Комплексная лабораторная диагностика бактериального вагиноза Копылов Владимир Михайлович, к.б.н.
реклама
Комплексная лабораторная диагностика бактериального вагиноза Копылов Владимир Михайлович, к.б.н. ВИДОВОЙ СОСТАВ МИКРОФЛОРЫ ВЛАГАЛИЩА ЗДОРОВЫХ ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА Lactobacillus spp. - 71-100% Bifidobacterium spp. - 80-88% Peptostreptococcus spp. -12% G. vaginalis - 6-60% Mobiluncus spp. - 30% Clostridium spp. - 10-25% Bacteroides spp - 9-13% M.hominis, U.urealythicum - до 15% Видовой состав микрофлоры здоровой женщины по данным сиквенса 16SрРНК ЗАЩИТНЫЕ СВОЙСТВА ЛАКТОБАКТЕРИЙ адгезивные свойства; колонизация слизистой влагалища (формирование экологического барьера); антагонистическая активность; способность продуцировать лизоцим; кислотообразование; продукция Н2О2. до 1955 г. 1955 г. Gardner H.L. - синдром нарушения микрофлоры влагалища (Haemophylus vaginalis) 1963 г. - Corynebacterium vaginalis 1980 г. - Gardnerella vaginalis 1984 г. - 1 Международный симпозиум по вагинитам НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЙ ВАГИНИТ БАКТЕРИАЛЬНЫЙ ВАГИНОЗ БАКТЕРИАЛЬНЫЙ ВАГИНОЗ – нарушение вагинальной микроэкологии, связанное с замещением лактофлоры анаэробными микроорганизмами и/или G.vaginalis, при отсутствии увеличения лейкоцитов в вагинальном отделяемом и воспалительной реакции в стенках влагалища (клинической и морфологической). ПРЕДРАСПОЛАГАЮЩИЕ ФАКТОРЫ, ВЕДУЩИЕ К РАЗВИТИЮ БАКТЕРИАЛЬНОГО ВАГИНОЗА - - - - использование антибактериальных препаратов; длительное использование внутриматочных контрацептивов; использование пероральных контрацептивов; перенесенные ранее воспалительные заболевания урогенитального тракта; нарушение гормонального статуса, сопровождающееся нарушением менструального цикла, преимущественно по типу олигоменореи или аменореи; изменение состояния местного иммунитета; воздействие малых доз ионизирующего излучения; стрессовые воздействия на организм. Видовой состав микрофлоры женщины с БВ по данным сиквенса 16SрРНК АКТУАЛЬНОСТЬ ДИАГНОСТИКИ БАКТЕРИАЛЬНОГО ВАГИНОЗА Оценка состояния микрофлоры влагалища позволяет: идентифицировать этиотропный агент наблюдаемых воспалительных процессов своевременно начать заместительную терапию с целью профилактики осложнений бактериального вагиноза (воспалительные процессы урогенитального тракта) Конкурирующие модели БВ «истощение лактобацилл» Неблагоприятные воздействия/ условия Снижение «Н2О2продуцирующих лактобацилл» Внедрение факультативных и анаэробных бактериальных патогенов «внедрение патогена» Усиленный рост факультативных и анаэробных оппортунистических бактерий Вытеснение лактобацилл Бактериальный вагиноз ВОЗМОЖНЫЕ ИСХОДЫ БАКТЕРИАЛЬНОГО ВАГИНОЗА самопроизвольное восстановление нормальной микрофлоры влагалища развитие воспалительных процессов – вагинита и/или органов малого таза (хориоамнионит, преждевременные роды, внутриутробное инфицирование плода, послеродовой эндометрит и т.д.) Критерии Амселя, 1983 год Данные Клинические Критерий Метод I Осмотр влагалища зеркалом, кольпоскопия Клиниколабораторные Лабораторные II Определение рН влагалища индикаторной полоской III «Тест КОН» -добавление в пробирку с 10% КОН выделений из влагалища IV Микроскопия мазка из выделений влагалища как нативного препарата или окрашенного по Граму Результат Обильные белосерые выделения с неприятным запахом («тухлой рыбы») рН >4,5 Появление специфического запаха аммика Обнаружение "ключевых клеток"* C A Spiegel, R Amsel and K K Holmes. Diagnosis of bacterial vaginosis by direct gram stain of vaginal fluid. J Clin Microbiol. 1983 July; 18(1): 170-177 Чувствительность и специфичность критериев Амселя при бактериальном вагинозе Диагностический метод Чувствительность, % Специфичность, % Все критерии Амселя 37 99 Вагинальный рН > 4,5 83 69 Ключевые клетки 33 98 Положительный тест КОН 45 96 Специфические выделения 35 85 ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ БАКТЕРИАЛЬНОГО ВАГИНОЗА 1. патологический характер вагинальных выделений 2. рН вагинального отделяемого > 4,5 3. положительный аминотест 4. присутствие “ключевых” клеток ФАКТОРЫ ВЛИЯЮЩИЕ НА рН ВАГИНАЛЬНОГО ОТДЕЛЯЕМОГО менструация; интенсивность половой жизни; антибактериальные препараты; гормональные препараты; изменения гормонального фона; национальные особенности туалета наружных половых органов; особенности питания. Патогенез бактериального вагиноза Н2О2 + Lactobacillus spp. Молочная кислота Рост «каталаза (-)» бактерий Анаэробы аммоний G.vaginalis 4,5 <pH декарбоксилазы отделение эпителия влагалища Ключевые клетки полиамины Mobiluncus Триметиламиноксид Триметиламин 4,5 <pH Mycoplasma трансудат Выделения Запах Sobel J.D., New England J Med., 1997,v.337, p.1896 МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ БАКТЕРИАЛЬНОГО ВАГИНОЗА микроскопическое исследование; бактериологическое исследование; ПЦР; метод газожидкостной хроматографии; Микрофлора БВ. Окраска по Граму. b= bacteroids, c= mobilincus, g= gardenerlla, p=peptostreptococci Баллы Нугента и лабораторное заключение Количество полученных баллов суммируют (A+B+C) 0 - 3 балла : нормальная микрофлора 4 - 6 баллов: промежуточная микрофлора => 7 баллов: бактериальный вагиноз Nugent RP, Krohn MA, Hillier SL. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by a standardized method of gram stain interpretation. J Clin Microbiol. 1991 Feb;29(2):297–301. КЛАССИФИКАЦИЯ СОСТОЯНИЯ МИКРОФЛОРЫ ВЛАГАЛИЩА (по Кира Е.Ф.) нормоценоз промежуточный тип дисбиоз влагалища вагинит НОРМОЦЕНОЗ доминирование лактобактерий; отсутствие грамотрицательной микрофлоры; единичные лейкоциты в поле зрения; единичные эпителиальные клетки в поле зрения. ПРОМЕЖУТОЧНЫЙ ТИП умеренное или незначительное количество лактобактерий; наличие грамположительных кокков и/или грамотрицательных палочек; лейкоциты, моноциты, макрофаги, эпителиальные клетки. ДИСБИОЗ ВЛАГАЛИЩА незначительное количество или полное отсутствие лактобактерий; обильная полиморфная грамотрицательная и грамположительная палочковая и кокковая микрофлоры; наличие "ключевых" клеток; количество лейкоцитов вариабильно; отсутствие или незавершенность фагоцитоза. ВАГИНИТ большое количество лейкоцитов, макрофагов, эпителиальных клеток; выраженный фагоцитоз; морфологический пейзаж воспалительного процесса. СТЕПЕНИ БАКТЕРИАЛЬНОГО ВАГИНОЗА (по Мавзютову А.Р.) 1-ая степень - компенсированный 2-ая степень - субкомпенсированный 3-ая степень - декомпенсированный КОМПЕНСИРОВАННЫЙ полное отсутствие в исследуемом материале микрофлоры при неизменных эпителиоцитах; СУБКОМПЕНСИРОВАННЫЙ •количественное снижение лактобактерий; •возрастание количества сопутствующей грамвариабельной полиморфной бактериальной флоры; •"ключевые" клетки единичные в поле зрения •умеренный лейкоцитоз (15-25 лейкоцитов в поле зрения). ДЕКОМПЕНСИРОВАННЫЙ - - полное отсутствие лактобактерий; "ключевые" клетки в большом количестве; присутствие бактериальной флоры в виде монокультуры или в различных морфо- и видовых сочетаниях. КОМПЛЕКСНАЯ ЛАБОРОТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БАКТЕРИАЛЬНОГО ВАГИНОЗА цитологическое исследование мазка детекция маркеров бактериального вагиноза методом ПЦР ВЗЯТИЕ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА мазок со слизистой заднего нижнего свода влагалища на цитологическое исследование мазок со слизистой заднего нижнего свода влагалища на исследование методом ПЦР ПЦР-наборы определения бактерий БВ ЛАКТОПОЛ (Lactobacillus spp.) ГАРДПОЛ (Gardnerella vaginalis) БАКТОПОЛ (Bacteroides spp.) МОБИКУРТ (Mobiluncus curtisii) АТОПОЛ (Atopobium vaginae) КАНДИПОЛ (Candida albicans) ПОЛИМИК-Мк (Mycoplasma hominis) ПОЛИМИК-Ур (Ureaplasma urealyticum) Atopobium vaginale микроб выделен 18 лет назад из флоры рта человека маленькая Грам-положительная кокко-бацилла строгий анаэроб широко распространены штаммы высокоустойчивые к метронидазолу считается маркѐром рецидивирующего БВ Collins, M. D. 81 Wallbanks, S. Comparative sequence analysis of the 16s rRNA genes of Lactobacillus minutus, Lactobacillus rimae and Streptococcus parvulus : proposal for the creation of a new genus Atopobium. FEMS Microbiol Lett., 1992, v. 95, 235-240. М о с к в а , у л .М а л а я П и р о г о в с к а я ,1 а т е л . (0 9 5 ) 2 4 6 -4 4 -9 4 лицензия №10261/1720 НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА ФамилияИ.О.____________________________________________ Дата______________________ Диагноз______________________________________Возраст_______________ Организация_________________________________________________________ В о збуд ит ел ь р е зу л ьт а т Дата ______________________________________________ Дата ______________________________________________ Исполнитель______________________________________ Исполнитель______________________________________ ЗАКЛЮЧЕНИЕ: Врач______________________________ Комплексная диагностика. Нормоценоз. Комплексная диагностика. Бактериальный вагиноз. Комплексная диагностика. Бактериальный вагиноз Комплексная диагностика. Бактериальный вагиноз Комплексная диагностика. Вагинит. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ СОСТАВ МИКРОФЛОРЫ ВЛАГАЛИЩА ЗДОРОВЫХ ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА (КОЕ/мл) Lactobacillus spp. - 107 - 109 Bifidobacterium spp. - 103 - 107 Peptostreptococcus spp. - 103 - 104 G. vaginalis - до 106 Mobiluncus spp. - до 104 Clostridium spp. - до 104 Bacteroides spp - 103 - 104 M.hominis, U.urealythicum - до 103 Количественные изменения микрофлоры влагалища при БВ БВ характеризуется 100-1000 кратным увеличением патогенных бактерий относительно такого же снижения концентрации ЛАКТОБАЦИЛЛ Контроль взятия материала от двух гинекологов при анализе БВ 10 9 Общая бактериальная масса ,Lоg 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 КВМ (контроль взятия материала), Log Чувствительность анализа для микробной ДНК составляет: лактобацилл (Lactobacillus spp.) – 106 геном-эквивалентов/мл гарднерелл (Gardnerella vaginalis) – 106 геном-эквивалентов/мл бактероидов (Bacteroides spp.) – 104 геном-эквивалентов/мл мобилункуса (Mobiluncus curtisii) – 104 геном-эквивалентов/мл атопобиума (Atopobium vaginae) – 104 геном-эквивалентов/мл кандиды (Candida albicans) – 104 геном-эквивалентов/мл уреаплазм (Ureaplasma spp.) – 104 геном-эквивалентов/мл микоплазм (Mycoplasma hominis) – 104 геном-эквивалентов/мл С бактериальным вагинозом всѐ не просто… Спасибо за внимание!
