой инфекции. Только лечащий
врач должен оценивать полученные результаты в свете других
клинических данных, включая результаты других лабораторных
исследований.
УТВЕРЖДАЮ
Генеральный директор ООО «ГЕМ»
_____________С.А. Гольдберг
«23» июня 2010 г.
Представительство в РФ: ООО «ГЕМ»
г. Москва, Новый Зыковский проезд, д. 4А.
+7 (495) 787-04-32
www.hemltd.ru
IFU-Influenza A+B-R6036c-HEM-russ-v.4-24.04.11
ЛИТЕРАТУРА:
1.
2.
3.
4.
Daniel E. Noyola, et al. Comparison of a New Neuraminidase
Detection Assay with an Enzyme Immunoassay, Immunofluorescence,
and Culture for Rapid Detection of Influenza A and B Viruses in
Nasal Wash Specimens. Journal of Clinical Microbiology, Mar. 2000,
p. 1161–1165 Vol. 38, No. 3
Newman A.P. et al. Human Case of Swine Influenza A (H1N1) Triple
Reassortant Virus Infection, Wisconsin. Emerging Infectious Diseases,
Sept 2008, Vol 14, No. 9, pp1470-1472
Andreea C. Cazacu, Gail J. Demmler et al. Comparison of a New
Lateral-Flow Chromatographic Membrane Immunoassay to Viral
Culture for Rapid Detection and Differentiation of Influenza A and B
Viruses in Respiratory Specimens. Journal of Clinical Microbiology,
Aug. 2004, p. 3661–3664 Vol. 42, No. 8.
Kenneth E. Irmen and James J. Kelleher. Use of Monoclonal
Antibodies for Rapid Diagnosis of Respiratory Viruses in a
Community Hospital. Clinical and Diagnostic Laboratory
Immunology, May 2000, p. 396–403 Vol. 7, No. 3.
_________________________________________________________