Документ 2292245

 . .
. . .
. -
-
.. , .. .. , .. -
-
2009
2009
579.26+577.2
28.4
43
579.26+577.2
28.4
43
: !" # .$. %
&': !" # (.(. )
!" # *.,. #'
!" # /.,. 0
: !" # .$. %
&': !" # (.(. )
!" # *.,. #'
!" # /.,. 0
!"# .., $%"# .. ( 1#;#< =<
1'1: !-1! %. – >?: $'- «@"#», 2009. – 91 .
ISBN 978-5-904234-06-5
!"# .., $%"# .. ( 1#;#< =<
1'1: !-1! %. – >?: $'- «@"#», 2009. – 91 .
ISBN 978-5-904234-06-5
( ;E1 % #% F1 'G !
G % % =%
=%1? % '#!< ! '';
1" E. @ ! #, % %&, #<E"; %11 1#; =
1'1.
F. 74 '. $. 10. . 7.
( ;E1 % #% F1 'G !
G % % =%
=%1? % '#!< ! '';
1" E. @ ! #, % %&, #<E"; %11 1#; =
1'1.
F. 74 '. $. 10. . 7.
579.26+577.2
28.4
579.26+577.2
28.4
ISBN 978-5-904234-06-5
ISBN 978-5-904234-06-5
” ? .*., ./., 2009
” !G 1 #
$# #" 1. $.. @% , 2009
” ? .*., ./., 2009
” !G 1 #
$# #" 1. $.. @% , 2009
&
&
@………………………………………………………...
5
@………………………………………………………...
5
( 1#;#< =< 1'1…………
6
( 1#;#< =< 1'1…………
6
,% E…………………………………………………
8
,% E…………………………………………………
8
I. '()* #+%
I. '()* #+%
H 1. H; G; ………………………………………..
9
H 1. H; G; ………………………………………..
9
1.1. ( %;……………………………………………….
9
1.1. ( %;……………………………………………….
9
1.2. J1, %?'#1 G………………
12
1.2. J1, %?'#1 G………………
12
1.3. ,1; ; G…………………..
19
1.3. ,1; ; G…………………..
19
1.4. #<E …………………………………………
20
1.4. #<E …………………………………………
20
1.5. $%?' ; -G"
………………………………………………………..
22
1.5. $%?' ; -G"
………………………………………………………..
22
H 2. ! %1' &% &…
25
H 2. ! %1' &% &…
25
2.1. 1 %;;………………………………….
25
2.1. 1 %;;………………………………….
25
2.2. @&% 1 @…………………………………………...
25
2.2. @&% 1 @…………………………………………...
25
H 3. ; ; ……………………………….
30
H 3. ; ; ……………………………….
30
3.1. ( " %;…………………………………...
30
3.1. ( " %;…………………………………...
30
3.2. " E.coli………………………….
31
3.2. " E.coli………………………….
31
3.3. @;1; &; , GE" %'1# @-%#………………………………………………………..
35
3.3. @;1; &; , GE" %'1# @-%#………………………………………………………..
35
II. )-!+"#$ /1$-45()6 '%" "
/1$* 75 5#$+"
H 4. /#;-! 1 '#!
c 1" E………………………………….......
37
III. '%()* #+%
E; "1 " =% %! %
'#!< ! ''; 1'1 '
1" E………………………………………………
3
II. )-!+"#$ /1$-45()6 '%" "
/1$* 75 5#$+"
H 4. /#;-! 1 '#!
c 1" E………………………………….......
37
III. '%()* #+%
52
E; "1 " =% %! %
'#!< ! ''; 1'1 '
1" E………………………………………………
3
52
H 5. ; %< % F&
? 1 ………………………………………….
54
H 5. ; %< % F&
? 1 ………………………………………….
54
H 6. ( #11 ? …………….
56
H 6. ( #11 ? …………….
56
6.1. ( 11 F1 ' ………..
61
6.1. ( 11 F1 ' ………..
61
6.2. / ! %11 …………………..
62
6.2. / ! %11 …………………..
62
6.3. ( %1E?< ……………………….
63
6.3. ( %1E?< ……………………….
63
H 7. 1%F&; F1 16S ' #11
66
H 7. 1%F&; F1 16S ' #11
66
? ……………………………………
? ……………………………………
7.1. @ % %1………………………………………..
67
7.1. @ % %1………………………………………..
67
7.2. @ %1?" # 1%F&……………….
68
7.2. @ %1?" # 1%F&……………….
68
7.3. ! @-%#…………………………………………
70
7.3. ! @-%#…………………………………………
70
H 8. * @-%# %'1 …….
73
H 8. * @-%# %'1 …….
73
8.1. * @-%# %1 &1…………...
73
8.1. * @-%# %1 &1…………...
73
8.2. * @-%# #%1 &1…………….
74
8.2. * @-%# #%1 &1…………….
74
H 9. F1&; E.coli…………………………………
75
H 9. F1&; E.coli…………………………………
75
9.1. @ 1%" …………………………
75
9.1. @ 1%" …………………………
75
9.2. % ) F1&; …………………
77
9.2. % ) F1&; …………………
77
9.3. @;1; &; , GE" # @%#……………………………………………………………..
78
9.3. @;1; &; , GE" # @%#……………………………………………………………..
78
H 10. ( %'1 …………………………….
79
H 10. ( %'1 …………………………….
79
H 11. @ %% @-%# <……………………………………………………..
81
H 11. @ %% @-%# <……………………………………………………..
81
H 12. ,? F! '
#" %?……………………………….
81
H 12. ,? F! '
#" %?……………………………….
81
,@$, *$…………………………………………..
83
,@$, *$…………………………………………..
83
4
4
1!
%
';
%
&
1!
%
';
%
&
%?'; «/#; "» $(( ;
%?'; «/#; "» $(( ;
#,
#,
%
#,
#<E";
%11
%
#,
#<E";
%11
1#; = 1" E, G ; " G<E"
1#; = 1" E, G ; " G<E"
'1?; %&%1 11 G.
'1?; %&%1 11 G.
( %11 #% F1 'G %G;
G,
'
1
#
%
( %11 #% F1 'G %G;
G,
'
1
#
%
1! '. % 'G; 1 '!?
1! '. % 'G; 1 '!?
!
!
'!#
#!;
#,
1<E"
'1G
'!#
#!;
#,
1<E"
'1G
%#)? %&' # & % G %#)? %&' # & % G %1 K1 1<E" . ( 1!1
%1 K1 1<E" . ( 1!1
' %; 'G; 1 # %?
' %; 'G; 1 # %?
=% %! c 11 E1: %,
=% %! c 11 E1: %,
%!; ? 1, ? ,
%!; ? 1, ? ,
1%F&; F1 16S , %'1#,
1%F&; F1 16S , %'1#,
F1&;
%'1
1%
E.coli,
F1&;
%'1
1%
E.coli,
1 '#1" F1 ' %'1.
1 '#1" F1 ' %'1.
@#<E
@#<E
=%
'
-
,
?
=%
'
-
,
?
F! ' #" %? F1
F! ' #" %? F1
'#1" – % " '1?" ".
'#1" – % " '1?" ".
@
;;;
1
%!1
#1
;
@
;;;
1
%!1
#1
;
'" ' G" ) ; 1" #!" %
'" ' G" ) ; 1" #!" %
1#; = 1" E, '! " ;;;
1#; = 1" E, '! " ;;;
#! # )" # #, % #!"
#! # )" # #, % #!"
# 1 =%1? .
# 1 =%1? .
5
L.@ «/#; "»
L.@ «/#; "»
... ./. ... ./. 5
" /1$/8 758 5#$+"
" /1$/8 758 5#$+"
"1? %; %; ;' 1
"1? %; %; ;' 1
'1 1 1#; )1 '1G;1 "
'1 1 1#; )1 '1G;1 "
%1; ; '#!; ''; F#&; '!"
%1; ; '#!; ''; F#&; '!"
1" E. /#;-! 1 ;E
1" E. /#;-! 1 ;E
1; ;; ' "1" ;<E" 1%"
1; ;; ' "1" ;<E" 1%"
;" = 1'1. ? ;" = 1'1. ? F!
F!
'
%?
1"
'
%?
1"
%; !; F&; 1'1, ;<E"
%; !; F&; 1'1, ;<E"
1 E, <!; '' #?#1" .
1 E, <!; '' #?#1" .
M %1 1#;-! %" '#!<
M %1 1#;-! %" '#!<
= 1'1 '1G ? 1 = 1'1 '1G ? 1 ? #%%, #? " % 1 1
? #%%, #? " % 1 1
%!1 '#?. ,1 % '#!; 1"
%!1 '#?. ,1 % '#!; 1"
E – 1#;; =; 1'1 - ' ;
E – 1#;; =; 1'1 - ' ;
#!1# !< #" 1!" & XX :
#!1# !< #" 1!" & XX :
%1'
%1'
.
&%
&
,G?
;
&%&
"
-G"
1
%",
.
&%
&
,G?
;
&%&
"
-G"
1
%",
%1;1" 1#;1 =1, #%) 1%#; )1
%1;1" 1#;1 =1, #%) 1%#; )1
1 ", %';<E" %, % < 1 ", %';<E" %, % < !1
1!1
!1
1!1
1
E,
1
E,
1'1.
@=1#,
%"1,
<!;
%;;
?
'
,
%
#?#1"
%#!
%;11
1'1.
@=1#,
%"1,
<!;
%;;
?
'
,
%
#?#1"
%#!
%;11
%!1 E ! #?1 %?"
%!1 E ! #?1 %?"
" %" #%% 1'1, '#?1 1#;-
" %" #%% 1'1, '#?1 1#;-
!" , 1 %#!1 1% ' 1"
!" , 1 %#!1 1% ' 1"
E. , %?'1 1 1! %" E. , %?'1 1 1! %" 6
6
; #? ''; 1'1, 1<E" '#<
; #? ''; 1'1, 1<E" '#<
E#< !?, #" 1" E" ' ,
E#< !?, #" 1" E" ' ,
"'#<E; F1 #;1 (? ., 1996;
"'#<E; F1 #;1 (? ., 1996;
? ., 2003; ?, 2004).
? ., 2003; ?, 2004).
( %11 % ! 1
( %11 % ! 1
! G (/ ., 1984; Sambrook et al., 1989; .) ! G (/ ., 1984; Sambrook et al., 1989; .) %! , ! % 1#;-
%! , ! % 1#;-
!" 1; 1 , % % ?
!" 1; 1 , % % ?
1! %", ' 1" =%1?"
1! %", ' 1" =%1?"
;" % % '#! '!" %"
;" % % '#! '!" %"
1" E ' %", 1" 1?"
1" E ' %", 1" 1?"
!, ' ?" 1 1'1" && !, ' ?" 1 1'1" && )1 G1 ;1 (? ., 2005; *% .,
)1 G1 ;1 (? ., 2005; *% .,
2007; ? ., 2008, 2008; ., 2009).
2007; ? ., 2008, 2008; ., 2009).
..., & .*. ?
7
..., & .*. ?
7
:
:
J – 'FF
J – 'FF
J, – 1F J, – 1F J – '#FF
J – '#FF
/, – 1#?F
/, – 1#?F
– '#; – '#; J – '#FF
J – '#FF
J@ - FF%#
J@ - FF%#
.. – & .. – & – ?
– ?
, , – 1#, #, 1#
, , – 1#, #, 1#
// – 1#;; 1
// – 1#;; 1
@H – %1 ?
@H – %1 ?
%.., .%.. – % #, ;! % #
%.., .%.. – % #, ;! % #
@ – %1'; &%; &;
@ – %1'; &%; &;
– 1; #; – 1; #; , – - #F
, – - #F
– &111; 1
– &111; 1
R – =1&
R – =1&
K-MES – 2[N-1F]=#?F ;
K-MES – 2[N-1F]=#?F ;
ß-/ – ß-1%=
ß-/ – ß-1%=
SAM – S-'1FF
SAM – S-'1FF
SDS – &#?F ;
SDS – &#?F ;
8
8
I. ; I. ; 1
1
&
&
1.1.
"%$ -$1'*
1.1.
"%$ -$1'*
– = ; =%1?; ";,
– = ; =%1?; ";,
'1<E;; ' )1 1 ' '1<E;; ' )1 1 ' 1%#; . R "; ) '1G ;
1%#; . R "; ) '1G ;
#; in vitro #" !" 1, "
#; in vitro #" !" 1, "
1# ? K F1 ' '1 '"
1# ? K F1 ' '1 '"
. , %1E?< 1G ? 1#< G ,
. , %1E?< 1G ? 1#< G ,
%#!? ! 11 %?'? " %#!? ! 11 %?'? " F#1?" ;" %!" ";". G F#1?" ;" %!" ";". G ;E 1; %1E?< G %#! ;E 1; %1E?< G %#! G ;, #E '" '1 G ;, #E '" '1 <E
<E
%'1
#11
%'1:
%'1
#11
%'1:
?"'; #?#, 1<E #< 1'#!?,
?"'; #?#, 1<E #< 1'#!?,
#!? ;1, F&;1 &1; 1
#!? ;1, F&;1 &1; 1
1'1, %!<E %#! %E
1'1, %!<E %#! %E
%1); G " %#!; , #1,
%1); G " %#!; , #1,
" %%, " ! #G<E " %%, " ! #G<E !" , ! %'" %1" (@#), 2004).
!" , ! %'" %1" (@#), 2004).
. H1 K1 -
. H1 K1 -
G" ;;; 1# (.1). , G" ;;; 1# (.1). , '#; , – = %1, ;E ' '#; , – = %1, ;E ' %G" #K& – #. # G %G" #K& – #. # G 1%: %# %1 , %;#
1%: %# %1 , %;#
&! " ''#, 1 ;' 1 '
&! " ''#, 1 ;' 1 '
9
9
" 1 ' N-' ;'?<, FF, ;' =F
/
" 1 ' N-' ;'?<, FF, ;' =F
;'?< 5 -#1 ". % # %;; '1
;'?< 5/-#1 ". % # %;; '1
1. ( 1; ! '" ;: , 1,
1. ( 1; ! '" ;: , 1,
# &', # '!< A, T, G C,
# &', # '!< A, T, G C,
. # ;<; # #1 %1#<
. # ;<; # #1 %1#<
&%!# %1E?< FF=F" ;'. ' ; &%!# %1E?< FF=F" ;'. ' ; %1< #!; # &%. -
%1< #!; # &%. -
FF 1 #;#< ###, %??
FF 1 #;#< ###, %??
%#" %1" – #;.
%#" %1" – #;.
/# ' #" %1" &%, '#!" %? (. 1).
/# ' #" %1" &%, '#!" %? (. 1).
&%
&%
.1. , (?1, 1, 2004).
10
.1. , (?1, 1, 2004).
10
@# %1 ; &% E #?
@# %1 ; &% E #?
% %G %? # ## %%#;
% %G %? # ## %%#;
%. ,%? ' 1 ;';1 1G#
%. ,%? ' 1 ;';1 1G#
%1 : , G C, %&F!? %; "
%1 : , G C, %&F!? %; "
# 1%1? %? "
# 1%1? %? "
&%;" . ( 1# ? &% &%;" . ( 1# ? &% %%G (%?), 5/-& 3/- &#.
%%G (%?), 5/-& 3/- &#.
(G1 1 ;;; , ! 3/, 5/-FF=F; ;'?
(G1 1 ;;; , ! 3/, 5/-FF=F; ;'?
#-FF 1# !#? "1!1#,
#-FF 1# !#? "1!1#,
F11# E%<.
F11# E%<.
?) '! ; F#&; %&" %&
?) '! ; F#&; %&" %&
%& 1 '1G? "G; &% %
%& 1 '1G? "G; &% %
"
"
';"
"
%#<E
;.
';"
"
%#<E
;.
;' 1G# ;1 '<;, '#? &%,
;' 1G# ;1 '<;, '#? &%,
'#<E #"&%!!#< 1## , ";; – ##<
'#<E #"&%!!#< 1## , ";; – ##<
(.1).
(.1).
#&;, % , %" % #!
1%#
?
E!
.
,??
#&;, % , %" % #!
1%#
?
E!
.
,??
#"&%!! %;1#< ' ! GC-%, GC-
#"&%!! %;1#< ' ! GC-%, GC-
% ;' 1; 1 ;';1, 1; -%
% ;' 1; 1 ;';1, 1; -%
#1; 1 ;';1. 1 ) G GC-%, 1
#1; 1 ;';1. 1 ) G GC-%, 1
) 1%# %; .
) 1%# %; .
#&; 1 G % % '; #" &%. #&; 1 G % % '; #" &%. #? 1%1 &% % 1%# %1 250,
#? 1%1 &% % 1%# %1 250,
G
G
1%#
%;
"
,
&?. R %& '; #&
!<
G1
1%#
%;
"
,
&?. R %& '; #&
!<
G1
(. 1). #&; #E;; 2 =%: ! '#?
(. 1). #&; #E;; 2 =%: ! '#?
#!" &%!!" 1# %" %?
#!" &%!!" 1# %" %?
" 1%1" #!. @ '; "
" 1%1" #!. @ '; "
11
11
#"&%!!" ## «"%» % #"&%!!" ## «"%» % " #"&%!! %? 1# .
" #"&%!! %? 1# .
1.2.
=$'>, )-!+/> " 5$$* $?$
#E?
''
1!
%"
1.2.
-
=$'>, )-!+/> " 5$$* $?$
#E?
''
1!
%"
-
G" ;" #? ? % , G" ;" #? ? % , F1, '#<E & #1 1.
F1, '#<E & #1 1.
G1 ) %?'#11 F11 G1 ) %?'#11 F11 G ;;<; =#' &. ( 1 ', 1
G ;;<; =#' &. ( 1 ', 1
', ## 1 G F1 -' -
', ## 1 G F1 -' -
%1'. , % %!1 F11 %1'. , % %!1 F11 ' #<E" 1F . / (/ ' #<E" 1F . / (/ ., 1984),
., 1984),
*.$. @#) (@#), 2004)
,.. `#
(`#, 2004).
*.$. @#) (@#), 2004)
,.. `#
(`#, 2004).
', =#' &, E%;< %
', =#' &, E%;< %
%1 #1 %?;1. R %1 #1 %?;1. R % '#! F ;", %1, % '#!
% '#! F ;", %1, % '#!
F ;1 O, %1 "';1 ;;; )!;
F ;1 O, %1 "';1 ;;; )!;
%! Escherichia coli. ' #!#< &, %! Escherichia coli. ' #!#< &, 1F& (1 & - 1F& R–M). /F&;
1F& (1 & - 1F& R–M). /F&;
'<!;
'<!;
1
%"
1
%"
%?, #< #' ', = ;?
%?, #< #' ', = ;?
'EE #! ; '. @ ;#
'EE #! ; '. @ ;#
##-F#&?
'&
=
F1
%';< .
##-F#&?
'&
=
F1
%';< .
' I % 1 // 400 600 ,
' I % 1 // 400 600 ,
;E1 ' " #K& ' % (=#', 1' ;E1 ' " #K& ' % (=#', 1' 12
12
F1 #';). '#! F1
EcoK
EcoB,
F1 #';). '#! F1
EcoK
EcoB,
' )11 E.coli K12 E.coli B. ' )11 E.coli K12 E.coli B. G % #K& (DE J) // 135, 60 50 , )
G % #K& (DE J) // 135, 60 50 , )
" F1 '!. J1 #'< %&F!
" F1 '!. J1 #'< %&F!
%? , , '< #!1 '1 %? , , '< #!1 '1 ; 400–700 %.. #! #';; ! F ; 400–700 %.. #! #';; ! F %?'#< J, SAM, Mg . E% 1E 2+
%?'#< J, SAM, Mg . E% 1E '1 J.
'1 J.
2+
' II ; ' ?" : &
' II ; ' ?" : &
=#' 1F& 1'; G ' 1G
=#' 1F& 1'; G ' 1G
? #?1 ;. ' 1< // 50–100 ,
? #?1 ;. ' 1< // 50–100 ,
;
;
'
#"
#K&
%;
#'<
''<
'
#"
#K&
%;
#'<
''<
1F&#< #"&%!!#< 1## % %&F!1
1F&#< #"&%!!#< 1## % %&F!1
%?;1, ! % '< -
%?;1, ! % '< -
F1. ; " %&F! ; #<; ? Mg
2+
F1. ; " %&F! ; #<; ? Mg
2+
F'!" &&;". ' #'< %?
F'!" &&;". ' #'< %?
4–8 %.. #"&%!! ?< 11 II %; –
4–8 %.. #"&%!! ?< 11 II %; –
%1.
%1.
– = #! #"&%!! 1# , &%
– = #! #"&%!! 1# , &%
< %??< # %
< %??< # %
%! 5/ 3/ 3/ 5/ &#, ? ;;; 11
%! 5/ 3/ 3/ 5/ &#, ? ;;; 11
1 %1.
1 %1.
' (AluI) E%;< % 11
' (AluI) E%;< % 11
#'1 %?, ! % '< F1
#'1 %?, ! % '< F1
, 1<E1 #%<E" &%!!"
, 1<E1 #%<E" &%!!"
#!:
#!:
13
13
5/…N-N-A-G-C-T-N-N…3/
3/…N-N-T-C-G-A-N-N…5/
#
'
5/…N-N-A-G3/
3/…N-N-T-C5/
(EcoRI)
+
5/C-T-N-N…3/
3/G-A-N-N…5/
E%;<
#'1#<
%?? '1 &%!!" ! ":
5/…N-N-G-A-A-T-T-C-N-N…3/
3/…N-N-C-T-T-A-A-G-N-N…5/
/
/
5/…N-N-G3/
+ 5/ A-A-T-T-C-N-N…3
/
/
/
3 …N-N-C-T-T-A-A5
3 G-N-N…5
1 #%<E" %" 5/-& ' 1# '?
G % 3/-& (' PstI):
5/…N-N-C-T-G-C-A-G-N-N…3/
3/…N-N-G-A-C-G-T-C-N-N…5/
5/…N-N-A-G-C-T-N-N…3/
3/…N-N-T-C-G-A-N-N…5/
#
'
5/…N-N-A-G3/
3/…N-N-T-C5/
(EcoRI)
+
5/C-T-N-N…3/
3/G-A-N-N…5/
E%;<
#'1#<
%?? '1 &%!!" ! ":
5/…N-N-G-A-A-T-T-C-N-N…3/
3/…N-N-C-T-T-A-A-G-N-N…5/
/
/
5/…N-N-G3/
+ 5/ A-A-T-T-C-N-N…3
/
/
/
3 …N-N-C-T-T-A-A5
3 G-N-N…5
1 #%<E" %" 5/-& ' 1# '?
G % 3/-& (' PstI):
5/…N-N-C-T-G-C-A 3/ + 5/ G-N-N…3/
3/…N-N-G-5/
3/ A-C-G-T-C-N-N…5/
5/…N-N-C-T-G-C-A-G-N-N…3/
3/…N-N-G-A-C-G-T-C-N-N…5/
5/…N-N-C-T-G-C-A 3/ + 5/ G-N-N…3/
3/…N-N-G-5/
3/ A-C-G-T-C-N-N…5/
@;<E ! ' II %?'#< !
@;<E ! ' II %?'#< !
# 1F&#< . !<; ',
# 1F&#< . !<; ',
E%;<E in vitro ? 1 %? .
E%;<E in vitro ? 1 %? .
' III %"G ' I . J1 1
' III %"G ' I . J1 1
// 200-300 , ' #" '!" #K& // 200-300 , ' #" '!" #K& '
'
1'
?<.
'
11!
1'
?<.
'
11!
%? 5–6 %.. E%;< ; 24–27
%? 5–6 %.. E%;< ; 24–27
%.. #! #';, '#; &%!! 5/-& 2–3
%.. #! #';, '#; &%!! 5/-& 2–3
#. ; %;; =#' #; J #. ; %;; =#' #; J 2+
2+
Mg . SAM )? 1## &<, E% %G;
Mg . SAM )? 1## &<, E% %G;
'1 J.
'1 J.
14
14
-
-
( ! ', «''<E"» , ' «)<»
( ! ', «''<E"» , ' «)<»
F1 . % % -': F1, '#1 F1 . % % -': F1, '#1 " E.coli, F1, %;;<E; " E.coli, F&"
" E.coli, F1, %;;<E; " E.coli, F&"
F1 4. R ' '!<; % %;1 F": -
F1 4. R ' '!<; % %;1 F": -
' E.coli #G; J@, -' F 4 - J. 1 ,
' E.coli #G; J@, -' F 4 - J. 1 ,
F1 % ! % % '?
F1 % ! % % '?
#"&%!!" F1 #%1 &1.
#"&%!!" F1 #%1 &1.
-' F 4 - 11 // 68 , '#<E
/
' FF=F ;' 1G# 5/-FF1 (5/-) 3/-
?1 (3/-) &1 &% . ('1G 2 % &:
?1 (3/-) &1 &% . ('1G 2 % &:
1. * %" &:
5/…pN-pN-pG
/
-' F 4 - 11 // 68 , '#<E
' FF=F ;' 1G# 5 -FF1 (5 -) 3 -
1. * %" &:
/
A-pA-pT-pT-pC-pN-pN…3/
+
3/… Np-Np-Cp-Tp-Tp-Ap-Ap
Gp-Np-Np…5/
5/…pN-pN-pG
A-pA-pT-pT-pC-pN-pN…3/
+
3/… Np-Np-Cp-Tp-Tp-Ap-Ap
Gp-Np-Np…5/
#" ! "$#%
#" ! "$#%
5/…pN-pN-pG A-pA-pT-pT- pC-pN-pN…3/
5/…pN-pN-pG A-pA-pT-pT- pC-pN-pN…3/
3/… Np-Np-Cp -Tp-Tp-Ap-Ap Gp-Np-Np…5/
3/… Np-Np-Cp -Tp-Tp-Ap-Ap Gp-Np-Np…5/
-(#
2+
)*, Mg
-(#
#" &&'&% "$#
5/…pN-pN-pG-pA-pA-pT-pT-pC-pN-pN…3/
3/… Np-Np-Cp-Tp-Tp-Ap-Ap-Gp-Np-Np…5/
15
2+
)*, Mg
#" &&'&% "$#
5/…pN-pN-pG-pA-pA-pT-pT-pC-pN-pN…3/
3/… Np-Np-Cp-Tp-Tp-Ap-Ap-Gp-Np-Np…5/
15
2. * #%" &:
5/…pN-pN-pA-pG
3/… Np-Np-Tp-Cp
-(#
+
2. * #%" &:
C-pT-pN-pN…3/
Gp-Ap-Np-Np…5/
2+
)*, Mg
5/…pN-pN-pA-pG
3/… Np-Np-Tp-Cp
-(#
5/…pN-pN-pA-pG-pC-pT-pN-pN…3/
3/… Np-Np-Tp-Cp-Gp-Ap-Np-Np…5/
+
C-pT-pN-pN…3/
Gp-Ap-Np-Np…5/
2+
)*, Mg
5/…pN-pN-pA-pG-pC-pT-pN-pN…3/
3/… Np-Np-Tp-Cp-Gp-Ap-Np-Np…5/
1 '1, -' F 4 %! 1 '1, -' F 4 %! <" #"&%!!" F1 ' ! «)» 5/-p <" #"&%!!" F1 ' ! «)» 5/-p 3/-OH &. ,% %# ' & ' &&
3/-OH &. ,% %# ' & ' &&
#!#<E" F1 . @ &&
#!#<E" F1 . @ &&
%1#E '#<; 1# . @ 1
%1#E '#<; 1# . @ 1
G; && F1 %); ;? ';
G; && F1 %); ;? ';
?&" ## . H 1# ?) !
?&" ## . H 1# ?) !
## ;? ' #" F1, G ' " . G %%
## ;? ' #" F1, G ' " . G %%
' % &&, %1#E ##
' % &&, %1#E ##
'?; ?& ' ?" F1. @=1# G
'?; ?& ' ?" F1. @=1# G
E? ? #; ' &, % " %"
E? ? #; ' &, % " %"
' " 1#, ;E" ' #" F1 .
' " 1#, ;E" ' #" F1 .
-
-
-%1'1 ;; F1, % %?'?
-%1'1 ;; F1, % %?'?
%# 1& ? 1%1 1 %# 1& ? 1%1 1 # &%.
# &%.
16
16
-%1' I E.coli. R F1 ;;; % #G
%1'.
R
11
//
103
,
1<E
"1#< ###. G 1 %;; ?#<
/
%1'.
R
11
//
103
,
1<E
"1#< ###. G 1 %;; ?#<
F1#< ?: N-& 1 – 5 -3 -='#'#<, ,-
F1#< ?: N-& 1 – 5/-3/-='#'#<, ,-
& 1 – 5/-3/-%1'#<, 1 – 3/-5/-='#'#<.
& 1 – 5/-3/-%1'#<, 1 – 3/-5/-='#'#<.
-%1' I E.coli (PolI) ;'; 1#1 #"&%!!
-%1' I E.coli (PolI) ;'; 1#1 #"&%!!
?&
?&
.
/
-%1' I E.coli. R F1 ;;; % #G
#?
%#!?
.
#?
%#!?
&%!! F1, 1 %1' ;'; !",
&%!! F1, 1 %1' ;'; !",
%%&?" =" #! – %1 1 1# 300
%%&?" =" #! – %1 1 1# 300
#" . PolI ;'; &%!!1 #!1
#" . PolI ;'; &%!!1 #!1
% , 1" &%!!" ', G % , 1" &%!!" ', G &1 #"&%!!" 1# .
&1 #"&%!!" 1# .
5/-3/- % 1 ' ; ? F1 '#; %
5/-3/- % 1 ' ; ? F1 '#; %
! &%!! -1& 1%1 #!# =
! &%!! -1& 1%1 #!# =
&% F1 – %1 (') 3/--&1. %
&% F1 – %1 (') 3/--&1. %
%1'
&
1%1
'1G
#.
<!
%1E?
#E#<
&%?
%1'
&
%"
3/-5/-
1%1
'1G
#.
<!
%1E?
#E#<
&%?
%"
3/-5/-
='#', #<E; )! #, 1 '1
='#', #<E; )! #, 1 '1
%;; %?.
%;; %?.
/
/
3 -5 - = ' # ' ;
? %;;; 3/-5/- = ' # ' ;
? %;;; %, 1 '# . E% FF=F ;'
%, 1 '# . E% FF=F ;'
%" %" #!" #"&%!! 1# . 3/-5/-
%" %" #!" #"&%!! 1# . 3/-5/-
#' % E%;? 11 ? 1 #. $1 =
#' % E%;? 11 ? 1 #. $1 =
? %! !? %1'&, %;1 1&.
? %! !? %1'&, %;1 1&.
5/-3/- = ' # ' ; ? F1 #
5/-3/- = ' # ' ; ? F1 #
# &%? #"&%!! , !; 5/-&, E%;
# &%? #"&%!! , !; 5/-&, E%;
FF=F#< ;'? ? %" #!" #"&%!!
FF=F#< ;'? ? %" #!" #"&%!!
/
1# , 1G '? 5 -& # 10
1# , 1G '? 5/-& # 10
.
.
17
17
1 '1, PolI % ;'; #"&%!! 1
1 '1, PolI % ;'; #"&%!! 1
&%!! ' %# J '# 1
&%!! ' %# J '# 1
/
/
& – 5 -3 -' ' &% 1# 5 -3 -
& – 5/-3/-' ' &% 1# 5/-3/-
%1'#< &<, 3/-5/-='#' #; '<E %1'#< &<, 3/-5/-='#' #; '<E %& F1 ).
%& F1 ).
/
/
@ !1 %' F1 PolI %'1 %;
F1,
1<E"
'1
35
68
.
?)
–
F#&? F1 %; '? F11 j /
/
/
/
%1' I E.coli, 5 -3 -%1' 3 -5 -='#'
;1.
%?'#<
;
&%!!"
5 /-
@ !1 %' F1 PolI %'1 %;
F1,
1<E"
'1
35
68
.
?)
–
F#&? F1 %; '? F11 j %1' I E.coli, 5/-3/-%1' 3/-5/-='#'
;1.
%?'#<
;
&%!!"
5/-
#%<E" & #"&%!! #%", ; ' #%<E" & #"&%!! #%", ; ' &% &%!! , ; ' #%<E" &%!!"
&% &%!! , ; ' #%<E" &%!!"
3/- & #"&%!!" 1#" .
3/- & #"&%!!" 1#" .
1?
-%1'.
@
1?
-%1'.
@
"' -%1' ' 1F? Thermus
"' -%1' ' 1F? Thermus
aquaticus (Taq -%1'). 1F?; ; Thermus aquaticus
aquaticus (Taq -%1'). 1F?; ; Thermus aquaticus
G ;!" !". J1 Taq -%1', ; '
G ;!" !". J1 Taq -%1', ; '
= , %; 11 // 94 ,
= , %; 11 // 94 ,
<E
/
/
5 -3 -%1'
/
/
5 -3 -='#'
?<.
<E
5/-3/-%1'
5/-3/-='#'
?<.
(G1 1 F1 ;;; 1??: (G1 1 F1 ;;; 1??: #; % ? #& % 950,. %1?;
#; % ? #& % 950,. %1?;
1%# ' &% (=&) % 1! ; 720,, 1%# ' &% (=&) % 1! ; 720,, ? F1 ; 1000 %.. ' 1 . 3/-5/-
? F1 ; 1000 %.. ' 1 . 3/-5/-
='#'; ?, %';<E; %;? ) F1 ='#'; ?, %';<E; %;? ) F1 ? %? &%? #, # Taq -
? %? &%? #, # Taq -
%1' %;;; . , 1, G
%1' %;;; . , 1, G
10 000 100 000 # %;; 1%1, 10 000 100 000 # %;; 1%1, ' 20-25 & %; '1 ! ) ?
' 20-25 & %; '1 ! ) ?
" 1&, 1G ? # 400.
" 1&, 1G ? # 400.
18
18
( ! 1990-" %;? &; ; 1"
( ! 1990-" %;? &; ; 1"
F1, " ' " 1F?" ", F1, " ' " 1F?" ", /
/
"; 3 -5 -='#'#< #<E#< ?. %1
"; 3/-5/-='#'#< #<E#< ?. %1
;; Pfu Vent, Deep Vent -%1', ' Pyrococcus
;; Pfu Vent, Deep Vent -%1', ' Pyrococcus
furiosus Thermococcus litoralis, . , ; furiosus Thermococcus litoralis, . , ; !?<, = F1 %&F! '#< %1,
!?<, = F1 %&F! '#< %1,
%=1# #< %?" =%1 % %# %1?"
%=1# #< %?" =%1 % %# %1?"
# %; 1%F&. 1, ! Taq -%1' # %; 1%F&. 1, ! Taq -%1' ;E 1; ; #1 11 ) %?'#11
;E 1; ; #1 11 ) %?'#11
F11 ; %; %1' &% &.
F11 ; %; %1' &% &.
1.3.
"$$#1 )'#'51 5$$* $?$
1.3.
"$$#1 )'#'51 5$$* $?$
H1 G; ! G !< 1972 . $1 H1 G; ! G !< 1972 . $1 =1 # ,=F1 # (,M) @ =1 # ,=F1 # (,M) @ %#! %; 1; ; (). %#! %; 1; ; (). ; F1 F s, )! %! '?;?
; F1 F s, )! %! '?;?
# SV40. L1 '' 1! %" # SV40. L1 '' 1! %" K #< 1#< < ! G, #?
K #< 1#< < ! G, #?
'<!; #<E1:
'<!; #<E1:
1. ?)#< 1## %'1 ##< ,
%#<
%&?;
1
"11,
1. ?)#< 1## %'1 ##< ,
%#<
%&?;
1
"11,
F1 < F1 1# < '#!1
F1 < F1 1# < '#!1
'1 # '#1 1 ;
'1 # '#1 1 ;
2. '#<E; % =1 1# ( ) ; 2. '#<E; % =1 1# ( ) ; !#? %! =#! , !#? %! =#! , %&#<;, '1G; F1 ;
%&#<;, '1G; F1 ;
3. %1 11 < #,
GE" #? % 1# ;
19
3. %1 11 < #,
GE" #? % 1# ;
19
4.
;
%<
'1#
4.
;
%<
'1#
##-F#&?1# '#!<, #< ? % =1 <
##-F#&?1# '#!<, #< ? % =1 <
=FF 1 )F %? #
=FF 1 )F %? #
() F1 .
() F1 .
1.4.
$/8B "'>
1.4.
@ #E 1& in vitro ' F1 G
F1&<,
"1#<
;
1
%&
$/8B "'>
@ #E 1& in vitro ' F1 G
F1&<,
"1#<
;
1
%&
1# %1 % . @ !
1# %1 % . @ !
#?# ' , ) ' ! , ; G
#?# ' , ) ' ! , ; G
#?#< 1## , #E;; #?#< 1## , #E;; % F1 .
% F1 .
J1, %!<E %&< 1# J1, %!<E %&< 1# , '; #<E1 1 #<E1
, '; #<E1 1 #<E1
1:
1:
1. 1 ! ! 1 #'; ' %
%;
1. 1 ! ! 1 #'; ' %
%;
2. G ? !" 1, 2. G ? !" 1, %?'#< ; , #E" , %
%?'#< ; , #E" , %
; !#? 1 1# , %#!" ; !#? 1 1# , %#!" %& 1& in vitro;
%& 1& in vitro;
3. G ;? % F#& % ='
F1 .
3. G ;? % F#& % ='
F1 .
– = 1%&#<E; (1) 1# ,
– = 1%&#<E; (1) 1# ,
%?'#< ; % ' '1- '1-
%?'#< ; % ' '1- '1-
&% ; ; #" %?.
&% ; ; #" %?.
( ! " 1# ! G %?'#<
)
%
%'1"
#"
20
.
1
#!1
( ! " 1# ! G %?'#<
)
%
%'1"
#"
20
.
1
#!1
#<E"
;;<;
=%#<E
.
R
#<E"
;;<;
=%#<E
.
R
1#; , ;# 1%F& %!<
1#; , ;# 1%F& %!<
%?#< =FF#< =%< !#G" "-
%?#< =FF#< =%< !#G" "-
&%".
&%".
(
;
#!
1#;
%!<
(
;
#!
1#;
%!<
&< !#G 1 #, &< !#G 1 #, '< 1.
'< 1.
( 1# < G)#< ? =% ;
( 1# < G)#< ? =% ;
'#!1" 1# . $%?' " ## %'; %#!?
'#!1" 1# . $%?' " ## %'; %#!?
'#1 F1 #?1 ; %%"
'#1 F1 #?1 ; %%"
!". R %; ! #? ;
!". R %; ! #? ;
##-F#&? '& 1 %!",
##-F#&? '& 1 %!",
=#!" '1.
=#!" '1.
; ; F1 !#G '1G; " ; ; F1 !#G '1G; " " E. coli %?'#< ! % : F O /13,
" E. coli %?'#< ! % : F O /13,
1 %'1. @ %?' -G" %" ;
1 %'1. @ %?' -G" %" ;
'#!;
'#!;
!
'';
1"
E
!
!
'';
1"
E
!
%?'#< #<E , # %'1,
%?'#< #<E , # %'1,
#% # ; %1" .
#% # ; %1" .
–
=
1
%&#<E;
"11
–
=
1
%&#<E;
"11
! =1, % #G &%'1 .
! =1, % #G &%'1 .
@'1 %;< ?) '1# ?& 1#
@'1 %;< ?) '1# ?& 1#
'11 1 200 .%.. , ";E; " '11 1 200 .%.. , ";E; " "%'1 ;.
"%'1 ;.
? #1 1, %'1 G G? !
? #1 1, %'1 G G? !
#? ; F1 & ( ! ;
#? ; F1 & ( ! ;
?" #<E" F1) , ; #E
?" #<E" F1) , ; #E
; %& %'1. %1?1 ;;; "G ; %& %'1. %1?1 ;;; "G &, % 1 %" F1 !#G
&, % 1 %" F1 !#G
, # , #<E" 1, %';<E %? , # , #<E" 1, %';<E %? 21
21
1" %'1. ( =1 #! F1 !#G
1" %'1. ( =1 #! F1 !#G
& = , %' %;;; ;"
& = , %' %;;; ;"
" , # 1#< %'1#. !# " " , # 1#< %'1#. !# " ;; , %;<E #!? 1, %? ;; , %;<E #!? 1, %? '# , E% G" !" ,
'# , E% G" !" ,
'
'
=,
'
F1
&
=,
'
F1
&
1F& (/ ., 1984). ( % 1 %'1
1F& (/ ., 1984). ( % 1 %'1
%<;
%<;
1
"';1
%1
%&,
!
1
"';1
%1
%&,
!
?<& . ( G %'1 1G %?
?<& . ( G %'1 1G %?
;1 %#1 # %&, ' F1&.
;1 %#1 # %&, ' F1&.
1.5. )-!+"#$ 4#'* %1 5$$-$?$$>6 ))%"#$*
1.5. )-!+"#$ 4#'* %1 5$$-$?$$>6 ))%"#$*
= * ' «%%1
= * ' «%%1
1» 1#;" (, , 2004). ?,
1» 1#;" (, , 2004). ?,
% =%1, %G) ! 1 1#;
% =%1, %G) ! 1 1#;
, ;". #< '? " %#!
, ;". #< '? " %#!
? - )!; %! Escherichia coli. «E.coli, %'1 ? - )!; %! Escherichia coli. «E.coli, %'1 F ;? %1 K1 ! G, "
F ;? %1 K1 ! G, "
#? !? &" '#? % < =%
#? !? &" '#? % < =%
!#G" » (`#, 2004). ( " E.coli %
!#G" » (`#, 2004). ( " E.coli %
#G %'1, %1, F-%'1 (% F #G %'1, %1, F-%'1 (% F "11 ?& #"&%!! ); ' %
"11 ?& #"&%!! ); ' %
; '!" F" %'1" ; #G
; '!" F" %'1" ; #G
%'#<E; =1, ; " ? & F-%'1 %'#<E; =1, ; " ? & F-%'1 ?#< "11# (*?<, 1987).
?#< "11# (*?<, 1987).
E.coli %?'#< ";" ; ' 1" E.coli %?'#< ";" ; ' 1" (@#), 2004), %1;<E"; ; %#!; %?" (@#), 2004), %1;<E"; ; %#!; %?" (Steinberger et al., 2000), 1" &%!!" "
(Steinberger et al., 2000), 1" &%!!" "
22
22
F1 (Kramer, Hock, 2003), "' ; #;
F1 (Kramer, Hock, 2003), "' ; #;
"GE" ';' #G<E (Lecerf et al., 2001),
"GE" ';' #G<E (Lecerf et al., 2001),
''" F1, 1!" ; >/-%% (Ward
''" F1, 1!" ; >/-%% (Ward
et al., 1989), %' 1 #, F (Holt et
et al., 1989), %' 1 #, F (Holt et
al., 2003).
al., 2003).
; ?1 )111 "1 '? %
E; "; ?" )11.
; ?1 )111 "1 '? %
E; "; ?" )11.
01" 3! 4". @ %1?" #;"
01" 3! 4". @ %1?" #;"
#?# E.coli =%&?. ,? #?# '
#?# E.coli =%&?. ,? #?# '
%? , %? , % )11,
%? , %? , % )11,
1%# =&. @ 1 #!; % #?# ?
1%# =&. @ 1 #!; % #?# ?
; G; " %, % # ; G; " %, % # &&
&&
(
E<E
%),
%
G'%, #G ;;.
L
?<
(
E<E
%),
%
#
?,
G'%, #G ;;.
#?#
#
?,
;
'
L
?<
#?#
;
'
#?#? G !' % %1G# 1 % #?#? G !' % %1G# 1 % '1;; " %!#< %? D % 590–600 1 (D600 = 1
'1;; " %!#< %? D % 590–600 1 (D600 = 1
/1). !
# %1 7–8×108 /1). !
%%#;& '!< ? '!" F' : -F'#, -F'#,
%%#;& '!< ? '!" F' : -F'#, -F'#,
&#< F'# F'# 1; (. 2).
&#< F'# F'# 1; (. 2).
# %1 7–8×10
8
@ #< ! %%#;&, 1G %?, !'
@ #< ! %%#;&, 1G %?, !'
1; #?# F1! F' . @
1; #?# F1! F' . @
%'1 ; %#!; 1%" ;
%'1 ; %#!; 1%" ;
F1& !? G %?'? ?#< #?## &
F1& !? G %?'? ?#< #?## &
-F'.
-F'.
23
23
D600
D600
IV
IV
0$
. 2. ; ? #?#: I – -F', II – -F',
III – &; F', IV – F' 1;.
5 ( – & # – F' %& , % ! % <.
0$
. 2. ; ? #?#: I – -F', II – -F',
III – &; F', IV – F' 1;.
5 ( – & # – F' %& , % ! % <.
5 ( – & # – =%&?; F', ! = F'
5 ( – & # – =%&?; F', ! = F'
' ! ! ; ! , '1
' ! ! ; ! , '1
<; %;; %G?? #E; '<E"
<; %;; %G?? #E; '<E"
# ' #1 % .
# ' #1 % .
$
& # – "'#; #1?)1 $
& # – "'#; #1?)1 '1G; '#? E; %? %;
'1G; '#? E; %? %;
%# 1.
%# 1.
* # $ – = F' !; ' .
* # $ – = F' !; ' .
24
24
2
2
; D E E
; D E E
2.1. )$"$> '$> -$1'1
2.1. )$"$> '$> -$1'1
( 1985 . . / #1 ' 1, ( 1985 . . / #1 ' 1, ' %1' &% & (@, PCR), #? ' %1' &% & (@, PCR), #? '<!; 1%F& '#!1" F1 .
'<!; 1%F& '#!1" F1 .
–
=
1
1
%' F1 in vitro.
–
=
1
1
%' F1 in vitro.
! – % % F1 1; @.
! – % % F1 1; @.
=FF " @ 1G #? % 1# F#, ! =FF " @ 1G #? % 1# F#, ! ! ?" ! in vitro 1G ? '1G?
! ?" ! in vitro 1G ? '1G?
'#1#< ##< %?? !,
'#1#< ##< %?? !,
%)<E1 " 105. (; =FF? @ %!;
%)<E1 " 105. (; =FF? @ %!;
%?'1 " -F1 – #, -
%?'1 " -F1 – #, -
%1, F#< #<E#< ? %';<
%1, F#< #<E#< ? %';<
! «1G?» =# ?.
! «1G?» =# ?.
–
=
#,
%?'#1
@
;
–
=
#,
%?'#1
@
;
!; F1 ?) ! 1%F& =
!; F1 ?) ! 1%F& =
F1.
F1.
2.2. $F- '%# E
2.2. $F- '%# E
; 1%F& F1 < "1 #<E
; 1%F& F1 < "1 #<E
1%: 1!; , ! J, Taq -%1' 1%: 1!; , ! J, Taq -%1' |
!" %1 15–30 #, 1%1" 3 -
!" %1 15–30 #, 1%1" 3|-
#!1 %?" &% , F#<E" F1 1&.
#!1 %?" &% , F#<E" F1 1&.
,
,
;
1%F&
-F1,
G
G?
;
1%F&
-F1,
G
G?
(; %G; ;; F1),
(; %G; ;; F1),
25
25
#F (; %G; %1? ; F1) #F (; %G; %1? ; F1) %#< &&< F (#"" , !
%#< &&< F (#"" , !
2+
Mg ). @ <! ; %;<E; & 1%#
Mg2+). @ <! ; %;<E; & 1%#
#&
#&
,
G
%1
1%11
,
G
%1
1%11
%?;1 %#<E#< # %#"
%?;1 %#<E#< # %#"
&% %1 -%1'. @1 %<; 1 '1,
&% %1 -%1'. @1 %<; 1 '1,
! " &; " ;" " %'; -%1'
! " &; " ;" " %'; -%1'
' ? 1G# 1, #; ! % ,
' ? 1G# 1, #; ! % ,
'<! 1G# %11. . 3 % "1 @:
'<! 1G# %11. . 3 % "1 @:
'-#'/# 94°,
"1 60 )
1-* 7'##&; '-#'/# 48–70°,
"1 60 )
'-#'/# 94°,
"1 60 )
1-* 7'##&; '-#'/# 48–70°,
"1 60 )
2-* 7'#-
2-* 7'#-
G %1
G %1
'-#'/# 72°,
"1 60–120 )
'-#'/# 72°,
"1 60–120 )
3-* 7'#-
3-* 7'#-
=&;
&% =&;
&% . 3. C"1 " =% %1' &% &.
26
. 3. C"1 " =% %1' &% &.
26
11 % =% %1' &%
&.
@
!;
1
%
(1–2
)
0
11 % =% %1' &%
&.
@
!;
1
%
(1–2
)
0
& 1 % 1%# 95 ,, % %"
& 1 % 1%# 95 ,, % %"
% &% %#! , <E ?
% &% %#! , <E ?
1& (. 3, 1- =%).
1& (. 3, 1- =%).
@ 1%# %" &; %1" @ 1%# %" &; %1" (% %?' ! !E ). &#<
(% %?' ! !E ). &#<
1? "G< 48–700,, % =1 %" ;' (G)
1? "G< 48–700,, % =1 %" ;' (G)
%1 1! (. 3, 2- =%).
%1 1! (. 3, 2- =%).
(
'#?
%1
;'<;
%#1
'&
(
'#?
%1
;'<;
%#1
'&
1%11 11 1& = 11 !<
1%11 11 1& = 11 !<
#G? '1 ; ' Taq -%1' " &% ,
#G? '1 ; ' Taq -%1' " &% ,
1%1" G ' &% # 1! .
1%1" G ' &% # 1! .
1%1 &% '#<; " %;", !;
1%1 &% '#<; " %;", !;
%1 (. 3, 3- =%).
%1 (. 3, 3- =%).
; %; ' %1?" ; Taq -%1'
; %; ' %1?" ; Taq -%1'
#;" 1%## 1 #!< 720, %; =&<
#;" 1%## 1 #!< 720, %; =&<
? '#<E; ! 0,5–2 , % =1 1; #&
? '#<E; ! 0,5–2 , % =1 1; #&
' '#1 F1.
' '#1 F1.
@ ! ' '!; % & @,
@ ! ' '!; % & @,
% ! %;< 1 G G1 , %#<E
% ! %;< 1 G G1 , %#<E
& (20-30-) 1!1 G1 (. 4).
& (20-30-) 1!1 G1 (. 4).
H (. 4) #1 '? 1## , ;E#< ' H (. 4) #1 '? 1## , ;E#< ' &% 1! &% ? ' , &% 1! &% ? ' , ! %11-'. (? '; – = ,
! %11-'. (? '; – = ,
;E; ' &% , ! %11-' ? ;E; ' &% , ! %11-' ? . " 1# #1 @-
. " 1# #1 @-
%#. ( @-%# &% ! %11-
%#. ( @-%# &% ! %11-
'1 " .
'1 " .
27
27
'?5 " 1- F
#-K#F
2 (% '?5 " 1- F
#-K#F
2 (% '?5 " 2- F
#-K#F
2 (% ,
2 ""3
#"% '?5 " 2- F
#-K#F
2 (% ,
2 ""3
#"% '?5 " 3- F
#-K#F
2 (% ,
4 ""3
#"% ,
2 9:-
. 4. ,"1 1 #1G; F1 " @.
28
'?5 " 3- F
#-K#F
2 (% ,
4 ""3
#"% ,
2 9:-
. 4. ,"1 1 #1G; F1 " @.
28
(
'#?
%&
1%F&
#!
!
n
(
'#?
%&
1%F&
#!
!
n
'#1 F1 %" % =% % F1# 2 ,
'#1 F1 %" % =% % F1# 2 ,
n – ! %))" & 1%F&. @ =1 @-%#
n – ! %))" & 1%F&. @ =1 @-%#
- # F1 , % ;< 1G# #1;
- # F1 , % ;< 1G# #1;
%11, - %;;<;
%11, - %;;<;
& 1 ? % ?
& 1 ? % ?
& 1%F&, , %;?, 1 % 25-30 &
& 1%F&, , %;?, 1 % 25-30 &
1%F&
1%F&
##
;?
!
1#
& 1.
;?
!
1#
& 1.
( %1' &% &: "G %;;
##
1#11
1%F
(1&)
%11#11 1%#1 G11.
( %1' &% &: "G %;;
1#11
1%F
(1&)
%11#11 1%#1 G11.
('1G? 1%F& ?" F1 ('1G? 1%F& ?" F1 %#! " % ') @ 11 %%1
%#! " % ') @ 11 %%1
! < @ ? 1#;1# <
! < @ ? 1#;1# <
" F1 , %#!" %1E?< G"
" F1 , %#!" %1E?< G"
1!" %1, " %?'#<; ', 1!" %1, " %?'#<; ', -"';.
-"';.
29
29
3
3
3.1. "%$ )$"$>6 -$1'*
3.1. "%$ )$"$>6 -$1'*
" " – = %&# 1 %;
" " – = %&# 1 %;
F1 &%" ".
F1 &%" ".
- = , ; ; ,
- = , ; ; ,
1# ? %-, =#!1. E ; = &
1# ? %-, =#!1. E ; = &
%?'#< , %?# " %#!? ?)1 !. (
%?'#< , %?# " %#!? ?)1 !. (
;" 1G ? 1" '" '1: #"
;" 1G ? 1" '" '1: #"
, , G". '! ; '
, , G". '! ; '
1%<E", ; ); %%!? %?'?
1%<E", ; ); %%!? %?'?
=# (%1, GG, #?#1 G"), '-
=# (%1, GG, #?#1 G"), '-
' % =#!" , GE ,
' % =#!" , GE ,
=%?; %! .
=%?; %! .
– #%% , %";E" % .
– #%% , %";E" % .
#G #%1? ), 1 @, #E# G;
#G #%1? ), 1 @, #E# G;
";, %1E?< ; - =
";, %1E?< ; - =
"; %?'1 ', -"';. (
"; %?'1 ', -"';. (
;E 1; %?'#< ' "1 ; (,
;E 1; %?'#< ' "1 ; (,
,, 2002). , % "1, 1#< !
,, 2002). , % "1, 1#< !
E%;< #!1 '1 %1E?< &#<E" =#'
E%;< #!1 '1 %1E?< &#<E" =#'
?) F1 1%F&#< %&F!" %1"-
?) F1 1%F&#< %&F!" %1"-
'". G F1 ; %1E?< '". G F1 ; %1E?< &%#< #, ; '1 '1G;, 1%F&#; % =1
&%#< #, ; '1 '1G;, 1%F&#; % =1
, GE; 1 F1. , "1, , GE; 1 F1. , "1, F1& , ;1 ' %" '1,
F1& , ;1 ' %" '1,
1< % 1%1 (),
1< % 1%1 (),
'1 ; '1 ; &% , 1 % 1# # # #, &% , 1 % 1# # # #, 30
30
'!1
%%
'&11.
1%G?"
*'&1,
,
"
'#<E
G
#;"
'!1
%%
'&11.
1%G?"
*'&1,
,
"
'#<E
G
#;"
'# %% 1&?" , %?# '# %% 1&?" , %?# 1G %#? !' )<< 11# . *%%"
1G %#? !' )<< 11# . *%%"
) 11 1&?" '
) 11 1&?" '
1 #"" 1. 1%'#<E1 1
1 #"" 1. 1%'#<E1 1
R %'; !! #? )<< 11#, !?
R %'; !! #? )<< 11#, !?
%%" % =1 G;, %% %%" % =1 G;, %% ;
;
#%1
;
'&1,
E%;
1
#%1
;
'&1,
E%;
1
'#< ;'? 1G# N-&<'11 N-&1#1
'#< ;'? 1G# N-&<'11 N-&1#1
. @ =1 %" &% %<; ". . @ =1 %" &% %<; ". % F% #"&%!! F1.
% F% #"&%!! F1.
=FF1 ;;; 1 F1& CaCl2-'1"
=FF1 ;;; 1 F1& CaCl2-'1"
. ,#? 1 '<!; #?# E.coli 1
. ,#? 1 '<!; #?# E.coli 1
0
CaCl2 " (0 ,) %#<E1 %1 )1 % 37–42 ,.
CaCl2 " (00,) %#<E1 %1 )1 % 37–420,.
/"'1 #& 1% ;; # 1 ,2+,
/"'1 #& 1% ;; # 1 ,2+,
,
,
%%G?,
0
#&#<
F'
%"
%
%%G?,
#&#<
F'
%"
%
) 11, ; % 1 ! #"
) 11, ; % 1 ! #"
!#< ?#< F#&<. R %" %" !#< ?#< F#&<. R %" %" 1; 1%# ) %G; %E1 %'1
1; 1%# ) %G; %E1 %'1
. %& '. ,#E# '1? 1%#
. %& '. ,#E# '1? 1%#
F' %" % ) 11. @#<E
F' %" % ) 11. @#<E
0
"G 0 , G F'1# %"# %, 1#
"G 00, G F'1# %"# %, 1#
1# %? . @ =1 %G?? =
1# %? . @ =1 %G?? =
F' %" . ; " #' , ! F'
F' %" . ; " #' , ! F'
#); '< ? )<< 11# , !'
#); '< ? )<< 11# , !'
%'1!#< 11# E.coli 1# % %? '
%'1!#< 11# E.coli 1# % %? '
% ) ' " , , &1, % ) ' " , , &1, %; E.coli % F1& '.
%; E.coli % F1& '.
34
34
( ;E 1; ' ) %1;; F'! 1
( ;E 1; ' ) %1;; F'! 1
=%& - ; ='" 1# #. ,#? =%& - ; ='" 1# #. ,#? '<!; 1, ! 1 ' (! 5-20 )
'<!; 1, ! 1 ' (! 5-20 )
=! %; %;G (1-15 (/1) )<<
=! %; %;G (1-15 (/1) )<<
11# % '< %. (1; #E; '1
11# % '< %. (1; #E; '1
" % !, ! 11# , 1 '
" % !, ! 11# , 1 '
) # '#? ; 1!" .
) # '#? ; 1!" .
3.3. 1#1 )F1 $", )%?#B6 -#+%/
3.3. 1#1 )F1 $", )%?#B6 -#+%/
) ")'#"* E--%/'#
) ")'#"* E--%/'#
@ , 1 %'1 ; E.coli,
@ , 1 %'1 ; E.coli,
% '1G<;, G; 1 %'1
% '1G<;, G; 1 %'1
'# , G G #< %'1#, ,
'# , G G #< %'1#, ,
?, F1 !#G .
?, F1 !#G .
; '! % ; '<!; 1, ! G
; '! % ; '<!; 1, ! G
FF&? %'11 1 ' FF&? %'11 1 ' 1 %'11. @=1# ; ; %<
1 %'11. @=1# ; ; %<
1 '1, ! %!? =FF ;
1 '1, ! %!? =FF ;
1 %#1 E.coli.
1 %#1 E.coli.
& («%») - % 1G ", 1< 1 1 1.
, %#!" % -;, %; 11
«-#» (Sambrook et al., 1989).
& («%») - % 1G ", 1< 1 1 1.
, %#!" % -;, %; 11
«-#» (Sambrook et al., 1989).
3.3.1. -# .
3.3.1. -# .
R % %?' ! !
R % %?' ! !
1 E-''. ' ?& %'1 #<
1 E-''. ' ?& %'1 #<
F1# ; ; 1 #! %" # E-
F1# ; ; 1 #! %" # E-
''. ( #!, %'1 '); -' 1 ''. ( #!, %'1 '); -' 1 35
35
;, 'E-'' '; #)1, ;, 'E-'' '; #)1, %#&#< = F1. # ; ! %#&#< = F1. # ; ! 1 ? }-gal (5-1-4-"-3--E-D-%') -
1 ? }-gal (5-1-4-"-3--E-D-%') -
?,
E-''
'#);
'1
?,
E-''
'#);
'1
) & %#, , GE #)
) & %#, , GE #)
, ## ) &. ( =' @-%#
, ## ) &. ( =' @-%#
%" % #, '1# # = . ( @-
%" % #, '1# # = . ( @-
%# #) 1# !; , F1 '#;, }-gal %# #) 1# !; , F1 '#;, }-gal '#); %# & '#;. ,?,
'#); %# & '#;. ,?,
, GE %'1# , <; )1.
, GE %'1# , <; )1.
' %'1 <, %1# ! %'1 ' %'1 <, %1# ! %'1 1 E ! 1 – #! 1%&#, 1 E ! 1 – #! 1%&#, E 1%&1 %;1#< %G?#<
E 1%&1 %;1#< %G?#<
&< , #E" %'1#. 1 '1, < &< , #E" %'1#. 1 '1, < ) , %'#1;, ! # %'1# .
) , %'#1;, ! # %'1# .
3.3.2. / & ? =#' &.
3.3.2. / & ? =#' &.
PCR Cloning Kit (Fermentas) ;
11! GeneJETTM PCR Cloning Kit (Fermentas) ;
#%! ; – = 1 %G? & #%! ; – = 1 %G? & =FF ; @-%#, %#!" %1E?< Pfu,
=FF ; @-%#, %#!" %1E?< Pfu,
Taq < # 1? -%1'. ( "
Taq < # 1? -%1'. ( "
% ; %G? & pJET/blunt. R
% ; %G? & pJET/blunt. R
G =#' &, ; "
G =#' &, ; "
)11 E.coli, ! %?'#1" ; ;. *
)11 E.coli, ! %?'#1" ; ;. *
F1 #1 %G ' = ? .
F1 #1 %G ' = ? .
1 '1, '1G?; % ? , GE
1 '1, '1G?; % ? , GE
1 %'1. ( =1 #! ) #
1 %'1. ( =1 #! ) #
%'1# .
%'1# .
11! GeneJET
TM
36
36
II. M -;
II. M -;
4
4
-; D ;
-; D ;
D :
D :
/'1 < G#< ? " =1". ;
/'1 < G#< ? " =1". ;
?) ?< '1G; '; '!?#< 1#, ?) ?< '1G; '; '!?#< 1#, #!#< %&" 1!E; 1, 1'#; !
#!#< %&" 1!E; 1, 1'#; !
E , 1 11, E; # 1 =11. $'#!
E , 1 11, E; # 1 =11. $'#!
1!
1!
'';
"
'';
"
%; '1 =!" # ;;;
%; '1 =!" # ;;;
F#1?1 %1 1. , F#1?1 %1 1. , 1; = ; !? 1!1 %"1,
1; = ; !? 1!1 %"1,
#<E1 ; ! #?# %?'; #K"
#<E1 ; ! #?# %?'; #K"
; F&. @ =1 % 1F!,
; F&. @ =1 % 1F!,
#?#?, F'-"1! ! %', %
#?#?, F'-"1! ! %', %
1 # %G? 1# 1# #.
1 # %G? 1# 1# #.
, ? %', ! ' %" '&
, ? %', ! ' %" '&
#?#; 10-15% E ! (Amann et
#?#; 10-15% E ! (Amann et
al., 1995). 1, ! #E; !? 1 E %
al., 1995). 1, ! #E; !? 1 E %
%?' %" ; '#!. ' 1
%?' %" ; '#!. ' 1
1#; #1 %% ;
1#; #1 %% ;
.
.
L
%
20
%;?
? ?" ?"
%;
)11, 1 E &1 (Blackstone et al., 2003; Ellis et al., 2003).
/#;;
'<
F&;
&%
1'1
–
F!
%
L
%
20
%;?
? ?" ?"
%;
)11, 1 E &1 (Blackstone et al., 2003; Ellis et al., 2003).
1
/#;;
'<
F&;
&%
1'1
–
F!
%
1
1'1. ( ;E 1; ' ?) "
1'1. ( ;E 1; ' ?) "
37
37
%? 1?" , ? ' "
%? 1?" , ? ' "
G
G
1
F!
F&
1
F!
F&
1'1 (http://srs.ebi.ac.uk). R " <! ;
1'1 (http://srs.ebi.ac.uk). R " <! ;
# %? ? #?#1" )11, # %? ? #?#1" )11, %?, %#! 1#;1 11 ' '!"
%?, %#! 1#;1 11 ' '!"
1" E. 1? 1< ; %1#E %
1" E. 1? 1< ; %1#E %
#1 11 %?;1 % " %?'; ;
#1 11 %?;1 % " %?'; ;
'#!; '';. R 1<; " '1", '#!; '';. R 1<; " '1", G
G
,
?
.
,
?
.
( %? %?'#< ! 1)
( %? %?'#< ! 1)
% & E ! (Schloss et al., 2005), ? #G
% & E ! (Schloss et al., 2005), ? #G
1 #'; ; ', %&F!" 1 #%%1 1 #'; ; ', %&F!" 1 #%%1 1 % F& 1'1 (Thoerner et al., 2003).
1 % F& 1'1 (Thoerner et al., 2003).
1 '1, 16S p #1 #11 ; 1 '1, 16S p #1 #11 ; , "G; #" %? , "G; #" %? #?" %;< !; F&
#?" %;< !; F&
. @ F!" %'; ;;? ' . @ F!" %'; ;;? ' #%%
1'1,
;<E"
E, ? '1G F!
1
;' 1G#
#%%
1'1,
;<E"
E, ? '1G F!
1
;' 1G#
=1 #%%1 , 1 '1, ? '<! " , ?
=1 #%%1 , 1 '1, ? '<! " , ?
'1; #E#<E#< F&< 1'1 %?
'1; #E#<E#< F&< 1'1 %?
#&< (Romanuik et al., 1987; Anzai et al., 2000). 1 , #&< (Romanuik et al., 1987; Anzai et al., 2000). 1 , ;E 1; %; % " 1" ;E 1; %; % " 1" – #<E" ; %; =<&" '1)
– #<E" ; %; =<&" '1)
'" #%% 1'1 (Henz et al., 2004). M
'" #%% 1'1 (Henz et al., 2004). M
'
'
%#! 1 '& in situ, %';<E ;;? ?
%#! 1 '& in situ, %';<E ;;? ?
? % '&" , 1 '1, '#!?
? % '&" , 1 '1, '#!?
1 E ' #?; (DeLong et al., 1989;
1 E ' #?; (DeLong et al., 1989;
Amann et al., 1995). R 1 %?'#; =!
Amann et al., 1995). R 1 %?'#; =!
38
38
1 ; ' %" 1" E
1 ; ' %" 1" E
(Gloeckner et al., 1999), "! 1 ; (Gloeckner et al., 1999), "! 1 ; & %" # %" 1'1 (Fang et al.,
& %" # %" 1'1 (Fang et al.,
2003).
2003).
@ %% "'? 1 E %"
@ %% "'? 1 E %"
'&" % 1?1 1 %%; 20 '. (
'&" % 1?1 1 %%; 20 '. (
1985 # %' '1G? %?'; 1?" 1985 # %' '1G? %?'; 1?" ; '#!; F& ?" 1'1 (Lane et al.,
; '#!; F& ?" 1'1 (Lane et al.,
1985), ; '#!; 1 E &1 %"
1985), ; '#!; 1 E &1 %"
'&" ' #?; (Stahl et al., 1985). R ; '&" ' #?; (Stahl et al., 1985). R ; ' 5S 1? . ( % ' 5S 1? . ( % =%1 % # %? 12
=%1 % # %? 12
)11 Thiobacillus (Lane et al., 1985). , " 1G# )11 Thiobacillus (Lane et al., 1985). , " 1G# 1<E1 11 %?;1 " %',
1<E1 11 %?;1 " %',
! F! , <!<E %? &,
! F! , <!<E %? &,
#%%#;
#%%#;
1
«%#%#1
F'#<E1
1
«%#%#1
F'#<E1
1'11» 1G ? =<& %;' = #%%.
1'11» 1G ? =<& %;' = #%%.
R G #%% "' % E
R G #%% "' % E
1'1
1'1
1?"
!"
&?
@
1?"
!"
&?
@
##, 1%# " 90°, (Stahl et al., 1985) .
##, 1%# " 90°, (Stahl et al., 1985) .
1
%
1
1'11,
%',
1'11,
!
1
'
E
"
%',
!
1
'
E
"
%
F!1 . 1#<E1 % F!1 . 1#<E1 % ,
,
'#<E;
%;1
".
'#<E;
%;1
".
R#? %? ' , R#? %? ' , ;'" 1 Thermus. R , ?, %
;'" 1 Thermus. R , ?, %
;, % ", '#?
;, % ", '#?
" %G %&%? %" ; '#!;
" %G %&%? %" ; '#!;
=
=
1'1
-
F!
39
'.
,
1'1
-
F!
39
'.
,
F1 G 120–# F1 5S pP
F1 G 120–# F1 5S pP
'? !1 ; %; F!"
'? !1 ; %; F!"
' ?) ''; 1'1. @=1# ' ?) ''; 1'1. @=1# ! K ; #<E" %;G ! K ; #<E" %;G 16S p. R G 1500 % #; ';
16S p. R G 1500 % #; ';
? #1 ; 1#;-!" , ! ? #1 ; 1#;-!" , ! ;E 1; " =" %? ?
;E 1; " =" %? ?
2002 166 . %?
2002 166 . %?
(http://srs.
ebi.ac.uk).
ebi.ac.uk).
, 1 ! %1; 1#;–! %" 1!"
?
(http://srs.
;"
'
F1?
1?"
.
,
%;
,
, 1 ! %1; 1#;–! %" 1!"
?
;"
'
F1?
1?"
.
,
%;
,
%? '; ?" #? ;
%? '; ?" #? ;
=<& ;' (Olsen et al., 1985; Giovannoni et al., 1988a; Turner et al.,
=<& ;' (Olsen et al., 1985; Giovannoni et al., 1988a; Turner et al.,
1989; Romanuik et al., 1987; Anzai et al., 2000), # , 1989; Romanuik et al., 1987; Anzai et al., 2000), # , %G 1 ' %" ?" %%#;&
%G 1 ' %" ?" %%#;&
(DeLong et al., 1989; Ward et al., 1990; Giovannoni et al., 1990; Amann et al.,
(DeLong et al., 1989; Ward et al., 1990; Giovannoni et al., 1990; Amann et al.,
1995).
1995).
1 ' 1" #%" G # 1? 1 ' 1" #%" G # 1? )1 1!1 # G1 1 " #%% '1:
)1 1!1 # G1 1 " #%% '1:
=#, % " (Woese, Fox, 1977). R ;
=#, % " (Woese, Fox, 1977). R ;
%
;
#"
,
%
;
#"
,
%#!" '#? ' %# ' F11
%#!" '#? ' %# ' F11
'1 (Woese, Fox, 1977), ' !!" %?
'1 (Woese, Fox, 1977), ' !!" %?
1?" , 1<E"; 1# 1 ". 1?" , 1<E"; 1# 1 ". F! ); 450 '!" '1,
F! ); 450 '!" '1,
<!; =# %. ( '#? %', ! #
<!; =# %. ( '#? %', ! #
#%%# ' =#: ) ;, G, GG #%%# ' =#: ) ;, G, GG . (#< #%%# %;<E ?) . (#< #%%# %;<E ?) 40
40
&. %#! ' " =#.
&. %#! ' " =#.
( =# #%%# G ) 1" "% =#!"
( =# #%%# G ) 1" "% =#!"
. $ ?#<, ?< #%%# , <E . $ ?#<, ?< #%%# , <E =1?"
=1?"
#;":
1'#<E
=
,
#;":
1'#<E
=
,
=1? 1F. R #%% '1 %#! '
=1? 1F. R #%% '1 %#! '
".
".
' %" 1#;–1!", F!"
%
1&F?
"
' %" 1#;–1!", F!"
%
1&F?
"
Sulfolobus solfataricus, ##< %?? 16S Sulfolobus solfataricus, ##< %?? 16S %?'
%?'
;
;;
=<&"
'1;'
;
;;
=<&"
'1;'
%?;1 F?" 1'#<E" ",
%?;1 F?" 1'#<E" ",
=# =# (Mankin et al., 1985; Olsen et al., 1985). 1 =# =# (Mankin et al., 1985; Olsen et al., 1985). 1 %', ! #; %?? = #%%#;
%', ! #; %?? = #%%#;
%?;1 #" ". 1 '1, 1
%?;1 #" ". 1 '1, 1
%1
%1
1#;
%1
%"
;
'1G?
F!
%?';
F&
1#;
%1
%"
;
'1G?
F!
%?';
F&
1'1. ,#<E1 <&1 1 1G !?
1'1. ,#<E1 <&1 1 1G !?
# =<&" ;' & "% '"
# =<&" ;' & "% '"
(Giovannoni et al., 1988a; Turner et al., 1989). ( (Giovannoni et al., 1988a; Turner et al., 1989). ( % F! , #'<E, ! '! % F! , #'<E, ! '! & ')? =<& %1G# 1.
& ')? =<& %1G# 1.
H# ; #1" & 1 1?),
H# ; #1" & 1 1?),
!1 , ; ; " " =#?" .
!1 , ; ; " " =#?" .
@% F! ' G <!< ;
@% F! ' G <!< ;
'1G? %; ' ? ?" , #%"
'1G? %; ' ? ?" , #%"
?" #%%. @% %'? ? ;
?" #%%. @% %'? ? ;
" ?" %G? '1
" ?" %G? '1
11 %%; %! '# G, ? 11 %%; %! '# G, ? % ! F! 1 #"
% ! F! 1 #"
41
41
%? 16S #?#1" )11. %? 16S #?#1" )11. ;E 1; # '? ?#< #%%#, ; ;E 1; # '? ?#< #%%#, ; %? % '. ' %" =
%? % '. ' %" =
%; 1G % %# !? F! ' %; 1G % %# !? F! ' Campylobacter (Romanuik et al., 1987). 1 %
Campylobacter (Romanuik et al., 1987). 1 %
%? 1? %" )11 = %? 1? %" )11 = % " F! '. %', ! %
% " F! '. %', ! %
=
=
F1#<
%#<
,
1;?#<
F1#<
%#<
,
1;?#<
F!#< ?, #< 1G "'? # '
F!#< ?, #< 1G "'? # '
=#?"
=#?"
#%%
;,
#%%
;,
<; ; " ?" " #%% =#. (
<; ; " ?" " #%% =#. (
Campylobacter pylori, ;;<E; % , '<E
Campylobacter pylori, ;;<E; % , '<E
G#!
G#!
'; !, F!1 ';
'; !, F!1 ';
! # #" % Campylobacter, !
! # #" % Campylobacter, !
%' ? ' = .
%' ? ' = .
# #% %1 F1; – = %G; # #% %1 F1; – = %G; 2000 #, % # , <&; % Pseudomonas
2000 #, % # , <&; % Pseudomonas
(Anzai et al., 2000). J%! %, ;;;
(Anzai et al., 2000). J%! %, ;;;
! #K1, %' # Pseudomonas ? «» ;
! #K1, %' # Pseudomonas ? «» ;
& "'" 1&?" =" %!,
& "'" 1&?" =" %!,
1<E" %; G#. ( ;E 1; = <!
1<E" %; G#. ( ;E 1; = <!
1
1
!
.
#
%?
128
!
.
#
%?
128
" " % Pseudomonas " " % Pseudomonas %' 1 . R %? %' 1 . R %? %?;1 % #" F!" %#%%
%?;1 % #" F!" %#%%
%. ,1? ; Pseudomonas,
%. ,1? ; Pseudomonas,
%!1, ! %G =" ") #; %!1, ! %G =" ") #; ;1 --'&, %1 (Palleroni,
;1 --'&, %1 (Palleroni,
1984). '#? %', ! 57 , <!; )11 Pseudomonas
1984). '#? %', ! 57 , <!; )11 Pseudomonas
42
42
aeruginosa, 1G =1# #. ? aeruginosa, 1G =1# #. ? ; =1# #, # " F! %'&. '?
; =1# #, # " F! %'&. '?
1 , %G? " !"
1 , %G? " !"
%#%%" % (?F, , 11 11-). %#%%" % (?F, , 11 11-). Pseudomonas % F! F& ; 11-
Pseudomonas % F! F& ; 11-
%#%% %.
%#%% %.
( ;E 1; # #%% %; ';
( ;E 1; # #%% %; ';
1 Vibrionaceae (Kita-Tsukamoto et al., 1993; Thompson et al., 2003).
1 Vibrionaceae (Kita-Tsukamoto et al., 1993; Thompson et al., 2003).
,! = ' 1" '#!" 1, %
,! = ' 1" '#!" 1, %
' " %!" =1. ? %
' " %!" =1. ? %
1; "' 15 " % 1; "' 15 " % Enterovibrio (Thompson et al., 2002). ' F%!" Enterovibrio (Thompson et al., 2002). ' F%!" %!" " '" )11 1 %G
%!" " '" )11 1 %G
" " 1 ' 1 Vibrionaceae, 1 -
" " 1 ' 1 Vibrionaceae, 1 -
Enterovibrionaceae, Photobacteriaceae, Salinivibrionaceae (Kita-Tsukamoto et al.,
Enterovibrionaceae, Photobacteriaceae, Salinivibrionaceae (Kita-Tsukamoto et al.,
1993; Huang et al., 2000; Thompson et al., 2002).
1993; Huang et al., 2000; Thompson et al., 2002).
1 , 1#;-! %" ) )
1 , 1#;-! %" ) )
%1 % %" 1" E, %1 % %" 1" E, %'; ;? ) '' , <!; %'; ;? ) '' , <!; #?#1 % . .5 % "1 %;
#?#1 % . .5 % "1 %;
1#;-!" =%1.
1#;-!" =%1.
@&# ' % 1 %%#;& <! %;?
<!"
:
#11
?
,
@&# ' % 1 %%#;& <! %;?
<!"
:
#11
?
,
1%F&<, , ? '. (
1%F&<, , ? '. (
;E 1; %! = %" ") ;E 1; %! = %" ") #1 11 .
#1 11 .
43
43
,?
'
EMBL-4#$ %#$$>6
.5. ,"1 %; 1#;-!" %" '& (% Amann et al., 1995).
44
$> ) K#5$'# ,
/'%$> -)%"#'!$)' 5$# ,?
'
EMBL-4#$ %#$$>6
>%$ -K#F1
$"#$
%/'> #-K#F
5$# 16S p
"$"#$
/'%$> -)%"#'!$)' 5$# @1';
%;
&;
#"$'!$>*
#$#+
,
$"#$
$> ) K#5$'# "$"#$
%/'> #-K#F
5$# 16S p
#"$'!$>*
#$#+
@1';
%;
&;
#-'!$#1
/!'/#
>%$ $/$">6 )'
-K#F1
>%$ $/$">6 )'
@;1;
=&;
#-'!$#1
/!'/#
%$>* 4#+F
>%$ @;1;
=&;
%$>* 4#+F
.5. ,"1 %; 1#;-!" %" '& (% Amann et al., 1995).
44
, # 1?, ! , # 1?, ! 1%F&< 1G !? <!1 1 " #%)
1%F&< 1G !? <!1 1 " #%)
%; %?< ' '#? '. =" ;" #
%; %?< ' '#? '. =" ;" #
? #!? %" ?"
? #!? %" ?"
E, "1 %#%? '1G ?
E, "1 %#%? '1G ?
';'. R1 %11 %;E ; %#&, "
';'. R1 %11 %;E ; %#&, "
% %? ; %< =" .
% %? ; %< =" .
1 , '?, ! G1 %1' &% & (@)
1 , '?, ! G1 %1' &% & (@)
% %1 G 1# #E1 '1 ;? !
% %1 G 1# #E1 '1 ;? !
'#? (von Wintzingerode et al., 1997; Chandler et al., 1997).
'#? (von Wintzingerode et al., 1997; Chandler et al., 1997).
'?, ! % 1%F& " F1 % G1,
'?, ! % 1%F& " F1 % G1,
%!<E1
%!<E1
11?
%?
,
1
11?
%?
,
1
" %, %#!; ?) ! ( 30%)
" %, %#!; ?) ! ( 30%)
"1" 1# (Wang, Wang, 1996). R %? '#<;
"1" 1# (Wang, Wang, 1996). R %? '#<;
'#? %&F! '& %?< #" '#? %&F! '& %?< #" %#E1 & 1%F& &% «» . '
%#E1 & 1%F& &% «» . '
#!
#!
"
1#"
%G
'1
1'11.
"
1#"
%G
'1
1'11.
1, ! %#!<; % 1%F& 1<E"; 1, ! %#!<; % 1%F& 1<E"; %%#;& 1?" F1, , % F!1
%%#;& 1?" F1, , % F!1
' % % %? %?'?
' % % %? %?'?
?';. ( %G % ;; "
?';. ( %G % ;; "
#" %?. $ % ; %1'
#" %?. $ % ; %1'
&% & !' %;? % ; %
&% & !' %;? % ; %
1#;1#
1#;1#
'#
#?#1"
%"
1"
'#
#?#1"
%"
1"
E, # %1?" #, #! ),
E, # %1?" #, #! ),
'<E" % %?' 1%F& #11 , '<E" % %?' 1%F& #11 , %G 1 #; =" ), #) #<E 15 .
%G 1 #; =" ), #) #<E 15 .
'#? 1#;-! ' #?#1"
'#? 1#;-! ' #?#1"
1'1, " % ' %" E,
1'1, " % ' %" E,
45
45
%') '1G G;. ; ?) !
%') '1G G;. ; ?) !
#"
#"
%?,
1
'
%&
%?,
1
'
%&
1 %?;1 #?#1" )11 (Ward et al.,
1 %?;1 #?#1" )11 (Ward et al.,
1990; Bruce, 1993; Wise et al., 1997; Garcia-Martinez et al., 1999; Gray, Head,
1990; Bruce, 1993; Wise et al., 1997; Garcia-Martinez et al., 1999; Gray, Head,
2001). %', ! , #?#1 #%%
2001). %', ! , #?#1 #%%
" ; 1" ''" %" =1, " ; 1" ''" %" =1, 1", %" %!" (Ward et al., 1990; Kuske et al.,
1", %" %!" (Ward et al., 1990; Kuske et al.,
1997;
1997;
Borneman,
Triplett,
1997).
@!1,
%?
Borneman,
Triplett,
1997).
@!1,
%?
#?#1" 1'1, ", %1, ' %"
#?#1" 1'1, ", %1, ' %"
',
',
F!1
'#<;
1
F!1
'#<;
1
%?;1, %#!1 !1 11 ' #"
%?;1, %#!1 !1 11 ' #"
%" , , %!" =1 (Wise et al., 1997). 1
%" , , %!" =1 (Wise et al., 1997). 1
, %', ! #?#1" , %', ! #?#1" ;;<; '!" ?" #%%" (Bahr et al., 1996; Gloeckner
;;<; '!" ?" #%%" (Bahr et al., 1996; Gloeckner
et al., 2000). R %' ? 1, ! = ? #E#<E
et al., 2000). R %' ? 1, ! = ? #E#<E
#%%, " '1G !' %?#< #?##.
#%%, " '1G !' %?#< #?##.
$1 % #" " #%% Nitrospira $1 % #" " #%% Nitrospira Holophaga, %;< ? F! #%%,
Holophaga, %;< ? F! #%%,
# " %G; F!1 (Ehrich et al.,
# " %G; F!1 (Ehrich et al.,
1995; Ludwig et al., 1997). #%% % "
1995; Ludwig et al., 1997). #%% % "
%1#E %?;1 #?#1" . ,
%1#E %?;1 #?#1" . ,
% #%) %% %#!; %? #?# % #%) %% %#!; %? #?# Holophaga (Ludwig et al., 1997).
Holophaga (Ludwig et al., 1997).
1 '1, !# 90-" #G %;; ! ?)
1 '1, !# 90-" #G %;; ! ?)
" 1?" %? #?#1", " 1?" %? #?#1", #?#1" 1'1, ! %' '? #?#1" 1'1, ! %' '? % , ; ?" ?" ,
% , ; ?" ?" ,
% %1 '& ' #?;, %1E?<
% %1 '& ' #?;, %1E?<
%&F!"
%&F!"
#"
46
'.
L
-
=
#"
46
'.
L
-
=
&%!!
# F1, 1<E 1< &%!!
# F1, 1<E 1< 1, ?1 %?;1
1, ?1 %?;1
1?" , #E F#&#< F#&#<
1?" , #E F#&#< F#&#<
1# %';<E ;;? ! %
1# %';<E ;;? ! %
. ?; E.coli G 104 105 1 (Amann et
. ?; E.coli G 104 105 1 (Amann et
al., 1990a) , 1 '1, ? G % 1?" .
al., 1990a) , 1 '1, ? G % 1?" .
,?, ;;; 1%F& 1)?<
,?, ;;; 1%F& 1)?<
; '&" '. ( 1988 # % %', !
; '&" '. ( 1988 # % %', !
; !< ?) ! %, #? ; !< ?) ! %, #? 1# ? F& 1!1 1
1# ? F& 1!1 1
'1 (Giovannoni et al., 1988b). @' F#&-1! '
'1 (Giovannoni et al., 1988b). @' F#&-1! '
%?' ; %;1 F& ?" . 1
%?' ; %;1 F& ?" . 1
«F!
«F!
)11»
;
%;
)11»
;
%;
" =" ' (DeLong et al., 1989; Amann et al., 1990b). };
" =" ' (DeLong et al., 1989; Amann et al., 1990b). };
F#& G %1;? ; F& ?"
F#& G %1;? ; F& ?"
%" '&", " %&F!?, 1, !
%" '&", " %&F!?, 1, !
#1 % (Macario et al., 1989; Ward et al., 1990). 1 ,
#1 % (Macario et al., 1989; Ward et al., 1990). 1 ,
%?' F#&" ; & 1'1 in
%?' F#&" ; & 1'1 in
situ
situ
#
%?
;
'1
–
1).
(
#
%?
;
'1
–
1).
(
%%G? =1#, %&?; %&F!? 1!" ',
%%G? =1#, %&?; %&F!? 1!" ',
1!"
1!"
1?
,
%;;
?
1?
,
%;;
?
F! %. , ', ! % 1<E1; F! %. , ', ! % 1<E1; " %?;1 16S , 1# ? '
" %?;1 16S , 1# ? '
#%% 1'1, #E#< !" #?#"
#%% 1'1, #E#< !" #?#"
E " #;" (Olsen et al., 1986).
E " #;" (Olsen et al., 1986).
.6 'G "1 = %".
47
.6 'G "1 = %".
47
-
'&;
5$/'%$>* +$%
$> ) K#5$'#
4)#!$>6 5$"
#)(' )'/'/>
+$%#
/'%$>
-)%"#'!$)'
,?
'
#$ %#$$>6 -
)'/'/# !;
'&;
4%+#F1
/#$#1
4#'#!$#1 H'&; &"
-
'&;
5$/'%$>* +$%
/'%$>
-)%"#'!$)'
$'+
+$%#
$> ) K#5$'#
4)#!$>6 5$"
!;
'&;
#-'!$#1 /!'/#
H'&; in situ
#)(' )'/'/>
+$%#
/#$#1
4#'#!$#1 H'&; &"
4%+#F1
#-'!$#1 /!'/#
%$>* 4#+F
H'&; in situ
$'+
+$%#
%$>* 4#+F
,?
'
#$ %#$$>6 -
)'/'/# .6. ,"1, 1#<E; '! '1G %?';
.6. ,"1, 1#<E; '! '1G %?';
#" ' ; " %" '& (%
#" ' ; " %" '& (%
Amann et al., 1995).
Amann et al., 1995).
48
48
@!? % ' ', 1%1" 1
@!? % ' ', 1%1" 1
#!1 16S p, %G ' #% ,
#!1 16S p, %G ' #% ,
" =#, F! #%%
" =#, F! #%%
%, <!; %#%% ?F, 11, ,
%, <!; %#%% ?F, 11, ,
%1&, &F F (Giovannoni et al., 1988b; DeLong
%1&, &F F (Giovannoni et al., 1988b; DeLong
et al., 1989; Amann et al., 1995). @ %?' ! 1)
et al., 1989; Amann et al., 1995). @ %?' ! 1)
?"
%?,
##<;
?"
%?,
##<;
%&F! ', %';<E ;? ? ?
%&F! ', %';<E ;? ? ?
.
.
1 , #? ' 1# ? %?' ;
1 , #? ' 1# ? %?' ;
'1; #11 ! '& ; & '! '1; #11 ! '& ; & '! G !" G !" %
%"
(Stahl et al., 1988; Amann et al., 1990b).
%1;;
G
1&
%E
%
%"
(Stahl et al., 1988; Amann et al., 1990b).
%1;;
G
1&
%E
1. ( ;E 1; %G !
1. ( ;E 1; %G !
1!" 1!" %#, %? 1!" 1!" %#, %? ! %" 1'1 (Blackstone et al., 2003; Thoerner et al.,
! %" 1'1 (Blackstone et al., 2003; Thoerner et al.,
2003). ' %!" %1, %?' '
2003). ' %!" %1, %?' '
#%%- - %&F!" ' %?' = %" ;
#%%- - %&F!" ' %?' = %" ;
' %" %-';'" =1 (Snaidr et al.,
' %" %-';'" =1 (Snaidr et al.,
1997; Pernthaler et al.,1998; Gloeckner et al., 1999). (% 1
1997; Pernthaler et al.,1998; Gloeckner et al., 1999). (% 1
F#& '& in situ
F#& '& in situ
(FISH) #%%-%&F!1
(FISH) #%%-%&F!1
'1 %G 1 ; %; %" =1.
'1 %G 1 ; %; %" =1.
, 1!, ! ; ?) %" E
, 1!, ! ; ?) %" E
#11 %& ?" #%%, #1" '1 #11 %& ?" #%%, #1" '1 ' , '; #E 1?),
' , '; #E 1?),
!1 E; !? , %;1; % )< J$.
!1 E; !? , %;1; % )< J$.
@! = ;; %? K;? ; & J$
@! = ;; %? K;? ; & J$
#" !&, %##<E", '!#<, %" '&".
#" !&, %##<E", '!#<, %" '&".
,
,
;1
K;1
49
1G
?
?)
;1
K;1
49
1G
?
?)
'' " ?" #%%, ;E 1; '' " ?" #%%, ;E 1; #?#<; '" " ", %;<; ?
#?#<; '" " ", %;<; ?
% #11 , ' %" '&
% #11 , ' %" '&
(Gloeckner et al., 1996). $;1 %;G %" (Gloeckner et al., 1996). $;1 %;G %" %' '1G? %?'; = %" ; ' %' '1G? %?'; = %" ; ' 1"
1"
''"
1"
E:
%"
"
''"
1"
E:
%"
"
%!" %%#;&, '" # %E %1)
%!" %%#;&, '" # %E %1)
%1)"
F1"
#?",
;
'
%1)"
F1"
#?",
;
'
%1)" !" , ' #?;. 1
%1)" !" , ' #?;. 1
%?' ?" ', 1!" '1 F#&1
%?' ?" ', 1!" '1 F#&1
;1, %'; %;? ' % 1 1 G
;1, %'; %;? ' % 1 1 G
% ';. 1 , !; 1F#1; %', !
% ';. 1 , !; 1F#1; %', !
! -%&F! ', ;'; E.coli
! -%&F! ', ;'; E.coli
?#
?#
&&
1,
,
?,
1G
"'? < ? (DeLong et al., 1989).
&&
1,
,
?,
1G
"'? < ? (DeLong et al., 1989).
' " % 1#; 1 -
' " % 1#; 1 -
#%" F1 ?" 1 ' #%" F1 ?" 1 ' ?
?
!,
F#&?
'';
!,
F#&?
'';
#?#1" 1'1 (Rondon et al., 2000). ; '
#?#1" 1'1 (Rondon et al., 2000). ; '
1 '#!; ? % ''; 1" %%#;&, 1 '#!; ? % ''; 1" %%#;&, F#&;,
%?'
?
F#&;,
%?'
?
# "11 ((,) . $' %!" '& # "11 ((,) . $' %!" '& %#! 11 , G %#! 11 , G 1×106 %.. J! ' %? 16S ,
1×106 %.. J! ' %? 16S ,
" ; ' , %', ! G " ; ' , %', ! G ?) ''; ?" #%%, <!; %?
?) ''; ?" #%%, <!; %?
" '!" , 1%G? '1 " '!" , 1%G? '1 1 G1 H-% , &, &F 1 G1 H-% , &, &F %. @!? E.coli, ;
%. @!? E.coli, ;
50
50
? , =%#< ! .
? , =%#< ! .
1 '1, %', ! (,- 1G ? %?' ;
1 '1, %', ! (,- 1G ? %?' ;
=%
=%
'
'
%"
'&.
J%,
'
'
%"
'&.
J%,
=% =" , %; ?#<, %'#<,
=% =" , %; ?#<, %'#<,
1'#<, #'#< "1!#< (Rondon et al., 2000;
1'#<, #'#< "1!#< (Rondon et al., 2000;
Courtois et al., 2003). /1
Courtois et al., 2003). /1
1'1,
- 1E # <E
F1&<
?
1'1,
- 1E # <E
F1&<
?
!1 '' 1'1. # %"
!1 '' 1'1. # %"
1G ? 1 %"1 ; '#!; 1, 1G ? 1 %"1 ; '#!; 1, %' ;'? F!#< F#&?#< F1&< %' ;'? F!#< F#&?#< F1&< 1" %%#;&;", " 1#< 1'1, #
1" %%#;&;", " 1#< 1'1, #
%<E; #?<.
%<E; #?<.
51
51
III. ; III. ; : D ; D
; ; D :
E;
"1
%!"
1%;
%
: D ; D
; ; D :
<
! ''; 1" E % .7:
E;
"1
%!"
1%;
%
<
! ''; 1" E % .7:
1) %1 =% %; %, GE" ?
1) %1 =% %; %, GE" ?
1 (, %F, .), ' " ;<
1 (, %F, .), ' " ;<
?#< 1#< (.7, ; 1);
?#< 1#< (.7, ; 1);
2)
F#;
F1
16S
1
2)
F#;
F1
16S
1
?1 %11, %; 1%F&<; %#!
?1 %11, %; 1%F&<; %#!
@-%# G F1 = ' ? 1 @-%# G F1 = ' ? 1 " 1'1 '#!1 1 E (.7, ;
" 1'1 '#!1 1 E (.7, ;
2);
2);
3) %#! @-%# ';< %#1 ; 3) %#! @-%# ';< %#1 ; %'1 %#<E F1& E.coli (.7,
%'1 %#<E F1& E.coli (.7,
3 4);
3 4);
4) %#!< ? E.coli 11
%'11 %; (.7, ; 5);
5)
'
?"
;<
4) %#!< ? E.coli 11
%'11 %; (.7, ; 5);
@-%#,
5)
'
?"
;<
@-%#,
)F< " # %? %;
)F< " # %? %;
? F! ' F1 16S '
? F! ' F1 16S '
1'1 E (.7, 6, 7, 8).
1'1 E (.7, 6, 7, 8).
52
52
/!
%',
!
;
''
%"
%,
1"
%#!1"
E
'#?
/!
%',
!
;
''
%"
%,
1"
%#!1"
E
'#?
1#;-!" , ' %?'#1" 1
1#;-!" , ' %?'#1" 1
; , !, % ' , G #
; , !, % ' , G #
%; @. @=1# ; '#!; ! '';
%; @. @=1# ; '#!; ! '';
%"
%"
1"
E
1#;
1
%?'? '! 1 ; #11 (. 1).
1"
,
F#<
80%-1
1#;
1
%?'? '! 1 ; #11 (. 1).
%5'"# 45()5 #'##
,#%'<
E
%5'"# 45()5 #'##
=1,
,#%'<
,
F#<
80%-1
=1,
&F##< 15–20 % 12000 /. ,#% #;<, &F##< 15–20 % 12000 /. ,#% #;<, #%#< 100 1 - #F ; ; #%#< 100 1 - #F ; ; 11 F1 ' (?, 2004) 50 1 -#F
11 F1 ' (?, 2004) 50 1 -#F
; ; 11 (H! ., 2006).
; ; 11 (H! ., 2006).
5'"$ 4/K$>6 #)'""
5'"$ 4/K$>6 #)'""
( G # %?'? "; !
( G # %?'? "; !
" #F. "; – = &
" #F. "; – = &
1% %1 %'1 , "
1% %1 %'1 , "
"; % 1 1%# "? % +4°,. !
"; % 1 1%# "? % +4°,. !
– = 11% #F , " ;
– = 11% #F , " ;
% % %?'1 ' "; (.2, 3).
% % %?'1 ' "; (.2, 3).
/1$> #))> )$"$>6 #5$'":
/1$> #))> )$"$>6 #5$'":
-111 (-), // = 121,2
-111 (-), // = 121,2
NaCl, // = 58,4
NaCl, // = 58,4
R (; ?), // = 336,2
R (; ?), // = 336,2
& ;, ', // = 82,0
& ;, ', // = 82,0
&#?F ;, // = 288,4
&#?F ;, // = 288,4
57
57
–
G 1% 1 ,
'1G-.
=#< =1,
;< 3/ & ;.
,? . #F1.
–
G 58
,? . /1 =<=1.
1
; 1 #&
%';.
! %"
F# 10 .
F# 10 .
–
–
*'#<E #F:
10 1/ -HCl, pH 7.5,
0.1M NaCl,
2 1/ R,
10 1/1 '&1.
*'
%
37°,
30–60
,
%? – %'
SDS ( 1%).
/ F1 ' F-"F1 =&
,? . #F1.
3 / & ;, '1 %,
< =.
1% 1 ,
'1G-.
=#< =1,
;< 3/ & ;.
,? . #F1.
,? . #F1.
3 / & ;, '1 %,
< =.
' %' J-"F1; =&;
.
–
*'#<E #F:
100 1/ -HCl, pH 8.0,
1.4 / NaCl,
2% ,
20 1/ R.
*' % 60°,, 1'&;.
*'#<E ,
1 F1.
*' % 1 1%#
20–30 .
#%#.
/ 1F&
! &1
F1 1%,,
/
G !
*'
,;
–
–
*'#<E #F:
10 1/ -HCl, pH 7.5,
0.1M NaCl,
2 1/ R,
10 1/1 '&1.
*'
%
37°,
30–60
,
%? – %'
SDS ( 1%).
/ F1 ' F-"F1 =&
' %' J-"F1; =&;
.
#4F# 1. ?" 1 ; (? ., 2008).
58
,? . /1 =<=1.
1
; 1 #&
%';.
! %"
F# 10 .
F# 10 .
–
*'#<E #F:
100 1/ -HCl, pH 8.0,
1.4 / NaCl,
2% ,
20 1/ R.
*' % 60°,, 1'&;.
*'#<E ,
1 F1.
*' % 1 1%#
20–30 .
#%#.
/ 1F&
! &1
F1 1%,,
/
G !
*'
,;
#4F# 1. ?" 1 ; (? ., 2008).
D D 5'"$ #)'"# 6#$$1 1 ')-HCl, pH 7,5
5'"$ #)'"# 6#$$1 1 ')-HCl, pH 7,5
# 12,1 ? 80 1 ,
# 12,1 ? 80 1 ,
%1); 1 1). ? 7,5 1N
%1); 1 1). ? 7,5 1N
; , % ! K1 1 100 1.
; , % ! K1 1 100 1.
@F?? !' 0,22-1 F? ?#< ;#<
@F?? !' 0,22-1 F? ?#< ;#<
%##, "? % +4°, , ; G, % -200,.
%##, "? % +4°, , ; G, % -200,.
5'"$ #)'"# 6#$$1 1 ')-HCl, pH 8,0
5'"$ #)'"# 6#$$1 1 ')-HCl, pH 8,0
# 12,1 ? 80 1 . , %1); # 12,1 ? 80 1 . , %1); 1 1). ? 8,0 1N HCl, 1 1). ? 8,0 1N HCl, K1 1 100 1. @F?? !' 0,22-11 F? K1 1 100 1. @F?? !' 0,22-11 F? 0
?#< ;#< %##, "? % +4°, % -20 ,.
?#< ;#< %##, "? % +4°, % -200,.
5'"$ #)'"# 6#$$1 5 NaCl
5'"$ #)'"# 6#$$1 5 NaCl
# 29,0 " ; ?, %1); 1
# 29,0 " ; ?, %1); 1
1), 95 1 , % ! K1 1), 95 1 , % ! K1 1 100 1. }? % 1 1%#.
1 100 1. }? % 1 1%#.
5'"$ #)'"# 6#$$1 0,5 , 8,0
5'"$ #)'"# 6#$$1 0,5 , 8,0
# R 84 ? 400 1 . , %1); # R 84 ? 400 1 . , %1); 1 1) #; 8,0 10% NaOH. K1 1 1) #; 8,0 10% NaOH. K1 1 500 1. }? % 1 1%#.
1 500 1. }? % 1 1%#.
5'"$ #)'"# 6#$$1 3 #F'#'# $#'1, 5,0
5'"$ #)'"# 6#$$1 3 #F'#'# $#'1, 5,0
# 24,6 & ; ? 80 1 # 24,6 & ; ? 80 1 , %1); 1 1). ? 5,0
, %1); 1 1). ? 5,0
; ## (? ;G1 )F#!), % !
; ## (? ;G1 )F#!), % !
K1 100 1 1 . @F?? !'
K1 100 1 1 . @F?? !'
0,22-1 F? ?#< ;#< %##, "? % +4°,.
0,22-1 F? ?#< ;#< %##, "? % +4°,.
59
59
5'"$ #)'"# 6#$$1 10% SDS
5'"$ #)'"# 6#$$1 10% SDS
# 10 SDS ? 90 1 ,
# 10 SDS ? 90 1 ,
%1); 1 1), K1 100 1 1
%1); 1 1), K1 100 1 1
. }? % 1 1%#. @ %G 1%#
. }? % 1 1%#. @ %G 1%#
10% SDS % , 1G ?, % 10% SDS % , 1G ?, % ; .
; .
; D
#4F# 2. @ !" : - -#F.
-$$'
4/>* 4Z $($#1 $F$'#F1
; D
#4F# 2. @ !" : - -#F.
-$$'
4/>* 4Z $($#1 $F$'#F1
$-" '!
$-" '!
1/ -HCl, pH 7,5
1 1
10 1/ -HCl, pH 7,5
1/ -HCl, pH 7,5
1 1
10 1/ -HCl, pH 7,5
5/ NaCl
2 1
0,1 M NaCl
5/ NaCl
2 1
0,1 M NaCl
0,5/ R, 8,0
0,4 1
2 1/ R
0,5/ R, 8,0
0,4 1
2 1/ R
H2O
100 1 1 H2O
100 1 1 @F?? !' 0,22-1 F? ?#< ;#<
@F?? !' 0,22-1 F? ?#< ;#<
%##, "? % +4°,.
%##, "? % +4°,.
$(-'!
$(-'!
1/ -HCl, pH 7,5
1 1
10 1/ -HCl, pH 7,5
1/ -HCl, pH 7,5
1 1
10 1/ -HCl, pH 7,5
0,5/ R, 8,0
0,2 1
1 1/ R
0,5/ R, 8,0
0,2 1
1 1/ R
H2O
100 1 1 H2O
100 1 1 @F?? !' 0,22-1 F? ?#< ;#<
@F?? !' 0,22-1 F? ?#< ;#<
%##, "? % +4°,. '? % 1 1 ? % %
%##, "? % +4°,. '? % 1 1 ? % %
=%%F "? % –20°,.
=%%F "? % –20°,.
60
60
6.1. >%$ '% K$'#'"$5 +)#
6.1. >%$ '% K$'#'"$5 +)#
100 1 ! #%' ;< 300 1 -
100 1 ! #%' ;< 300 1 -
#F ( 8,0) '&11 (10–20 1/1) ! &&
#F ( 8,0) '&11 (10–20 1/1) ! &&
'&1 1–10 1/1. *' # 15–60 % 37°,. L1 ;< 25
'&1 1–10 1/1. *' # 15–60 % 37°,. L1 ;< 25
1 %' (10 1/1) ##< E 15–30 % 60°,.
1 %' (10 1/1) ##< E 15–30 % 60°,.
;< 10% SDS ! && 1% SDS ;< 10% SDS ! && 1% SDS G< 10 % 1 1%#. @ =& G< 10 % 1 1%#. @ =& %" 1G ? # '1G;-
%" 1G ? # '1G;-
;. ; = 1 '1G< % –40q, ! 30 ;. ; = 1 '1G< % –40q, ! 30 %< % 60q, 20 . %" =#< F1 %< % 60q, 20 . %" =#< F1 "F11 (<? "# '%: ? ;G1 )F#
"F11 (<? "# '%: ? ;G1 )F#
%!"!). ; = F& ;< K1 F,
%!"!). ; = F& ;< K1 F,
E -HCl (pH 8,0), #%'< '< 10–15 E -HCl (pH 8,0), #%'< '< 10–15 &F##< % 12000 / 10 . @ -
&F##< % 12000 / 10 . @ -
GE 1 ; F', %"
GE 1 ; F', %"
%"; !#< F'# (F). ; ?) "<<
%"; !#< F'# (F). ; ?) "<<
#< F'# < E?, '"; F'#, #< F'# < E?, '"; F'#, =#<, % ), 1 K11 1 F-
=#<, % ), 1 K11 1 F-
"F1 (1:1) &F##< 10 % 12000 /. L1 #<
"F1 (1:1) &F##< 10 % 12000 /. L1 #<
F'# < 1 G '1 1 K11 "F1.
F'# < 1 G '1 1 K11 "F1.
@&## "F11 # %?, ; F'
@&## "F11 # %?, ; F'
%'! <; G; F'. @ =&
%'! <; G; F'. @ =&
11# F' ;< 1/10 K1 3M & ; (pH
11# F' ;< 1/10 K1 3M & ; (pH
5,0) 2 K1 < =. G< ! ! %
5,0) 2 K1 < =. G< ! ! %
–20q,, < &F#1 % 12000 /. ! 30 .
–20q,, < &F#1 % 12000 /. ! 30 .
; #; %1< 400 1 70%- " =,
; #; %1< 400 1 70%- " =,
"; % –20q,, E ' &F##<. !#<
"; % –20q,, E ' &F##<. !#<
G? #;<, %#)< '#" ;< -
G? #;<, %#)< '#" ;< -
#F '? . }; #< % –20q,.
#F '? . }; #< % –20q,.
61
61
6.2. '% ()' ) -$$ E
6.2. '% ()' ) -$$ E
( 11 ! %11 ?
( 11 ! %11 ?
") '#? % 1 ' ?) !
") '#? % 1 ' ?) !
1. / %?' = 1 1F& /.. H! 1. / %?' = 1 1F& /.. H! (H! ., 2006).
(H! ., 2006).
; ; 50 1 ! #%' #F
; ; 50 1 ! #%' #F
;< 100 1 '#<E #F , 1'#< 10 ;< 100 1 '#<E #F , 1'#< 10 % 60q,, '1 ;< E 150 1 = #F G< 30
% 60q,, '1 ;< E 150 1 = #F G< 30
% 60q,, %! %1);. ,1? &F##< !
% 60q,, %! %1);. ,1? &F##< !
5 1 % 12000 /, #% %; #< %#, 5 1 % 12000 /, #% %; #< %#, %1< 100 1 '#<E #F. ,#% K;< %1< 100 1 '#<E #F. ,#% K;< ;< 5 1 %' (10 1/1), 1? ##< 30 %
;< 5 1 %' (10 1/1), 1? ##< 30 %
60q,. L1 ;< 1 1 1% , %1)< G<
60q,. L1 ;< 1 1 1% , %1)< G<
&#< ? #" %1E?< '1G;-
&#< ? #" %1E?< '1G;-
;. < &F#1 ! 15 %
;. < &F#1 ! 15 %
12000 /, G %1< 300 1 1% &.
12000 /, G %1< 300 1 1% &.
,#% #;<, %#)< =#< =1 (2
,#% #;<, %#)< =#< =1 (2
' % 400 1) 10 % 60q,, ;; #% &F#1
' % 400 1) 10 % 60q,, ;; #% &F#1
! 30 % 12000 /. K1# #%#
! 30 % 12000 /. K1# #%#
;< 80 1 3/ & ; ( 5,0) G< !? %
;< 80 1 3/ & ; ( 5,0) G< !? %
' 1%# (–20q,) ; G; #" . ' 1%# (–20q,) ; G; #" . G< &F#1 % 12000 / ! 30 ,
G< &F#1 % 12000 / ! 30 ,
%1< 70%-1 =1 (1. )), %#)< '#" %1< 70%-1 =1 (1. )), %#)< '#" ;< #F.
;< #F.
62
62
5'"$ #4(5 #)'"# 1% "%$5 E
5'"$ #4(5 #)'"# 1% "%$5 E
@ #;1 " '% "1
@ #;1 " '% "1
%? ;G1 )F#.
# 1 ? 95 1
%? ;G1 )F#.
# 1 ? 95 1
, %1); 1 1), K1
, %1); 1 1), K1
1 100 1. }? % 1 1%#.
1 100 1. }? % 1 1%#.
@ %G 1%# % , 1G
@ %G 1%# % , 1G
?, % ; .
?, % ; .
#4F# 3. @ ! '#<E #F .
#4F# 3. @ ! '#<E #F .
-$$'
4/>* 4Z $($#1 $F$'#F1
-$$'
4/>* 4Z $($#1 $F$'#F1
1/ -HCl, pH 8,0
10 1
100 1/ -HCl, pH 8,0
1/ -HCl, pH 8,0
10 1
100 1/ -HCl, pH 8,0
5/ NaCl
28 1
1,4 / NaCl
5/ NaCl
28 1
1,4 / NaCl
2
2% 2
2% 0,5/ R, 8,0
4 1
20 1/ R
0,5/ R, 8,0
4 1
20 1/ R
H2O
100 1 1 H2O
100 1 1 6.3. >%$ ) -B!8 )4$'"
6.3. >%$ ) -B!8 )4$'"
( ;E 1; ; 1#;-!"
( ;E 1; ; 1#;-!"
%; %;;<; ; ; %; %;;<; ; ; /, ; ! @-%#. /, ; ! @-%#. %1 ;;<; ; ; %1E?<
%1 ;;<; ; ; %1E?<
, 1 ' " ;;<; 1. (
, 1 ' " ;;<; 1. (
" ; ; %?'#<; G =% !
" ; ; %?'#<; G =% !
, ! %" ) %":
, ! %" ) %":
1 - '#) '&11 '#<E1 #F1,
GE1 "1! ;
63
1 - '#) '&11 '#<E1 #F1,
GE1 "1! ;
63
2 - G , 1 " 11#
(%", ), <; ;
2 - G , 1 " 11#
(%", ), <; ;
3 - 1 .
3 - 1 .
1 ' 1 ;;<; 1 ' 1 ;;<; F1 1% (/, ;). ( %; F1 1% (/, ;). ( %; %1E?< - , #11 %% #"
%1E?< - , #11 %% #"
%#!< %1E?< $- % %1 1
%#!< %1E?< $- % %1 1
#&. #%' K11 100 1 ;< 450 1
#&. #%' K11 100 1 ;< 450 1
'#<E #F, E? %1)<. % ' 1
'#<E #F, E? %1)<. % ' 1
1, ! ' 1 ')" !&, % 1
1, ! ' 1 ')" !&, % 1
'#<E ;'? "1 &F#?
'#<E ;'? "1 &F#?
10–15
%
12000
/.
!#<
G?
%
10–15
%
12000
/.
!#<
G?
%
&F#; %; #< %# ;< 25 1
&F#; %; #< %# ;< 25 1
. ,#%'< E? #%#< , G<
. ,#%'< E? #%#< , G<
%
1
1%#
,
5
%!
%1);.
%
1
1%#
,
5
%!
%1);.
F##< 30 % 12000 /, #% #;<. F##< 30 % 12000 /, #% #;<. %; < 1 1!" #F" 1 3 %
%; < 1 1!" #F" 1 3 %
#&. #%#< 400 1 ; 1 4,
#&. #%#< 400 1 ; 1 4,
&F##< 30 % 12000 ./1., #% #;< &F##< 30 % 12000 ./1., #% #;< %#)< 30 % 48°,. 1G "? % 1
%#)< 30 % 48°,. 1G "? % 1
1%# =<& #" . # 1%# =<& #" . # =<#< 50 1 '? ? -#F. ;
=<#< 50 1 '? ? -#F. ;
= E? #%#<, %< 1 5 %
= E? #%#<, %< 1 5 %
60°, &F##< 5 % 12000 /. !#< G?
60°, &F##< 5 % 12000 /. !#< G?
E?, ' < #< %# %?'#< E?, ' < #< %# %?'#< ! 1& %1' &% & (@).
! 1& %1' &% & (@).
1 ' 1" ) %?'#1" 1 ;;;
1 ' 1" ) %?'#1" 1 ;;;
; ; QIAamp Blood&tissue (QIAGENE). ?
; ; QIAamp Blood&tissue (QIAGENE). ?
1 F? #%#< 180 1 - #F
1 F? #%#< 180 1 - #F
( 8,0) '&11 (10 1/1). ,#%'< ##< 30 % 37q,.
( 8,0) '&11 (10 1/1). ,#%'< ##< 30 % 37q,.
64
64
;< 25 1 %' (100 1/1) < # # %
;< 25 1 %' (100 1/1) < # # %
%#: ;< 200 1 #F AL (' ). &#< 1?
%#: ;< 200 1 #F AL (' ). &#< 1?
##< 30 % 70q, 30 % 95q,. @ = ;< 210
##< 30 % 70q, 30 % 95q,. @ = ;< 210
1 96%- =, E? %1)<, ; # 1 96%- =, E? %1)<, ; # &F##< 1 ? &F# % 12000 /.
&F##< 1 ? &F# % 12000 /.
# G %1< #F1 AW (' ), &F##< 1
# G %1< #F1 AW (' ), &F##< 1
% 12000 /. ; % #; % %;<
% 12000 /. ; % #; % %;<
&F# ! 3 % 12000 /. =<#<
&F# ! 3 % 12000 /. =<#<
#F1 AE (' ). ; = #F %? %< %
#F1 AE (' ). ; = #F %? %< %
70q,, ; 200 1 ;! #F #, G< 1–5 70q,, ; 200 1 ;! #F #, G< 1–5 &F##< 5 % 12000 /.
&F##< 5 % 12000 /.
65
65
7
7
=E = 16S =E = 16S M M ( & 1 ; %; %1' &%
( & 1 ; %; %1' &%
& "; #<E 1%:
& "; #<E 1%:
1. #F 10 1/ -HCl, 8,8; 50 1/ KCl;
1. #F 10 1/ -HCl, 8,8; 50 1/ KCl;
2. MgCl2, &&< 1G ?? 1 8 1/ (
2. MgCl2, &&< 1G ?? 1 8 1/ (
#"
#"
1;
"1
;
-%1').
1;
"1
;
-%1').
1#1; &&; ; 1%F& ? – 2,5
1#1; &&; ; 1%F& ? – 2,5
1/.;
1/.;
3. J, J, HJ, J % 0,2–0,4 11? G. !
3. J, J, HJ, J % 0,2–0,4 11? G. !
'#FF ' F1, %?'#1 '#FF ' F1, %?'#1 &. ; & F11, <E1 ='#'1
&. ; & F11, <E1 ='#'1
(%&1)
G?
;1
%?
(Tth,
&&
Vent,
Pfu
-%1'),
'#FF
(%&1)
G?
;1
%?
(Tth,
&&
Vent,
Pfu
-%1'),
'#FF
G1 #! ? '1 1%;
G1 #! ? '1 1%;
4. # %1, &&; G % 10 %1? 25
4. # %1, &&; G % 10 %1? 25
1 & 1;
1 & 1;
5. ! #11 ? &<
5. ! #11 ? &<
%F1! %1'#< &%#< &< # 1 10
%F1! %1'#< &%#< &< # 1 10
;
;
6. -%1' – 1%F&< # 1 .. 25 1 &
6. -%1' – 1%F&< # 1 .. 25 1 &
1.
1.
( ; %1' &% & "; % –20º,.
( ; %1' &% & "; % –20º,.
@ '1) 1%F& "1 ? #<E1
@ '1) 1%F& "1 ? #<E1
%1:
%1:
1. @ '1G; "1 %1)? 1. @ '1G; "1 %1)? ? ? &F# 1" " (3000 /, 1 )
? ? &F# 1" " (3000 /, 1 )
' <!1 F1;
' <!1 F1;
66
66
2. @ ; 1%F& #? ) "1;
2. @ ; 1%F& #? ) "1;
3. ? "1 1%, F1 ;; 3. ? "1 1%, F1 ;; %<< !?;
%<< !?;
4. (? G1 &, #? % 1%F 4. (? G1 &, #? % 1%F '%#? %.
'%#? %.
,#
1?,
!
%
%
1%F&
,#
1?,
!
%
%
1%F&
"1 ? . ,1 – = '1
"1 ? . ,1 – = '1
'1! ? & – =1 #! &#< 1?
'1! ? & – =1 #! &#< 1?
;< 1%, ! 1& %?'#< #. R
;< 1%, ! 1& %?'#< #. R
? G ? &?1, ! %G !#
? G ? &?1, ! %G !#
%?'#1" . 1 , % 1%F& %" #%%-
%?'#1" . 1 , % 1%F& %" #%%-
%&F!"
%&F!"
%1
"1
%
#<E"
%1
"1
%
#<E"
%G?" &?" . R ! 1&
%G?" &?" . R ! 1&
%'#1< %?' %% #" " )11,
%'#1< %?' %% #" " )11,
"
@-%#
G
?
%#!
;'?
"
@-%#
G
?
%#!
;'?
(%G? ?), ! #? (&?
(%G? ?), ! #? (&?
?).
?).
7.1 . %4 -#> -#*"
7.1 . %4 -#> -#*"
@# %1 ; 1%F& < '1 @# %1 ; 1%F& < '1 % '!: ; '#!; 11? ''; 1
% '!: ; '#!; 11? ''; 1
E 1#; %?'? %# "
E 1#; %?'? %# "
?" %1 500L–1350R (%'& % E.coli 514–533 1407–
?" %1 500L–1350R (%'& % E.coli 514–533 1407–
1389, ., 1999).
1389, ., 1999).
@ =" %1 %?'1 ' " Ribosomal
@ =" %1 %?'1 ' " Ribosomal
Database Project II (http://rdp.cme.msu.edu/) %', ! ?
Database Project II (http://rdp.cme.msu.edu/) %', ! ?
< ?<. # %?
< ?<. # %?
"
"
#%%-
-%&F!"
?"
%1
#%%-
-%&F!"
?"
%1
% & 4. 1 , & #' F!
% & 4. 1 , & #' F!
67
67
#%%, 1# ? % %1E?< %
#%%, 1# ? % %1E?< %
%1.
%1.
#4F#
4.
#
%1
F! #%% .
#+"#$
-#>
-#*"
EUB500L
EUB1350R
ADF681L
BET680L
CF319L
BLS342L
ACT235L
PLA930R
ACI31L
CYA106L
CYA781R
ACA650L
;
CGTGCCAGCAGCCGCGGTAA
GACGGGCGGTGTGTACAAG
CTGGCTCAGAYCGAACG
CRCGTGTAGCAGTGA
GTACTGAGACACGGACCA
CAGCAGTAGGGAATCTTC
CGCGGCCTATCAGCTTGTTG
CTCCACCGCTTGTGTGA
GATCCTGGCTCAGAATC
CGGACGGGTGAGTAACGCGTGA
GACTACTGGGGTATCTAATCCCATT
TAGAGTATGGGAGAGGAT
&
=5$'()#1 5/--#
( =#
?F-%#%% %
-%#%% %
F-J
H1%G?, &
@1&
&
Acinetobacter calcoaceticus
#+"#$
-#>
-#*"
EUB500L
EUB1350R
ADF681L
BET680L
CF319L
BLS342L
ACT235L
PLA930R
ACI31L
CYA106L
CYA781R
ACA650L
%4 -'#!$>6 /)"* #-K#F
%1?"
4.
#
%1
F! #%% .
)%"#'!$)'! 5'-3'
7.2.
#4F#
#
1%F&
"1
)%"#'!$)'! 5'-3'
CGTGCCAGCAGCCGCGGTAA
GACGGGCGGTGTGTACAAG
CTGGCTCAGAYCGAACG
CRCGTGTAGCAGTGA
GTACTGAGACACGGACCA
CAGCAGTAGGGAATCTTC
CGCGGCCTATCAGCTTGTTG
CTCCACCGCTTGTGTGA
GATCCTGGCTCAGAATC
CGGACGGGTGAGTAACGCGTGA
GACTACTGGGGTATCTAATCCCATT
TAGAGTATGGGAGAGGAT
7.2.
;
&
=5$'()#1 5/--#
( =#
?F-%#%% %
-%#%% %
F-J
H1%G?, &
@1&
&
Acinetobacter calcoaceticus
%4 -'#!$>6 /)"* #-K#F
%1?"
#
1%F&
"1
%? #<E %1 & (1) &&< 1!
%? #<E %1 & (1) &&< 1!
; (2) 1%## G (3) ! &. ; 1%F&
; (2) 1%## G (3) ! &. ; 1%F&
%?'#< #<E && #11 ? : 0,01;
%?'#< #<E && #11 ? : 0,01;
0,1; 1 10 1/1. ; ;; %1? 1%# G
0,1; 1 10 1/1. ; ;; %1? 1%# G
1%F&< # 1 1%# 50 72q,. !
1%F&< # 1 1%# 50 72q,. !
& 1G '1;? 20 45.
& 1G '1;? 20 45.
1 , # #!?, 1 F11
1 , # #!?, 1 F11
%; 1%F&;. ( ;E 1; ;# !1
%; 1%F&;. ( ;E 1; ;# !1
1F?1 Taq -%1'1 ) %?'#<; -
1F?1 Taq -%1'1 ) %?'#<; -
68
68
%1',
<E
%&1
;1,
+
/
%1',
<E
%&1
;1,
Vent(exo ) Pfu -%1'. R %1' ' ! 3 –5/ -
='#'
='#'
%!<
#<
!?
+
Vent(exo ) Pfu -%1'. R %1' ' ! 3 –5 /
/
%!<
#<
!?
1%F& '#< !# ), % < ?1
1%F& '#< !# ), % < ?1
1?1
1?1
-%1'1,
#<
%?
-%1'1,
#<
%?
% # 1%F&. ; %#!; ! @-
% # 1%F&. ; %#!; ! @-
%# =1 %1'1 1 )%!" %1,
%# =1 %1'1 1 )%!" %1,
# #!? # 1%F&#1 F1 #!?
# #!? # 1%F&#1 F1 #!?
&&< J.
&&< J.
;
%#!;
11?
'';
@-%#
;
%#!;
11?
'';
@-%#
1#; %?'? #<E G1 & ( .,
1#; %?'? #<E G1 & ( .,
1999):
1999):
94q, – 5 , 50q, – 2 , 72q, – 2 (1 &),
94q, – 5 , 50q, – 2 , 72q, – 2 (1 &),
92q, – 45 , 52q, – 1,2 , 72q, – 1,5 (2–10 &),
92q, – 45 , 52q, – 1,2 , 72q, – 1,5 (2–10 &),
92q, – 45 , 54q, – 1,2 , 72q, – 1,5 (11–20 &),
92q, – 45 , 54q, – 1,2 , 72q, – 1,5 (11–20 &),
92q, – 45 , 56q, – 1,2 , 72q, – 1,5 (21–30 &),
92q, – 45 , 56q, – 1,2 , 72q, – 1,5 (21–30 &),
72q, – 20 (31 &).
72q, – 20 (31 &).
1%F&<
#%%-%&F!"
%1"
%;
#<E1 G1 &:
1%F&<
#%%-%&F!"
%;
#<E1 G1 &:
%$#'/#F1 – 94q,, 45 ;
%$#'/#F1 – 94q,, 45 ;
'?5
'?5
– 1%# ?# '1 % %1, 45 ;
7$5#F1
%1"
– 72q,, 70 .
– 1%# ?# '1 % %1, 45 ;
7$5#F1
– 72q,, 70 .
( %1 & 1&# ##< 5 , %1 - 1;
( %1 & 1&# ##< 5 , %1 - 1;
=& #!< 20 . ( %; 30 & 1%F&.
=& #!< 20 . ( %; 30 & 1%F&.
,# 1?, ! 1; =& % 1%F& %;G"
,# 1?, ! 1; =& % 1%F& %;G"
F1 ( 1000 %..) 1G ? #! 1,5–2 .
F1 ( 1000 %..) 1G ? #! 1,5–2 .
69
69
7.3.
()'# E--%/'#
7.3.
()'# E--%/'#
( "1!" ;" ; F&; 11#
( "1!" ;" ; F&; 11#
( #" ) %?'#< =F' '"
( #" ) %?'#< =F' '"
;" – "1?", ", '" %1" ;"
;" – "1?", ", '" %1" ;"
(H?
(H?
.,
1982).
#%11
'
"
;;<;
.,
1982).
#%11
'
"
;;<;
%1 ' . R1 ;1 %#E %1 ' . R1 ;1 %#E 1#; , ; !1# " 1G ';? #
1#; , ; !1# " 1G ';? #
'! ! //. , " %1E?< 1G %? '! ! //. , " %1E?< 1G %? ? !# // '#1 F1 , #?,
? !# // '#1 F1 , #?,
; 1# ' #" %#" &%, ; 1# ' #" %#" &%, G %? F1# 1# – #< ?&#<.
G %? F1# 1# – #< ?&#<.
%%!?
%G<E
%
%%!?
%G<E
%
=F' #" ;;<; ' . '111
=F' #" ;;<; ' . '111
" ! %! #%'. ' – = " ! %! #%'. ' – = !;
!;
F&;
,
;;<E;
1?<
%"
"
F&;
,
;;<E;
1?<
%"
"
%", '< ' " 1" .
%", '< ' " 1" .
' '<, '#; % 1%#" 36–42°C. @
' '<, '#; % 1%#" 36–42°C. @
1%#" 84–96°C ' ' ; %" %'!#< G? –
1%#" 84–96°C ' ' ; %" %'!#< G? –
«%;».
«%;».
RF'1
&?
'
';G
!&,
?)
1#<E
#!
';<
#.
(
RF'1
&?
'
';G
!&,
?)
1#<E
#!
';<
#.
(
&& ', %;<E '1 % ' ;, ' && ', %;<E '1 % ' ;, ' '1 F&#1" 1# (. 5).
'1 F&#1" 1# (. 5).
' #" ' %11 !
' #" ' %11 !
1#; 1 && ' ;< #
1#; 1 && ' ;< #
F. , &%!! 1#; 1# 1G
F. , &%!! 1#; 1# 1G
';? 0,6%-1 '1 % #, ! '& // 1G#
';? 0,6%-1 '1 % #, ! '& // 1G#
1#1 ; 1 5 %. @G? G #"&%!!"
1#1 ; 1 5 %. @G? G #"&%!!"
1# %! ' " //. ( 2%-1 '1 1# %! ' " //. ( 2%-1 '1 70
70
# ';<;, 1 '1, # ';<;, 1 '1, !1 " //. @-%# % 1%F& '#<, !1 " //. @-%# % 1%F& '#<, %, =F'1 1% 1,5% '1 0,5× #F.
%, =F'1 1% 1,5% '1 0,5× #F.
#4F# 5. RFF '1 F1 ;
#4F# 5. RFF '1 F1 ;
'; , GE1 '! ! ' (Sambrook et
'; , GE1 '! ! ' (Sambrook et
al., 1989).
al., 1989).
()'" #5#+>
" 5 (%, ")/4)
$# K#5$'" $*$*
(×103 -.$.)
()'" #5#+>
" 5 (%, ")/4)
$# K#5$'" $*$*
(×103 -.$.)
0,3
0,6
0,7
0,9
1,2
1,5
2,0
5–60
1–20
0,8–10
0,5–7
0,4–6
0,2–3
0,1–2
0,3
0,6
0,7
0,9
1,2
1,5
2,0
5–60
1–20
0,8–10
0,5–7
0,4–6
0,2–3
0,1–2
@ F& (F1 ) G %?
@ F& (F1 ) G %?
&? // #1" 1#. ; = & ?1 &? // #1" 1#. ; = & ?1 %; ' 1# G % '1 '!;1 //
%; ' 1# G % '1 '!;1 //
%;< %G % #1 %?1
%;< %G % #1 %?1
%G1 % 1 . ; ; = &
%G1 % 1 . ; ; = &
%?'#< , 5S , 1 # ' '1.
%?'#< , 5S , 1 # ' '1.
; ? 1 ! %; F1 '
; ? 1 ! %; F1 '
, %#! % E% ' %1
, %#! % E% ' %1
'1. , %1, F s,
'1. , %1, F s,
%#!<E; % E% '1 Hind III Eco RI -
%#!<E; % E% '1 Hind III Eco RI -
%'? 1.
%'? 1.
( ! #<E" % =F' #"
%?'#< 1F & (.6).
71
( ! #<E" % =F' #"
%?'#< 1F & (.6).
71
#4F# 6. @ ; J,, %?'#1 %
#4F# 6. @ ; J,, %?'#1 %
@-%# ?.
@-%# ?.
-$$'
4/>* 4Z $($#1 $F$'#F1
-$$'
4/>* 4Z $($#1 $F$'#F1
2% J,
20 1
0,04%
2% J,
20 1
0,04%
&
100 1
10%
&
100 1
10%
0,5/ R, 8,0
200 1
0,1 /
0,5/ R, 8,0
200 1
0,1 /
H2O
1 1
H2O
1 1
@ =F' ? )< 11 =1 (!;
@ =F' ? )< 11 =1 (!;
&&; 2 1/1) ; '#'& %# 1%F& J-
&&; 2 1/1) ; '#'& %# 1%F& J-
. ,# #!? G? J-#!: !1 1;! J- ()
. ,# #!? G? J-#!: !1 1;! J- ()
), 1 1?) '#) ### . @,
), 1 1?) '#) ### . @,
#<E % '1# 1 F1 16S , '<
#<E % '1# 1 F1 16S , '<
% J- 312 1 %; !# @-%# % J- 312 1 %; !# @-%# %1E?< 11!" =<&. ; =<& #
%1E?< 11!" =<&. ; =<& #
1 F1 ; %1E< ? % =%%F,
1 F1 ; %1E< ? % =%%F,
'1G< % –20q,, '1 &F##< 15 ?
'1G< % –20q,, '1 &F##< 15 ?
&F# % 11?" ". ,#%, GE @-
&F# % 11?" ". ,#%, GE @-
%#, < %?'#< ; ; ;.
%#, < %?'#< ; ; ;.
5'"$ #)'"# 6#$$1 50× 4/K#
5'"$ #)'"# 6#$$1 50× 4/K#
# 121 - ? 400 1 # 121 - ? 400 1 , %1); 1 1). ? 7,6
, %1); 1 1). ? 7,6
; ## , % ! ? 50 1 0,5/ R ( 8,0) ; ## , % ! ? 50 1 0,5/ R ( 8,0) K1 1 500 1. }? % +4°,. ! K1 1 500 1. }? % +4°,. ! 0,5× ; % % %?'1.
0,5× ; % % %?'1.
50×) &:
50×) &:
/ -&, 7,6,
/ -&, 7,6,
50 1/ R
50 1/ R
72
72
8
8
E-
D E-
D ; ; @-%# %; %?'? %'1
; ; @-%# %; %?'? %'1
. @'1 %; F1 %'1,
. @'1 %; F1 %'1,
GE ? ! %&, #! #
GE ? ! %&, #! #
(!E 1%&#) ! 1 ; & .
(!E 1%&#) ! 1 ; & .
) %?'#1 F1 Promega Fermentas. @-
) %?'#1 F1 Promega Fermentas. @-
%#, %#! %1E?< Taq -%1', %?'#<
%#, %#! %1E?< Taq -%1', %?'#<
! -. ; ; @-%#, %#!" ! -. ; ; @-%#, %#!" %1E?< -%1' %&1 ;1, %
%1E?< -%1' %&1 ;1, %
1; %1;< ; #%! ;. G 1
1; %1;< ; #%! ;. G 1
1 %1#E . %1, #! -
1 %1#E . %1, #! -
; 1%F&#< 1? 1G %?'? &<
; 1%F&#< 1? 1G %?'? &<
;, ' %? !, % =1 ! ,
;, ' %? !, % =1 ! ,
GE" %'1# , ?# 30 60% E !
GE" %'1# , ?# 30 60% E !
)" . ( #! #% ; "1 ;'?
)" . ( #! #% ; "1 ;'?
%? !# @-%#, % =1 ! ,
%? !# @-%#, % =1 ! ,
GE" %'1# #G , #!;.
GE" %'1# #G , #!;.
8.1.
5"#$ E--%/'" ) - $F#
; ;
@-%#, GE" F1 16S
8.1.
5"#$ E--%/'" ) - $F#
; ;
@-%#, GE" F1 16S
, %?'#< %'1 123 (ClonTech), pGEM-AT
, %?'#< %'1 123 (ClonTech), pGEM-AT
(Promega), pJET-AT (Fermentas). ( &< # 50 %'1 (Promega), pJET-AT (Fermentas). ( &< # 50 %'1 1–3 1 !E @-%#. * %; 10 1
1–3 1 !E @-%#. * %; 10 1
& 1, GE ' #F 1 . . 4 -'
& 1, GE ' #F 1 . . 4 -'
#<E F1-%';. ,1? ##< 12 24
#<E F1-%';. ,1? ##< 12 24
! % 14q, %?'#< ; F1&.
! % 14q, %?'#< ; F1&.
73
73
8.2.
5"#$ E--%/'" ) '/-> $F#
GeneJETTM
8.2.
5"#$ E--%/'" ) '/-> $F#
GeneJETTM
PCR Cloning Kit 1% Fermentas
PCR Cloning Kit 1% Fermentas
%'! ; #% ;. @-%# #%1 &1,
%'! ; #% ;. @-%# #%1 &1,
%#!1 %1E?< #<E" -%1', 1# ?
%#!1 %1E?< #<E" -%1', 1# ?
'# G 1 ; ; pJET/blunt. @-
'# G 1 ; ; pJET/blunt. @-
%# 3'-A #%<E1 &1, %#! %1E?< Taq -
%# 3'-A #%<E1 &1, %#! %1E?< Taq -
%1'
%1'
#1
1?1
-%1'1,
#1
1?1
-%1'1,
'#%;<; %1E?< =FF 1? F1
'#%;<; %1E?< =FF 1? F1
-blunding (1? F1 j -%1' I
-blunding (1? F1 j -%1' I
E.coli) % 1. & #F ; = &
E.coli) % 1. & #F ; = &
%1' ; & «'#%;» &, ; &
%1' ; & «'#%;» &, ; &
;. %1? 1; ) : – 3:1.
;. %1? 1; ) : – 3:1.
&<
«'#%;»
&
@-%#,
%#!"
&<
«'#%;»
&
@-%#,
%#!"
%1E?< Taq -%1', %; '1 #F, %;11
%1E?< Taq -%1', %; '1 #F, %;11
F1-%'1, ;< 1–2 1 !E @-%# 1
F1-%'1, ;< 1–2 1 !E @-%# 1
1
1
F1
DNA-blunding.
,1?
E?
%1)<,
F1
DNA-blunding.
,1?
E?
%1)<,
&F##< 3–5 ##< % 1%# 70°, ! 5
&F##< 3–5 ##< % 1%# 70°, ! 5
. "G< ?# ? # '# G ; &<
. "G< ?# ? # '# G ; &<
;, ;; 50 pJET/blunt 1 1 4 -'.
;, ;; 50 pJET/blunt 1 1 4 -'.
&#< 1? E? %1)<, &F##< 3–5 &#< 1? E? %1)<, &F##< 3–5 ##< 30 % 1 1%# (22°,). @ = 1?
##< 30 % 1 1%# (22°,). @ = 1?
1G %?'? ; F1& E.coli.
1G %?'? ; F1& E.coli.
74
74
9
9
=E Escherichia coli
=E Escherichia coli
9.1.
9.1.
5'"$ -'$'$>6 '
5'"$ -'$'$>6 '
1% E.coli ()11 Inv’, JM-109, XL-1) ;
1% E.coli ()11 Inv’, JM-109, XL-1) ;
F1& %#!<, %?'#; 1# F1& CaCl2-
F1& %#!<, %?'#; 1# F1& CaCl2-
'1" (Sambrook et al., 1989). E.coli %G< '1" (Sambrook et al., 1989). E.coli %G< "; "? !)" 11? /9. ; %#!;
"; "? !)" 11? /9. ; %#!;
! #?# 2–3 ? '< 50 1 SOB ! #?# 2–3 ? '< 50 1 SOB 7
##< 4–7×10 G'%" 1 1 %
##< 4–7×107 G'%" 1 1 %
%;1 %1). ; %; G'%"
%;1 %1). ; %; G'%"
%?'#< 1 J-2-}* 4.2 (;). L!;
%?'#< 1 J-2-}* 4.2 (;). L!;
%! % G'%" , "
%! % G'%" , "
E< 1# ; %; 1%" , !
E< 1# ; %; 1%" , !
'; )11, %?'#1 . (G1 #1
'; )11, %?'#1 . (G1 #1
;;; %?' % , 1 ;;; %?' % , 1 %' F1! F' . )11 Inv’ JM-109
%' F1! F' . )11 Inv’ JM-109
E< % 37q, %! % 0,22–0,3 ( 590
E< % 37q, %! % 0,22–0,3 ( 590
1, < 1 1), )11 XL-1 E< % 18–25q, 1, < 1 1), )11 XL-1 E< % 18–25q, %! % 0,6–1,0.
%! % 0,6–1,0.
%&# 1 E.coli %; ?#. 1%
%&# 1 E.coli %; ?#. 1%
1G ? ?)1 K1 (100–200 1), '1G? 1G ? ?)1 K1 (100–200 1), '1G? "? % –70º,. ";< %? F1& "? % –70º,. ";< %? F1& ! . '1G "? , " 1G
! . '1G "? , " 1G
? 1!" (1,5 1) %?'? ; F1& ? 1!" (1,5 1) %?'? ; F1& ? %;.
? %;.
5'"$ -'$'$>6 ' %1 6#$$1
5'"$ -'$'$>6 ' %1 6#$$1
@ G; #1 %! % (250 1
@ G; #1 %! % (250 1
) "G< ! 10 1 ; &F##< 15
) "G< ! 10 1 ; &F##< 15
75
75
&F# ,-6 (;) % 3000 / 4º,. @
&F# ,-6 (;) % 3000 / 4º,. @
&F#; ?" #;" #% <, &F#; ?" #;" #% <, %1< 80 1 "G1 ?# ( #F (10 1/ MOPS, 55 1/
%1< 80 1 "G1 ?# ( #F (10 1/ MOPS, 55 1/
MnCl2, 15 1/ CaCl2, 250 1/ KCl), G< 10 ; MnCl2, 15 1/ CaCl2, 250 1/ KCl), G< 10 ; &F##< 15 % !" #;". ,#% <,
&F##< 15 % !" #;". ,#% <,
#%#< 20 1 ( #F , 1 %1);,
#%#< 20 1 ( #F , 1 %1);,
;< /, ! && 7%, ##< 10 ;< /, ! && 7%, ##< 10 ; . 1#; /, ;? %1, G '
; . 1#; /, ;? %1, G '
G; ; 15 . L1 !#< 1#
G; ; 15 . L1 !#< 1#
';< % 200 1, '1G< "; % –70º,.
';< % 200 1, '1G< "; % –70º,.
5'"$ -'$'$>6 ' 4+ +##?"#$1
5'"$ -'$'$>6 ' 4+ +##?"#$1
!#< #%'< (1,5 1) "G< 10–15 ?#,
!#< #%'< (1,5 1) "G< 10–15 ?#,
&F##< ? &F# 30 (10000 /).
&F##< ? &F# 30 (10000 /).
,#% <, , 1; %1);, %1< 500 1
,#% <, , 1; %1);, %1< 500 1
"G TB #F ##< 10–15 . !#< #%'<
"G TB #F ##< 10–15 . !#< #%'<
? &F##< 30 (10000 /), #%#< 120 1 TB
? &F##< 30 (10000 /), #%#< 120 1 TB
#F, G ;< % 4,2 1 /, E# #%',
#F, G ;< % 4,2 1 /, E# #%',
G; 1? G ' % 15 ?#.
G; 1? G ' % 15 ?#.
3$ 9 (Sambrook et al., 1989)
3$ 9 (Sambrook et al., 1989)
0,6 Na2HPO4
0,6 Na2HPO4
0,3 KH2PO4
0,3 KH2PO4
0,05 NaCl
0,05 NaCl
0,1 NH4Cl
0,1 NH4Cl
1,5 1,5 ( 100 1
( 100 1
,'#<; ? ;<; ?" #;":
,'#<; ? ;<; ?" #;":
0,2 1 1/ MgSO4
0,2 1 1/ MgSO4
0,1 1 1/ CaCl2
0,1 1 1/ CaCl2
1 1 20% <'
1 1 20% <'
76
76
SOB (Sambrook et al., 1989)
SOB (Sambrook et al., 1989)
1 %
1 %
0,25 GG =
0,25 GG =
250 1 2/ NaCl
250 1 2/ NaCl
62,5 1 2/ KCl
62,5 1 2/ KCl
( 50 1
( 50 1
? '#<; ;<; ?" #;":
? '#<; ;<; ?" #;":
0,5 1 1/ MgCl2
0,5 1 1/ MgCl2
0,5 1 1/ MgSO4
0,5 1 1/ MgSO4
9.2.
-"* _ )4)'"$$ '#$)K#F1
; F1& G#< %# 1%1 1
;<
%
3
1
'
1,
E?
%1)<,
9.2.
-"* _ )4)'"$$ '#$)K#F1
; F1& G#< %# 1%1 1
;<
%
3
1
'
1,
E?
%1)<,
G< 30 ; % = %; «% )»:
G< 30 ; % = %; «% )»:
% ##< ; % 42q, 90 , % ! '# G
% ##< ; % 42q, 90 , % ! '# G
"G< ?# ! 2 G#< %# ;< % 800
"G< ?# ! 2 G#< %# ;< % 800
1 SOC. ; «G;» , 1 ; ;
1 SOC. ; «G;» , 1 ; ;
! , #%'< ##< 45–60 % 37q,. ; -
! , #%'< ##< 45–60 % 37q,. ; -
# , %#!" % F1& # , %#!" % F1& ' 1?< % -;, < !) @ ' 1?< % -;, < !) @ LB, GE 20 1/1 1%& 0,0005% X-gal.
LB, GE 20 1/1 1%& 0,0005% X-gal.
; % #% ; pJET/blunt ; % #% ; pJET/blunt < !) @ LB, GE 20 1/1
< !) @ LB, GE 20 1/1
1%&. ) 1, #1 #! ##< !? % 37q,.
1%&. ) 1, #1 #! ##< !? % 37q,.
SOC (Sambrook et al., 1989)
SOC (Sambrook et al., 1989)
50 1 c SOB
50 1 c SOB
( ?" #;" ;< 0,5 1 20% <'
( ?" #;" ;< 0,5 1 20% <'
77
77
LB (Sambrook et al., 1989)
LB (Sambrook et al., 1989)
0,5 GG =
0,5 GG =
1 %
1 %
1 NaCl
1 NaCl
1,5 1,5 ( 100 1
( 100 1
9.3.
1#1 )F1 $", )%?#B6 ")'#"/
9.3.
1#1 )F1 $", )%?#B6 ")'#"/
E--%/'#
E--%/'#
, %#!" % -;, %; 11
, %#!" % -;, %; 11
«-#» (Sambrook et al., 1989). < «-#» (Sambrook et al., 1989). < &, %'#1;, ! # %'1# .
&, %'#1;, ! # %'1# .
GeneJETTM PCR Cloning Kit 1% Fermentas ; #%
GeneJETTM PCR Cloning Kit 1% Fermentas ; #%
; – = 1 =FF %G? &
; – = 1 =FF %G? &
F1 ? =#' &.
F1 ? =#' &.
* F1 #1 %G ' =
* F1 #1 %G ' =
? . ( =1 #! ) # %'1# ? . ( =1 #! ) # %'1# .
.
78
78
10
10
D
D
( %'1 %; 11 E! '. ;
( %'1 %; 11 E! '. ;
= E< G LB 1%&1 % 37°, = E< G LB 1%&1 % 37°, ! !. !#< 1# "G< 15–20 "?,
! !. !#< 1# "G< 15–20 "?,
&F##< #%#< 100 1 #F ß-/ (.7).
&F##< #%#< 100 1 #F ß-/ (.7).
#4F# 7. @ ! #F ß-1%=1.
#4F# 7. @ ! #F ß-1%=1.
-$$'
4/>* 4Z $($#1 $F$'#F1
-$$'
4/>* 4Z $($#1 $F$'#F1
1/ -HCl, pH 8,0
2 1
20 1/ -HCl, pH 8,0
1/ -HCl, pH 8,0
2 1
17,8 / ß-1%= 56 1
10 1/ ß-1%=
17,8 / ß-1%= 56 1
10 1/ ß-1%=
0,5/ R, 8,0
0,4 1
2 1/ R, 8,0
0,5/ R, 8,0
0,4 1
2 1/ R, 8,0
H2O
100 1 1 H2O
100 1 1 20 1/ -HCl, pH 8,0
;< 2 1 = G #F '&11 (&&; 5 1/1) ;< 2 1 = G #F '&11 (&&; 5 1/1) 1 1 1% }-100 ( ). ,1? ##< 30 ?#.
1 1 1% }-100 ( ). ,1? ##< 30 ?#.
;< 200 1 1% SDS 0,2/ NaOH ##< E 15 %
;< 200 1 1% SDS 0,2/ NaOH ##< E 15 %
1 1%#. ;< 150 1 3/ & ; ( 4,8–5,0),
1 1%#. ;< 150 1 3/ & ; ( 4,8–5,0),
G< 1 ! ?#, &F##< 5 % 12000 /, G< 1 ! ?#, &F##< 5 % 12000 /, #;< %!. #%# ;< 900 1 < =,
#;< %!. #%# ;< 900 1 < =,
G< 1–2 ! % –20°,, &F##< 5 (12000 /),
G< 1–2 ! % –20°,, &F##< 5 (12000 /),
!#< G? #;<. ;< 100 1 ,
!#< G? #;<. ;< 100 1 ,
;< 100 1 5/ LiCl 50 1/ -HCl (pH 8,0) ##< 15 ;< 100 1 5/ LiCl 50 1/ -HCl (pH 8,0) ##< 15 ?#. &F##< 5 ? &F# (12000
?#. &F##< 5 ? &F# (12000
/), #% %; #< %#, ;< 500 1
/), #% %; #< %#, ;< 500 1
< = G< %'1#< 1–2 ! % –20°,.
< = G< %'1#< 1–2 ! % –20°,.
&F##< 5 (12000 /), #% <, &F##< 5 (12000 /), #% <, ;< 50 1 #F.
;< 50 1 #F.
79
79
@'1;
?)
,
!
;
1
=1
11,
G
?
,
%=1#
@'1;
?)
,
!
;
1
=1
11,
G
?
,
%=1#
1%F&< F1 # %? #?"
1%F&< F1 # %? #?"
%'1" %1". 1 , %'1; 1G ?
%'1" %1". 1 , %'1; 1G ?
%?' ; , GE" #, &1
%?' ; , GE" #, &1
'1.
'1.
x
; ?) ! 1
x
; ?) ! 1
%?'#1 1 «%;!;» . ; = 1# %?'#1 1 «%;!;» . ; = 1# " %; % =%%F, GE 20 1
" %; % =%%F, GE 20 1
20 1/ -HCl (pH 7,5), #%'< %;; 5 , '1
20 1/ -HCl (pH 7,5), #%'< %;; 5 , '1
'1G<. ' % &F#; (15 , 12000
'1G<. ' % &F#; (15 , 12000
/) 1G '# %?'? ! 1& %1'
/) 1G '# %?'? ! 1& %1'
&% & %'1" %1".
&% & %'1" %1".
x
; , GE" #, %; @ x
; , GE" #, %; @ 1 1 ' «%;!"» , %?'#; %1, 1%1
1 1 ' «%;!"» , %?'#; %1, 1%1
%&F!1 #!1 %'1 . ,## %1
%&F!1 #!1 %'1 . ,## %1
'; , %?'#1 ; ; @-%#, "
'; , %?'#1 ; ; @-%#, "
"1 #!;? #<E1 %. ; &
"1 #!;? #<E1 %. ; &
#<E:
#<E:
94q, – 2 (1 &),
94q, – 2 (1 &),
92q, – 45 , 55q, – 45 , 72q, – 60 (2–30 &),
92q, – 45 , 55q, – 45 , 72q, – 60 (2–30 &),
72q, – 15 (31 &).
72q, – 15 (31 &).
@#! %# & '#< =F'1 1,5%
@#! %# & '#< =F'1 1,5%
'1 . @ ); ; 11 =1 %,
'1 . @ ); ; 11 =1 %,
#<E % '11 1 F1 16S , '<
#<E % '11 1 F1 16S , '<
'1G<. ; =<& # 1 ;
'1G<. ; =<& # 1 ;
&F##<, G? < %?'#< ; ;,
&F##<, G? < %?'#< ; ;,
& ' '&.
& ' '&.
80
80
D
1.
2.
3.
4.
3" .5., " 5.G., " .., J%K" .*., RK"
1.
.). ( '' #" 1'1 '
, ; % %?;1 16S // . .
, ; % %?;1 16S // . .
1996. . 348. •5. ,. 692-695.
1996. . 348. •5. ,. 692-695.
3" .5., &" 0.0., " .G., " 5.G.,
2.
J%K" .*. } ''; 1 E
E ' // /;. 2003. . 72. •2. ,. 239-
E ' // /;. 2003. . 72. •2. ,. 239-
249.
249.
3" .5. 1! '' 1 E
3.
3" .5. 1! '' 1 E
E ' // F. . … . . #.
E ' // F. . … . . #.
(: (H, 2004. 20 .
(: (H, 2004. 20 .
3" .5., &" 0.0., " ., ) .., # .
?
1
E
4.
;!
3" .5., &" 0.0., " ., ) .., # .
''
?
1
E
;!
! ? ('. ) // $'; (;
! ? ('. ) // $'; (;
!;). 2005. . 32. •6. ,. 664–671.
!;). 2005. . 32. •6. ,. 664–671.
3" .5., #U .0., !" .0. /#;-!;
%
%
5.
barkhanus
Spironucleus
3" .5., #U .0., !" .0. /#;-!;
&;
%
%
barkhanus
Spironucleus
(Diplomonadida: Hexamitidae) !1 ?1 "# (Thymallus
(Diplomonadida: Hexamitidae) !1 ?1 "# (Thymallus
arcticus
arcticus
baikalensis
Dybowski,
1874)
//
$';
.
,;
!;. 2008. .35. •2. ,. 253–256.
1#;-!
baikalensis
Dybowski,
1874)
//
$';
.
,;
!;. 2008. .35. •2. ,. 253–256.
3" .5., #U .0., !" .0., V" .). %&;
1
7.
3" .5., &" 0.0., " .G., " 5.G.,
J%K" .*. } ''; 1 E
&;
6.
3" .5., " 5.G., " .., J%K" .*., RK"
.). ( '' #" 1'1 '
''
5.
D
'
;
6.
'#!;
3" .5., #U .0., !" .0., V" .). %&;
1
1#;-!
'
;
'#!;
1'1, &" 1 // ; #"
1'1, &" 1 // ; #"
. 2008. •2, ,. 91–94.
. 2008. •2, ,. 91–94.
R3 W., 34 R., 0 5. RF' '
!" 11#. /.: /. 1982. 448.
83
7.
R3 W., 34 R., 0 5. RF' '
!" 11#. /.: /. 1982. 448.
83
8.
9.
RK" .)., #" .X., Y" .). / ;
8.
RK" .)., #" .X., Y" .). / ;
!E ; %?'; %1' &%
!E ; %?'; %1' &%
& // /#;; ;. 2006. . 40. • 1. ,. 180–183.
& // /#;; ;. 2006. . 40. • 1. ,. 180–183.
"
5.G.,
3"
.5.,
!"
..,
J%K"
.*.
9.
"
5.G.,
3"
.5.,
!"
..,
J%K"
.*.
'' '!" #" <G '' '!" #" <G ' , ; % %?;1 16S //
' , ; % %?;1 16S //
/;. 1999. . 68. •4. ,. 475-483.
/;. 1999. . 68. •4. ,. 475-483.
10. 5" .)., 3" .5., &" 0.0. @
10. 5" .)., 3" .5., &" 0.0. @
% % '. //
% % '. //
/;. 2007. . 76. •4. ,. 545–551.
/;. 2007. . 76. •4. ,. 545–551.
11. 53U . H. /.: /. 1987. 544 .
11. 53U . H. /.: /. 1987. 544 .
12. ., *K W., ' Z. / ! G.
12. ., *K W., ' Z. / ! G.
/#; . /.: /. 1984. 480 .
13. 4" 5.. $# ! 1. .1: H; ; G;. /.: #. 2004. 526 .
/#; . /.: /. 1984. 480 .
13. 4" 5.. $# ! 1. .1: H; ; G;. /.: #. 2004. 526 .
14. :" .0., 3" .5., 5" .)., !" .0. %&;
14. :" .0., 3" .5., 5" .)., !" .0. %&;
1#;-!" 1 ; '#!; 1!
1#;-!" 1 ; '#!; 1!
''; 1" E, &" 1F1 //
''; 1" E, &" 1F1 //
; #" . 2009. •1. ,. 102-111.
; #" . 2009. •1. ,. 102-111.
15. Y" .. H!;
G;: !-%! %.
: ,.#.'-. 2004. 496 .
15. Y" .. H!;
G;: !-%! %.
: ,.#.'-. 2004. 496 .
16. Amann R.I., Binder B.J., Olson R.J., Chisholm S.W., Devereux R., Stahl D.A.
16. Amann R.I., Binder B.J., Olson R.J., Chisholm S.W., Devereux R., Stahl D.A.
Combination of 16S rRNA-targeted oligonucleotide probes with flow
Combination of 16S rRNA-targeted oligonucleotide probes with flow
cytometry for analyzing mixed microbial populations // Appl. Environ.
cytometry for analyzing mixed microbial populations // Appl. Environ.
Mikrobiol. 1990a.Vol. 56. P.1919- 1925.
Mikrobiol. 1990a.Vol. 56. P.1919- 1925.
17. Amann R.I., Krmuholz L., Stahl D.A. Fluorescent oligonucleotide probing of
17. Amann R.I., Krmuholz L., Stahl D.A. Fluorescent oligonucleotide probing of
whole cells for determinative, phylogenetic and environmental studies in
whole cells for determinative, phylogenetic and environmental studies in
microbiology// J.Bacteriol. 1990b. Vol. 172. P.762 – 770.
microbiology// J.Bacteriol. 1990b. Vol. 172. P.762 – 770.
84
84
18. Amann R.I., Ludwig W., Schleifer K.H. Phylogenetic identification and in situ
18. Amann R.I., Ludwig W., Schleifer K.H. Phylogenetic identification and in situ
detection of individual microbial cells without cultivation // Microbiological
detection of individual microbial cells without cultivation // Microbiological
Reviews. 1995. Vol. 59. P. 143 – 169.
Reviews. 1995. Vol. 59. P. 143 – 169.
19. Anzai Y., Kim H., Park J.-Y., Wakabayashi H., Oyaizu H. Phylogenetic
19. Anzai Y., Kim H., Park J.-Y., Wakabayashi H., Oyaizu H. Phylogenetic
affiliation of the pseudomonads based on 16S rRNA sequence // Int. J. Syst.
affiliation of the pseudomonads based on 16S rRNA sequence // Int. J. Syst.
Evol. Mikrobiol. 2000. Vol. 50. P. 1563 – 1589.
Evol. Mikrobiol. 2000. Vol. 50. P. 1563 – 1589.
20. Bahr M., Hobbie J. E., Sogin M.L. Bacterial diversity in an arctic lake a
20. Bahr M., Hobbie J. E., Sogin M.L. Bacterial diversity in an arctic lake a
freshwater SAR 11 cluster // Aquat. Mikrob. Ecol. 1996. Vol. 11. P. 271 –
freshwater SAR 11 cluster // Aquat. Mikrob. Ecol. 1996. Vol. 11. P. 271 –
277.
277.
21. Blackstone G.M., Nordstrom J.L., Vickery M.C.L., Bowen M.D., Meyer R.F.,
21. Blackstone G.M., Nordstrom J.L., Vickery M.C.L., Bowen M.D., Meyer R.F.,
DePaola A. Detection of pathogenic Vibrio parahaemolyticus in oyster
DePaola A. Detection of pathogenic Vibrio parahaemolyticus in oyster
enrichments by real time PCR // J. Microbiol. Methods. 2003. Vol.53. P. 149–
enrichments by real time PCR // J. Microbiol. Methods. 2003. Vol.53. P. 149–
155.
155.
22. Borneman J., Triplett E.W. Molecular microbial diversity in soils from
22. Borneman J., Triplett E.W. Molecular microbial diversity in soils from
Eastern Amazonia: evidence for unusual microorganisms and microbial
Eastern Amazonia: evidence for unusual microorganisms and microbial
population shifts associated with deforestation // Appl. Environ. Microbiol.
population shifts associated with deforestation // Appl. Environ. Microbiol.
1997. Vol. 63. P. 2647 – 2653.
1997. Vol. 63. P. 2647 – 2653.
23. Bruce I.J. Nucleic acid amplification mediated microbial identification //
Science Progress. 1993. Vol. 77. P. 183 – 206.
23. Bruce I.J. Nucleic acid amplification mediated microbial identification //
Science Progress. 1993. Vol. 77. P. 183 – 206.
24. Chandler D.P., Fredrickson J.K., Brockman F.J. Effect of PCR template
24. Chandler D.P., Fredrickson J.K., Brockman F.J. Effect of PCR template
concentration on the composition and distribution of total community 16S
concentration on the composition and distribution of total community 16S
rDNA clone libraries // Mol. Ecol. 1997.Vol. 6. P. 475 – 482.
rDNA clone libraries // Mol. Ecol. 1997.Vol. 6. P. 475 – 482.
25. Courtois S., Cappellano C.M., Ball M., Francou F. –X., Normand P., Helynck
25. Courtois S., Cappellano C.M., Ball M., Francou F. –X., Normand P., Helynck
G., Martinez A., Kolvek S.J., Hopke J., Osburne M.S., August P.R., Nalin R.,
G., Martinez A., Kolvek S.J., Hopke J., Osburne M.S., August P.R., Nalin R.,
Guerineau M., Jeannin P., Simonet P., Pernodet J.–L. Recombinant
Guerineau M., Jeannin P., Simonet P., Pernodet J.–L. Recombinant
environmental libraries provide access to microbial diversity for drug
environmental libraries provide access to microbial diversity for drug
discovery from natural products // Appl. Environ. Microbiol. 2003. Vol. 69. P.
discovery from natural products // Appl. Environ. Microbiol. 2003. Vol. 69. P.
49 – 55.
49 – 55.
85
85
26. DeLong E.F., Wickham G.S., Pace N.R. Phylogenetic stains: ribosomal RNA
26. DeLong E.F., Wickham G.S., Pace N.R. Phylogenetic stains: ribosomal RNA
– based probes for the identification of single cells // Science. 1989. Vol. 243.
– based probes for the identification of single cells // Science. 1989. Vol. 243.
P. 1360 – 1363.
P. 1360 – 1363.
27. Ehrich S., Behrens D., Lebedeva H., Ludwig W., Bock E.J. A new obligately
27. Ehrich S., Behrens D., Lebedeva H., Ludwig W., Bock E.J. A new obligately
chemolithoautotrophic, nitrite – oxidizing bacterium, Nitrospira moscoviensis
chemolithoautotrophic, nitrite – oxidizing bacterium, Nitrospira moscoviensis
sp. nov. and its phylogenetic relationship // Arch.. Microbiol. 1995. Vol. 164.
sp. nov. and its phylogenetic relationship // Arch.. Microbiol. 1995. Vol. 164.
P. 16 - 23.
P. 16 - 23.
28. Ellis R.J., Morgan P., Weightman A.J., Fry J.C. Cultivation – dependent and –
28. Ellis R.J., Morgan P., Weightman A.J., Fry J.C. Cultivation – dependent and –
independent approaches for determining bacterial diversity in heavy – metal –
independent approaches for determining bacterial diversity in heavy – metal –
contaminated soil // Appl. Environ. Microbiol. 2003. Vol. 69.P. 3223 -3230.
contaminated soil // Appl. Environ. Microbiol. 2003. Vol. 69.P. 3223 -3230.
29. Fang Q., Brockmann S., Botyzenhart K., Wiedenmann A. Improved detection
29. Fang Q., Brockmann S., Botyzenhart K., Wiedenmann A. Improved detection
of Salmonella spp. In food by fluorescent in situ hybridization with 23S rRNA
of Salmonella spp. In food by fluorescent in situ hybridization with 23S rRNA
probes: a comparison with conventional culture methods // J. Food Prot.
probes: a comparison with conventional culture methods // J. Food Prot.
2003.Vol. 66. P. 723 – 731.
2003.Vol. 66. P. 723 – 731.
30. Garcia – Martinez J., Acinas S.G., Anton A.I., Rodriges -Valera F. Use of the
30. Garcia – Martinez J., Acinas S.G., Anton A.I., Rodriges -Valera F. Use of the
16S – 23S ribosomal genes spacer region in studies of prokaryotic diversity //
16S – 23S ribosomal genes spacer region in studies of prokaryotic diversity //
J. Microbiol. Methods. 1999. Vol. 36. P. 55 – 64.
J. Microbiol. Methods. 1999. Vol. 36. P. 55 – 64.
31. Giovannoni S.J., Turner S., Olsen G.J., Barns S., Lane D.J., Pace N.R.
31. Giovannoni S.J., Turner S., Olsen G.J., Barns S., Lane D.J., Pace N.R.
Evolutionary relationships among cyanobacteria and green chloroplasts //
Evolutionary relationships among cyanobacteria and green chloroplasts //
Bacteriol. 1988a. Vol. 170.P. 3584 – 3592.
Bacteriol. 1988a. Vol. 170.P. 3584 – 3592.
32. Giovannoni S.J., DeLong E.F, Olsen G.J., Pace N.R. Phylogenetic group –
32. Giovannoni S.J., DeLong E.F, Olsen G.J., Pace N.R. Phylogenetic group –
specific oligodeoxynucleotide probes for identification of single microbial
specific oligodeoxynucleotide probes for identification of single microbial
cells // J. Bacteriol. 1988b. Vol. 170. P. 720 – 726.
cells // J. Bacteriol. 1988b. Vol. 170. P. 720 – 726.
33. Giovannoni S.J., Britschgi T.B., Moyer C.L., Field K.G. Genetic diversity in
Sargasso Sea bacterioplankton // Nature. 1990. Vol. 345.P. 60 – 63.
33. Giovannoni S.J., Britschgi T.B., Moyer C.L., Field K.G. Genetic diversity in
Sargasso Sea bacterioplankton // Nature. 1990. Vol. 345.P. 60 – 63.
34. Gloeckner F.O., Amann R., Alfreider A., Pernthaler J., Psenner R., Trebesius
34. Gloeckner F.O., Amann R., Alfreider A., Pernthaler J., Psenner R., Trebesius
K., Schleifer K.–H. An in situ hybridization protocol for detection and
K., Schleifer K.–H. An in situ hybridization protocol for detection and
identification of planktonic bacteria // Syst. Appl. Microbiol. 1996. Vol. 19. P.
identification of planktonic bacteria // Syst. Appl. Microbiol. 1996. Vol. 19. P.
403 – 406.
403 – 406.
86
86
35. Gloeckner F.O., Fuchs B.M., Amann R. Bacterioplankton compositions of
35. Gloeckner F.O., Fuchs B.M., Amann R. Bacterioplankton compositions of
lakes and oceans: a first comparison based on fluorescence in situ
lakes and oceans: a first comparison based on fluorescence in situ
hybridization // Appl. Environ. Microbiol. 1999. Vol. 65. P. 3721 – 3726.
hybridization // Appl. Environ. Microbiol. 1999. Vol. 65. P. 3721 – 3726.
36. Glockner O., Zaichikov E., Belkova N., Denissova L., Pernthaler A., Amann
36. Glockner O., Zaichikov E., Belkova N., Denissova L., Pernthaler A., Amann
R. Comparative 16S rRNA analysis of lake bacterioplankton reveals globally
R. Comparative 16S rRNA analysis of lake bacterioplankton reveals globally
distributed
distributed
phylogenetic
clusters
including
an
abundant
group
of
phylogenetic
clusters
including
an
abundant
group
of
Actinobacteria // Appl. Environ. Microbiol. 2000. Vol. 66. P. 5053 – 5065.
Actinobacteria // Appl. Environ. Microbiol. 2000. Vol. 66. P. 5053 – 5065.
37. Gray N.D., Head I.M. Linking genetic identity and function in communities of
37. Gray N.D., Head I.M. Linking genetic identity and function in communities of
uncultured bacteria // environ. Microbiol. 2001. Vol. 3. P.481 – 492.
uncultured bacteria // environ. Microbiol. 2001. Vol. 3. P.481 – 492.
38. Henz S.R., Huson D.H., Auch A.F., Nieselt – Struwe K., Schuster S.C. Whole
38. Henz S.R., Huson D.H., Auch A.F., Nieselt – Struwe K., Schuster S.C. Whole
– genome prokaryotic phylogeny // Bioinformatics. 2004.doi: 10.1093 /
– genome prokaryotic phylogeny // Bioinformatics. 2004.doi: 10.1093 /
bioinformatics / bth 324.
bioinformatics / bth 324.
39. Holt L.J., Herring C., Jespers L.S., Woolven B.P. Domain antibodies: Proteins
for thearapy // Trends Biotechnol. 2003. Vol.21. P.484-490.
39. Holt L.J., Herring C., Jespers L.S., Woolven B.P. Domain antibodies: Proteins
for thearapy // Trends Biotechnol. 2003. Vol.21. P.484-490.
40. Huang C.Y., Garcia J.L., Patel B.K., Cayol J.L., Baresi L., Mah R.A.
40. Huang C.Y., Garcia J.L., Patel B.K., Cayol J.L., Baresi L., Mah R.A.
Salinivibrio costicola subsp. vallismortis subsp.nov., a halotolerant facultative
Salinivibrio costicola subsp. vallismortis subsp.nov., a halotolerant facultative
anaerobe from Death Valley, and emended description of Salinivibrio
anaerobe from Death Valley, and emended description of Salinivibrio
costicola // Int.J. Syst. Evol. Microbiol. 2000.Vol. 50.P. 615 – 622.
costicola // Int.J. Syst. Evol. Microbiol. 2000.Vol. 50.P. 615 – 622.
41. Kita–Tsukamoto K., Oyaizu H., Nanba K., Simidu U. Phylogenetic
41. Kita–Tsukamoto K., Oyaizu H., Nanba K., Simidu U. Phylogenetic
relationshipc of marine bacteria, mainly members of the family Vibrionaceae,
relationshipc of marine bacteria, mainly members of the family Vibrionaceae,
determined on the basis of 16S rRNA sequences // Int. J.Syst. Bacteriol. 1993.
determined on the basis of 16S rRNA sequences // Int. J.Syst. Bacteriol. 1993.
Vol. 43. P. 8 – 19.
Vol. 43. P. 8 – 19.
42. Kramer K., Hock B. Recombinant antibodies for environmental analysis //
Anal.Bioanal.Chem. 2003. Vol.377. P.417-426.
42. Kramer K., Hock B. Recombinant antibodies for environmental analysis //
Anal.Bioanal.Chem. 2003. Vol.377. P.417-426.
43. Kuske C.R., Barns S.M., Busch J.D. Diverse unculrivated bacterial groups
43. Kuske C.R., Barns S.M., Busch J.D. Diverse unculrivated bacterial groups
from soils of the arid southwestern United States that are present in many
from soils of the arid southwestern United States that are present in many
geographic regions // Appl. Environ.Microbiol.1997. Vol. 63.P. 3614 – 3621.
geographic regions // Appl. Environ.Microbiol.1997. Vol. 63.P. 3614 – 3621.
44. Lane D.J., Stahl D.A., Olsen G.J., Heller D.J., Pace N.R. Phylogenetic
44. Lane D.J., Stahl D.A., Olsen G.J., Heller D.J., Pace N.R. Phylogenetic
analysis of the genera Thiobacillus and Thiomicrospira by 5S rRNA
analysis of the genera Thiobacillus and Thiomicrospira by 5S rRNA
sequences // J. Bacteriol. 1985. Vol. 163. P. 75 – 81.
sequences // J. Bacteriol. 1985. Vol. 163. P. 75 – 81.
87
87
45. Lecerf J.-M., Shirley T.L., Zhu Q. et al. Human single-chain Fv intrabodies
45. Lecerf J.-M., Shirley T.L., Zhu Q. et al. Human single-chain Fv intrabodies
counteract in situ huntingtin aggregation in cellular models of Huntington,s
counteract in situ huntingtin aggregation in cellular models of Huntington,s
disease // Ibid., 2001. Vol.98. P.4764-4769.
disease // Ibid., 2001. Vol.98. P.4764-4769.
46. Ludwig W., Bauer M., Held I., Kirchhof G., Schulze R., Huber I., Spring S.,
46. Ludwig W., Bauer M., Held I., Kirchhof G., Schulze R., Huber I., Spring S.,
Hartmann T., Schleifer K.H. Detection and in situ indentification of
Hartmann T., Schleifer K.H. Detection and in situ indentification of
representatives of a widely distributed new bacterial phylum // FEMS
representatives of a widely distributed new bacterial phylum // FEMS
Microbiol. Lett. 1997. Vol. 153 .P.181-190.
Microbiol. Lett. 1997. Vol. 153 .P.181-190.
47. Macario A.J.L., De Macario C.E., Schoberth S.M., Sahm H. Shifts in
47. Macario A.J.L., De Macario C.E., Schoberth S.M., Sahm H. Shifts in
methanogenic subpopulation measured with antibody probes in a fixed-bed
methanogenic subpopulation measured with antibody probes in a fixed-bed
loop
loop
anaerobic
bioreactor
treating
sulfite
evaporator
condensate//
Appl.Environ.Microbiol. 1989. Vol. 55.P.1996-2001.
anaerobic
bioreactor
treating
sulfite
evaporator
condensate//
Appl.Environ.Microbiol. 1989. Vol. 55.P.1996-2001.
48. Mankin A.S., Kagramanova V.K., Teterina N.L., Rubtsov P.M., Belova E.N.,
48. Mankin A.S., Kagramanova V.K., Teterina N.L., Rubtsov P.M., Belova E.N.,
Kopylov A.M., Baratova L.A., Bogdanov A.A. The nucleotide sequence of the
Kopylov A.M., Baratova L.A., Bogdanov A.A. The nucleotide sequence of the
gene coding for the 16S rRNA from the archaebacterium Halobacterium
gene coding for the 16S rRNA from the archaebacterium Halobacterium
halobium // Gene. 1985. Vol.37(1-3). P.181-189.
halobium // Gene. 1985. Vol.37(1-3). P.181-189.
49. Olsen G.J., Pase N.R., Nuell M., Kaine B.P., Gupta R., Woese C.R. Sequence
49. Olsen G.J., Pase N.R., Nuell M., Kaine B.P., Gupta R., Woese C.R. Sequence
of the 16S rRNA gene from the thermoacidophilic archaebacterium
of the 16S rRNA gene from the thermoacidophilic archaebacterium
Sulfolobus solfatoricus and its evolutionary implicftions// J. Mol. Evol. 1985.
Sulfolobus solfatoricus and its evolutionary implicftions// J. Mol. Evol. 1985.
Vol. 22. P. 301-307.
Vol. 22. P. 301-307.
50. Romaniuk P.J., Zoltowska B., Trust T.J., Lane D.J., Olsen G. J., Pase N.R.,
50. Romaniuk P.J., Zoltowska B., Trust T.J., Lane D.J., Olsen G. J., Pase N.R.,
Staht D.A. Campilobacter pilori, the spiral bacterium associated with human
Staht D.A. Campilobacter pilori, the spiral bacterium associated with human
gastritis, is not a true Campilobacter sp.// J. Bacteriol/1987. Vol. 169. P. 2137-
gastritis, is not a true Campilobacter sp.// J. Bacteriol/1987. Vol. 169. P. 2137-
2141.
2141.
51. Rondon M.R., August P.R., Bettermann A.D., Brady S.F., Grossman T.N.,
51. Rondon M.R., August P.R., Bettermann A.D., Brady S.F., Grossman T.N.,
Liles M.R., Lioacono K.A., Lynch B.A., Macneil I.A., Minor C., Tiong C.L.,
Liles M.R., Lioacono K.A., Lynch B.A., Macneil I.A., Minor C., Tiong C.L.,
Gilvan M., Osburne M.S., Clardy J., Handelsman J., Goodman R.M. Cloning
Gilvan M., Osburne M.S., Clardy J., Handelsman J., Goodman R.M. Cloning
the soil metagenome: a strategy for accessing the genetic and functional
the soil metagenome: a strategy for accessing the genetic and functional
diversity of uncultured microorganisms// Appl. Environ. Microbiol. 2000.Vol.
diversity of uncultured microorganisms// Appl. Environ. Microbiol. 2000.Vol.
66. P.2541-2547.
66. P.2541-2547.
88
88
52. Palleroni N.J. Genus I. Pseudomonas Migula 1984// Bergey, s Manual of
52. Palleroni N.J. Genus I. Pseudomonas Migula 1984// Bergey, s Manual of
Systematic Bacteriology// Edited by krieg N.R. and Holt J.G. Baltimor:
Systematic Bacteriology// Edited by krieg N.R. and Holt J.G. Baltimor:
Williams &Wilkins, 1984. Vol. 1. P. 141-199.
Williams &Wilkins, 1984. Vol. 1. P. 141-199.
53. Pernthaler J., Gloeckner F.O., Unterholzner S., Alfreider A., Psenner R.,
53. Pernthaler J., Gloeckner F.O., Unterholzner S., Alfreider A., Psenner R.,
Amann R. Seasonal community and population dynamics of pelagic Bacteria
Amann R. Seasonal community and population dynamics of pelagic Bacteria
and Archaea in a high mountain lake// Appl. Environ. Microbiol. 1998. Vol.
and Archaea in a high mountain lake// Appl. Environ. Microbiol. 1998. Vol.
64. P. 4299-4306.
64. P. 4299-4306.
54. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning. A laboratory
54. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning. A laboratory
Manual // Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.
Manual // Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.
Vol. 1, 2, 3.
Vol. 1, 2, 3.
55. Schloss P.D., Hay A.G., Wilson D.B., Gossett J.M., Walker L.P. Quantifying
55. Schloss P.D., Hay A.G., Wilson D.B., Gossett J.M., Walker L.P. Quantifying
bacterial population dynamics in compost using 16S rRNA gene
bacterial population dynamics in compost using 16S rRNA gene
probes//Appl. Microbiol.Biotech.2005.Vol. 66.P. 457-463.
probes//Appl. Microbiol.Biotech.2005.Vol. 66.P. 457-463.
56. Snaidr J., Amann R., Huber I., Ludwig W., Schleifer K.-H. Phylogenetic
56. Snaidr J., Amann R., Huber I., Ludwig W., Schleifer K.-H. Phylogenetic
analysis and in situ identificftion of bacteria in activated sludge// Appl.
analysis and in situ identificftion of bacteria in activated sludge// Appl.
Environ. Microbiol. 1997. Vol. 63. P.2884-2896.
Environ. Microbiol. 1997. Vol. 63. P.2884-2896.
57. Stahl D.A., Lane D.J., Olsen G.J., Pase N.R. Characterization of a
57. Stahl D.A., Lane D.J., Olsen G.J., Pase N.R. Characterization of a
Yellowstone hot spring microbial community by 5S rRNA sequences// Appl.
Yellowstone hot spring microbial community by 5S rRNA sequences// Appl.
Environ. Microbiol. 1985. Vol. 49.P.1379-1384.
Environ. Microbiol. 1985. Vol. 49.P.1379-1384.
58. Stahl D.A., Flesher B., Mansfield H.R., Montgomery L. Use of
58. Stahl D.A., Flesher B., Mansfield H.R., Montgomery L. Use of
phylogenetically based hybridization probes for studies of ruminal microbial
phylogenetically based hybridization probes for studies of ruminal microbial
ecology// Appl. Environ. Microbiol. 1988. Vol. 54. P. 1079-1084.
ecology// Appl. Environ. Microbiol. 1988. Vol. 54. P. 1079-1084.
59. Steinberger P., Andris-Widhopf J., Buhler B. et al. Functional deletion of the
59. Steinberger P., Andris-Widhopf J., Buhler B. et al. Functional deletion of the
CCR5 receptor by intracellular immunization produces cells that are
CCR5 receptor by intracellular immunization produces cells that are
refractory to CCCR5-dependent HHIV-1
refractory to CCCR5-dependent HHIV-1
infection and cell fusion //
Proc.Nat.Acad.Sci.USA. 2000. Vol.97. P.805-810.
infection and cell fusion //
Proc.Nat.Acad.Sci.USA. 2000. Vol.97. P.805-810.
60. Thoerner P., Bin Kigombe C.I., Bogli-Chosat B., Wassenaar T.M., Frey J.,
60. Thoerner P., Bin Kigombe C.I., Bogli-Chosat B., Wassenaar T.M., Frey J.,
Jemmi T. PCR detection of virulence genes in Yersinia enterocolitica and
Jemmi T. PCR detection of virulence genes in Yersinia enterocolitica and
Yersinia pseudotuberculosis and investigation of virulence gene diatribution //
Yersinia pseudotuberculosis and investigation of virulence gene diatribution //
Appl. Environ. Microbiol. 2003. Vol. 69. P. 1810-1816.
Appl. Environ. Microbiol. 2003. Vol. 69. P. 1810-1816.
89
89
61. Thompson F.L., Hoste B., Thompson C.C., Goris J., Gomez-Gil B., Huys L.,
61. Thompson F.L., Hoste B., Thompson C.C., Goris J., Gomez-Gil B., Huys L.,
De Vos P., Swings J. Enterovibrio norvegicus gen. nov., sp.nov., isolated from
De Vos P., Swings J. Enterovibrio norvegicus gen. nov., sp.nov., isolated from
the gut of turbot (Scophthalmus maximus) larvae: a new member of the
the gut of turbot (Scophthalmus maximus) larvae: a new member of the
family Vibrioaceae// Int.J.Syst. Evol. Micribiol. 2002. Vol.52.P. 2015-2022.
family Vibrioaceae// Int.J.Syst. Evol. Micribiol. 2002. Vol.52.P. 2015-2022.
62. Thompson F.L., Thompson C.C., Li Y., Gomez–Gil B., Hoste B.,
Vandenberghe J.,
Swings J. Vibrio kanaloae sp. Nov., Vibrio pomeroyi
62. Thompson F.L., Thompson C.C., Li Y., Gomez–Gil B., Hoste B.,
Vandenberghe J.,
Swings J. Vibrio kanaloae sp. Nov., Vibrio pomeroyi
sp.nov. and Vibrio chagasii sp. Nov., from sea water and marine animals //
sp.nov. and Vibrio chagasii sp. Nov., from sea water and marine animals //
Int. J.Syst. Evol.Microbiol. 2003. Vol. 53. P. 753 – 759.
Int. J.Syst. Evol.Microbiol. 2003. Vol. 53. P. 753 – 759.
63. Turner S., Burger – Wiersma T., Giovannoni S.J., Mur L.R., Pace N.R. The
63. Turner S., Burger – Wiersma T., Giovannoni S.J., Mur L.R., Pace N.R. The
relationship of a prochlorophyte Prochlorothrix hollandica to green
relationship of a prochlorophyte Prochlorothrix hollandica to green
chloroplasts // Nature. 1989. Vol. 337. P. 380- 382.
chloroplasts // Nature. 1989. Vol. 337. P. 380- 382.
64. Von Wintzingerode F., Gobel U.B., Stackebrandt E. Determination of
64. Von Wintzingerode F., Gobel U.B., Stackebrandt E. Determination of
microbial diversity in environmental samples: pitfall of PCR – based rRNA
microbial diversity in environmental samples: pitfall of PCR – based rRNA
analysis// FEMS Microbiol. Reviews. 1997. Vol. 21. P. 213- 229.
analysis// FEMS Microbiol. Reviews. 1997. Vol. 21. P. 213- 229.
65. Wang G.C., Wang Y. The frequency of chmeric molecules as a consequence
65. Wang G.C., Wang Y. The frequency of chmeric molecules as a consequence
of PCR coamplification of 16S rRNA genes from different bacterial species //
of PCR coamplification of 16S rRNA genes from different bacterial species //
Microbiology. 1996. Vol. 142. P. 1107- 1114.
Microbiology. 1996. Vol. 142. P. 1107- 1114.
66. Ward D.M., Weller R., Bateson M.M. 16S rRNA sequences reveal numerous
66. Ward D.M., Weller R., Bateson M.M. 16S rRNA sequences reveal numerous
uncultured microorganisms in a natural community // Nature. 1990. Vol. 345.
uncultured microorganisms in a natural community // Nature. 1990. Vol. 345.
P. 63-65.
P. 63-65.
67. Ward E.S., Gussow D., Griffiths A.D. et al. Binding activities of repertoire of
67. Ward E.S., Gussow D., Griffiths A.D. et al. Binding activities of repertoire of
single immunoglobulin variable domains secreted from Escherichia coli //
single immunoglobulin variable domains secreted from Escherichia coli //
Nature, 1989. Vol.341.P544-546.
Nature, 1989. Vol.341.P544-546.
68. Wise M.G., McArthur J.V., Shimkets L.J. Bacterial diversity of a Carolina bay
68. Wise M.G., McArthur J.V., Shimkets L.J. Bacterial diversity of a Carolina bay
as determined by 16S rRNA gene analysis: confirmation of novel taxa // Appl.
as determined by 16S rRNA gene analysis: confirmation of novel taxa // Appl.
Environ. Microbiol. 1997. Vol. 63. P. 1505-1514.
Environ. Microbiol. 1997. Vol. 63. P. 1505-1514.
69. Woese C.R., Fox G.E. Phylogenetic structure of the prokaryotic domain: the
primary kingdoms // PNAS. 1977. Vol. 74. P. 5088-5090.
90
69. Woese C.R., Fox G.E. Phylogenetic structure of the prokaryotic domain: the
primary kingdoms // PNAS. 1977. Vol. 74. P. 5088-5090.
90
70. .., .. -
. .: . 1995. 407 .
71. ., . : !!. .: " «# #$». 2004. 472 .
72. ., .-. ! . .: . 2004. 469 .
73. .., .. ! %: . : &'. 1997, 180 .
74. .., !. ! ( (: . .: . 2002. 142 .
91
!-1! %
!-1! %
!"# .., $%"# ..
!"# .., $%"# ..
@% %!? 22.07.2009. J1 70"100/16.
H# “Times New Roman”.
#1 F;. G 50 ='. L' •1437.
. %!. . 7,51.
%! «@"#»
150000, ;, . >?, #. ,, 12,
(4852) 73-04-74, 30-49-80
e-mail: printhouse-yar@yandex.ru, print_house-06@inbox.ru
www.printhouse.yar.ru
@% %!? 22.07.2009. J1 70"100/16.
H# “Times New Roman”.
#1 F;. G 50 ='. L' •1437.
. %!. . 7,51.
%! «@"#»
150000, ;, . >?, #. ,, 12,
(4852) 73-04-74, 30-49-80
e-mail: printhouse-yar@yandex.ru, print_house-06@inbox.ru
www.printhouse.yar.ru