Влияние тромбодефенсинов сельскохозяйственных животных

ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ
контрольной группе увеличивается концентрация общего белка на 0,64%, альбуминов – на
10,42%, а концентрация глобулинов снижается на
6,93%, относительно показателей пятисуточных
животных. Следовательно ДПН плазмы крови во
многом зависит от концентрации в крови пластических белков, отражающих интенсивность
роста и развития молодого организма. Снижение концентрации глобулинов в плазме крови
у поросят-сосунов молочной фазы кормления
свидетельствует о том, что поросята обладают
достаточно высокими показателями факторов
резистентности на воздействие изменяющихся
вредных природно-климатических факторов на
организм.
На 30-е сутки жизни в плазме крови поросят отмечается повышение поверхностного
натяжения при среднем времени существования
поверхности и σ2 составляет 68,26±1,20, а при
больших временах существования поверхности
σ3 составляет 62,40±1,20. Значение λ0 у поросят
всех возрастов колеблется в пределах 5,9±0,05,40±0,20 мН·м-1с1/2 и 12,40±1,20-5,93±0,18
мН·м-1с1/2, при этом наивысшее значение λ0
наблюдается у суточных поросят.
Заключение. Использование тимозина-α1
увеличивает количество общего белка, иммуноглобулинов и минеральных веществ в плазме
крови опытных поросят на достоверную величину. На параметры σ0 и σ1 контрольных животных
наибольшее влияние оказывают концентрация
общего белка, альбуминов, JgA, неорганического фосфора, опытных – альбумины, JgG,
неорганический фосфор; на σ2 контрольных
поросят – JgG, JgА, АсАТ и опытных – общий
белок, альбумины, JgG, JgА, JgМ; на σ3 исследуемых групп – общий белок, альбумины.
Литература
1. Казаков В.Н., Синяченко О.В., Игнатенко Г.А. и др. Межфазная тензиометрия биологических жидкостей в терапии.
Донецк: Донетчина, 2003. С. 1–126.
2. Казаков В.Н., Синяченко О.В., Файкорман В.Б и др.
Динамическое поверхностное натяжение биологических
жидкостей здоровых людей // Архив клинической и экспериментальной медицины. 1996. Т. 5. № 1. С. 3–6.
3. Зарудная Е.Н., Максимов В.И., Зайцев С.Ю. и др. Исследование поверхностного натяжения сыворотки крови
животных с помощью модельных систем // Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной
медицины / Междунар. науч.-практич. конф. «Кадровое и
научное обеспечение инновационного развития отрасли
животноводства». Казань, 2010. Т. 203. С. 96–100.
4. Зарудная Е.Н., Зайцев С.Ю., Максимов В.И. Использование метода динамической межфазной тензиометрии для
исследования поверхностного натяжения сыворотки крови
// Труды ВИЭВ. М., 2009. Т. 75. С. 262–267.
Влияние тромбодефенсинов сельскохозяйственных
животных на гемолитическую активность
Staphylococcus aureus
М.В. Сычёва, к.б.н., В. В. Куранова, аспирантка,
О.Л. Карташова, д.б.н., профессор, Оренбургский ГАУ
Staphylococcus aureus, являясь хорошо изученным микроорганизмом, продолжает привлекать внимание микробиологов и врачей всех
специальностей. Интерес к данным бактериям
обусловлен их важным биомедицинским значением. Стафилококки, как неотъемлемый элемент
практически всех микробиоценозов организма
человека, не только участвуют в обеспечении
колонизационной резистентности макроорганизма, но также выступают инициаторами
инфекционно-воспалительных процессов любой
локализации [1].
Определяющую роль в этом процессе играют факторы вирулентности и персистенции.
В настоящее время в медицине и ветеринарии
актуальным является вопрос о возможности
регуляции данных факторов за счёт природных
естественных защитных компонентов организмахозяина, сформированных в результате длительного процесса коэволюции микробов и
макроорганизмов [2].
Особый интерес среди этих компонентов
представляют тромбодефенсины – один из
факторов поддержания иммунного гомеостаза
макроорганизма. Ранее было изучено антимикробное, антивирусное, антимикотическое
противоопухолевое действие этих веществ [3].
Установлено влияние тромбоцитарного катионного белка (ТКБ) на некоторые персистентные характеристики микроорганизмов [4].
Однако сведения о влиянии тромбодефенсинов
сельскохозяйственных животных на факторы
патогенности стафилококков, в частности, на
гемолитическую активность (ГА), в изученной
нами литературе отсутствуют.
Поэтому целью нашего исследования явилось
изучение влияния тромбодефенсинов сельскохозяйственных животных на гемолитическую
активность S. aureus.
Материалы и методы. Тромбодефенсины
получали методом кислотной экстракции из
тромбоцитов клинически здоровых лошадей,
кур, крупного рогатого скота. Содержание белка
в полученных кислотных экстрактах определяли
по методу М.М. Брэдфорда с использовани-
117
ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ
%
100
90
80
70
60
50
40
30
***
20
**
***
**
10
0
лошадь
контроль
куры
МПК
крупный рогатый скот
1/4 МПК
Примечание: ** – достоверность различий показателя гемолитической активности в контроле и после соинкубирования с кислотным экстрактом тромбоцитов – (р<0,01); *** – (р<0,001).
Рис. – Изменение гемолитической активности S. aureus под воздействием разведений кислотного
экстракта из тромбоцитов
ем красителя Coomassie Brilliant Blue G-250
(SIGMA, Германия) [8].
Влияние различных концентраций ТКБ на
вирулентные свойства микроорганизмов изучали
в отношении музейной культуры Staphylococcus
aureus, у которой при посеве на 5%-ный кровяной
агар было определено наличие гемолитической
активности. Клоны выделяли путём рассева
суточной культуры на плотную питательную
среду в соответствии с указаниями Дж. Миллера [5].
На следующем этапе исследований проводили соинкубирование клонов с минимальной подавляющей концентрацией (МПК) и
1/ минимальной подавляющей концентрацией
4
(1/4 МПК) ТКБ сельскохозяйственных животных,
установленных нами ранее, в течение одного
часа при 37 °С. Затем бактерии культивировали
на кровяном агаре в течение 24 часов.
Количественную оценку гемолитической
активности клонов S. aureus до и после сокультивирования с белком давали с помощью
фотометрического метода [6].
Полученные численные материалы обработаны статистически с определением средних
значений, среднего квадратического отклонения
и средней ошибки средней. Достоверность различий сравниваемых показателей оценивалась
по t-критерию Стьюдента [7].
Результаты. По результатам исследования
установлено, что все клоны золотистого стафилококка до соинкубирования с тромбодефенсинами
обладали гемолитической активностью, среднее
значение которой составило 4,1±0,73%. Анти-
микробные белки из тромбоцитов сельскохозяйственных животных уменьшали способность
микроорганизмов разрушать эритроциты в 100%
случаев (рис.).
Максимальное изменение признака наблюдали при воздействии на микроорганизмы
тромбодефенсинами кур. Так, под влиянием ТКБ
кур в МПК и 1/4 МПК отмечалось уменьшение
гемолитической активности S. aureus на 88,53%.
Разница значений по сравнению с контролем в
обоих случаях достоверна (р<0,001).
При изучении влияния тромбодефенсинов
крупного рогатого скота в МПК на гемолитическую активность S. aureus нами установлено
снижение изучаемого показателя в среднем на
83,9% (р<0,01). При соинкубировании S. аureus
с тромбодефенсинами крупного рогатого скота
в 1/4 МПК отмечено уменьшение гемолитической активности на 87,3% (р<0,01), причём в
популяции S. аureus появились клоны, у которых гемолитическая активность полностью
отсутствовала.
В меньшей степени изменялась способность
золотистого стафилококка разрушать эритроциты с помощью гемолизинов под действием кислотного экстракта из кровяных пластинок лошади. В среднем гемолитическая
активность (ГА) S. аureus после соинкубирования с тромбодефенсинами лошади снижалась
на 14,63%.
Дозозависимого эффекта влияния тромбоцитарного катионного белка сельскохозяйственных животных на значение ГА S. аureus
не обнаружено.
118
ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ
Выводы. Таким образом, в результате проведённого исследования было установлено ингибирующее действие тромбоцитарных катионных
белков, выделенных из тромбоцитов сельскохозяйственных животных, на гемолитическую
активность S. аureus. Однако смесь пептидов,
полученная из тромбоцитов кур, обладает более выраженным ингибирующим действием
на гемолитическую активность по сравнению
с кислотным экстрактом кровяных пластинок
крупного рогатого скота и лошадей.
2.
3.
4.
5.
6.
Литература
7.
8.
1. Городечный П.П. Влияние факторов персистенция золотистого стафилококка на хемотаксическую активность
нейтрофилов и иммунологические показатели перифери-
ческой крови у пациентов с дисбактериозом кишечника,
ассоциированным с S. Аureus: автореф. дис. ... канд. мед.
наук. Челябинск, 2007. 22 с.
Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М.:
Медицина; Екатеринбург: УрО РАН, 1999. 370 с.
Бухарин О.В., Черешнев В.А., Сулейманов К.Г. Антимикробный белок тромбоцитов. Екатеринбург, 2000. 200 с.
Сычёва М.В., Шейда Е.В., Карташова О.Л. Влияние
тромбодефенсинов некоторых видов животных на антилактоферриновую активность микроорганизмов // Учёные
записки Казанской государственной академии ветеринарной
медицины им. Н.Э. Баумана. Казань, 2010. С. 256–260.
Миллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике; пер.
с англ. М.: Мир, 1976. 350 с.
Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Ханина Е.А. Взаимодействие
бактерий и эритроцитов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2005. № 4. С. 89–95.
Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. 288 с.
Bradford, M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation
of microgram quantities of protein utilizing the principle of
protein-dye binding // Anal. Biochev. 1976. Vol. 72. P. 248–254.
Стимуляция иммунного ответа в комплексе
лечебно-профилактических мероприятий
при болезнях копытец у коров
голштино-фризской породы
А.Н. Безин, д.в.н., профессор, Д. В. Малов, к.в.н.,
Ю.В. Веряскина, аспирантка, Уральская ГАВМ
Анализ литературы и собственные данные
последних лет подтверждают тот факт, что заболевания дистального отрезка конечностей
у крупного рогатого скота занимают одно из
ведущих мест в Российской Федерации, в том
числе и на Южном Урале [1–3].
Основные исследования по изучению характера поражений при заболеваниях копытец у коров голштино-фризской породы, разработке мер
профилактики и лечения проводили в ООО «Песчаное» Увельского района Челябинской области.
Особенностью заболеваний дистального отрезка конечностей у голштино-фризского скота
явилось то, что заболевание протекало в тяжёлой
форме и часто заканчивалось вынужденным
убоем больных коров. При этом возбудитель
некробактериоза выделен в 100% проб, а также
в ассоциации с синегнойной палочкой (100%
проб), энтерококками и клостридией перфрингенс (42,8% проб).
Выделенные культуры и условно-патогенная
микрофлора высокочувствительны только к
ципрофлоксацину, умеренно – к гентамицину.
К остальным антибиотикам культуры были
слабо чувствительны или устойчивы.
В настоящее время в России есть три официально зарегистрированных вакцины против
некробактериоза крупного рогатого скота, опыт
применения которых показал их невысокую профилактическую эффективность, особенно в тех
хозяйствах, которые являются длительное время
неблагополучными по данному заболеванию [4].
Поэтому для повышения эффективности профилактической работы, особенно в хозяйствах,
где названные вакцины применялись ранее, было
решено использовать их в сочетании с другими
препаратами (адаптогенами), повышающими их
иммуногенность.
Одним из таких препаратов является трансфер-фактор, который использовался нами для
стимуляции иммунного ответа организма при
применении вакцины против некробактериоза
крупного рогатого скота.
Материал и методы. Трансфер-фактор получали по запатентованной нами методике,
используя лимфоузлы крупного рогатого скота,
переболевшего некробактериозом. В дальнейшем
лимфоузлы подвергали специальной обработке.
Коровы 1-й контрольной группы (n=20) вакцинировали без предварительной стимуляции.
Коровам 2-й опытной группы (n=20) за семь
дней до введения вакцины подкожно вводили
трансфер-фактор, в дозе 5 мл на 100 кг живой
массы. В обеих группах животных использовали вакцину Нековак против некробактериоза
крупного рогатого скота, производства ФГУП
«Ставропольская биофабрика», ООО НПФ
«Вентком-М».
С целью определения наличия сенсибилизации организма к F. neсroforum использовали антиген (очищенную, убитую, культуру F. necroforum),
который вводили подкожно через 14 дней после
применения вакцины с последующим учётом
119