2010 ÖÈÒÎËÎÃÈß Ò î ì 52, ¹ 9 ÏÐÎËÈÔÅÐÀÖÈß ÍÎÐÌÀËÜÍÛÕ È ÎÏÓÕÎËÅÂÛÕ ÊËÅÒÎÊ Â ÏÐÈÑÓÒÑÒÂÈÈ ÑÛÂÎÐÎÒÊÈ ÊÐÎÂÈ ÁÎËÜÍÛÕ ÐÀÊÎÌ ÌÎËÎ×ÍÎÉ ÆÅËÅÇÛ ÏÎÑËÅ ÊÓÐÑÀ ÔÎÒÎÒÅÐÀÏÈÈ ÂÈÄÈÌÛÌ È ÁËÈÆÍÈÌ ÈÍÔÐÀÊÐÀÑÍÛÌ ÑÂÅÒÎÌ À. À. Çèìèí, Ê. À. Ñàìîéëîâà, Í. À. Æåâàãî Èíñòèòóò öèòîëîãèè ÐÀÍ, Ñàíêò-Ïåòåðáóðã; ýëåêòðîííûé àäðåñ: samoilova@yandex.ru À. À. Çèìèí, Ê. À. Ñàìîéëîâà, Í. À. Æåâàãî Íèçêîèíòåíñèâíîå âèäèìîå (ÍÂ) è áëèæíåå èíôðàêðàñíîå (ÁÈÊ) èçëó÷åíèÿ îò ëàçåðíûõ è íåëàçåðíûõ èñòî÷íèêîâ èñïîëüçóþòñÿ ïðè ëå÷åíèè îñëîæíåíèé ó îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ, ðàçâèâàþùèõñÿ ïîñëå õèðóðãè÷åñêîãî óäàëåíèÿ îïóõîëè, õèìèî- è ëó÷åâîé òåðàïèè. Îñòàåòñÿ, îäíàêî, îòêðûòûì âîïðîñ î õàðàêòåðå âëèÿíèÿ ýòîãî ôèçèîòåðàïåâòè÷åñêîãî ìåòîäà íà ïðîëèôåðàòèâíóþ àêòèâíîñòü îïóõîëåâûõ êëåòîê ïàöèåíòîâ ñ îíêîïàòîëîãèåé è êëåòîê, ó÷àñòâóþùèõ â ïðîöåññàõ ðàíîçàæèâëåíèÿ — ôèáðîáëàñòîâ (ÔÁ) è êåðàòèíîöèòîâ (ÊÖ).  íàñòîÿùåé ðàáîòå èçó÷åíî âëèÿíèå êóðñà îáëó÷åíèé áîëüíûõ ÐÌÆ â ïîñëåîïåðàöèîííîì ïåðèîäå âèäèìûì è ÁÈÊ ñâåòîì (480—3400 íì, 95%-íàÿ ïîëÿðèçàöèÿ, 40 ìÂò/cì2, 12 Äæ/cì2) íà ïðîëèôåðàòèâíóþ àêòèâíîñòü ÊÖ è ÔÁ ÷åëîâåêà, à òàêæå íåñêîëüêèõ âèäîâ îïóõîëåâûõ êëåòîê (BT-474, HBL-100, Hs578T è À431) â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ ÐÌÆ. 1-íåäåëüíûé êóðñ ôîòîòåðàïèè âèäèìûì è ÁÈÊ ñâåòîì ó áîëüíûõ ÐÌÆ ïðèâîäèë ê ïîâûøåíèþ ïðîëèôåðàöèè ÔÁ (îòíîñèòåëüíî èñõîäíîãî óðîâíÿ) è ÊÖ (îòíîñèòåëüíî ïîñëåîïåðàöèîííîãî óðîâíÿ) íà 22 è 28 % ñîîòâåòñòâåííî. Ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê BT-474, Hs578T è À431 ñíèæàëàñü íà 31.5, 8.97 è 6.47 % îòíîñèòåëüíî äîîïåðàöèîííîãî (èñõîäíîãî) óðîâíÿ ñîîòâåòñòâåííî, òîãäà êàê ïðîëèôåðàöèÿ êëåòîê BT-474, HBL-100, Hs578T è À431 áûëà òàêæå íèæå â ñðàâíåíèè ñ ïîñëåîïåðàöèîííûì óðîâíåì íà 32, 16, 8.65 è 6.26 % ñîîòâåòñòâåííî. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò â ïîëüçó îíêîëîãè÷åñêîé áåçîïàñíîñòè êóðñîâîãî îáëó÷åíèÿ âèäèìûì è ÁÈÊ ñâåòîì áîëüíûõ ÐÌÆ â ïåðèîä ïîñëåîïåðàöèîííîé ðåàáèëèòàöèè. Ïðîëèôåðàöèÿ íîðìàëüíûõ è îïóõîëåâûõ êëåòîê â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè Ê ë þ ÷ å â û å ñ ë î â à: ðàê ìîëî÷íîé æåëåçû, âèäèìûé è áëèæíèé èíôðàêðàñíûé ñâåò, ïðîëèôåðàöèÿ îïóõîëåâûõ êëåòîê, ôèáðîáëàñòû è êåðàòèíîöèòû. Ï ð è í ÿ ò û å ñ î ê ð à ù å í è ÿ: ÁÈÊ — áëèæíèé èíôðàêðàñíûé, ÊÖ — êåðàòèíîöèòû, Í — íèçêîèíòåíñèâíîå âèäèìîå, ÐÌÆ — ðàê ìîëî÷íîé æåëåçû, ÔÁ — ôèáðîáëàñòû, ÝÒÑ — ýìáðèîíàëüíàÿ òåëÿ÷üÿ ñûâîðîòêà. ïèè. Êàê ïîêàçûâàåò ïðîâåäåííûé íàìè àíàëèç îïóáëèêîâàííûõ çà ïîñëåäíèå 25 ëåò ðàáîò â îáëàñòè ýêñïåðèìåíòàëüíîé è êëèíè÷åñêîé îíêîëîãèè (Zimin et al., 2008), ðàçëè÷íûå ôîòîòåðàïåâòè÷åñêèå ìåòîäû íå òîëüêî íå óñêîðÿþò îïóõîëåâûé ðîñò è ìåòàñòàçèðîâàíèå, íî çíà÷èòåëüíî òîðìîçÿò ýòè ïðîöåññû ó ÷åëîâåêà è æèâîòíûõ. Ïðèðîäà èíãèáèðîâàíèÿ îïòè÷åñêèì èçëó÷åíèåì ïðîëèôåðàöèè îïóõîëåâûõ êëåòîê â óñëîâèÿõ in vivo îñòàåòñÿ íåèçâåñòíîé. Èññëåäóÿ â ïîñëåäíåå äåñÿòèëåòèå ñèñòåìíîå äåéñòâèå âèäèìîãî ñâåòà è ÁÈÊ ïðè îáëó÷åíèè ïîâåðõíîñòè òåëà (óñêîðåíèå ðàíîçàæèâëåíèÿ, ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîå è èììóíîìîäóëèðóþùåå), ìû äîêàçàëè, ÷òî êëþ÷åâàÿ ðîëü â åãî ôîðìèðîâàíèè ïðèíàäëåæèò òðàíñêóòàííîé ôîòîìîäèôèêàöèè íåáîëüøèõ êîëè÷åñòâ êðîâè ïàöèåíòà, êîòîðàÿ â òå÷åíèå íåñêîëüêèõ ìèíóò ïðèâîäèò ê èçìåíåíèþ ñâîéñòâ è ôóíêöèîíàëüíîãî ñîñòîÿíèÿ êëåòîê âñåõ òèïîâ è ìíîãèõ êîìïîíåíòîâ ïëàçìû âñåãî îáúåìà öèðêóëèðóþùåé êðîâè (Samoilova et al., 1998; Æåâàãî è äð., 2002). Ôîòîàêòèâàöèÿ êîíñòèòóòèâíîé NO-ñèíòàçû (Samoilova et al., 2008) â êëåòêàõ ýíäîòåëèÿ è êðîâè âåäåò ê ñòèìóëÿöèè ñèíòåçà îêñèäà àçîòà (NO), êîòîðûé íå òîëü- Óæå ìíîãèå ãîäû Í è ÁÈÊ èçëó÷åíèÿ èñïîëüçóþòñÿ â êëèíè÷åñêîé ïðàêòèêå äëÿ ñòèìóëÿöèè ðåïàðàòèâíûõ ïðîöåññîâ, ãåìîïîýçà è èììóíîãåíåçà, ò. å. äëÿ àêòèâàöèè íà ñèñòåìíîì óðîâíå ïðîëèôåðàòèâíûõ ïðîöåññîâ. Îäíàêî ïðèìåíåíèå ñîâðåìåííûõ ôîòîòåðàïåâòè÷åñêèõ ìåòîäîâ, îñíîâàííûõ íà èñïîëüçîâàíèè ëàçåðíûõ, ñâåòîäèîäíûõ è äðóãèõ èñòî÷íèêîâ ýòèõ èçëó÷åíèé, ñäåðæèâàåòñÿ èç-çà îïàñåíèÿ âîçìîæíîñòè ñòèìóëÿöèè ïðîëèôåðàöèè íå òîëüêî íîðìàëüíûõ, íî è òðàíñôîðìèðîâàííûõ êëåòîê, êîòîðûå ïîñòîÿííî ïðèñóòñòâóþò â îðãàíèçìå â òîì èëè èíîì êîëè÷åñòâå. Îïàñåíèÿ áàçèðóþòñÿ íà äàâíî è íåîäíîêðàòíî óñòàíîâëåííîì ôàêòå, ñâèäåòåëüñòâóþùåì î òîì, ÷òî èçëó÷åíèå îïòè÷åñêîãî äèàïàçîíà ñòèìóëèðóåò ïðîëèôåðàöèþ îïóõîëåâûõ êëåòîê â óñëîâèÿõ in vitro (Karu, Pyatibrat, 1987; Pinheiro et al., 2002; Renno et al., 2007). Ïðè ýòîì, îäíàêî, íå ó÷èòûâàåòñÿ òî îáñòîÿòåëüñòâî, ÷òî â êëèíè÷åñêîé îíêîëîãèè íàêîïëåí ìíîãîëåòíèé îïûò óñïåøíîãî ïðèìåíåíèÿ íèçêîèíòåíñèâíîé ôîòîòåðàïèè äëÿ óñêîðåíèÿ çàæèâëåíèÿ ïîñëåîïåðàöèîííûõ ðàí, ðàäèàöèîííûõ ïîâðåæäåíèé ñëèçèñòûõ è êîæè, âîññòàíîâëåíèÿ ãåìîïîýçà è èììóíîãåíåçà ïîñëå ðàäèêàëüíîãî óäàëåíèÿ îïóõîëåé, à òàêæå õèìèî- è ëó÷åâîé òåðà785 786 À. À. Çèìèí, Ê. À. Ñàìîéëîâà, Í. À. Æåâàãî êî óëó÷øàåò ìèêðîöèðêóëÿöèþ êðîâè íà ëîêàëüíîì è ñèñòåìíîì óðîâíÿõ, íî îáëàäàåò è ïðîòèâîîïóõîëåâûì äåéñòâèåì (Ïðîñêóðÿêîâ è äð., 2000). Ñóùåñòâåííûå èçìåíåíèÿ ïðîèñõîäÿò òàêæå â öèòîêèíîâîé ñåòè: â ñûâîðîòêå êðîâè ñíèæàåòñÿ (èñõîäíî ïîâûøåííîå) ñîäåðæàíèå ïðîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ (TNF-a, IL-6 è IL-12) è çíà÷èòåëüíî âîçðàñòàåò óðîâåíü ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûõ ôàêòîðîâ (IL-10 è TGFb1); îñîáåííî ðåçêî âîçðàñòàåò êîíöåíòðàöèÿ èíòåðôåðîíà ãàììà (IFN-g) ïðè åãî èñõîäíî íèçêîì è íîðìàëüíîì óðîâíÿõ (Æåâàãî è äð., 2002). Ðàíåå ïðè èçó÷åíèè ðîñòîñòèìóëèðóþùåé àêòèâíîñòè ïëàçìû ñûâîðîòêè ôîòîìîäèôèöèðîâàííîé êðîâè ÷åëîâåêà ìû êóëüòèâèðîâàëè êëåòêè ÷åëîâåêà èç ðàçëè÷íûõ òêàíåé íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ, ñîäåðæàùèõ âìåñòî ÝÒÑ ïëàçìó êðîâè çäîðîâûõ äîíîðîâ (Áåëèøåâà, Ñàìîéëîâà, 1984; Ñàìîéëîâà è äð., 1984). Ïðè ýòîì àêòèâíîñòü ñûâîðîòêè âûÿâëÿëè ïî èçìåíåíèþ ñêîðîñòè ïðîëèôåðàöèè ðàçëè÷íûõ êëåòîê ÷åëîâåêà â óñëîâèÿõ in vitro.  ýòèõ óñëîâèÿõ êëåòêè ñîõðàíÿëè âûñîêóþ æèçíåñïîñîáíîñòü è àêòèâíî ïðîëèôåðèðîâàëè, à èõ ïàðàëëåëüíîå êóëüòèâèðîâàíèå íà ñòàíäàðòíîé ñðåäå, ñîäåðæàùåé 10 % ÝÒÑ, ïîçâîëÿëî îöåíèòü èíäèâèäóàëüíûå ðîñòîñòèìóëèðóþùèå ñâîéñòâà êðîâè êàæäîãî ÷åëîâåêà.  äàëüíåéøåì ýòîò ïîäõîä áûë èñïîëüçîâàí ïðè îöåíêå ýôôåêòèâíîñòè êóðñà ôîòîòåðàïèè ó äîáðîâîëüöåâ ïî óðîâíþ ïðîëèôåðàöèè ÊÖ è ÔÁ ïðè äîáàâëåíèè ñûâîðîòêè èõ êðîâè (2.5 %) â ñðåäó êóëüòèâèðîâàíèÿ (Ñàìîéëîâà è äð., 2003; Áîãà÷åâà è äð., 2004). Âàæíûì èòîãîì ýòèõ äâóõ ðàáîò áûëè ñëåäóþùèå ôàêòû: ðîñòîñòèìóëèðóþùàÿ àêòèâíîñòü êóëüòóðàëüíîé ñðåäû äëÿ ÔÁ è ÊÖ, ñîäåðæàùåé 2.5 % ïëàçìû êðîâè äîáðîâîëüöåâ, íå îòëè÷àåòñÿ îò òàêîâîé ñðåäû, ñîäåðæàùåé 10 % ÝÒÑ; îáëó÷åíèå íåáîëüøîãî ó÷àñòêà ïîâåðõíîñòè òåëà ÷åëîâåêà âèäèìûì ñâåòîì ïðèâîäèëî ê ïîÿâëåíèþ â êðîâè ðàñòâîðèìûõ ôàêòîðîâ, ñïîñîáñòâóþùèõ óñèëåíèþ ïðîëèôåðàöèè ÔÁ è ÊÖ â óñëîâèÿõ in vitro. Âåäóùåå ìåñòî â ñòðóêòóðå îíêîëîãè÷åñêèõ çàáîëåâàíèé æåíùèí çàíèìàåò ÐÌÆ, ïðè ýòîì ÷àñòîòà âîçíèêíîâåíèÿ ýòîãî çàáîëåâàíèÿ åæåãîäíî óâåëè÷èâàåòñÿ íà 2 % (Òàðóòèíîâ è äð., 1996; Òþëÿäèí, Ìîèñååíêî, 2004).  ñâÿçè ñ ýòèì ïîèñê ôîòîòåðàïåâòè÷åñêèõ ìåòîäîâ ïîñëåîïåðàöèîííîé èììóíîðåàáèëèòàöèè ïàöèåíòîâ ñ ýòèì çàáîëåâàíèåì ÿâëÿåòñÿ âàæíîé çàäà÷åé ñîâðåìåííîé ìåäèöèíû. Ïðè ýòîì íåîáõîäèìî çíàòü õàðàêòåð âëèÿíèÿ ýòèõ ìåòîäîâ íà ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê ÐÌÆ äëÿ èñêëþ÷åíèÿ âîçìîæíîñòè ðåöèäèâîâ è ìåòàñòàçèðîâàíèÿ â ïîñëåîïåðàöèîííîì ïåðèîäå. Ó÷èòûâàÿ âûøåèçëîæåííîå, ìû ïîñòàâèëè ïåðåä ñîáîé çàäà÷ó èçó÷èòü âëèÿíèå ïîñëåîïåðàöèîííîãî êóðñà ôîòîòåðàïèè âèäèìûì è ÁÈÊ ñâåòîì íà õàðàêòåð èçìåíåíèé ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè íîðìàëüíûõ è îïóõîëåâûõ êëåòîê ó áîëüíûõ ÐÌÆ. Ìàòåðèàë è ìåòîäèêà Ðàáîòà âûïîëíåíà íà áàçå êëèíè÷åñêîé áîëüíèöû ÐÀÍ (Ñàíêò-Ïåòåðáóðã). Ýòè÷åñêèé êîìèòåò áîëüíèöû ðàññìîòðåë äèçàéí èññëåäîâàíèÿ è äàë ðàçðåøåíèå íà åãî ïðîâåäåíèå. Áîëüíûå ÐÌÆ è èññëåäóåìûå îáðàçöû ê ð î â è.  èññëåäîâàíèè ïðèíÿëè ó÷àñòèå 17 áîëüíûõ ÐÌÆ I—II ñòàäèè, êîòîðûõ ëå÷èëè õèðóðãè÷åñêè. Âñå ïàöèåíòû áûëè ðàíäîìèçèðîâàííî ðàçäåëåíû íà îñíîâíóþ è êîíòðîëüíóþ ãðóïïû, â êîòîðûõ áîëüíûå áûëè ñîïîñòà- âèìû ïî âîçðàñòó (54.3 ± 3.87 è 57.6 ± 2.99 ãîäà ñîîòâåòñòâåííî) è ñòàäèè îïóõîëåâîãî ïðîöåññà ñîãëàñíî êëàññèôèêàöèè TNM. Äèàãíîç óñòàíàâëèâàëñÿ íà îñíîâàíèè ðåçóëüòàòîâ ìàììîãðàôè÷åñêîãî, óëüòðàçâóêîâîãî è öèòîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèé. Áîëüíûì êîíòðîëüíîé ãðóïïû (n = 7) ïðîâîäèëè ñòàíäàðòíûé êóðñ ïîñëåîïåðàöèîííîé ðåàáèëèòàöèè. Áîëüíûì îñíîâíîé ãðóïïû (n = 10) íà÷èíàÿ ñ 1-õ ñóò ïîñëå îïåðàöèè äîïîëíèòåëüíî ïðîâîäèëè êóðñ ôîòîòåðàïèè â òå÷åíèå 7 ñóò. Îáðàçöû ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ âûäåëÿëè çà 1 ñóò äî îïåðàöèè, ÷åðåç 1 ñóò è íà 8-å ñóò ïîñëå îïåðàöèè. Ñûâîðîòêó èç öåëüíîé êðîâè âûäåëÿëè öåíòðèôóãèðîâàíèåì â òå÷åíèå 10 ìèí ïðè 1500 g. Ïîñëå ýòîãî îáðàçöû èíäèâèäóàëüíûõ ñûâîðîòîê çàìîðàæèâàëè ïðè –20 °C. Ïåðåä òåñòèðîâàíèåì ðîñòîñòèìóëèðóþùèõ ñâîéñòâ îáðàçöû ðàçìîðàæèâàëè. Òåïëîâóþ èíàêòèâàöèþ ñûâîðîòêè áîëüíûõ è ÝÒÑ íå ïðîâîäèëè, ïîñêîëüêó îíà ìîæåò ïðèâåñòè ê íàðóøåíèþ àêòèâíîñòè öèòîêèíîâ è ðîñòîâûõ ôàêòîðîâ, êîòîðûå âëèÿþò íà ïðîëèôåðàöèþ èçó÷àåìûõ â ðàáîòå êëåòîê-ìèøåíåé. Íåïîñðåäñòâåííî ïîñëå ðàçìîðàæèâàíèÿ íà÷èíàëè ãîòîâèòü ñðåäû äëÿ êóëüòèâèðîâàíèÿ êëåòîê-ìèøåíåé ñ äîáàâëåíèåì ñûâîðîòîê êàæäîãî áîëüíîãî íà ñîîòâåòñòâóþùèé ñðîê òåñòèðîâàíèÿ. Ïðè ïðèãîòîâëåíèè ñðåä â êàæäóþ ìèêðîïðîáèðêó âíîñèëè 15 ìêë èíäèâèäóàëüíîé ñûâîðîòêè è 585 ìêë ïèòàòåëüíîé ñðåäû, íåîáõîäèìîé äëÿ êóëüòèâèðîâàíèÿ êëåòîê êàæäîãî òèïà (ò. å. ãîòîâûå ñðåäû ñîäåðæàëè 2.5 % ñûâîðîòîê áîëüíûõ). Ïîëó÷åííûå ñðåäû âíîñèëè â 96-ëóíî÷íûå ïëàíøåòû ñ êëåòêàìè âìåñòî ÝÒÑ. Ô î ò î ò å ð à ï è ÿ. 7-äíåâíûé êóðñ åæåäíåâíîãî îáëó÷åíèÿ ïîÿñíè÷íî-êðåñòöîâîé îáëàñòè áîëüíûõ ÐÌÆ âèäèìûì è ÁÈÊ ñâåòîì ïðîèçâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì øâåéöàðñêîãî àïïàðàòà Bioptron-2 (480—3400 íì, 95%-íàÿ ïîëÿðèçàöèÿ, 40 ìÂò/cì2, äîçà, 12 Äæ/cì2, âðåìÿ îáëó÷åíèÿ 10 ìèí, äèàìåòð îáëàñòè îáëó÷åíèÿ 15 ñì). Ìåòîäèêà ôîòîòåðàïèè áûëà ðàçðàáîòàíà ðàíåå (Samoilova et al., 1998). Êóëüòèâèðîâàíèå îïóõîëåâûõ êëåòîê ÷åë î â å ê à. Èñïîëüçîâàëè òðè ëèíèè êëåòîê ÐÌÆ ÷åëîâåêà (BT-474, HBL-100, Hs578T) è êëåòêè ýïèäåðìîèäíîé êàðöèíîìû À431. Âñå êëåòêè ïîëó÷åíû èç êîëëåêöèè Áàíêà êëåòî÷íûõ êóëüòóð Èíñòèòóòà öèòîëîãèè ÐÀÍ (Ñàíêò-Ïåòåðáóðã). Äâå ëèíèè êëåòîê ÐÌÆ (BT-474 è HBL-100) êóëüòèâèðîâàëè â ïèòàòåëüíîé ñðåäå RPMI 1640 (Áèîëîò, Ðîññèÿ), ñîäåðæàùåé 10 % ÝÒÑ (Áèîëîò, Ðîññèÿ), 80 ìêã/ìë ãåíòàìèöèíà (Sigma, ÑØÀ) è äëÿ êëåòîê BT-474 — 10 ìêã/ìë áû÷üåãî èíñóëèíà (Sigma, ÑØÀ). Äëÿ ýêñïåðèìåíòîâ êëåòêè âûñåâàëè â 96-ëóíî÷íûå ïëàíøåòû ñ ïëîòíîñòüþ 12.5$103 êëåòîê íà ëóíêó è êóëüòèâèðîâàëè â àòìîñôåðå ñ 5 % ÑO2 ïðè 37 °Ñ. ×åðåç 2 ÷ ïîñëå ïðèêðåïëåíèÿ êëåòîê ê ïëàñòèêó ïðîâîäèëè ñìåíó ïèòàòåëüíîé ñðåäû, äîáàâëÿÿ 2.5 % ñûâîðîòêè áîëüíûõ ÐÌÆ (âìåñòî 10 % ÝÒÑ). Îïóõîëåâûå êëåòêè äâóõ äðóãèõ ëèíèé (Hs578T è À431) êóëüòèâèðîâàëè â ïèòàòåëüíîé ñðåäå DMEM (Áèîëîò, Ðîññèÿ), ñîäåðæàùåé 10 % ÝÒÑ è 80 ìêã/ìë ãåíòàìèöèíà è äîïîëíèòåëüíî 10 ìêã/ìë áû÷üåãî èíñóëèíà äëÿ êëåòîê Hs578T. Êóëüòèâèðîâàíèå êëåòîê ïðîâîäèëè â 96-ëóíî÷íûõ ïëàíøåòàõ ñ ïëîòíîñòüþ 1$104 êëåòîê íà ëóíêó â àòìîñôåðå 5 % ÑO2 ïðè 37 °Ñ. Ñìåíó ïèòàòåëüíîé ñðåäû ñ äîáàâëåíèåì ñûâîðîòêè áîëüíûõ ÐÌÆ ïðîâîäèëè òàêèì æå îáðàçîì, êàê è â ïðåäûäóùåì ñëó÷àå. Ê ó ë ü ò è â è ð î â à í è å Ô Á.  ðàáîòå èñïîëüçîâàíû ïîñòíàòàëüíûå ÔÁ êðàéíåé ïëîòè ÷åëîâåêà, ïîëó÷åííûå èç êîëëåêöèè Áàíêà êëåòî÷íûõ êóëüòóð Èíñòèòóòà öèòî- Ïðîëèôåðàöèÿ íîðìàëüíûõ è îïóõîëåâûõ êëåòîê â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè ëîãèè ÐÀÍ. Êëåòêè êóëüòèâèðîâàëè â ïèòàòåëüíîé ñðåäå Iscove’s MDM (StemCell Technologies, ÑØÀ) ñ äîáàâëåíèåì 10 % ÝÒÑ. Äëÿ ýêñïåðèìåíòîâ êëåòêè âûñåâàëè â 96-ëóíî÷íûå ïëàíøåòû ñ ïëîòíîñòüþ 1$104 êëåòîê íà ëóíêó è êóëüòèâèðîâàëè â àòìîñôåðå 5 % ÑO2 ïðè 37 °Ñ. ×åðåç 2 ÷ ïîñëå ïðèêðåïëåíèÿ êëåòîê ê ïëàñòèêó ïèòàòåëüíóþ ñðåäó ìåíÿëè, äîáàâëÿÿ ñûâîðîòêó áîëüíûõ ÐÌÆ (2.5 %). Ê ó ë ü ò è â è ð î â à í è å Ê Ö. Âûäåëåíèå è êóëüòèâèðîâàíèå ÊÖ èç ôðàãìåíòîâ êîæè ëèöà ïðàêòè÷åñêè çäîðîâûõ æåíùèí, ïîëó÷åííûõ ïðè êîñìåòè÷åñêèõ îïåðàöèÿõ, ïðîâîäèëè ïî ìåòîäó Ðåéíâàëüäà è Ãðèíà (Rheinwald, Green, 1975) â ìîäèôèêàöèè (Þäèíöåâà è äð., 1999). Èçîëèðîâàííûå èç áàçàëüíîãî ñëîÿ ýïèäåðìèñà êëåòêè ñóñïåíäèðîâàëè â ñìåñè ïèòàòåëüíûõ ñðåä DMEM è F12 (3 : 1) ñ äîáàâëåíèåì 10 % ÝÒÑ, âûñåâàëè â 96-ëóíî÷íûå ïëàíøåòû ñ ïëîòíîñòüþ 4$104 êëåòîê íà ëóíêó è êóëüòèâèðîâàëè â àòìîñôåðå 5 % ÑO2 ïðè 37 °Ñ. ×åðåç 2 ñóò ïðîâîäèëè ñìåíó ïèòàòåëüíîé ñðåäû ñ äîáàâëåíèåì ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà (ÝÔÐ, 10 ìã/ìë), èíñóëèíà, ãèäðîêîðòèçîíà, õîëåðíîãî òîêñèíà, òðàíñôåððèíà, àäåíèíà è ëèîòèðîíèíà, îäíàêî âìåñòî 10 % ÝÒÑ âíîñèëè 2.5 % ñûâîðîòêè êðîâè íåîáëó÷åííûõ èëè îáëó÷åííûõ áîëüíûõ ÐÌÆ, êîòîðóþ ïîëó÷àëè çà 1 ñóò äî ìàñòýêòîìèè, à òàêæå ÷åðåç 1 è 8 ñóò ïîñëå îïåðàöèè. Ïðîäîëæèòåëüíîñòü êóëüòèâèðîâàíèÿ êëåòîê êàæäîé ëèíèè ñîñòàâëÿëà äëÿ êëåòîê ÐÌÆ (BT-474, Hs578T è HBL-100) 72 ÷, äëÿ ÔÁ, ÊÖ è A431 — 60 ÷. Äëÿ îöåíêè èñõîäíîãî óðîâíÿ ïðîëèôåðàöèè êëåòîê âñåõ èçó÷àåìûõ ëèíèé â ïðèñóòñòâèè 2.5 % ñûâîðîòîê áîëüíûõ èõ ïàðàëëåëüíî êóëüòèâèðîâàëè íà ñòàíäàðòíîé ïèòàòåëüíîé ñðåäå, ò. å. â ïðèñóòñòâèè 10 % ÝÒÑ. Êëåòêè êàæäîé ëèíèè êóëüòèâèðîâàëè ñ ñûâîðîòêàìè êðîâè 7 áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ ñòàíäàðòíûé êóðñ ïîñëåîïåðàöèîííîé ðåàáèëèòàöèè, è ñ ñûâîðîòêàìè êðîâè 10 áîëüíûõ, êîòîðûì íàçíà÷àëè ôîòîòåðàïåâòè÷åñêèé êóðñ âèäèìûì è ÁÈÊ ñâåòîì. Òåñòèðîâàíèå ñûâîðîòîê áîëüíûõ ïðîâîäèëè íà òðåõ ñðîêàõ (äî îïåðàöèè, ÷åðåç 1 è 8 ñóò ïîñëå) â òðåõ ïàðàëëåëÿõ. Îïûò ïîâòîðÿëè 3 ðàçà. Î ö å í ê à ï ð î ë è ô å ð à ö è è Ô Á, Ê Ö è î ï ó õ î ë åâ û õ ê ë å ò î ê ÷ å ë î â å ê à. ×èñëî êëåòîê îïðåäåëÿëè êîñâåííî ïî èçìåíåíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè îêðàøåííûõ ÿäåð â 96-ëóíî÷íûõ ïëàíøåòàõ, èñïîëüçóÿ êðèñòàëë-âèîëåò. Àâòîðàìè ýòîãî ìåòîäà (Mosman, 1983; Kueng et al., 1989) áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî ìåæäó îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòüþ ýêñòðàãèðîâàííîãî èç ÿäåð êëåòîê êðèñòàëë-âèîëåòà è ÷èñëîì êëåòîê ñóùåñòâóåò ëèíåéíàÿ çàâèñèìîñòü. Ïåðåä ôèêñèðîâàíèåì êëåòîê â 70%-íîì ýòèëîâîì ñïèðòå (5 ìèí) ïðîâîäèëè äâóêðàòíóþ îòìûâêó êëåòîê â ëóíêàõ ðàñòâîðîì PBS. Ïîñëå ôèêñàöèè âíîñèëè êðèñòàëë-âèîëåò (0.1 % íà 10 ìèí), çàòåì îòìûâàëè ëóíêè ñ êëåòêàìè äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé. Äàëåå êðàñèòåëü ýêñòðàãèðîâàëè 10%-íîé óêñóñíîé êèñëîòîé â òå÷åíèå 20 ìèí íà øåéêåðå ïðè ñêîðîñòè âðàùåíèÿ 150 îá/ìèí. Èçìåðåíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ýêñòðàãèðîâàííîãî êðàñèòåëÿ ïðè 570 íì ïðîâîäèëè íà ïëàíøåòíîì ñïåêòðîôîòîìåòðå STATFAX 2100 (Awareness Technology, ÑØÀ). Ñ ò à ò è ñ ò è ÷ å ñ ê à ÿ î ö å í ê à ð å ç ó ë ü ò à ò î â. Èñïîëüçîâàëè êîìïüþòåðíóþ ïðîãðàììó Statistica 6.0. Äîñòîâåðíîñòü ðàçëè÷èé ÷èñëà êëåòîê, êóëüòèâèðóåìûõ ñ ñûâîðîòêîé êðîâè áîëüíûõ äî îïåðàöèè, ÷åðåç 1 è 8 ñóò ïîñëå îïåðàöèè, à òàêæå ÷åðåç 24 ÷ ïîñëå 7-äíåâíîãî êóðñà ôîòîòåðàïèè, îöåíèâàëè íåïàðàìåòðè÷åñêèì ìåòîäîì äëÿ ïîïàðíî ñâÿçàííûõ ðåçóëüòàòîâ, èñïîëüçóÿ êðèòåðèé Âèëêîêñîíà U. 787 Ðåçóëüòàòû Ï ð î ë è ô å ð à ò è â í à ÿ à ê ò è â í î ñ ò ü í î ð ì à ë üí û õ è î ï ó õ î ë å â û õ ê ë å ò î ê. 1. Êëåòêè ÔÁ. Î ïðîëèôåðàöèè êëåòîê ñóäèëè ïî èíòåíñèâíîñòè îêðàñêè êðèñòàëë-âèîëåòîì, êîòîðàÿ ïðÿìî ïðîïîðöèîíàëüíà ÷èñëó êëåòîê (Mosman 1983; Kueng et al., 1989). Èñõîäíûå (äî îïåðàöèè) ïîêàçàòåëè ïðîëèôåðàöèè ÔÁ ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ îáðàçöàìè ñûâîðîòêè êðîâè 17 áîëüíûõ ÐÌÆ â êîíòðîëüíîé è îñíîâíîé ãðóïïàõ âàðüèðîâàëè ñîîòâåòñòâåííî â 3.8 è 2.9 ðàçà è â ñðåäíåì áûëè äîñòîâåðíî íèæå, ÷åì ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ÝÒÑ (110 ïðîòèâ 206 îòí. åä. â êîíòðîëüíîé ãðóïïå è 114 ïðîòèâ 193 îòí. åä. â ãðóïïå áîëüíûõ, ïîëó÷àâøèõ êóðñ ôîòîòåðàïèè). ×åðåç 1 ñóò ïîñëå îïåðàöèè ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê â êîíòðîëüíîé è îñíîâíîé ãðóïïàõ íå ìåíÿëàñü (ðèñ. 1). Ó áîëüíûõ êîíòðîëüíîé ãðóïïû ïðîëèôåðàöèÿ êëåòîê íå ìåíÿëàñü íà âñåõ ñðîêàõ òåñòèðîâàíèÿ (ò. å. çà 1 ñóò äî îïåðàöèè è ÷åðåç 1 è 8 ñóò ïîñëå ìàñòýêòîìèè). Îäíàêî ó ïàöèåíòîâ îñíîâíîé ãðóïïû, êîòîðûì â òå÷åíèå 7 ñóò ïîñëå îïåðàöèè ïðîâîäèëè êóðñ ôîòîòåðàïèè, ðåãèñòðèðîâàëîñü äîñòîâåðíîå ïîâûøåíèå ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè êëåòîê ñî 114 (èñõîäíûé óðîâåíü) äî 134 îòí. åä. ó 6 áîëüíûõ ÐÌÆ ýòîé ãðóïïû (ðèñ. 1). 2. Ê ë å ò ê è Ê Ö. Ïîêàçàòåëè ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè ýòèõ êëåòîê äî îïåðàöèè (ò. å. èñõîäíûå) â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ âàðüèðîâàëè â êîíòðîëüíîé è îñíîâíîé ãðóïïàõ ñîîòâåòñòâåííî â 2.3 è 3.7 ðàçà è â ñðåäíåì áûëè äîñòîâåðíî íèæå ïî ñðàâíåíèþ ñ àêòèâíîñòüþ êëåòîê ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ÝÒÑ (83 îòí. åä. ïî ñðàâíåíèþ ñî 129 â ïðèñóòñòâèè ÝÒÑ â êîíòðîëüíîé ãðóïïå è 57 îòí. åä. ïî ñðàâíåíèþ ñî 125 — â îñíîâíîé). Îäíàêî îáå ãðóïïû áîëüíûõ (êîíòðîëüíàÿ è îñíîâíàÿ) áûëè ñîïîñòàâèìû ïî èñõîäíûì çíà÷åíèÿì ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè (83 è 57 îòí. åä. ñîîòâåòñòâåííî, P > 0.05). ×åðåç 1 ñóò ïîñëå óäàëåíèÿ îïóõîëè ïðîëèôåðàöèÿ êëåòîê â îáåèõ ãðóïïàõ íå èçìåíÿëàñü (ðèñ. 1). Ó áîëüíûõ êîíòðîëüíîé ãðóïïû ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê íå ìåíÿëàñü è ÷åðåç 7 ñóò ïîñëå îïåðàöèè. Îäíàêî ó ïàöèåíòîâ îñíîâíîé ãðóïïû, êîòîðûì â òå÷åíèå 7 ñóò ïîñëå îïåðàöèè ïðîâîäèëè êóðñ ôîòîòåðàïèè, íàáëþäàëè ïîâûøåíèå ïðîëèôåðàöèè ñ 50 îòí. åä. (ïîñëåîïåðàöèîííûé óðîâåíü) äî 62 ó 8 áîëüíûõ ÐÌÆ (P < 0.05). 3. Ê ë å ò ê è B T - 4 7 4. Ïîêàçàòåëè èñõîäíîé ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè ýòèõ êëåòîê â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ ÐÌÆ âàðüèðîâàëè â êîíòðîëüíîé è îñíîâíîé ãðóïïàõ ñîîòâåòñòâåííî â 3.3 è 2.7 ðàçà è â ñðåäíåì áûëè äîñòîâåðíî íèæå, ÷åì â ïðèñóòñòâèè ÝÒÑ (219 îòí. åä. ïðîòèâ 525 ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ÝÒÑ â êîíòðîëüíîé ãðóïïå è 259 îòí. åä. ïðîòèâ 583 — â îñíîâíîé). ×åðåç 1 ñóò ïîñëå îïåðàöèè ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê â îáåèõ ãðóïïàõ íå èçìåíÿëàñü (ðèñ. 2). ×åðåç 7 ñóò ïîñëå îïåðàöèè â êîíòðîëüíîé ãðóïïå áîëüíûõ îòìå÷àëîñü ïîâûøåíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê ñ 240 (èñõîäíûé óðîâåíü) äî 263 îòí. åä. ïî ñðàâíåíèþ ñ îñíîâíîé ãðóïïîé, â êîòîðîé ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê â ýòîò æå ñðîê òåñòèðîâàíèÿ îòíîñèòåëüíî íà÷àëüíîãî óðîâíÿ ñíèæàëàñü c 259 äî 175 îòí. åä. (ðèñ. 2). Ïðè÷åì ýòî ñíèæåíèå íàáëþäàëîñü ó 6 áîëüíûõ. Áîëåå òîãî, ñíèæåíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê c 251 äî 175 îòí. åä. ó 7 áîëüíûõ îòíîñèòåëüíî ïîñëåîïåðàöèîííîãî óðîâíÿ áûëî äîñòîâåðíûì (P < 0.05). 4. Ê ë å ò ê è H B L - 1 0 0. Ïîêàçàòåëè èñõîäíîé ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè ýòèõ êëåòîê ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ñûâîðîòêàìè êðîâè áîëüíûõ ÐÌÆ âàðüèðîâàëè â êîíò- 788 À. À. Çèìèí, Ê. À. Ñàìîéëîâà, Í. À. Æåâàãî Ðèñ. 1. Âëèÿíèå ñûâîðîòêè (2.5 %) áîëüíûõ ÐÌÆ, íå ïðîøåäøèõ (I, III) è ïðîøåäøèõ (II, IV) êóðñ ôîòîòåðàïèè, íà ïðîëèôåðàöèþ êåðàòèíîöèòîâ (ÊÖ) è ôèáðîáëàñòîâ (ÔÁ). Ïî ãîðèçîíòàëè — òðè ñðîêà òåñòèðîâàíèÿ ñûâîðîòêè: 0 — èñõîäíûé óðîâåíü äî îïåðàöèè, 1 — ÷åðåç 1 ñóò ïîñëå îïåðàöèè, 2 — ÷åðåç 8 ñóò ïîñëå îïåðàöèè; ïî âåðòèêàëè — îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü, îòí. åä. Çâåçäî÷êîé îòìå÷åíà äîñòîâåðíîñòü îòëè÷èé ìåæäó óðîâíÿìè èñõîäíûì è ÷åðåç 8 ñóò ïîñëå îïåðàöèè (II, P < 0.05), à òàêæå ìåæäó óðîâíÿìè ïîñëå îïåðàöèè ÷åðåç 1 è 8 ñóò (IV, P < 0.05). Çäåñü è íà ðèñ. 2: î ïðîëèôåðàöèè ñóäèëè ïî èíòåíñèâíîñòè îêðàøèâàíèÿ êëåòîê êðèñòàëë-âèîëåòîì. Ñûâîðîòêó äîáàâëÿëè â ñðåäó êóëüòèâèðîâàíèÿ. Ðèñ. 2. Âëèÿíèå ñûâîðîòêè (2.5 %) áîëüíûõ ÐÌÆ áåç êóðñà ôîòîòåðàïèè (I) è ïîñëå êóðñà ôîòîòåðàïèè (II) íà ïðîëèôåðàöèþ 4 îïóõîëåâûõ ëèíèé ÷åëîâåêà — BT-474, HBL-100, Hs578T è À431. Ïî îñÿì — òî æå, ÷òî è íà ðèñ. 1. Çâåçäî÷êè óêàçûâàþò íà äîñòîâåðíûå îòëè÷èÿ îò èñõîäíîãî óðîâíÿ: * P < 0.05, ** P < 0.01, *** P < 0.001. Äîñòîâåðíûå ðàçëè÷èÿ ìåæäó óðîâíÿìè ÷åðåç 1 è 8 ñóò: à — P < 0.05, b — P < 0.01, c — P < 0.001. g — äîñòîâåðíîå ðàçëè÷èå ìåæäó ãðóïïàìè îòíîñèòåëüíî èñõîäíîãî óðîâíÿ ïðè P < 0.05; D è s — äîñòîâåðíûå ðàçëè÷èÿ ìåæäó ãðóïïàìè îòíîñèòåëüíî ïîñëåîïåðàöèîííîãî óðîâíÿ ñîîòâåòñòâåííî ïðè P < 0.05 è P < 0.01. Ïðîëèôåðàöèÿ íîðìàëüíûõ è îïóõîëåâûõ êëåòîê â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè ðîëüíîé è îñíîâíîé ãðóïïàõ ñîîòâåòñòâåííî â 3.4 è 3.6 ðàçà è áûëè äîñòîâåðíî íèæå, ÷åì ïðè êóëüòèâèðîâàíèè êëåòîê ñ ÝÒÑ (209 îòí. åä. ïðîòèâ 343 â êîíòðîëüíîé ãðóïïå è 189 îòí. åä. ïðîòèâ 370 â îñíîâíîé). Îïåðàöèÿ íå èçìåíÿëà ïðîëèôåðàòèâíóþ àêòèâíîñòü êëåòîê â îáåèõ ãðóïïàõ (ðèñ. 2). ×åðåç 7 ñóò â êîíòðîëüíîé ãðóïïå áîëüíûõ ÐÌÆ îòìå÷àëîñü ïîâûøåíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê ýòîé ëèíèè c 167 äî 182 îòí. åä. (ðèñ. 2). Ìåæäó òåì â îñíîâíîé ãðóïïå â ýòîò æå ñðîê òåñòèðîâàíèÿ ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü ñíèçèëèñü cî 184 äî 157 îòí. åä. îòíîñèòåëüíî óðîâíÿ ïîñëå îïåðàöèè (P < 0.05). Ïðè÷åì òàêîå ñíèæåíèå íàáëþäàëîñü ó 7 áîëüíûõ. Ðåãèñòðèðóåìîå èçìåíåíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê îêàçàëîñü äîñòîâåðíûì (P < 0.05) ìåæäó äâóìÿ ãðóïïàìè. 5. Ê ë å ò ê è H s 5 7 8 T. Ðåãèñòðèðîâàëàñü âàðèàáåëüíîñòü èñõîäíûõ ïîêàçàòåëåé ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè êëåòîê ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ñûâîðîòêîé êðîâè áîëüíûõ â êîíòðîëüíîé è îñíîâíîé ãðóïïàõ ñîîòâåòñòâåííî â 2.2 è 2.3 ðàçà. Ïðè ýòîì ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü êëåòîê â ýòèõ ãðóïïàõ íå îòëè÷àëàñü îò òàêîâîé â ïðèñóòñòâèè ÝÒÑ. Îïåðàöèÿ íå èçìåíÿëà ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê â îáåèõ ãðóïïàõ (ðèñ. 2). ×åðåç 7 ñóò ïîñëå îïåðàöèè â êîíòðîëüíîé ãðóïïå íå ïðîèñõîäèëî èçìåíåíèé ïîêàçàòåëåé ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè êëåòîê, òîãäà êàê â îñíîâíîé ãðóïïå â ýòîò ñðîê ðåãèñòðèðîâàëîñü åå äîñòîâåðíîå ñíèæåíèå c 533 äî 476 îòí. åä. îòíîñèòåëüíî èñõîäíîãî óðîâíÿ, à òàêæå îòíîñèòåëüíî óðîâíÿ ïîñëå îïåðàöèè ñ 527 äî 476 îòí. åä. (p < 0. 01). 6. Ê ë å ò ê è A 4 3 1. Ïîêàçàòåëè èñõîäíîé ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè êëåòîê çà 1 ñóò äî îïåðàöèè (èñõîäíî) âàðüèðîâàëè â êîíòðîëüíîé ãðóïïå â 1.8 ðàçà, â îñíîâíîé — â 2 ðàçà è áûëè äîñòîâåðíî íèæå, ÷åì ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ÝÒÑ (617 îòí. åä. ïðîòèâ 692 â ïðèñóòñòâèè ÝÒÑ â êîíòðîëüíîé ãðóïïå è 599 îòí. åä. ïðîòèâ 702 â îñíîâíîé). Îïåðàöèÿ íå èçìåíÿëà ïðîëèôåðàöèè êëåòîê â îáåèõ ãðóïïàõ (ðèñ. 2). ×åðåç 7 ñóò â êîíòðîëüíîé ãðóïïå áîëüíûõ ÐÌÆ îòìå÷àëîñü ïîâûøåíèå ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè êëåòîê c 617 îòí. åä. (èñõîäíûé óðîâåíü) äî 643 è c 603 îòí. åä. (ïîñëåîïåðàöèîííûé óðîâåíü) äî 643 (ðèñ. 2).  îáîèõ ñëó÷àÿõ óâåëè÷åíèå áûëî îòìå÷åíî ó 7 áîëüíûõ.  îñíîâíîé ãðóïïå ÷åðåç 7 ñóò ðåãèñòðèðîâàëîñü ñíèæåíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê c 617 îòí. åä. (èñõîäíûé óðîâåíü) äî 558 è c 597 îòí. åä. (ïîñëåîïåðàöèîííûé óðîâåíü) äî 558. Ýòè ðàçíîíàïðàâëåííûå ðàçëè÷èÿ ÿâëÿþòñÿ ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíûìè (P < 0.05) â îáîèõ ñëó÷àÿõ. Îáñóæäåíèå  íàñòîÿùåì èññëåäîâàíèè ïîêàçàíî, ÷òî èñõîäíàÿ (äî îïåðàöèè) ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü ïåðâè÷íûõ êóëüòóð (ÔÁ è ÊÖ) ïðè êóëüòèâèðîâàíèè â ñðåäå ñ ñûâîðîòêîé êðîâè áîëüíûõ ÐÌÆ áûëà íèæå, ÷åì â ïðèñóòñòâèè ÝÒÑ, â ñðåäíåì íà 44.8 %. Ïî ýòîìó ïîêàçàòåëþ áîëüíûå ÐÌÆ îòëè÷àëèñü îò çäîðîâûõ äîáðîâîëüöåâ, âëèÿíèå ñûâîðîòêè êîòîðûõ íà ïðîëèôåðàöèþ ÔÁ è ÊÖ áûëî ñîïîñòàâèìî ñ òàêîâûì ÝÒÑ (Ñàìîéëîâà è äð., 2003; Áîãà÷åâà è äð., 2004). Ìîæíî ïðåäïîëàãàòü, ÷òî îñîáåííîñòü ñûâîðîòêè êðîâè îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ ÿâëÿåòñÿ îäíîé èç ïðè÷èí âÿëîãî òå÷åíèÿ ó íèõ ïðîöåññîâ çàæèâëåíèÿ ðàí. Âëèÿíèå ñûâîðîòêè áîëüíûõ ÐÌÆ íà ïðîëèôåðàöèþ îïóõîëåâûõ êëåòîê òàêæå áûëà â ñðåäíåì íà 33.4 % íèæå, ÷åì âëèÿíèå ÝÒÑ. Èñêëþ÷åíèå ñîñòàâëÿëè êëåòêè Hs578T, óðîâåíü ïðîëèôåðàöèè êîòîðûõ çà 1 ñóò 789 äî îïåðàöèè äîñòîâåðíî íå îòëè÷àëñÿ îò ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè êëåòîê ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ñ ÝÒÑ. ×åðåç 1 ñóò ïîñëå õèðóðãè÷åñêîãî óäàëåíèÿ îïóõîëè ïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü âñåõ âèäîâ èçó÷åííûõ â äàííîé ðàáîòå êëåòîê (êàê íîðìàëüíûõ, òàê è îïóõîëåâûõ) íå èçìåíÿëàñü. Îíà íå ìåíÿëàñü è â êóðñå ñòàíäàðòíîãî ïîñëåîïåðàöèîííîãî ëå÷åíèÿ áîëüíûõ, òîãäà êàê ÷åðåç 7 ñóò ïîñëå êóðñà ôîòîòåðàïèè Í è ÁÈÊ ñâåòîì ïðîèñõîäèëî óâåëè÷åíèå ïðîëèôåðàöèè ÔÁ íà 22 % îòíîñèòåëüíî èñõîäíîãî óðîâíÿ, à äëÿ ÊÖ — íà 28 % îòíîñèòåëüíî ïîñëåîïåðàöèîííîãî óðîâíÿ. Âìåñòå ñ òåì ïðîëèôåðàöèÿ êëåòîê BT-474, Hs578T è À431 â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ ñíèæàëàñü îòíîñèòåëüíî äîîïåðàöèîííîãî (èñõîäíîãî) óðîâíÿ íà 31.5, 9 è 6.5 % ñîîòâåòñòâåííî, à äëÿ îïóõîëåâûõ êëåòîê BT-474, HBL-100, Hs578T è À431 â ñðàâíåíèè ñ ïîñëåîïåðàöèîííûì óðîâíåì — íà 32, 16, 8.6 è 6.3 % ñîîòâåòñòâåííî. Ïðè îáñóæäåíèè âîçìîæíûõ ìåõàíèçìîâ òàêèõ èçìåíåíèé ïðîëèôåðàöèè êëåòîê íåîáõîäèìî îáðàòèòüñÿ ê äàííûì, ïîëó÷åííûì íàìè â ïðåäûäóùèõ èññëåäîâàíèÿõ. Ñîãëàñíî îäíîìó èç íèõ, óæå ÷åðåç 30 ìèí ïîñëå îáëó÷åíèÿ Í è ÁÈÊ ñâåòîì äîáðîâîëüöåâ èëè îáðàçöîâ èõ êðîâè in vitro â ïëàçìå ñíèæàåòñÿ ñîäåðæàíèå ïðîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ (TNF-a, IL-6 è IL-12) è âîçðàñòàåò óðîâåíü ðîñòîâûõ ôàêòîðîâ PDGF è TGF-b1 (Æåâàãî è äð., 2005). Ïðè÷åì ó äîáðîâîëüöåâ ñ íåâûñîêèì èñõîäíûì óðîâíåì PDGF åãî ñîäåðæàíèå â ïëàçìå êðîâè óâåëè÷èâàåòñÿ íà 20 %, à ÷åðåç 24 ÷ — íà 24 %; â ýòè æå ñðîêè ïðè èñõîäíî íèçêîì ñîäåðæàíèè âîçðàñòàåò è óðîâåíü TGF-b1 íà 43 è 38 % ñîîòâåòñòâåííî. Ýòè èçìåíåíèÿ êîððåëèðîâàëè ïî âðåìåíè ñ ïîâûøåíèåì ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè ÔÁ. Õîòÿ PDGF è ýïèäåðìàëüíûé ôàêòîð ðîñòà (ÝÔÐ), êîíöåíòðàöèÿ êîòîðûõ â êðîâè ïîñëå ñâåòîâîãî âîçäåéñòâèÿ ïîâûøàåòñÿ ïðåæäå âñåãî â ñâÿçè ñ âûõîäîì èç òðîìáîöèòîâ (Kiaru et al., 1991), ñòèìóëèðóþò ïðîëèôåðàòèâíûå ïðîöåññû, â îïóõîëåâûõ êëåòêàõ ýòè öèòîêèíû ìîãóò îêàçûâàòü ïðîòèâîïîëîæíûé ýôôåêò è èíäóöèðîâàòü àïîïòîç (Armstrong et al., 1994).  ÷àñòíîñòè, ÝÔÐ çàïóñêàåò ïðîöåññ ãèáåëè êëåòîê ÐÌÆ, êîòîðûå ýêñïðåññèðóþò ïîâûøåííîå êîëè÷åñòâî ðåöåïòîðà ê ýòîìó öèòîêèíó. Âåðîÿòíî, èìåííî ýòèì ìîæíî îáúÿñíèòü îáíàðóæåííîå â äàííîì èññëåäîâàíèè ñíèæåíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê A431, òàê êàê íà ïîâåðõíîñòè ýòèõ êëåòîê òàêæå ðàñïîëàãàåòñÿ îãðîìíîå êîëè÷åñòâî ðåöåïòîðîâ ê ÝÔÐ. Ñîãëàñíî èìåþùèìñÿ äàííûì (Æåâàãî è äð., 2005), îñîáåííîñòüþ âëèÿíèÿ Í è ÁÈÊ ñâåòà íà öèòîêèíîâóþ ñåòü ÿâëÿåòñÿ ïî÷òè 6-êðàòíîå óâåëè÷åíèå ñîäåðæàíèÿ â ïëàçìå IFN-g è â ñðåäíåì 5-êðàòíîå âîçðàñòàíèå óðîâíÿ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîãî öèòîêèíà IL-10. Ïîâûøåíèå ñîäåðæàíèÿ IFN-g ïðè âîçäåéñòâèè âèäèìîãî ëàçåðíîãî ñâåòà îòìå÷àåòñÿ òàêæå â èññëåäîâàíèè Ëåîíîâîé ñ ñîòðóäíèêàìè (1994). Ïîñêîëüêó ÔÁ ÷åëîâåêà èìåþò ðåöåïòîðû è ê IFN-, è ê IL-10 (Anderson, Nagler, 1984; Ritchin, Haas-Smith, 2001), ñëåäóåò îáñóäèòü âîçìîæíûå ïîñëåäñòâèÿ èõ âëèÿíèÿ íà ôóíêöèîíàëüíîå ñîñòîÿíèå êëåòîê ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè. Àíòèïðîëèôåðàòèâíûå ñâîéñòâà IFN-g õîðîøî èçâåñòíû, è â ïðîöåññàõ ðàíîçàæèâëåíèÿ ýòîìó öèòîêèíó îòâîäèòñÿ ðîëü èíãèáèòîðà ïðîëèôåðàöèè è ìèãðàöèè ÔÁ (Eisenbeiss et al., 1998). Îäíàêî èìåþòñÿ äàííûå î òîì, ÷òî IFN-g ïîäàâëÿåò ïðîëèôåðàöèþ òîëüêî áûñòðî ðàçìíîæàþùèõñÿ ÔÁ, à ïîêîÿùèåñÿ êëåòêè îí ñòèìóëèðóåò (Elias et al., 1987). Ó êóëüòèâèðóåìûõ ÔÁ êîíúþíêòèâû ÷åëîâåêà IFN-g ïîäàâëÿåò ïðîäóêöèþ ýêñòðàöåëëþëÿðíî- 790 À. À. Çèìèí, Ê. À. Ñàìîéëîâà, Í. À. Æåâàãî ãî ìàòðèêñà è ìèãðàöèþ êëåòîê, íî íå âëèÿåò íà èõ ïðîëèôåðàöèþ (Yamanaka et al., 2003). Ñ äðóãîé ñòîðîíû, ýòîò öèòîêèí ñòèìóëèðóåò â äîçîçàâèñèìîé ìàíåðå ïðîëèôåðàöèþ ÔÁ çóáíîé ïóëüïû ÷åëîâåêà (Melin et al., 1989).  ëèòåðàòóðå òàêæå ïðèâîäÿòñÿ äàííûå î âëèÿíèè IL-10 íà ïðîëèôåðàöèþ ÔÁ è çàæèâëåíèå ðàí. Ïî äàííûì íåêîòîðûõ àâòîðîâ (Dosanjh et al., 2001), êîíäèöèîíèðîâàííàÿ ñðåäà, ïîëó÷åííàÿ îò ýïèòåëèàëüíûõ êëåòîê áðîíõîâ çäîðîâîãî ÷åëîâåêà, ñîäåðæèò áîëüøîå êîëè÷åñòâî IL-10 è ñòèìóëèðóåò ðîñò ëåãî÷íûõ ÔÁ. Òàêèì æå ñâîéñòâîì îáëàäàåò îáû÷íàÿ ïèòàòåëüíàÿ ñðåäà, ê êîòîðîé äîáàâëåí IL-10 â êîíöåíòðàöèÿõ 100, 200 è 500 ïã/ìë. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, â äåðìàëüíûõ ðàíàõ ýìáðèîíîâ ìûøåé áëàãîäàðÿ âûñîêîìó ñîäåðæàíèþ IL-10 ñíèæàþòñÿ ñîäåðæàíèå ïðîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ è ñòåïåíü ñàìîãî âîñïàëèòåëüíîãî ïðîöåññà, ÷òî ñäåðæèâàåò ãèïåðïðîäóêöèþ êëåòîê ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè (Liechty et al., 2000). Íà ýòîì îñíîâàíèè àâòîðû ïîëàãàþò, ÷òî IL-10 íåîáõîäèì äëÿ áåçðóáöîâîé ðåãåíåðàöèè ðàí. Ìåõàíèçì ïîâûøåíèÿ ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè ÊÖ ó áîëüíûõ ÐÌÆ ìîæåò áûòü ñâÿçàí ñ äåéñòâèåì ñâåòà íå òîëüêî íà êðîâü, íî è íà êîìïîíåíòû ïîâåðõíîñòíûõ îòäåëîâ êîæè. Çíà÷èòåëüíûé âêëàä, ïî-âèäèìîìó, âíîñÿò ñàìè ÊÖ. Ýòè êëåòêè ïðîäóöèðóþò êîíñòèòóòèâíî èëè ïîä äåéñòâèåì èíäóêòîðîâ ðàçëè÷íûå öèòîêèíû (IL 1a, 1b, 6, 7, 8, 10, 12, 18, 20, TNF-a, IFN a, b è g), íåêîòîðûå èç êîòîðûõ ñòèìóëèðóþò ïðîëèôåðàöèþ ÊÖ (IL-4, IL-6), èíäóöèðóþò èõ õåìîòàêñèñ (IL-1, IL-8, TNF-a è IFN-g) è äèôôåðåíöèðîâêó (IFN-g) (Gröne, 2002). ÊÖ ñåêðåòèðóþò òàêæå ðîñòîâûå ôàêòîðû, íåîáõîäèìûå äëÿ ïðîöåññîâ ðåãåíåðàöèè êîæè. Ñðåäè íèõ ëèãàíäû äëÿ ðåöåïòîðîâ EGF — EGF, TGFa, ãåïàðèíñâÿçûâàþùèé EGF-ïîäîáíûé ôàêòîð (HB-EGF) è àìôèðåãóëèí. Îíè ñèíòåçèðóþòñÿ ÊÖ â ìåìáðàííî-ñâÿçàííîé ôîðìå è ìîãóò äåñîðáèðîâàòüñÿ ñ ïîâåðõíîñòè ïîä äåéñòâèåì ðàçëè÷íûõ ôàêòîðîâ (Massague, Pandiella, 1993). Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ïðè âîçäåéñòâèè íà êîæó îïòè÷åñêîãî èçëó÷åíèÿ ýòè ðîñòîâûå ôàêòîðû äåñîðáèðóåþòñÿ ñ ïîâåðõíîñòè ÊÖ è, ïîñòóïàÿ â ïëàçìó êðîâè, ñïîñîáñòâóþò âîçðàñòàíèþ ïðîëèôåðàöèè ýòèõ êëåòîê. Íå èñêëþ÷åíî òàêæå, ÷òî â óñëîâèÿõ in vivo ñâåò ïîòåíöèðóåò äåðìàëüíî-ýïèäåðìàëüíûå âçàèìîäåéñòâèÿ, è ðîñòîâîé ôàêòîð ÊÖ ñåêðåòèðóåòñÿ ÔÁ. Ïîêàçàíî, íàïðèìåð, ÷òî ïðè ðàçäðàæåíèè è ïîâðåæäåíèè êîæè ýïèäåðìàëüíûå êëåòêè ñåêðåòèðóþò IL-1, ÷òî ñòèìóëèðóåò ñåêðåöèþ ôèáðîáëàñòàìè ôàêòîðà ðîñòà êåðàòèíîöèòîâ (Maas-Szabowski et al., 2000). Ïîâûøåíèå ìèòîãåííîé àêòèâíîñòè ïëàçìû äëÿ ÔÁ ïðè ôîòîìîäèôèêàöèè êðîâè ìîæåò áûòü òàêæå ñâÿçàíî ñ âîçäåéñòâèåì ñâåòà íà òðîìáîöèòû è âûõîäîì èõ íèõ âåùåñòâ áåëêîâîé ïðèðîäû (Ñàìîéëîâà è äð., 2003; Áîãà÷åâà è äð., 2004). Ïîêàçàíî, ÷òî ïðè àêòèâàöèè êðîâÿíûõ ïëàñòèíîê â ïðîöåññå ñâåðòûâàíèÿ êðîâè ÝÔÐ îñâîáîæäàåòñÿ â âèäå íåñêîëüêèõ ôðàêöèé ðàçíîé ìîëåêóëÿðíîé ìàññû (Kiaru et al., 1991; Hwang et al., 1992). Ðÿäîì àâòîðîâ îïèñàíà âûñîêàÿ ÷óâñòâèòåëüíîñòü òðîìáîöèòîâ ê âèäèìîìó è ÁÈÊ ëàçåðíîìó èçëó÷åíèþ è èõ êîìáèíàöèè. Òàê, ó îáëó÷åííûõ â ìàëûõ äîçàõ òðîìáîöèòîâ ðåçêî ñíèæàåòñÿ àãðåãàöèîííàÿ ñïîñîáíîñòü (Brill et al., 1996). Ïî äàííûì äðóãèõ àâòîðîâ (Olban et al., 1998), êðàñíûé ñâåò â äîçå 1.8—2.0 Äæ ñòèìóëèðóåò â ýòèõ êëåòêàõ îáðàçîâàíèå ñóïåðîêñèäíûõ ðàäèêàëîâ, ñåêðåöèþ áåëêîâ è àäåíèíîâûõ íóêëåîòèäîâ. Äàííûå ëèòåðàòóðû ñâèäåòåëüñòâóþò î ñïîñîáíîñòè IFN-g èíãèáèðîâàòü ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê âñåõ ëèíèé ÐÌÆ, êîòîðûå èçó÷àëè â íàñòîÿùåé ðàáîòå. Ðîñò êëåòîê HBL-100 òîðìîçèòñÿ ïðè äîáàâëåíèè IFN-g (Tsai, Gaffney, 1987). Àíàëîãè÷íûé ýôôåêò ðàçâèâàåòñÿ ïðè äîáàâëåíèè IFN-g è ê êëåòêàì BT-474 (Kopreski et al., 1996).  îòíîøåíèè êëåòîê Hs578T óñòàíîâëåí ìåõàíèçì àêòèâàöèè èíòåðôåðîíðåãóëèðóþùåãî ôàêòîðà IRF-1, êîòîðûé îêàçûâàåò èíãèáèðóþùåå âëèÿíèå íà ýòó ëèíèþ îïóõîëåâûõ êëåòîê (Yim et al., 2003). Óãíåòåíèå ïðîëèôåðàöèè ýòèõ êëåòîê ïðè äåéñòâèè IFN-g òàêæå îïèñûâàåòñÿ â ðàáîòå äðóãèõ àâòîðîâ (Mueller et al., 1996). Âëèÿíèå IFN-g íà ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê A431 ñõîäíî ñ ýôôåêòîì íà êëåòêè ÐÌÆ ÷åëîâåêà: ïðîèñõîäèò àêòèâàöèÿ ïðîöåññà êëåòî÷íîé ãèáåëè ïîñðåäñòâîì âëèÿíèÿ íà òðàíñêðèïöèîííûé ôàêòîð STAT1 (Chin et al., 1997).  óñëîâèÿõ in vitro IFN-g ñïîñîáåí èíäóöèðîâàòü àïîïòîç êëåòîê ÐÌÆ â êîìáèíàöèè ñ ïðîòèâîîïóõîëåâûìè ïðåïàðàòàìè (Ossina et al., 1997) è àíòèìåòàáîëèòàìè (Koshiji et al., 1997). Ïðîòèâîîïóõîëåâàÿ àêòèâíîñòü IFN-g òàêæå îòìå÷àåòñÿ è â êëèíè÷åñêèõ èññëåäîâàíèÿõ. Ó áîëüíûõ ÐÌÆ ñ ìåòàñòàçàìè â êîæó ìåñòíûå èíúåêöèè IFN-g ïðèâîäèëè ê èõ ÷àñòè÷íîé èëè ïîëíîé ðåãðåññèè (Habif et al., 1995). Äðóãèå àâòîðû ïðèâîäÿò äàííûå î ïîâûøåíèè ñïîñîáíîñòè òàìîêñèôåíà â êîìáèíàöèè ñ IFN-g èíãèáèðîâàòü ðîñò îïóõîëè ó áîëüíûõ ñ äèññåìèíèðîâàííûì ÐÌÆ (Seymour, Bezwoda, 1993). Îïðåäåëåííûé ïðîðûâ â îáëàñòè ïðàêòè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ òêàíåâûõ ìàðêåðîâ, ñâÿçàííûõ ñ îïîñðåäîâàííîé ðåöåïòîðàìè ÝÔÐ ðåãóëÿöèåé ðîñòà ðàêà ìîëî÷íîé æåëåçû, ïðîèçîøåë ïîñëå ïîÿâëåíèÿ ïðåïàðàòà Ãåðöåïòèí, ïðåäñòàâëÿþùåãî ñîáîé àíòèòåëà ê HER2/neu — îäíîìó èç ðåöåïòîðîâ ñåìåéñòâà ErbB, ê êîòîðîìó ïðèíàäëåæèò è ðåöåïòîð ÝÔÐ. Äåéñòâèå IFN-g íà êëåòêè ÐÌÆ ÷åëîâåêà ëèíèé BT-474 è MCF-7 ïðèâîäèò ê ïîâûøåíèþ ýêñïðåññèè ðåöåïòîðà HER2/neu è óñèëåíèþ ñâÿçûâàíèÿ àíòèòåë ïðîòèâ ýòîãî ðåöåïòîðà, ÷òî â èòîãå ïîâûøàåò ýôôåêòèâíîñòü ïðèìåíåíèÿ Ãåðöåïòèíà (Fan et al., 2006). Ìíîãèå ýôôåêòû öèòîêèíîâ çàâèñÿò íå òîëüêî îò èõ ñîáñòâåííûõ, íî òàêæå è îò ñâîéñòâ äðóãèõ öèòîêèíîâ è áèîëîãè÷åñêè àêòèâíûõ âåùåñòâ, ñîâìåñòíî ñ êîòîðûìè îñóùåñòâëÿåòñÿ äåéñòâèå íà îïóõîëåâûå êëåòêè â ýêñïåðèìåíòå. Ýòî õîðîøî èëëþñòðèðóåòñÿ â èññëåäîâàíèè ãðóïïû àâòîðîâ (Sun et al., 2000), â êîòîðîì ó ìûøåé ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûìè îïóõîëÿìè ÐÌÆ ïðîòèâîîïóõîëåâîå äåéñòâèå IL-10 çàâèñåëî îò ïðèñóòñòâèÿ îêñèäà àçîòà (NO). Èíãèáèðîâàíèå NO-ñèíòàçû ôàðìàêîëîãè÷åñêèìè ïðåïàðàòàìè çíà÷èòåëüíî ñíèæàëî àíòèïðîëèôåðàòèâíûå ñâîéñòâà IL-10. Ýêñïðåññèÿ NO-ñèíòàçû óñèëèâàëàñü ïðè äåéñòâèè IFN-g. Òàêèì îáðàçîì, êîíå÷íûé èíãèáèðóþùèé ýôôåêò íà îïóõîëåâûå êëåòêè îïðåäåëÿëñÿ ñîâìåñòíûì äåéñòâèåì óêàçàííûõ âåùåñòâ. Ìåæäó òåì, ïî íàøèì äàííûì (Samoilova et al., 2008), ïîëèõðîìàòè÷åñêèé ñâåò ñòèìóëèðóåò NO-ñèíòàçó è ñïîñîáñòâóåò ïîâûøåíèþ óðîâíÿ NO â öèðêóëÿöèè. Îáíàðóæåííîå â íàñòîÿùåì èññëåäîâàíèè èíãèáèðîâàíèå ïðîëèôåðàöèè êëåòîê ÐÌÆ ìîæåò ñëóæèòü îäíèì èç îáîñíîâàíèé îíêîëîãè÷åñêîé áåçîïàñíîñòè ïðèìåíåíèÿ Í è ÁÈÊ ñâåòà äëÿ ëå÷åíèÿ áîëüíûõ ÐÌÆ. Óñèëåíèå æå ïîñëå òàêîãî êóðñà ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòè ÊÖ è ÔÁ ìîæåò ñîñòàâëÿòü îäíî èç îáúÿñíåíèé óñèëåíèÿ ïðîöåññîâ ðåãåíåðàöèè ðàí è ñíèæåíèÿ ÷àñòîòû îñëîæíåíèé ïîñëå õèìèî- è ëó÷åâîé òåðàïèè ó áîëüíûõ ñ ýòèì çëîêà÷åñòâåííûì çàáîëåâàíèåì. Ïðîëèôåðàöèÿ íîðìàëüíûõ è îïóõîëåâûõ êëåòîê â ïðèñóòñòâèè ñûâîðîòêè êðîâè Ñïèñîê ëèòåðàòóðû Áåëèøåâà Í. Ê., Ñàìîéëîâà Ê. À. 1984. Ìåõàíèçì êëèíè÷åñêèõ ýôôåêòîâ ÓÔ-îáëó÷åííîé êðîâè: ñòèìóëÿöèÿ ÄÍÊ-ñèíòåòè÷åñêîé àêòèâíîñòè êëåòîê ÷åëîâåêà â êóëüòóðå. Áþë. ýêñïåðèì. áèîë. ìåä. 12 : 675—678. Áîãà÷åâà Î. Í., Ñàìîéëîâà Ê. À., Æåâàãî Í. À., Îáîëåíñêàÿ Ê. Ä., Áëèíîâà Ì. È., Êàëìûêîâà Í. Â., Êóçüìèíûõ Å. Â. 2004. Ïîâûøåíèå ðîñòîñòèìóëèðóþùåé àêòèâíîñòè êðîâè ÷åëîâåêà äëÿ ôèáðîáëàñòîâ ïîñëå åå îáëó÷åíèÿ in vivo (òðàíñêóòàííî) è in vitro âèäèìûì è èíôðàêðàñíûì ïîëÿðèçîâàííûì ñâåòîì. Öèòîëîãèÿ. 46 (2) : 159—171. Æåâàãî Í. À., Ñàìîéëîâà Ê. À., Îáîëåíñêàÿ Ê. Ä., Ñîêîëîâ Ä. È. 2005. Èçìåíåíèå ñîäåðæàíèÿ öèòîêèíîâ â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè äîáðîâîëüöåâ ïîñëå îáëó÷åíèÿ ïîëèõðîìàòè÷åñêèì âèäèìûì è èíôðàêðàñíûì ñâåòîì. Öèòîëîãèÿ. 47 (5) : 450—460. Æåâàãî Í. À., Ñàìîéëîâà Ê. À., Ñîêîëîâ Ä. È., Îáîëåíñêàÿ Ê. Ä. 2002. Íåìåäëåííûå èçìåíåíèÿ ñîîòíîøåíèÿ ïðî- è ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ â êðîâè ÷åëîâåêà ïîñëå åå îáëó÷åíèÿ in vivo è in vitro ïîëèõðîìàòè÷åñêèì ñâåòîì â òåðàïåâòè÷åñêèõ äîçàõ. Öèòîêèíû è âîñïàëåíèå. 1 (2): 87—88. Ëåîíîâà Ã. Í., Ìàéñòðîâñêàÿ Î. Ñ., ×óäíîâñêèé Â. Ì. 1994. Ãåëèé-íåîíîâîå èçëó÷åíèå êàê èíäóêòîð èíòåðôåðîíîîáðàçîâàíèÿ. Âîïð. âèðóñîë. 39 (3) : 119—121. Ïðîñêóðÿêîâ Ñ. ß., Êîíîïëÿíèêîâ À. Ã., Èâàííèêîâ À. È., Ñêâîðöîâ Â. Ã., Öûá À. Ô. 2000. Îêñèä àçîòà è òåðàïèÿ çëîêà÷åñòâåííûõ íîâîîáðàçîâàíèé. Ðîñ. îíêîë. æóðí. 3 : 41—45. Ñàìîéëîâà Ê. À., Áåëèøåâà Í. Ê., Çàðèöêèé À. Þ., Ìèðîíîâà À. Ï., Ôèðóëèíà È. È. 1984. Ïîâûøåíèå ðîñòîñòèìóëèðóþùèõ ñâîéñòâ êðîâè ÷åëîâåêà ïîñëå åå îáëó÷åíèÿ ÓÔ ëó÷àìè. Öèòîëîãèÿ. 26 (9) : 1088—1089. Ñàìîéëîâà Ê. À., Áîãà÷åâà Î. Í., Îáîëåíñêàÿ Ê. Ä., Áëèíîâà Ì. È., Êàëìûêîâà Í. Â., Êóçüìèíûõ Å. Â. 2003. Ïîâûøåíèå ðîñòîñòèìóëèðóþùåé àêòèâíîñòè êðîâè ÷åëîâåêà äëÿ êåðàòèíîöèòîâ ïîñëå åå îáëó÷åíèÿ in vivo (òðàíñêóòàííî) è in vitro âèäèìûì è èíôðàêðàñíûì ïîëÿðèçîâàííûì ñâåòîì. Öèòîëîãèÿ. 45 (6) : 596—605. Òàðóòèíîâ Â. È., Ãàìàëåÿ Í. Ô., Ñêëÿð Ñ. Þ., Áóêàâèí À. Ñ., Ðóäûõ Ç. Ì., Ñòàäíèê Â. ß., Ãàëàõèí Ê. À., Ñêèâêà Ë. Ì., Òêà÷åâ Â. À., Âåðáåöêèé Â. Â. 1996. Ïðèìåíåíèå ëàçåðíîé òåðàïèè â ïðåäîïåðàöèîííîì ïåðèîäå ó áîëüíûõ ðàêîì ìîëî÷íîé æåëåçû. Êëèí. õèðóðãèÿ. 1 : 31—34. Òîòîëÿí À. À., Ôðåéäëèí È. Ñ. 1999. Êëåòêè èììóííîé ñèñòåìû. ÑÏá.: Íàóêà. 231 ñ. Òþëÿíäèí Ñ. À., Ìîèñååíêî Â. Ì. 2004. Ýïèäåìèîëîãè÷åñêèå ôàêòîðû ðèñêà, ðàííÿÿ äèàãíîñòèêà ðàêà ìîëî÷íîé æåëåçû.  êí.: Ïðàêòè÷åñêàÿ îíêîëîãèÿ: èçáðàííûå ëåêöèè. ÑÏá.: Öåíòð ÒÎÌÌ. 15—22. Þäèíöåâà Í. Ì., Ãîðåëèê Þ. Â., Äüÿêîíîâ È. À., Êàëìûêîâà Í. Â., Áëèíîâà Ì. È., Ïèíàåâ Ã. Ï., Ïàðàìîíîâ Á. À. 1999. Òðàíñïëàíòàöèÿ àëëîãåííûõ ýïèòåëèàëüíûõ ïëàñòîâ êåðàòèíîöèòîâ íà îæîãîâûå ðàíû. Öèòîëîãèÿ. 41 (3/4) : 328. Anderson P., Nagler C. 1984. Photoaffinity labeling of an interferon-gamma receptor on the surface of cultured fibroblasts. Biochem. Biophys. Res. Commun. 16 : 828—833. Armstrong D. K., Kaufmann S. H., Ottaviano Y. L., Furuya Y., Buckley J. A., Isaacs J. T., Davidson N. E. 1994. Epidermal growth factor-mediated apoptosis of MDA-MB-468 human breast cancer cells. Cancer Res. 54 : 5280—5283. Brill A. G., Kirichuk V. F., Brill G. E. 1996. Influence of He-Ne laser irradiation on platelet aggregation. Laser Therapy. 8 : 63—65. Chin Y. E., Kitagawa M., Kuida K., Flavell R. A., Fu X. Y. 1997. Activation of the STAT signaling pathway can cause expression of caspase 1 and apoptosis. Mol. Cell. Biol. 17 : 5328— 5337. Dosanjh A., Morris R. E., Wan B. 2001. Bronchial epithelial cell-derived cytokine IL-10 and lung fibroblast proliferation. Transplant. Proc. 33 : 352—354. Eisenbeiss W., Peter F. W., Bakhtiari C., Frenz C. 1998. Hypertrophic scars and keloids. J. Wound Care. 7 : 255—257. 791 Elias J. A., Jimenez S. A., Freundlich B. 1987. Recombinant gamma, alpha, and beta interferon regulation of human lung fibroblast porliferation. Amer. Rev. Respir. Dis. 135 : 62—65. Fan Y. X., Luo R. C., Fang Y. X., Yan X., Lu C. W. 2006. Effects of interferon-gamma on Her-2/neu expression and antitumor activity of 131I-Herceptin in breast cancer cell lines. Ai Zheng. 25 : 443—446. Grone A. 2002. Keratinocytes and cytokines. Vet. Immunol. Immunopathol. 88 : 1—12. Habif D., Ozello C., De la Rossa C., Cantell K., Lattes R. 1995. Regression of skin recurrences of breast cancer treated with intralesional injections of natural interferon alpha and gamma. Cancer Invest. 13 : 165—173. Hwang D. L., Lev-Ran A., Yen C. F., Sniecinski I. 1992. Release of different fractions of epidermal growth factor from human platelets in vitro: preferential release of 140kDa fraction. Regul. Pept. 37 : 95—100. Karu T. J., Pyatibrat L. V. 1987. Biostimulation of HeLa cells by low-intensity visible light. V. Stimulation of cell proliferation in vitro by He-Ne laser irradiation. Novo Cimento. 9D. N12 : 1485— 1494. Kiaru J., Viinikka L., Myllyla G., Pesonen K., Perheentupa J. 1991. Cytoskeleton-dependent release of human platelet epidermal growth factor. Life Sci. 49 : 1997—2003. Kopreski M. S., Lipton A., Harvey H. A., Kumar R. 1996. Growth inhibition of breast cancer cell lines by combinations of anti-P185HER2 monoclonal antibody and cytokines. Anticancer Res. 16 : 433—436. Koshiji M., Adachi Y., Taketani S., Takeuchi K., Hioki K., Ikehara S. 1997. Mechanisms underlying apoptosis induced by combination of 5-fluorouracil and interferon-g. Biochem. Biophys. Res. Commun. 240 : 376—381. Kueng W., Silber E., Eppenberger U. 1989. Quantification of cells cultured on 96-well plates. Anal. Biochem. 182 : 16—19. Liechty K. W., Kim H. B., Adzick N. S., Crombleholme T. M. 2000. Fetal wound repair results in scar formation in interleukin-10-deficient mice in a syngeneic murine model of scarless fetal wound repair. J. Pediatr. Surg. 35 : 866—873. Maas-Szabowski N., Stark H., Fusenig N. E. 2000. Keratinocyte growth regulation in defined organotypic cultures through IL-1 induced keratinocyte growth factor expression in resting fibroblast. J. Invest. Dermatol. 114 : 1075—1084. Massague J., Pandiella A. 1993. Membrane-anchored growth factors. Annu. Rev. Biochem. 62 : 515—541. Melin M., Hartmann D. J., Magloire H., Falcoff E., Auriault C., Grimaud J. A. 1989. Human recombinant gamma-interferon stimulates proliferation and inhibits collagen and fibronectin production by human dental pulp fibroblasts. Cell. Mol. Biol. 35 : 97—110. Mosman T. 1983. Rapid colometric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J. Immunol. Meth. 65 : 55—63. Mueller H., Flury N., Liu R., Scheidegger S., Eppenberger U. 1996. Tumour necrosis factor and interferon are selectively cytostatic in vitro for hormone-dependent and hormone-independent human breast cancer cells. Eur. J. Cancer. 32A : 2312—2318. Olban M., Wachowicz Â., Koter M., Bryszewska M. 1998. The biostimulatory effect of red laser irradiation on pig blood platelet function. Cell Biol. Int. 22 : 245—248. Ossina N. K., Cannas A., Powers V. C., Fitzpatrick P. A., Knight J. D., Gilbert J. R., Shekhtman E. M., Tomei L. D., Umansky S. R., Kiefer M. C. 1997. Interferon-g modulates a p53-independent apoptotic pathway and apopthosis-related gene expression. J. Biol. Chem. 272 : 16 351—16 357. Pinheiro A. L., Nascliento S. C., Vieira A. L., Rolim A. B., Silva P. S., Brugnera A., Jr. 2002. Does LLLT stimulate laryngeal carcinoma cells? An in vitro study. Braz. Dent. J. 13 : 109— 112. Renno A. C., McDonnel P. A., Parizotto N. A., Laakso E. L. 2007. The effects of laser irradiation on osteoblast and osteosarcoma cell proliferation and differentiation in vitro. Photomed. Laser Surg. 25 : 275—280. 792 À. À. Çèìèí, Ê. À. Ñàìîéëîâà, Í. À. Æåâàãî Rheinwald J. G., Green H. 1975. Serial cultivation of a strain of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells. Cell. 6 : 331—334. Ritchlin C., Haas-Smith S. A. 2001. Expression of interleukin 10 mRNA and protein by synovial fibroblastoid cells. J. Rheumatol. 28 : 698—705. Samoilova K. A., Obolenskaya K. D., Vologdina A. V., Snopov S. A., Shevchenko E. V. 1998. Single skin exposure to visible polarized light induces rapid modification of entire circulating blood. I. Improvement of rheologic and immune parameters. SPIE Proc. 3569 : 90—103. Samoilova K. A., Zhevago N. A., Petrishchev N. N., Zimin A. A. 2008. Role of nitric oxide in the visible light-induced rapid increase of human skin microcirculation at the local and systemic levels. II. Healthy volunteers. Photomed. Laser Surg. 25 : 275— 280. Seymour L., Bezwoda W. 1993. Interferon plus tamoxifen treatment for advanced breast cancer: in vivo biological effects of two growth modulator. Br. J. Cancer. 68 : 352—356. Sun H., Gutierrez P., Jackson M. J., Kundu N., Fulton A. M. 2000. Essential role of nitric oxide and interferon-gamma for tumor immunotherapy with interleukin-10. J. Immunother. 23 : 208—214. Tsai S. C., Gaffney E. V. 1987. Modulation of cell proliferation by human recombinant interleukin-1 and immune interferon. J. Nat. Cancer Inst. 79 : 77—81. Yamanaka O., Saika S., Okada Y., Ooshima A., Ohnishi Y. 2003. Effects of interferon-gamma on human subconjunctival fibroblasts in the presence of TGF beta 1: reversal of TGF beta-stimulated collagen production. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 241 : 116—124. Yim J. H., Ro S. H., Lowney J. K., Wu S. J., Connett J., Doherty G. M. 2003. The role of interferon regulatory factor-1 and interferon regulatory factor-2 in IFN-gamma growth inhibition of human breast carcinoma cell lines. J. Interferon Cytokine Res. 23 : 501—511. Zimin A. A., Zhevago N. A., Samoilova K. A. 2008. Low power visible and near IR light in clinical oncology. Photodiagnosis Photodyn. Ther. 5 : 37—38. Ïîñòóïèëà 15 III 2010 PROLIFERATION OF NORMAL AND TUMOR CELLS AT THE PRESENCE OF SERUM FROM PATIENTS WITH BREAST CANCER AFTER PHOTOTHERAPY WITH VISIBLE AND NEAR INFRARED LIGHT A. A. Zimin, K. A. Samoilova, N. A. Zhevago Institute of Cytology, RAS, St. Petersburg; e-mail: samoilova@yandex.ru Simultaneous low-intensity visible (VIS) and near infrared (nIR) irradiation from laser and non-laser sources was used for treatment of complications developing in cancer patients after surgical tumor resection, chemoand radiation therapy. However, the question remains about the impact of this physiotherapeutic method on proliferative activity of the patients’ tumor cells and cells involved in wound healing, fibroblasts (FB) and keratinocytes (KC). In this paper, we studied the effect blood serum obtained from the patients with breast cancer after the course of irradiation with visible and NI light (480—3400 nm, 95 % polarization, 40 mW/cm2, 12 J/cm2) in postoperative period on the proliferative activity of primary cultures of human FB and KC, and of several human tumor cell lines (BT-474, HBL-100, Hs578T and À431). Seven-day course of phototherapy increase proliferation of FB (as compared to the initial level) and KC (as compared to postoperative level) by 22 and 28 %, respectively. The tumor cells BT-474, Hs578T and À431 showed statistically significant decrease in proliferative activity compared with the preoperative (initial) level by 31.5, 8.97 and 6.47 %, respectively, whereas the cells BT-474, HBL-100, Hs578T and À431 also reduced their proliferative activity by 32, 16, 8.65 and 6.26 %, respectively, as compared with postperative level. The results obtained demonstrate the safety of the phototherapy with the visible and NI light for BC patients in the postoperative period. K e y w o r d s: breast cancer, blood growth factors of cancer patients, phototherapy, polychromatic visible and infrared irradiation, proliferation of tumor cells, proliferation of fibroblasts and keratinocyte primary cultures.