Российская академия сельскохозяйственных наук
реклама
Российская академия сельскохозяйственных наук ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ (ГНУ ВНИИБЗР Россельхозакадемии) На правах рукописи ХОХЛОВА Анна Александровна ОСОБЕННОСТИ ВЛИЯНИЯ АБИОТИЧЕСКИХ И БИОТИЧЕСКОГО ФАКТОРОВ НА РЕПРОДУКТИВНУЮ СИСТЕМУ РАСТЕНИЙ ТОМАТА LYCOPERSICON ESCULENTUM MILL. Специальность: 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биол. наук, профессор, академик РАН и РАСХН А.А. Жученко Краснодар – 2014 1 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………….. 1 4 ХАРАКТЕРИСТИКА РАСТЕНИЯ ТОМАТА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)……………………………………………..… 10 1.1 Классификация и характеристика томатов……………..…… 10 1.2 Мейотическая рекомбинация и ее значение в селекции на примере растений томата……………………………………… 1.3 Влияние абиотических факторов на репродуктивную систему растений томата……………………………………… 1.4 21 Влияние биотического фактора на репродуктивную систему растений томата……………………………………………….. 2 15 23 МАТЕРИАЛ, МЕТОДИКИ И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ…………………………………………… 27 2.1 Характеристика исследуемого материала………………..… 27 2.2 Условия проведения опыта………………..…….……….…… 31 2.3 Схема гибридизации………………………………………..…. 33 2.4 Индуцированный биотический фактор ВТМ………….…..... 34 2.5 Методика инокуляции растений томата ВТМ………..…..… 37 2.6 Методика морфологического описания растений….……...... 37 2.7 Методика определения фертильности и жизнеспособности пыльцевых зерен растений томата…………………….…….. 2.8 38 Методика определения количества пыльцевых зерен в цветке растения томата………………………………………… 38 Метод электронной микроскопии…………………………….. 39 2.10 Методика определения количества ДНК………………….….. 39 2.9 2.11 Методы статистического анализа экспериментальных данных…………………………………………………………… 3 40 ХАРАКТЕРИСТИКА МУЖСКОГО ГАМЕТОФИТА У 2 ГИБРИДОВ F1 РАСТЕНИЙ ТОМАТА ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ АБИОТИЧЕСКИХ И БИОТИЧЕСКОГО ФАКТОРОВ…………………………………………………….. 3.1 42 Морфологическая изменчивость гибридов F1 растений томата под воздействием абиотических и биотического факторов …………………………………………………..……. 3.2 Фертильность и жизнеспособность мужского гаметофита у гибридов F1 растений томата под воздействием абиотических и биотического факторов…………………..…. 3.3 78 Влияние вируса табачной мозаики на пыльцевые зерна растения томата…………………………………………….…... 4.2 65 ВЛИЯНИЕ ВТМ НА ПЫЛЬЦЕВОЕ ЗЕРНО ГИБРИДОВ F1 РАСТЕНИЙ ТОМАТА 4.1 62 Классификация генотипов подвергнутых влиянию разных температур…………………………………………………….…. 4 57 Количества пыльцевых зерен у гибридов F1 растений томата под воздействием абиотических и биотического факторов .... 3.4 42 Влияние абиотических и биотического факторов 78 на количество ДНК в пыльцевом зерне растения томата……..… 83 ВЫВОДЫ……………………………………………………………..... 86 РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ…….…. 88 СПИСОК ИСПОЛЬЗОННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ………………….…. 89 ПРИЛОЖЕНИЯ…………………………………………………….…. 109 3 ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы. Основные районы промышленного возделывания томата в России – Краснодарский и Ставропольский края, Ростовская область, Нижнее Поволжье. Особенно много выращивают в Молдове, на Украине, в Узбекистане, Азербайджане, в Средней Азии [Авдеев и др., 2008]. Томат, по данным ФАО [2012], занимает первое место в мире среди овощных культур (6 млн. га), в том числе и в защищенном грунте (60 % всей площади). Больше всего площадей в Китае – 1089 тыс. га (25 млн. тонн), в Индии – 620 тыс. га (8,2 млн. тонн), Турции – 325 тыс. га (10 млн. тонн), Египте – 190 тыс. га (7,2 млн. тонн), США – 177 тыс. га (12 млн. тонн). Всего в 2012 году в мире произведено 110,5 млн. тонн томатов, из которых перерабатывается 27 млн. тонн. Россия стоит на 6-ом месте по площади и на 11-ом по производству. Для производства экологичной продукции данной культуры требуется соблюдение нескольких факторов: технологии производства, сортового разнообразия, средовых условий и устойчивости к эпифитотиям. На данный момент экологическим факторам уделяется второстепенное значение, хотя задачи экологизации производства постоянно декларируются в документах правительства. В наше время, когда воздух, вода и земля загрязнены продуктами жизнедеятельности человека и экологическая обстановка несмотря на все усилия человечества продолжает ухудшаться, люди все больше и больше начинают задумываться о своем здоровье [Жученко, 2001; 2009]. С каждым годом увеличивается число выявленных вирусов, заражение которыми вызывает ощутимые потери урожая и заметно ухудшает качество сельскохозяйственной продукции. В южных районах нашей страны поражаемость растений Tobacco mosaic tobaco virus – вирус табачной мозаики (ВТМ) повсеместно снижает урожайность плодов томата в 1,3-1,6 раза и более [Авдеев, 2004]. 4 Решение проблемы видится в использовании биоразнообразия генотипов растений томата включающие: культурные, полукультурные сорта, дикорастущие и мутантные формы, и т.д. Это позволяет расширить спектр генетической изменчивости, а так же даёт возможность получение нетрадиционных признаками. форм Так же растений наладить томата с производство хозяйственно-ценными экологичной овощной продукции, путем создания новых устойчивых гибридов растений томата к вирусным болезням. Цель и задачи исследований. Цель исследований: оценка морфологического и генетического потенциала гибридного материала растений томата под воздействием абиотических и биотического факторов по качественным и количественным признакам. Для достижения этой цели поставлены следующие задачи: 1. Получить гибриды между культурными сортами, дикорастущими видами и мутантными формами растений томата. 2. Изучить морфологические особенности генотипов растений томата под воздействием абиотических и биотического факторов. 3. Провести пыльцевой анализ качества и количества пыльцевых зерен у гибридов F1 растений томата. 4. Установить характер проникновения ВТМ в растительную клетку с помощью метода электронной микроскопии. 5. Провести цитофотометрический анализ на количественное содержание ДНК ядре гибридных растений томата, пораженных ВТМ. Научная новизна работы. В условиях Краснодарского края впервые получены гибридные формы растений культурного томата с дикорастущими видами (L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull. и L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh.) и мутантными формами (Mo 393; Mo 628; Mo 755). В результате внутри− и межвидовой гибридизации получено 16 гибридных 5 комбинаций между культурными сортами, дикорастущими видами и мутантными формами растений томата. Проведена морфологическая идентификация гибридного материла по типу куста, длине междоузлия, высоте растений, типу соцветия, проценту пораженности ВТМ, размеру и окраске цветка, формы и окраске плода. Впервые выявлен характер действия абиотических факторов, таких как температура и удобрения, а также биотического фактора поражение ВТМ, на характеристики репродуктивной системы гибридных форм растений томата. Получены данные о фертильности, жизнеспособности и количестве пыльцевых зерен у 16 гибридных комбинаций растений томата. Впервые предпринята попытка установить характер действия ВТМ на компоненты растительной клетки на основе данных методов электронной микроскопии и цитофотометрии. Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований являются вкладом в изучение репродуктивной системы гибридных комбинаций растений томата, содержащих чужеродный генетический материал данных гибридных форм томата, подвергшиеся действию различных доз минерального удобрения, температур и действию ВТМ. Изучены особенности формирования репродуктивной системы растений томата под воздействием абиотических и биотического факторов Проведен пыльцевой зависимость действия анализ 16 указанных гибридных факторов комбинаций, на выявлена качественные и количественные характеристики пыльцевого зерна, что дало возможность использовать пыльцевой тест как маркерную систему отбора генотипов, устойчивых к действию абиотических и биотического факторов. Метод электронной микроскопии позволил установить характер действия ВТМ на растительную клетку, а метод цитофотометрии позволил 6 установить количественное содержание ДНК в ядре клетки пораженного растения ВТМ. Методы, использованные в работе, могут быть востребованы для проведения идентификационных работ по выявлению действия ВТМ на растительную клетку. В результате проведенных исследований созданы уникальные гибридные комбинации межвидовых и внутривидовых форм растений томата. Собран иллюстративный материал и коллекция фотообразов пыльцевых зерен гибридных комбинаций растений томата, подвергшихся влиянию абиотических и биотического факторов. Материалы диссертационной работы используются в Кубанском государственном аграрном университете при преподавании дисциплин «Цитология» и «Генетический мониторинг» для студентов и магистров агрономического факультета и факультета экологии. Методология и методы исследования. В работе использованы дикие виды, мутантные формы, культурные сорта растений томата, взятые из генетической коллекции ГНУ ВНИИБЗР, созданной академиком РАСХН и РАН А.А. Жученко, а также 16 гибридных комбинаций, полученных непосредственно автором в период 2008-2011 гг. При создании гибридных комбинаций использовалась стандартная методика гибридизации. Пыльцевой анализ гибридных комбинаций растений томата проводили по общепринятым методикам. Исследования с помощью методов электронной микроскопии и цитофотометрии были проведены на базе ВНИИСБ (г. Москва) по модифицированным методикам для данных растительных объектов. Основные положения, выносимые на защиту. 1. Гибридные формы, с чужеродными геномами дикорастущих видов растений томата, характеризуются устойчивостью к ВТМ по сравнению с другими гибридными комбинациями. 7 2. Абиотические факторы, представленные различными дозами удобрений и температур, оказывают достоверное влияние на фертильность, жизнеспособность и количество пыльцевых зерен у всех исследуемых генотипов растений томата. 3. Гибридные комбинации F1 растений томата, пораженные ВТМ, качественно различаются по гетерогенности, жизнеспособности и количеству пыльцевых зерен. 4. Биотический фактор, представленный вирусом табачной мозаики, оказывает влияние растительную клетку, меняет структуру пыльцевого зерна, деформирует ее и вызывает изменение количества ДНК в ядре клетки. Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на: Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Молодые ученые агропромышленного комплекса Поволжья» (г. Саратов, 2010); Международной конференции молодых ученых и специалистов, посвященной 145-летию РГАУ – МСХА имени К.А. Тимирязева (г. Москва, 2010); 6-ой Международной научно-практической конференции «Биологическая защита растений как основа экологического земледелия и фитосанитарной стабилизации агроэкосистем» (г. Краснодар, 2010); Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Конкурентоспособная научная продукция – АПК России» (г. Казань, 2011); Международной научно-практической конференции «Современные мировые тенденции в производстве и применение биологических и экологически малоопасных средств защиты растений «Биологическая защита растений − основа стабилизации агроэкосистем» (г. Краснодар, 2012); Международной научно-практической конференции «Наука и образование» и XXI веке» (г. Москва, 2013). Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в т.ч. 2 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ. 8 Объем и структура работы. Работа изложена на 116 страницах машинописного текста, включает 17 таблиц, 31 рисунка. Состоит из: введения, четырех глав с описанием современного состояния проблемы на основании источников литературы, описанием исходного материала и методов, используемых при решении поставленных задач, экспериментальных результатов и их обсуждения, выводов, рекомендаций для селекционной практики. Список литературы включает 225 источника, в том числе 79 на иностранном языке. Личный вклад автора. Автор непосредственно осуществил большую часть лабораторных опытов и исследований в камере искусственного климата и открытом грунте, а также в ходе работ с коллегами лаборатории «Изучение и поддержание генетической коллекции томата» ГНУ ВНИИБЗР (г. Краснодар). Часть результатов получена во время совместной работы с сотрудниками ГНУ ВНИИСБ (г. Москва). Автор выражает большую благодарность научному руководителю и учителю академику РАН и РАСХН, д.б.н., профессору А.А. Жученко, признательность куратору лаборатории д.с.-х.н. Н.И. Бочарниковой за ценные советы при обсуждении полученных результатов и содействие в выполнении данной работы; директору ГНУ ВНИИ биологической защиты растений академику РАСХН В.Д. Надыкта, руководителю лаборатории «Изучение и поддержание генетической коллекции томата» к.с.-х.н. Н.А. Щербакову, сотрудникам, а также д.б.н. В.Ю. Полякову, к.б.н. И.А. Чабан, к.б.н. Н.В. Кононенко (ГНУ ВНИИ сельскохозяйственной биологии) за совместные исследования и обсуждение результатов работы. 9 1 ХАРАКТЕРИСТИКА РАСТЕНИЯ ТОМАТА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) 1.1 Классификация и характеристика томатов Томат – Lycopersicon esculentum (Tourn.) Mill., как один из лучших моделей для цитологических исследований, принадлежит к царству растений отдела покрытосеменные (Angiospermae), классу двудольные (Dicotyledones), семейству пасленовые (Solanaceae), к роду Lycopersicon и виду Lycopersicon esculentum (Tourn.) Mill. Родина томата − тропические районы южной центральной Америки. В Европу томат был завезен в XVI веке. В России его начали выращивать как овощное растение в XVIII веке [Матвеев и др., 1985; Тахтаджян, 1987]. Ежегодное производство томатов в мире по данным ФАО [2012] составляет около 70 млн. тонн, а выращиваются они на площади более 2,7 млн. га при средней урожайности 23,5 тонн с 1 га. Ежегодная площадь под томатом в Российской Федерации составляет более 147 тыс. га при средней урожайности 2,13 тонн. На данный момент существует несколько классификаций растений томата. В России считается традиционной классификация Д.Д. Брежнева [1964], которым в роде Lycopersicon было выделено три вида: перуанский томат, волосистый и обыкновенный томат. К первому типу относится Lycopersicon peruvianum Mill. – многолетнее, стелющееся растение, с небольшим, тонким стеблем, относительно густоопушенным. Волоски короткие, нежелезистые, желтоватые. Листья небольшие 4-9 см длиной, 2-4 см шириной, перистые, конечная доля крупнее. Длина соцветия от 3 до 10 см, количество цветков в соцветии 6-12 штук оранжево-желтого цвета, диаметром 1,0-1,3 см. Плоды: − диаметром 1-2 см, шаровидной или сдавленно-округлой формы, светло зеленой окраски с 10 бледно-лиловыми полосками, покрытые мелкими волоскам, несъедобные. Родина − северные районы Чили и Перу. Ко второму типу относится Lycopersicon hirsutum Humb. et Bonp. – однолетние или многолетние растение, со стеблем густо покрытым жесткими волосками. Листья крупные, длиной 25–30 см, шириной 10–12 см, узкие, овальной формы, густо покрыты короткими волосками. Простое или вилкообразное соцветие среднего размера, длиною 15 см, также покрытое волосками. На каждом соцветии 10–15 цветков, желтого цвета. Плоды мелкие, диаметром 1,5–2,5 см, зеленовато-белой окраски с красными полосами, покрыты грубыми волосками. Этот вид обитает в горных районах Анд, на высоте 2200–2500 м. Третий тип – Lycopersicon esculentum Mill. Однолетние растение с восходящим, полегающим или прямостоячим стеблем. Листья гладкие или морщинистые, непарноперисто-рассеченные, от светло-зеленого до темнозеленого цвета. Соцветие простое или сложное с мелкими, средними или крупными цветками. Плоды бывают: шаровидной, плоско - округлой или, удлиненной формы. Поверхность плода гладкая или покрытая желобками, или ребрами красного, малинового, оранжевого, желтого или белого цвета, глянцевые или матовые [Брежнев, 1964]. Наиболее широко распространен вид Lycopersicon esculentum Mill., благодаря своей ценности как сельскохозяйственной культуры. В пределах вида Lycopersicon esculentum Mill. выделено три подвида: subsp. pimpinellifollium Brezh., дикий томат, с двумя разновидностями: а) смородиновый томат (eupimpinellifollium); б) кистевидный томат (racemigerum); subsp. subspontaneum Brezh., полукультурный томат, с пятью разновидностями: а) вишневидный томат (cerasiforme); б) грушевидный томат (pyriforme); 11 в) сливовидный томат (pruniforme); г) удлиненный томат (elongatum); д) многогнездный томат (succenturiatum); subsp. cultum Brezh., культурный томат, с тремя разновидностями: а) обыкновенный (vulgare); б) штамбовый (validum); в) крупнолистный (grandifolium). Полной классификацией рода Lycopersicon является классификация американского профессора C.M. Rick, описавшего 9 видов томатов: Lycopersicon chilense Dunal; Lycopersicon chmielewskii C.M. Rick, Kesicki, Fobes & M. Holle; Lycopersicon cheesmanii L. Riley; Lycopersicon esculentum Mill.; Lycopersicon hirsutum Humb. et Bonp.; Lycopersicon parviflorum C.M. Rick, Kesicki, Fobes and M. Holle; Lycopersicon pennellii Correll.; Lycopersicon peruvianum Mill.; Lycopersicon pimpinellifolium (Mill.) Brezh. [Rick, 1959]. Выделенные виды растений томата характеризуются определенными морфологическими признаками и биологическими свойствами. Одной из морфологических особенностей у растений томата является стебель, который в начале развития мягкий и очень сочный, а в процессе роста он твердеет до одеревенения. На стебле появляется много боковых побегов (пасынков), вырастающих в пазухах листьев до цветения. Листья растений томата различны по форме и размеру, окраске и т.д. в зависимости от сорта и разновидностей растений томата. Листовая пластинка может быть гладкой или густо опушенной. Верхние листья растения томата днем слегка закручиваются, а ночью распрямляются [Брежнев, 1955; Жученко и др., 1974]. 12 Соцветие томата имеет форму завитка, у овощеводов принято называть кистью. Различают соцветие: простое, простое двухстороннее, промежуточное. Простое соцветие начинает расти и развиваться, когда у растения появляются второй-третий лист, т.е. в зависимости от сорта и внешних условий среды. На соцветии вначале раскрываются цветки, расположенные ближе к стеблю, а затем расцветают все остальные. Одновременно в соцветии цветут два − четыре цветка [Гавриш, 2005; Богдановский и др., 1991]. Цветы растений томата обоеполые, самоопыляющиеся. Цветок, состоит из 5 сросшихся чашелистиков, венчика из 5 лепестков, сросшихся между собой, 5 тычинок и 1 пестика. Форма и окраска цветков варьируется в зависимости от сорта и форм. Часто у крупноплодных сортов растений томата встречаются фасциированные − сросшиеся цветки, из которых впоследствии образуются многокамерные, ребристые и часто деформированные плоды. Рыльце имеют бугорчатую форму, бледно-зеленую окраску. Длина рыльца характерна для каждого сорта томата; − для одних сортов характерно рыльце, которое не достигает верхнего края колонки, для других оно находится на уровне тычиночной колонки или выступает на 1-3 мм − такое рыльце называют длинностолбчатым. Тычинки состоят из тычиночных нитей, которые заканчиваются 2-мя камерными кожистыми пыльниками или пыльцевыми мешками, наполненные пыльцевыми зернами. Цветение происходит постепенно, снизу вверх. За весь вегетационный период, а это 90–190 суток на растении томата закладывается и развивается от 50–100 репродуктивных органов таких как: бутон, цветок, плод на 10–20 соцветиях, что характерно для культурного вида L. esculentum Mill. и до 3000 репродуктивных органов на 200-300 соцветиях для полукультурной формы L. esculentum var. pimpenellifolium [Брежнев, 1955; Меркулов, 1987]. 13 Плод томата – ягода. Плод заполнен сочной массой студенистой плаценты, в которую погружены семена. Плоды у растений томата различной формы: плоские, плоско-округлённые, округлые, округло-овальные, удлиненно-перцевидные. Плоды до 70 г считаются мелкими, от 70 до 90 г – средними, а свыше 100 г – крупными. Цвет плодов варьируется от лимонножелтого до темно-красного. Семена томатов мелкие, плоские, яйцевидно-овальной формы, обычно опушенные, желтовато-серой окраски. В 1 г содержится 250-300 семян крупноплодных сортов и гибридов, а мелкоплодных (вишневидные) – 400500. Масса 1000 семян от 3 до 4 г. Семена дикорастущих видов и полукультурных разновидностей томатов в 1,5−2 раза мельче семян культурных сортов, но по форме и степени опушенности резких различий не наблюдается. Так, семена L. hirsutum в 3−4 раза мельче семян культурных сортов, не опушены, имеют коричневую или темно- коричневую окраску Количество семенных камер у разновидностей L. esculentum различаются: плоды с гладкой и слаборебристой поверхностью имеют от 3 до 8 камер, а у средне ребристых и сильно ребристых – от 5 до 10 камер [Брежнев, 1964; Жученко, 1973; Игнатьева, 1990; Загорулько и др., 2001]. Среди растений томата, используемых в производстве, имеются и партенокарпические, которые могут в неблагоприятных условиях завязывать плоды и без оплодотворения. Семян в таких плодах практически нет. [Брежнев, 1964; Жученко, 1973; Гавриш, 1987; Куприянов, 1989; Горки, 1990] Таким образом, культура томата является благоприятным объектом не только для генетических, но и других (морфологических, физиологических, биохимических, фитопатологических) исследований, что оказывается особенно ценным при комплексном подходе к разработке теоретических и практических основ селекции. 14 1.2 Мейотическая рекомбинация и ее значение в селекции на примере растений томата Понимание механизмов мейотической рекомбинации важно при создании межсортовых и межвидовых гибридов растений томата, т.к. это позволяет получить новые сочетания генотипов, интересных для селекционной практики. Успешность прохождения мейоза является гарантом стабильности генетического материала, а появление фертильных пыльцевых зерен служит тому доказательством. Исследования мейоза дают селекционеру полную картину процесса конъюгации хромосом, по этой информации можно судить об успешности рекомбинации, которая дает сочетание новых генотипов [Вавилов, 1965; Жученко, 1973; Лосева и др., 1996; Li et al., 2001; Okamoto, 1989; Domenichini et al., 2006;]. В мейозе различают четыре важных этапа в которые входят пусковые механизмы мейоза и дифференциировка мейоцита, механизмы конъюгации хромосом, механизмы кроссинговера, метаболизм, сопутствующие мейозу [Куперман, 1961; Kolloo, 1991; Domenichini et al., 2000]. Мейоз − один из немногих биологических процессов, происходящих принципиально сходным образом у разных организмов. Универсальность мейоза позволяет предполагать, что у самых разных организмов он контролируется гомологичными генами, разными по своей иерархии [Davies, 1973; Feijo, 1989]. Каждый из ключевых этапов мейоза контролируется блоком генов. При этом можно выделить 7 относительно независимых ключевых цитогенетических этапов мейоза: 1) начальная стадия мейоза; 2) конъюгация гомологичных хромосом; 3) рекомбинация; 4) образование хиазм; 5) расхождение хромосом; 6) цитокинез; 7) второе деление мейоза [Шумный и др., 1972; Жученко и др., 1979; Stevens et al., 1986; Пивоваров и др., 1995; Chen et al., 1999; Albrecht, 2010]. 15 Биологическое значение мейоза заключается в поддержании постоянства числа хромосом при наличии полового процесса. Кроме того, вследствие кроссинговера происходит рекомбинация – появление новых сочетаний наследственных признаков в хромосомах. Мейоз обеспечивает также комбинативную изменчивость – появление новых сочетаний наследственных задатков при дальнейшем оплодотворении [Мюнтцинг, 1963; Rastogri et al., 1988; Пивоваров и др., 2002; Пухальский, 2007]. Рекомбинация является важным промежуточным этапом в процессе эволюции у высших эукариот, в основе которого лежит кроссинговер, происходящий в процессе мейоза [Rick, 1972; Hanawalt,1975; Голубовская, 1985; Jourdren et al., 1996; Schwacha et al., 1997; Ефремова и др., 2001; Жученко, 2001]. Наиболее распространенным процессом, который обеспечивает обмен между генетическими кроссинговер, в участками результате у которого высших организмов, возникают новые является сочетания наследственных факторов. Биологическое значение кроссинговера, играет большую роль в генетической рекомбинации, так как, позволяет создавать новые, ранее не существовавшие комбинации [Жученко, 1973; Хачатуров, 1995; Anderson et al., 2001; Batygina et al., 2003; Богданов, 2008]. На продолжительность мейоза оказывают сильное влияние условия внешней среды (температура и влажность воздуха). Мейотическая рекомбинация присуща всем классам живых существ, от вирусов до высших растений и животных [Цицин, 1954; Загорулько и др., 2001; Пухальский, 2007; Paigen и др., 2010]. Известно, что первоначальной функцией рекомбинации является репарация повреждений ДНК, на этом основании была выдвинута гипотеза, согласно которой аналогичную функцию рекомбинация выполняет в процессе мейоза [Brown, 1949; Жученко, 1980; Santucci-Darmanin et al., 2010; 16 Хасанова и др., 2012]. Исходя из этой гипотезы, формирование новых генов и их комбинаций считается побочным эффектом репарации ДНК, а не причиной, по которой рекомбинация и половое размножение возникли в эволюции. Анализ молекулярных процессов, происходящих во время мейоза показывает, что гомологичная рекомбинация действительно осуществляет репарацию ДНК, однако появление этих ДНК в мейозе запланировано, т.е. они создаются самой клеткой [Король, и др., 1988; Хачатуров, 1995; Tanaka et al., 2008; Albrecht et al., 2010; ]. Если рекомбинационные преобразования, происходящие в мейозе, запрограммированы, то у них есть еще одна специфическая черта, необъяснимая с точки зрения репарационной гипотезы. В митотических клетках в рекомбинационной репарации участвуют сестринские хроматиды, тогда как в мейозе, рекомбинация происходит преимущественно между гомологами [Голубовская, 1975; Жученко и др., 1979; Schleif et al., 1993; Богданов и др., 2007; Bhullar et al., 2010]. Рекомбинация между сестринскими хроматидами не создает новых комбинаций, поскольку они являются копиями друг друга [Caetano-Pereira et al., 2001]. Новые комбинации возникают в том случае, когда гомологичные хромосомы различаются по набору аллельных форм генов. События, которые происходят в мейозе, на первый взгляд, как нельзя лучше соответствуют требованиям, необходимым для осуществления комбинативной изменчивости, которая происходит под влиянием условий внешней среды [Grun et al., 1966; Feijo et al., 1989; Brown et al., 1998; Caetano-Pereira et al., 2001; Sanchez-Moran et al., 2005;]. Ранее проводимые исследования на различных видах организмов показали, что нарушение мейотической рекомбинации сопровождается не просто отсутствием рекомбинантов, а ведет к серьезным нарушениям гаметогенеза. Цитологические события, наблюдающиеся в процессе мейотической рекомбинации, модифицируются под влиянием экологических 17 и генетических факторов. Каждая из фаз мейоза проходит в строгой последовательности и характеризуется специфичной метаболической активностью [Palmerr et al., 1980; Pedersen et al., 1987; Жученко и др., 1985; Голубовская, 1982]. Индуцирование рекомбинаций за счет перераспределения кроссоверных обменов в зоны хромосом, где они в норме ингибированы, является резервом увеличения спектра доступной генотипической изменчивости. Наличие такого резерва особенно вероятно у межвидовых гибридов в силу рекомбинационного генетически обмена детерминированного между видами ограничения [Жученко, 1980; Brown et al., 1996]. Например, при скрещивании разных видов томата в отдельных зонах генома наблюдается уменьшение уровня обменов в 5−10 раз. Только оптимальные условия выращивания растений томата гарантируют правильное распределение хромосом по гаметам в мейозе (рисунок 1) [Король и др., 1988; Жученко мл. и др., 1989; Кильчевский и др., 1989; Жученко, 2001]. Каждый ключевой этап мейоза контролируется в свою очередь многими независимо действующими генами, которые запускаются одним общим для всего блока «ключевым» геном. В то же время существуют гены, контролирующие поведение отдельных хромосом и видоспецифичные характеристики мейоза. Каждый ключевой этап мейоза контролируется в свою очередь многими независимо действующими генами, которые запускаются одним общим для всего блока «ключевым» геном [Куперман, 1961; Мюнтцинг, 1963; Жученко и др., 1974; Kuzin et al., 1994; Лосева и др., 1996; Ma, 2005; Пухальский и др., 2007]. 18 Гены А и В находятся на негомологичных хромосомах. При мейозе происходит редукция числа хромосом, при этом гомологи из разных бивалентов расходятся 64, Рисунок 1 − Схема процесса мейотической рекомбинации [Поглазов, 1970] В то же время существуют гены, контролирующие поведение отдельных хромосом и видоспецифичные характеристики мейоза [Куперман, 1961; Мюнтцинг, 1963; Жученко и др., 1974; Kuzin et al., 1994; Лосева и др., 1996; Ma, 2005; Пухальский и др., 2007]. В настоящее время новые сорта томата с заданными признаками и свойствами создаются с помощью разных методов: − гибридизации, химического мутагенеза, генетико-физиологического направленного индивидуального отбора, искусственного инфицирования растений в разные фазы роста и развития, с использованием сортов дифференциаторов и массового отбора при размножении семян с целью госсортоиспытания для внедрения сорта в производство [Брежнев, 1955; Жученко и др., 1981; Авдеев, 1982; Анохина и др., 2001; Бухарова и др., 2009]. Основным и наиболее результативным, проверенным практикой методом селекции томата, остается искусственная гибридизация в сочетании с последующим непрерывным отбором семенных растений обладающих 19 минимальным наличием нежелательных признаков [Брежнев, 1964; Гавриш, 2005; Kessler, 2001; Бухарова и др., 2008; Бочарникова, 2011]. В зависимости от цели селекции гибридизация может быть − межсортовая, и отдаленная. Межсортовая гибридизация; − когда путем скрещивания признаки одного родительского сорта сочетают с дополняющими признаками другого сорта, гибрида, относящегося к тому же ботаническому виду. Отдаленная гибридизация; − когда используются экологически и географически отдаленные между собой формы растений, принадлежащие к одной и той же или к разным ботаническим разновидностям вида L. esculentum Mill. Гибриды их обладают богатой наследственностью и лучшей адаптацией к условиям произрастания [Гавриш, 2003; Izmaiɫow, 2000; Пехов, 1993; Жученко, 2009]. Неоднократно обсуждалась гипотеза возникновения рекомбинации как особого механизма, восстанавливающего двунитевые повреждения ДНК. Репарация двунитевых разрывов ДНК возможна при выполнении двух условий: а) необходимо наличие не менее 2-х наборов хромосом; б) способность клетки к гомологичной рекомбинации [Карпеченко, 1935; Жученко и др., 1986; Pedersen et al., 1987; Жученко и др., 1988; Bhullar et al., 2010]. Таким образом, большая часть хромосомных изменений происходит в ходе профазы I мейоза и опосредована механизмом гомологичной рекомбинации. В результате чего происходит синапсис хромосом, т.к. благодаря ему успешно проходит кроссинговер, между гомологами осуществляется редукция числа хромосом и их перераспределение между дочерними клетками в первом делении мейоза. 20 1.3 Влияние абиотических факторов на репродуктивную систему растения томата Актуальным направлением научных исследований в генетике и селекционной практике растений томатов является поиск и создание генотипов растений устойчивых к воздействию стрессов, вызванных неблагоприятным влиянием факторов окружающей среды: освещенность, температура, минеральное питание и др. [Palmerr et al., 1980; Авдеев, 1982; Жученкои др., 1982; Александров, 2009]. Для формирования органов репродуктивной системы, оптимальная освещенность − 20 кЛк. В условиях недостаточной освещенности нарушается процесс усвоения углекислоты, вследствие чего приостанавливается рост и развитие растений томата. Стебель растения томата вытягивается, образуя мелкие светло-зеленые листья. Для соцветий, сформированных в таких условиях, характерно небольшое количество цветков. Качество пыльцы у растений томата снижается, а общая ее масса увеличивается на 5-15 %. Плоды практически не завязываются. Растение томата нуждается в среднем в 14-16 ч освещении [Журбицкий, 1968; Алпатьев, 1981; Гавриш, 2005; Жученко, 2008] По отношению к влажности воздуха растения томата относятся к относительно засухоустойчивым [Брежнев, 1955]. Но несмотря на это посчитано, что в течение всего вегетационного периода растениям томата требуется около 7000 м3 воды на 1 га. площади [Гавриш, 2005]. Для нормального прорастания пыльцевых зерен и завязываемости плодов необходима относительная влажность воздуха 60−80 % [Горанько, 1985]. При более высокой влажности воздуха пыльцевые зерна набухают, затем происходит слипание, и опыление цветков затрудняется. При недостатке влаги скорость прорастания пыльцы и роста пыльцевых трубок снижается. 21 Пыльца при этом часто оказывается нежизнеспособной или не высыпается из пыльников [Жученко мл, 1990]. Температура является одним из важных факторов, которая влияет на рост и развития генеративных органов растения томата. Оптимальная температура для роста и развития растений томата +20−25 °С днем и +1820 °С ночью. Резкие перепады температуры, противопоказанные в этот период, способствуют образованию стерильной пыльцы и снижают способность пыльцевых зерен к прорастанию и росту пыльцевых трубок. При температуре ниже +12 °С растение томата перестает цвести, а при температуре ниже +10 °С − останавливается в росте. При температуре ниже −1 °С большинство растений томата гибнет. При повышение температуры, выше +30 °С происходит нарушение физиологических процессов, пыльцевые зерна теряют свою жизнеспособность, становятся стерильными. Полная стерильность наблюдается уже после суток воздействия высоких температур, большинство цветков растений томата осыпаются, оставшиеся образуют мелкие пустотелые партенокарпические плоды. Ночную температуру поддерживают ниже дневной с разницей больше 5 °С. Это необходимо для сокращения расхода веществ растением томата на дыхание ночью. Температура существенно влияет на поступление минеральных веществ из почвы в растение. С повышением температуры питательного раствора (до определенного предела) количество поглощаемых растением веществ увеличивается. Так при температуре выше +25°С хуже усваивается фосфор, а азот и калий лучше. Сумма активных температур (>10 °С) для нормального роста и развития растений томата 1800-2000 °С. [Boncroft et al., 1954; Доспехов, 1979; Гавриш, 1987; Болотских, 2003; Александров, 2005]. Таким образом, устойчивость к температурным стрессам это одна из наиболее важных характеристик при оценке генотипа устойчивости культивируемых видов и сортов томата [Андреев, 2003]. 22 Томаты очень отзывчивы к минеральному питанию. Самые благоприятные условия − это почва рыхлая по структуре, с достаточным количеством содержания азота [Алпатьев, 1981]. Азот усиливает рост и развитие у томатов всех вегетативных органов растений томата. Азотистое удобрение нужно в умеренном количестве в начале роста до периода цветения, а затем после завязывания плодов. От избыточного внесения азотистого удобрения растение замедляет созревание плодов, понижает устойчивость к болезням, растения томата наращивают вегетативную массу [Pound et al., 1955]. Недостаток азотистого удобрения − приводит к карликовости растений томата и пожелтению листовой пластинки. Фосфор обеспечивает рост корней, образование плодов и семян, ускоряет созревание плодов, способствует повышению их сахаристости. Калия требуется больше, чем азота и фосфора, особенно в период формирования вегетативных органов. Калий повышает устойчивость растений к холоду, болезням, улучшая качество скручиваться, плодов. ветки При опадать, его недостатке происходит листья начинают нарушения процесса оплодотворения и как следствие отклонение, от типичного процесса мейоза. По разным данным на образование одной тонны плодов томатов растение потребляет 4,5-7,9 кг калия, 3,3-4,0 кг азота, 1,1-2,5 кг фосфора, 1,7-4,4 кг кальция, 0,7-0,8 кг магния [Шафранский, 2009]. Таким образом, при неблагоприятных условиях окружающей среды нарушается процесс развития генеративных органов растения, что оказывает негативное влияние на репродуктивный потенциал растения томата в целом. 1.4 Влияние биотического фактора на репродуктивную систему растения томата Одной из распространенных и опасных болезней томата является вирус табачной мозаики − Tomato Mosaic Virus (ВТМ). Вирус табачной мозаики 23 был открыт биологом Д.И. Ивановским в 1892, что привело к возникновению специальной науки – вирусологии. Потери урожая от ВТМ находятся в прямой зависимости от времени года, возраста растений, сорта, штамма вируса и способа выращивания. Поражаемость растений вирусом табачной мозаики повсеместно снижает урожайность плодов в 1,3-1,6 раза и более [Авдеев, 2008]. Поражение растений томатов ВТМ выражается в неравномерной окраске листьев, на которых чередуются светлые и темно зеленые пятна различной формы. Сочетание темно и светлоокрашенных участков создает мозаичность окраски листовой пластинки, откуда болезнь получила свое название [Taylor et al., 1961; Сухов и др., 1983]. По литературным данным, вирус табачной мозаики поражает точку роста главного стебля растения томата. Последующее развитие пазушных побегов придает растению характерную кустистость. Листья, особенно верхние и пасынков, деформируются, мельчают, приобретают мозаичную расцветку. Часто наблюдается асимметрия листа вдоль центральной жилки, морщинистость. Жилки на нижней стороне листа имеют антоциановую окраску. Края листовых пластинок закручиваются вовнутрь, в результате чего, листья нередко скручены [Рыжков и др., 1934; Власов, 1970; Гиббс и др., 1978]. Плоды на больных растениях томатов не образуются или их бывает мало: − мелкие, деформированные и некротические. У некоторых растений томата, в плодах, не образуются семена [Брежнев и др., 1997, Hall, 1980; Mercer, 1982]. При поражении вирусом табачной мозаики растения томата теряют репродуктивный потенциал [Гольдин, 1947; Taylor et al., 1961; Власов и др., 1975]. Дикий виды томата Lycopersicon hirsutum var. glabratum содержат ген толерантности Тm-1, который находится в хромосоме 5 [Дьяченко, 1959; Авдеев, 1982]. Он впервые был обнаружен в потомстве от скрещивания 24 культурного томата Lycopersicon esculentum Mill. с диким видом L. hirsutum Humb. [Боуден, 1957; Бочарникова, 2007]. Тm-1 картирован в позиции, близкой к рибосомальным РНК-генам [Bohmert et al., 1998]. Кодируемый им белок распознается как продукт гена авирулентности (Аvr-гена). РНКзависимая, РНК-полимеразы вируса, контролирует устойчивость к патогену на клеточном уровне [Davies, 1973]. Гены Тm-2 и Тm-2a, которые находятся в хромосоме 9, также происходят от дикого вида L. peruvianum L. Все выше приведенные гены эффективны в доминантном состоянии. Гены Тm-2 и Тm-2a контролируют устойчивость к ВТМ на тканевом уровне, при передвижении вируса от клетки к клетке по плазмадесмам [Niemyski, 1963; Eshed et al., 2001]. Несмотря на некоторые негативные характеристики для селекции, такие как нарушения процесса мейоза и впоследствии препятствие образования семян в плодах предполагается, что аллели Тm-2 и Тm-2а обеспечивают более длительную защиту от ВТМ, чем ген Тm-1 [Щелкунов и др., 2004]. Химические средства борьбы практически бессильны против ВТМ. Одно из решений проблемы заключается в введении и использовании биоразнообразных генотипов томата, включающих как культурные формы, мутанты, дикорастущие, полукультурные разновидности, сорта разного географического происхождения, гибриды культурного томата [Жученко, 2004, 2009]. Это позволит расширить спектр генетической изменчивости, а также даст возможность получения нетрадиционных форм с хозяйственно-ценными признаками. В природе ВТМ в основном передается при контакте больного растения со здоровым, изредка семенами, вегетативным размножением, через почву, прививками, а также в результате сельскохозяйственной деятельности человека. В последние годы появились данные, что ВТМ может переноситься на большие расстояния туманами и облаками [Pelham, 1966; Mercer et al., 1980]. 25 Таким образом, селекцию на устойчивость к болезням, так же как и первичное семеноводство, взаимосвязанных и следует непрерывных рассматривать процессов прежде в всего; качестве в силу динамичности биотической структуры популяций вредных видов, а также появления новых генетических источников устойчивости растений. Кроме того, селекция на устойчивость к действию абиотических и биотических стрессоров требует качественно разных подходов, между соответствующими генетическими детерминантами онтогенетической и филогенетической адаптации и предопределяет необходимость постоянного повышения устойчивости сортов и гибридов растения томата. 26 2 МАТЕРИАЛ, МЕТОДИКИ И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1 Характеристика исследуемого материала В качестве контроля был взят сорт Marglob, который используют, как пример для описания генетической коллекции растений томата, так как он имеет морфологию, типичную для культурных сортов томата [Жученко, 1973]. Начиная с начала XX века сорт Marglob выращивался во многих странах и интенсивно использовался в селекционных программах. Из широко известных сортов в результате скрещивания с ним были получены такие сорта как Break o’Day в 1923 году и Pritchard в 1926 году. Сорт Marglob выделен из коллекции ВИРа и отселектирован на Майкопской станции в условиях юга Кубани под №1644. Стебель у сорта Marglob высокий, хорошо гнущийся, гладкий, тип куста полулежащий, сильно облиственный, Листья обыкновенные, светло зеленые, слабо гофрированные, доли крупные, сильно рассеченные. Кисть короткая, простая, иногда слабоветвистая, средней компактности. Цветки средней величины, желтого цвета, плодов в кисти 5-8. Плод крупный, в среднем вес 120 г, красного цвета. Сорт относится к среднеспелым сортам, период вегетации 112-116 дней (рисунок 2а) [Гавриш, 1987]. Сорт Гаидас в работе использовался в качестве второго контроля, районированный для Юга Кубани. Стебель прямостоячий, гладкий, тип куста детерминатный. Листья крупные, доли сильно рассеченные, гладкие. Соцветие простое иногда слабоветвистое, цветки крупные, желтого цвета. Плоды округлые, слаборебристые, массой 101-114 г. Гаидас относится к среднеспелым, высокоурожайным сортам, устойчив к перезреванию, транспортабелен. Период вегетации 96-101 дней. Растение детерминантное, 27 Сорт включен в Госреестр селекционных достижений (рисунок 2б) [Шмаль, 2013]. Рисунок 2 – а) куст сорта Marglob, выращенный в камере искусственного климата; б) куст сорта Гаидас, выращенный в камере искусственного климата. В исследования также были вовлечены мутантные образцы и дикорастущие формы коллекции Института генетики Республики Молдова. Описание мутантных форм и мутаций из каталога «Мутантные формы томатов» представлены в таблице 1. Таблица 1 – Список маркерных томатов используемых в исследованиях составлено по каталогу Бочарниковой Н.И [2011] Номер хромосомы, № п/п Мутант Символ в которой гена расположена мутация 1 2 3 4 Фенотипическое проявление маркерного признака 5 28 Продолжение таблицы 1 1 1 2 Мо 393 3 4 c 6 m-2 6 5 картофельный лист мелких на листьях хлоротических пятен жилка листа 2 Мо 628 e 4 деформирована, сегменты уменьшены Мо 628 ful 4 листья ярко-желтые, зеленые семядоли беловатожелтые, листья появляются с белой wv 2 пятнистостью, с развитием изменяются до нормальных; рост 3 замедлен Мо 755 полное aa 2 отсутствие антоциана во всех частях растения все d 2 части уменьшены; растения листья темные, морщинистые Описание диких и полукультурных разновидностей проводилось по книге «Дикие виды и полукультурные разновидности томатов и использование их в селекции» [Жученко и др., 1974]. L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh. – это кистевидный томат. Стебли прямостоячие, восходящие или стелющиеся, покрыты редкими 29 длинными волосками. Листья мелкие или средней величины. Листовая пластинка гладкая, доли листа варьируют от тупоконечных до оттянутых, заостренных. Соцветие средней длины, цветки не большие 1,5-2 см в диаметре, от 12 до 26 штук. Тычиночная колонка длиной 0,6-0,8 см. Плоды мелкие около 12-20 мм в диаметре, вначале плодообразования темнозеленые, в зрелом состоянии становятся темно-красными или желтыми, в плоде от 20 до 50 штук семян. По мнению А.А. Жученко [1973], в селекционной практике наблюдается хорошая совместимость с красноплодными разновидностями вида L. esculentum Mill. Эта разновидность обладает рядом положительных свойств. Плоды L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh. содержат большое количество пектиновых веществ. Этот вид обладает сравнительной устойчивостью к почвенной засухе, что является немало важным для создания сортов пригодных для механизированной уборки и транспортировки. Кистевидный томат представляет собой источник устойчивости к альтернариозу, септориозу и фитофторозу. L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull. – это волосистый томат. Обладает мощным, опушенным стеблем, с сильным проявлением антоциановой окраски. Листья у растения удлиненно-овальные по контуру, с псевдоприлистниками у основания, светло зеленые с желтоватым оттенком, средней длины. Дольки листообразной формы, сидячие. Томат L. hirsutum var. glabratum обладает вилкообразным соцветием длиной от 12 до 21 см, на соцветии от 18 до 30 мелких цветков. Тычиночная колонка 0,9 см высоты, столбик превышает ее не более чем на 3 мм. Плоды томата темно зеленого цвета, опушенные длинными белыми волосками несъедобные, горькие на вкус и содержат солонин. Одной из особенности является темно зеленая линия на плоде, которая делит его пополам. Семена темнокоричневые, гладкие [Брежнев, 1955]. 30 Разновидность L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull. является донором генов хозяйственно ценных признаков. Так, он содержит ген Tm, обуславливающий устойчивость к ВТМ в условиях естественного заражения, который находится в гомозиготном состоянии и сцеплен с нежелательным фактором, контролирующим пониженную фертильность, с геном, обуславливающим пожелтение листьев и прекращение роста, а также ещё с одним летальным рецессивным геном. У гибридов F1 L. esculentum × L. hirsutum var. glabratum гомозигота по гену Tm устойчива даже в условиях искусственного заражения. Вид нетребователен к теплу, переносит длительные понижения температуры до 0- −3 °С, а также заморозки до −2 °С [Жученко и др., 1973; Бухарова и др., 2008] 2.2 Условия проведения опыта Закладка экспериментов проводилась в период 2008 – 2012 гг. в лаборатории «Изучения и поддержания генетической коллекции томата», а также на экспериментальной базе ГНУ ВНИИБЗР (г. Краснодар) (поле, камера искусственного климата). Исследования электронной микроскопии и цитофотометрии были проведены на базе ВНИИСБ (г. Москва). Для выращивания рассады томатов семена сначала проращивали в чашках Петри на фильтровальной бумаге, помещая их в термостат при температуре +22-25 °С. Перед проращиванием семена обеззараживали перманганатом калия. Через 3-5 суток закладки проросшие семена высаживали в грунт. Гибридизацию проводили на первых трех кистях, методом кастрации бутонов [Веселовский, 1965]. Один из компонентов для скрещивания выращивали в полевых условиях (L. hirsutum var. glabratum), остальные в камере искусственного климата. 31 Для кастрации отбирали бутоны с зелено-желтыми пыльниками; для получения пыльцы – полностью раскрывшиеся цветки. Удаление пыльников и нанесение свежесобранной пыльцы на рыльце пестика осуществляли пинцетом; опыленные цветки изолировали ватным изолятором, маркировали пергаментными этикетками с указанием комбинации. Растения F1 выращивали в камере искусственного климата с заданными условиями: освещенность 20 кЛк, температура +25 °С, влажность 65 %, световой режим: день 16 часов, ночь 8 часов, в 5 л сосудах по методике постановки вегетационного опыта. Влажность почвы поддерживали на уровне 70−80 % от ее общей влагоемкости, а относительную влажность воздуха контролировали в пределах 45−60 % проветриванием и поливом [Журбицкий, 1968]. Для препаровальных работ в опыте использовали стереоскопический микроскоп (бинокуляр) Olympus SZ61. Цитологический анализ проводили на световом микроскопе Olympus BX×41. Готовые препараты анализировали при увеличении объективов 10×0,25, 40×0,65. Объекты просматривались в пяти полях зрения. Опыт проводился в следующей последовательности, которая представлена в таблице 2. Таблица 2 – Условия проведения опыта в климакамере, ГНУ ВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. № Условия п/п 1 2 32 Продолжение таблицы 2 1 1 2 В условиях пониженной температуры (to +12 °C) с нормальным содержанием азота 2 В условиях пониженной температуры (to +12 °C) с повышенным содержанием азота (доза азота увеличена в 2 раза) 3 В условиях оптимальной температуры (to +25 °C) с нормальным содержанием азота 4 В условиях оптимальной температуры (to +25 °C) с повышенным содержанием азота (доза азота увеличена в 2 раза) 5 В условиях повышенной температуры (to +30 °C) с нормальным содержанием азота 6 В условиях повышенной температуры (to +30 °C) с повышенным содержанием азота (доза азота увеличена в 2 раза) В качестве азотистого удобрения для проведения опыта использовали аммиачную селитру. В этом удобрении азот находится и в аммиачной и в нитратной формах, его содержание составляет 34,6 %. Промышленность выпускает аммиачную селитру в двух видах – в виде гранул и в виде чешуек. В нашей работе расчет дозы удобрения на сосуд осуществлялся с учетом массы сухой почвы и дозы г д.в. удобрения на 1 кг почвы по методике Б.А. Ягодин и др. [2007]. 2.3 Схема гибридизации В ходе работы было получено 10 межвидовых гибридов и 6 внутривидовых гибридов F1 растений томата (таблица 3). 33 Таблица 3 − Схема гибридизации Генотипы Название генотипов Внутривидовые гибриды 1 ♀ Marglob × ♂ Мо 393 2 ♀ Гаидас × ♂ Мо 393 3 ♀ Marglob × ♂ Мо 628 4 ♀ Гаидас × ♂ Мо 628 5 ♀ Marglob × ♂ Мо 755 6 ♀ Гаидас × ♂ Мо 755 Межвидовые гибриды 7 ♀ Мо 393 × ♂ L. esculentum var. racemigerum 8 ♀ Мо 393 × ♂ L. hirsutum var. glabratum 9 ♀ Мо 628 × ♂ L. esculentum var. racemigerum 10 ♀ Мо 628 × ♂ L. hirsutum var. glabratum 11 ♀ Мо 755 × ♂ L. esculentum var. racemigerum 12 ♀ Мо 755 × ♂ L. hirsutum var. glabratum 13 ♀ Marglob × ♂ L. hirsutum var. glabratum 14 ♀ Marglob × ♂ L. esculentum var. racemigerum 15 ♀ Гаидас × ♂ L. hirsutum var. glabratum 16 ♀ Гаидас × ♂ L. esculentum var. racemigerum 2.4 Индуцированный биотический фактор ВТМ Возбудитель мозаики − Tobacco мозаики, ВТМ) [Migliori et al., 1970; mosaic virus (вирус Власов, 1974; табачной Гавриш, 1987; Macias, 1980; Mercer et al., 1982]. Заболевание ВТМ распространено как в условиях открытого, так и защищенного грунтах. Симптомы заболевания варьируются от штамма, фазы заражения растений томата и условий 34 окружающей среды. окружающих условий [Taylor et al., 1961; Власов, 1975; Авдеев, 1987] Плотноупакованные хромосомы представляют собой кристаллическую структуру, образованную белками, содержащими от 50 до 200 аминокисгидрофобных связей. Структура белковых субъединиц такова, что при их сборке образуется спиральный желобок, закрученный вокруг длинной оси стержня, в центре которой находится цилиндрическая полость диаметром примерно 2 нм (рисунок 3) [Воробьев, 1999]. Рисунок 3 − Схема частицы ВТМ из изолированных субъединиц белка оболочки и молекулы РНК вируса [Воробьеву, 1999]. В этом желобке укладывается одна одноцепочечная молекула рибонуклеиновой кислоты (РНК, в которой хранится генетическая информация вируса) длиной 6400 нуклеотидов. Частица BTM имеет длину 300 нм, диаметр 18 нм, наглядно представлена на рисунке 4 [Воробьев, 1999]. Температура инактивации вируса 90–93 °С, предельное разведение 1:100 000, потеря инфекционности при выстраивании в соке около 3000 дней. ВТМ принадлежит к группе типичных контактных патогенов и является одним из наиболее распространенных и вредоносных фитовирусов. Вирус не имеет определенной связи с переносчиком, передается механической инокуляцией, контактом между больными и здоровыми растениями, с семенами томата и перца, не передается пыльцой. 35 Рисунок 4 − Схема изображения структуры ВТМ [По Воробьеву, 1999] По последним данным список растений-хозяев ВТМ включает представителей более 9 семейств [Valleau et al.,1930; Niemyski, 1963; Чебышев, 2007]. На территории России вирус табачной мозаики распространен повсеместно. Вредоносность зарегистрирована в республиках Прибалтики, на Северном Кавказе, в республиках Закавказья, Средней Азии, Белоруссии, а также в Молдове, на Украине, в Краснодарском и Хабаровском краях, Нижнем Поволжье и на Дальнем Востоке. Повсеместное распространение ВТМ свидетельствует о независимости развития вируса от экологических факторов, хотя наличие семенной инфекции существенно влияет на частоту возникновения эпифитотий [Van Winckel, 1968; Wetzler Chr et al., 1983; Авдеев, 2008]. 36 2.5 Методика инокуляции растений томата ВТМ Для заражения образцов использовали обычный (зеленый) штамм ВТМ, полученный из лаборатории вирусологии ВНИИФ, (г. Москва), поддерживаемый на растениях турецкого табака (N. tabacum L.). Заражение сеянцев проводилось в фазе 2 настоящих листьев, перед инокуляцией на листья был напылен карборунд с размером частиц 500 мкм. Затем стеклянным шпателем был нанесен инокулюм ВТМ на ½ листа, предварительно разведенный в дистиллированной воде 1:500 мкл. По каждому варианту заражалось по 10-16 растений [Smith, 1988]. 2.6 Методика морфологического описания растений Визуальное обследование и диагностику по симптомам заболевания проводили по методике European Handbook of Plant Diseases [1989]. Описание зараженных растений томата проводили по следующим признакам в соответствии с методикой: тип куста, длина междоузлия, высота растений, % пораженной листовой пластинки, количество цветков в соцветии, число завязавшихся плодов. 2.7 Методика определения фертильности и жизнеспособности пыльцевых зерен растения томата В нашей искусственной работе жизнеспособность питательной среде. В чашке пыльцы Петри определяли с на увлажненной фильтровальной бумагой на предметное стекло наносили каплю (15 % раствор сахарозы, подкисленный 0,006 % раствором борной кислоты) на нее кончиком иглы наносили пыльцу, и выдерживали в термостате при +25 °С в течение 3 часов. Жизнеспособность определяли по проценту проросших 37 пыльцевых зерен, наблюдаемых под микроскопом в 10-15 полях зрения, при этом анализировали 400-500 случайно выбранных пыльцевых зерен. Пыльцу считали проросшей, если ее трубка имела длину равную диаметру пыльцевого зерна и более [Паушева, 1988]. Изучалось по 10-16 растений томата в каждом из 6 вариантов условий их выращивания. Пыльцевые зерна выполненные, полностью заполненные крахмалом, окрашиваются в темно-коричневый цвет, являются фертильными. Пыльцевые зерна морщинистые, неокрашенные не содержат следов крахмала, такие зерна являются стерильными. 2.8 Методика определения количества пыльцевых зерен в цветке растения томата Количество пыльцы в цветке растений томата определяли по методике, разработанной на кафедре РГАУ – МСХА им. К.А. Тимирязева [Иванова и др., 1996]. Изучалось по 10-16 растений томата в каждом из 6 вариантов условий их выращивания. Свежесобранные пыльники подсушивали в течение суток при температуре 25-26 °С. Пыльники помещали в стеклянные бюксы и измельчались пинцетом, в него приливали 2 мл сахарозы, затем брали микропипеткой 4 мкл. взвешенной смеси и каплю переносили на предметное стекло. Для подсчета количества пыльцевых зерен использовали камеру Горяева. В каждом препарате подсчитывали пыльцевые зерна в пяти больших квадратах. Определение количества пыльцевых зерен рассчитывали по формуле: X = а × 50000 × b, где: а – среднее количество подсчитанных пыльцевых зерен в 5 больших квадратах; 38 b – количество исходной суспензии пыльцевых зерен; 50000 – коэффициент пересчета объема 5 больших квадратов на 1 мкл. 2.9 Метод электронной микроскопии В качестве материала для исследования в опыте электронной микроскопии использовали пыльники растений томата размером 1-3 мм. Эти размеры пыльников представляют стадии тетрад [Pacinie et al., 1985]. Пыльники растений томата были первоначально зафиксированы в 1,5 % глютаровом альдегиде, затем переведены в 2 % параформальдегид и установлены в 1 %-ом осмии (рисунок 5 а, б) [Polowick et al., 1992]. Рисунок 5 – а, б) Пыльцевые зерна гибрида Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum. Перед просмотром тонкие срезы пыльников, предварительно обезвоживали в ацетоне и соли лимонной кислоты. Готовые препараты рассматривались на электронном микроскопе марки Hitachi H−500, при разрешении около 0,5 нм. (увеличении × 2500) Изображения были сфотографированы на Kodak 489. 39 2.10 Методика определения количества ДНК Фиксацию пыльников растений томата проводили по методике Ε.Н. Хачатурова [1980]. Пыльники выдерживали в спирте в соотношении 1:3, при температуре +4 °С – от 3 ч до 1 суток. Затем проводили отмывку в70 % спирте, в 3-х кратной повторности. После пыльники томатов выдерживали в 50 % и 30 % спирте по 10 мин. Промывку пыльников проводили дистиллированной водой после окраски раствором Шифа при +4 °С. Затем пыльники переводили в постоянный препарат с помощью жидкого азота и смолы. Препараты были просмотрены на цитофотометре Opton, в режиме: I=5мА, изображения были сфотографированы на Kodak 489. 2.11 Методы статистического анализа экспериментальных данных В работе были применены различные методы статистической обработки данных. С помощью дисперсионного анализа определяли существенные различия между генотипами под влиянием определенных факторов [Доспехов, 1979]. Оценку достоверности различий между средними значениями признаков образцов проводили с помощью рангового теста [Тюрин, 2010]. Классификация данных растений томата по нескольким признакам одновременно, в нашем случае фертильности, жизнеспособности и продуктивности пыльцевых зерен, произведена в результате кластерного анализа [Олдендерфер и др., 1989]. В основе кластерного анализа лежит построение таблиц – матриц. Сходства, в которых указаны все по парные расстояния каждого объекта. Термин расстояния означает вычисления меры сходства между гибридами, чем больше сходства, тем меньше расстояние и наоборот. В результате обработки в нашем случае матрица сходства будет иметь размерность 18 × 18, что соответствует числу сравниваемых генотипов. В результате 40 обработки матриц строится график – иерархический кластерный дендрит, в котором по оси "X" указываются имена гибридов в порядке их сходства, по оси "Y" горизонтальными линиями расстояния между генотипами или их группами. Разрезание дендрита по "большим расстояниям" приводит к разделению сравниваемых объектов на группы сходных – кластеры. Использовались пакеты программ Statistica 7, MS Excel 2000. 41 3 ХАРАКТЕРИСТИКА МУЖСКОГО ГАМЕТОФИТА У ГИБРИДОВ F1 РАСТЕНИЙ ТОМАТА ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ АБИОТИЧЕСКИХ И БИОТИЧЕСКОГО ФАКТОРОВ 3.1 Морфологическая изменчивость гибридов F1 растений томата под воздействием абиотических и биотического факторов Отдаленная гибридизация необходима селекции растений, так как она позволяет обогащать геном вида новыми сочетаниями генов [Жученко, 2004; Цэрану и др., 2005]. При этом, начав широкое вовлечение новой зародышевой плазмы в скрещивание с культивируемыми формами растений, селекционеры получили богатые источники разнообразия, и на первый взгляд проблема генетической изменчивости казалась решенной [Воробьева, 1980; Цицин, 1981; Прохоров 1997; Аллашов, 2006]. Практика показала, что эти выводы были преждевременными, а исследования в области генетики позволили выявить причины возникших затруднений, обусловлены ингибированием рекомбинаций в отдаленных скрещиваниях, блочной организацией адаптивных комплексов генов, резким нарушением сбалансированности генотипов по наиболее существенным участкам генома. Генотипическая изменчивость, наблюдаемая в родственных и видовых скрещиваниях, является лишь небольшой частью общего скрытого потенциала изменчивости [Пивоваров, 2007]. Устойчивые к вирусам, болезням и вредителям сорта не только повышают урожайность и качество продукции, но и экономят значительные средства на защитные мероприятия и уменьшают или даже исключают загрязнение окружающей среды ядохимикатами. Возможности в селекции каждой культуры зависят от ее генетической изученности [Лудилов, 1973; Руденко, 1978; Сухов, 1983; Azhar, 2004]. 42 В нашей работе проводили скрещивания между культурными сортами, мутантными формами и дикорастущими видами растений томата. Морфологическое описание культурных сортов, внутри− и межвидовых и гибридов F1 растений томата, подвергшихся влиянию абиотических и биотическому факторов проводили в следующей последовательности: 1) тип куста, 2) длина междоузлия, 3) высота растения, 4) тип соцветия, 5) процента пораженности ВТМ, 6) размеру и окраске цветка, 7) формы и окраске плода. (Приложение 1−7; рисунки 6−23). Сорт Marglob − растение темно-зеленого цвета, детерминантный тип куста, сильно облиственный, полулежащий, длина междоузлия 5,56 см, высота растения 15,45 см (рисунок 6а). Листья обыкновенные, крупные, слабо гофрированные; сегменты сильно рассеченные, крупные (рисунок 6б). Процент поражения растений томата вирусом табачной мозаики растений томата составил 51 %, процент реализованной продуктивности 12,51 % (Приложение 1−7). Рисунок 6 – Сорт Marglob: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. 43 Сорт Гаидас − растение темно-зеленого цвета, детерминантный тип куста, длина междоузлия 5,49 см, высота растения 16,96 см (рисунок 7а). Листья обыкновенные, крупные, слабо гофрированные; сегменты сильно рассеченные, крупные (рисунок 7б). Процент поражения растений томата вирусом табачной мозаики растений томата составил 50 %, процент реализованной продуктивности 10,11 % (Приложение 1−7). Рисунок 7 – Сорт Гаидас: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. Межвидовой гибрид F1 Мо 393 × L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh. − растение темно-зеленого цвета, индетерминантный тип куста, длина междоузлия 5,54 см, высота растения 20,34 см (рисунок 8а). Наличие большого количества белых пятен (m-2) на слабо рассеченных листьях (с) (рисунок 8б). Процент поражения растений томата вирусом табачной мозаики растений томата составил 46 %, процент реализованной 10,11 % (Приложение 1−7). 44 Рисунок 8 – Гибрид F1 Мо 393 × L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh.: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. Межвидовой гибрид F1 Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull. Растение имеет индетерминатный тип куста, 4,45 см, высота растения 23,18 см (рисунок 9а). Листья с большим количеством белых пятен (m-2), слабо рассеченные (c) (рисунок 9б). Рисунок 9 – Гибрид F1 Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull.: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. Процент поражения растений томата вирусом табачной мозаики 40 %, процент реализованной продуктивности составил 15,23 % (Приложение 1−7). 45 Межвидовой гибрид F1 Мо 628 × L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh. – растения темно-зеленого цвета, индетерминатный тип куста. Стебли покрытые густыми короткими волосками, длина междоузлия 5,01 см, высота растения 12,34 см (рисунок 10а). Листья 30−35 см длины, прерывистоперестые. Сегменты листа заостренные, мелкогородчатые по краям (рисунок 10б). Процент поражения растений томата вирусом табачной мозаики 45 %, процент реализованной продуктивности составил 5,52 % (Приложение 1−7). Рисунок 10 – Гибрид F1 Мо 393 L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh.: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев, б) лист растения томата. Межвидовой гибрид F1 Мо 628 × L. hirsutum var. glabratum C. H. Mull. – растения темно-зеленого цвета, индетерминатный тип куста. Стебли покрытые густыми короткими волосками, длина междоузлия 4,87 см, высота растения 11,23 см (рисунок 11а). Листья 25−30 см длины, рассеченные. Сегменты листа заостренные, мелкогородчатые по краям (рисунок 11б). Процент поражения растений томата вирусом табачной мозаики 40 %, процент реализованной продуктивности составил 13,61 % (Приложение 1−7). 46 Рисунок 11 – Гибрид F1 Мо 628 × L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull.: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев, б) лист растения томата. Межвидовой гибрид F1 Мо 755 × L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh. – растения темно-зеленого цвета, стелющиеся, индетерминатный тип куста. Стебель покрыт густыми короткими волосками, длина междоузлия 5,09 см, высота растения 10,98 (рисунок 12а). Листья 20−25 см в длину, прерывистоперестые. Сегменты листа расположены на сравнительно длинных черешках 1,0−2,0 см; концы сегментов острые, у основания форма неравнобокая (рисунок 12б). Рисунок 12 – Гибрид F1 Мо 755 × L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh.: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. 47 Процент поражения растений томата вирусом табачной мозаики 45 %, процент реализованной продуктивности составил 4,45 % (Приложение 1−7). Межвидовой гибрид F1 Мо 755× L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull. – растения темно-зеленого цвета, индетерминатный тип куста. Стебли покрытые короткими железистыми волосками, длина междоузлия 4,56 см, высота растения 12,09 см (рисунок 13а). Листья крупные, длиною 25−30 см, с псевдоприлистниками у основания, темно-зеленые. Основные сегменты удлиненно-яйцевидной формы, заостренные, неравнобокие у основания, мелкогородчатые по краям (рисунок 13б). Процент поражения растений вирусом табачной мозаики 45 %, процент реализованной продуктивности составляет 15,23 % (Приложение 1−7). Рисунок 13 – Гибрид F1 Мо 755 × L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull.: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев, б) лист растения томата. Внутривидовой гибрид F1 Marglob × Мо 393 − растения томата темнозеленого цвета, детерминатный тип куста, междоузлия в фазе 3−4-х настоящих листьев 4,56 см, высота растения 12,98 см. Стебель, опушенный короткими железистыми волосками (рисунок 14а). 48 Листья очень крупные 25−35 см в длину и около 25−28 cм ширины, доли удлиненно-яйцевидные, рассеченные (рисунок 14б). Процент поражения растений вирусом табачной мозаики 50 %, процент реализованной продуктивности составляет 16,74 % (Приложение 1−7). Рисунок 14 – Гибрид F1 Marglob × Мо 393: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. Внутривидовой гибрид F1 Гаидас × Мо 393 − растения томата темнозеленого цвета, детерминатный тип куста, междоузлия в фазе 3−4-х настоящих листьев 4,9 см, высота растения 14,98 см. Рисунок 15 – Гибрид F1 Гаидас × Мо 393: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. 49 Стебель опушенный короткими железистыми волосками (рисунок 15а). Листья крупные 20−30 см в длину, сегменты листа удлиненнояйцевидные, рассеченные (рисунок 15б). Процент поражения растений вирусом табачной мозаики 48 %, процент реализованной продуктивности составляет 5,55 % (Приложение 1−7). Внутривидовой гибрид F1 Marglob × Мо 628 – растения томата темнозеленого цвета, детерминатный тип куста, длина междоузлия 4,08 см, высота растения 13,67 см. Стебель, опушенный короткими железистыми волосками (рисунок 16а). Рисунок 16 – Гибрид F1 Marglob × Мо 628: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. Листья крупные, удлиненные 24−30 см длиной, сегменты листа крупные, удлиненно яйцевидной формы, острые, гладкие, у основания неравнобокие (рисунок 16б). Процент поражения растений вирусом табачной мозаики 48 %, процент реализованной продуктивности составил 6,32 % (Приложение 1−7). Внутривидовой гибрид F1 Гаидас × Мо 628 − растения томата темнозеленого цвета, детерминатный тип куста, междоузлия в фазе 3−4-х 50 настоящих листьев 4,0 см, высота растения 12,45 см. Стебель, опушенный короткими железистыми волосками (hl) (рисунок 17а). Листья крупные, удлиненный 20−25 см в длину, сегменты листа уменьшены (e) (рисунок 17б). Процент поражения растений вирусом табачной мозаики 48 %, процент реализованной продуктивности составил 10,11 % (Приложение 1−7). Рисунок 17 – Гибрид F1 Гаидас × Мо 628: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. Внутривидовой гибрид F1 Marglob × Мо 755 − темно-зеленого цвета, детерминатный тип куста, высота растения 10,56 (d). Рисунок 18 – Гибрид F1 Marglob × Мо 755: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. 51 Листья крупные 30−35 см в длину, сегменты листа крупные, морщинистые, заостренные, у основания неравнобокие (рисунок 18б). Стебель, слегка опушенный короткими железистыми волосками. Длина междоузлия в фазе 3−4-х настоящих листьев 4,05 см (рисунок 18а). Процент поражения растений вирусом табачной мозаики 50 %, процент реализованной продуктивности составил 9,33 % (Приложение 1–7). Внутривидовой гибрид F1 Гаидас × Мо 755 − темно-зеленого цвета, детерминатный тип куста, высота растения 10,34 (d). Стебель, слегка опушенный короткими железистыми волосками. Длина междоузлия в фазе 3−4-х настоящих листьев 3,18 см (рисунок 19а). Листья крупные 30-35 см в длину, сегменты листа крупные, морщинистые, заостренные, у основания неравнобокие (рисунок 19б). Процент поражения растений вирусом табачной мозаики 48 %, процент реализованной продуктивности составил 10,34 % (Приложение 1−7). Рисунок 19 – Гибрид F1 Гаидас × Мо 755: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. Межвидовой гибрид F1 Marglob× L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull. − растения светло-зеленого цвета, индетерминатный тип куста, стелющиеся, сильно ветвящиеся. 52 Стебель, густо покрытый железистыми волосками, длина междоузлия 4,19 см, высота растения в фазе 3−4-х настоящих листьев 17,34 см (рисунок 20а). Рисунок 20 – Гибрид F1 Marglob× L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull.: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. Листья крупные, длиной до 25-30 см, сегменты листа широколанцетные с многочисленными мелкими зубчиками по краю, покрытые короткими железистыми волосками (рисунок 20б). Соцветие среднего размера, длиной до 15 см, на одном соцветии 8−10 опушенных цветков (рисунок 20в). Плод 1,5−2,5 см в диаметре, округлой формы, красного цвета, партенакарпический (рисунок 20г). 53 Процент поражения растений вирусом табачной мозаики равен 40 %, процент реализованной продуктивности составил 25,21 % (Приложение 1−7). Межвидовой гибрид F1 Marglob × L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh. − растение темно-зеленого цвета, индетерминатный тип куста. Стебель покрыт густыми короткими волосками, междоузлия 3,78 см, высота растения 16,34 см (рисунок 21а). Листья длиною 25−28 см, рассеченные. Сегменты листа яйцевидной или широкояйцевидной формы, мелкогородчатые, с заостренными концами, основание неравнобокое (рисунок 21б). Рисунок 21– Гибрид F1 Marglob × L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh.: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. 54 Соцветие простое, рыхлое, многоцветковое (10−14 цветков), длиной 15 см и более. Лепестки цветка узкие заостренные длиной 10−11 мм, лимонножелтого цвета (рисунок 21в). Плоды округлой формы, глянцевые, гладкие, ярко-красные, партенокарпические (рисунок 21г). Процент поражения растений вирусом табачной мозаики соответствовал 45 %, процент реализованной продуктивности составил 18,66 % (Приложение 1−7). Межвидовой гибрид F1 Гаидас × L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull.− растения светло-зеленого цвета, индетерминатный тип куста, стелющиеся, сильно ветвящиеся. Рисунок 22 – Гибрид F1 Гаидас × L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull.: а) растение томата в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. 55 Стебель, густо покрытый железистыми волосками, длина междоузлия 3,89 см, высота растения в фазе 3−4-х листьев 17,89 (рисунок 22а). Листья крупные, длиной до 25−30 см, сегменты листа широколанцетные с многочисленными мелкими зубчиками по краю, покрытые короткими железистыми волосками (рисунок 22б). Соцветие среднего размера, длиной до 15 см, на одном соцветии 8−10 опушенных цветков (рисунок 22в). Плод 1−1,5 см в диаметре, округлой формы, красного цвета, партенакарпический (рисунок 22г). Процент поражения растений вирусом табачной мозаики 40 %, процент реализованной продуктивности составил 16,72 % (Приложение 1−7). Межвидовой гибрид F1 Гаидас × L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh. − растение темно-зеленого цвета, индетерминатный тип куста. Рисунок 23 – Гибрид F1 Гаидас × L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh.: а) растение в фазе 3−4-х настоящих листьев; б) лист растения томата. Стебель покрыт густыми короткими волосками, междоузлия 4,46 см, высота растения 18,98 см (рисунок 23а). Листья длиной 25-30 см, 56 рассеченные. Сегменты листа яйцевидной или широкояйцевидной формы, мелко городчатые, с заостренными концами, основание неравнобокое (рисунок 23б). Соцветие простое, рыхлое, многоцветковое 10-14 цветков, длиной 15−20 см (рисунок 23в). Плоды округлой формы, от 1−2 см в диаметре, глянцевые гладкие, ярко-красные, партенокарпические (рисунок 23). Процент поражения растений вирусом табачной мозаики 45 %, процент реализованной продуктивности составил 16,71 % (Приложение 1−7). Таким образом, проявление у внутривидовых гибридов F1 растений томата проявление фенотипических признаков: тип куста, длина междоузлия, высота растений, тип соцветия, процент пораженности ВТМ, размер и окраска цветка, форма и окраска, шло по материнскому компоненту, представленному культурными сортами Marglob и Гаидас. У межвидовых гибридов F1 наследование этих же признаков, шло по отцовскому компоненту, в качестве которого использовались дикорастущие виды Процент поражения вирусом табачной мозаики у межвидовых гибридов F1 с дикорастущими формами составляет 40−45 %, в отличие от других генотипов, у которых процент поражения растения томата составлял 50 % и более. Из 16 гибридных комбинаций полученных в ходе работы только у четырех гибридов F1 растений томата отмечено образование плодов, где в качестве отцовской формы использовались дикорастущие виды. 3.2 Фертильность и жизнеспособность мужского гаметофита у гибридов F1 растений томата под воздействием абиотических и биотического факторов В селекционно-генетических исследованиях анализ традиционно начинается с изучения структуры изменчивости признаков, который 57 позволяет оценить вклады изучаемых факторов. Важное условие получения высокого урожая плодообразования, растения где томата одним из − это хорошие показателей показатели является энергия плодообразования — процент вызревших плодов от количества цветковых почек [Яндовка и др., 2006]. Вызревшие плоды образуются лишь при оплодотворении семяпочек. Слабое образование плодов или его отсутствие может быть следствием нескольких факторов: недоразвитость цветка, неблагоприятные условия выращивания растений, слабое пыльцеобразование, низкая фертильность пыльцы и стерильность мужского гаметофита, от повышенной температуры и зараженности растений томата ВТМ. Нередко неблагоприятных при отсутствии условиях образуются оплодотворения мелкие семяпочек пустотелые в соцветия [Серебряков, 1960; Валько и др., 2000; Анюхина и др., 2001; Batygina, 2003]. Также многое зависит от генотипа растений томата. Лучшее образование плодов наблюдается у малокамерных (от 2-х до 4-х камер), относительно мелкоплодных сортов и гибридов. К ним относятся все гибриды, одной из родительской формы которых является дикорастущий вид растения томата. Для них характерно большое количество пыльцы и ее высокий процент фертильности, т.е. способности пыльцы к оплодотворению. Другой показатель качества пыльцы − жизнеспособность, т.е. способность пыльцы к прорастанию на рыльце пестика [Симоненко, 1983; Прохоров, 1997]. Хорошее образование плодов обеспечивается поддержании оптимальных условий микроклимата: температуры при и минерального питания [Нокс, 1985]. В нашей работе были рассмотрены эффекты различия генотипов, температур и фонов удобрений растений томатов, зараженных вирусом ВТМ. Результаты выполнены в рамках трехфакторного дисперсионного анализа и представлены в таблице 4. 58 Таблица 4 – Результаты трехфакторного дисперсионного анализа степени фертильности пыльцевых зерен гибридов F1 растений томата под воздействием абиотических и биотического факторов, ГНУ ВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. Доля в Изменчивос ть df mS F d2 Fst общей диспер сии, % генотипов 17 689,05 17,83 3,68 8,54 0,9 температур 2 249104,73 6446,02 3,68 576,54 61,3 удобрение 1 14229,18 368,20 3,68 21,90 2,3 34 648,63 16,78 3,68 16,94 1,8 17 444,83 11,51 3,68 5,64 0,6 2 55586,11 1438,39 3,68 257,16 27,3 34 589,41 15,25 3,68 15,30 1,6 1188 38,64 − − 38,64 4,1 генотипов + температур генотипов + удобрение температур + удобрение генотипов + температур а +удобрение остаточная Примечание: df – степень свободы; mS – средний квадрат; F – критерий Фишера; Fst – критерий Фишера (табличный); d2 – дисперсия В нашей работе по анализу полученных данных видно, что наибольшее достоверное влияние на фертильность пыльцевых зерен у всех исследуемых генотипов оказали температура и совокупность факторов: – температуры и удобрение. Доля дисперсии соответственно составила 61,3 и 27,3 %. 59 Одной из главных задач для успешной селекции растений является обеспечение и определение устойчивости репродуктивной системы и ее качества. К качеству репродуктивной системы относят процент прорастания пыльцы на рыльце пестика, который в свою очередь зависит от особенностей генотипа, влияния окружающей среды, и других структурно- морфологических показателей пыльцы [Симоненко, 1982; Цаценко и др., 2012]. Пыльца, сформировавшаяся в экстремальных условиях, а также пыльца межвидовых гибридов практически не прорастает [Сладков, 1967]. В период формирования мужского гаметофита влияние повышенной и пониженной температур приводит к элиминации микроспор, не обладающих устойчивостью к данному фактору [Лобанов, 1985; Атабекова, 1987]. Причиной снижения жизнеспособности пыльцевых зерен может быть потеря питательных веществ пыльцы на фоне заражения вирусом табачной мозаики [Козлова, 1985]. Имеются немногочисленные данные о возможности отбора пыльцы на устойчивость к вирусам [Брежнев и др., 1977]. В работе установлено, что жизнеспособность пыльцевых зерен, зараженных растений томата при оптимальных условиях роста и развития на искусственной питательной среде in vitro, составляла 12−33 %. Оценка эффектов различия генотипов, температур и фонов удобрений проведена с помощью трехфакторного дисперсионного анализа (таблица 5). В ходе достоверные дисперсионного эффекты анализа изучаемых установлены факторов. статистически Для показателя жизнеспособности пыльцевых зерен имело преимущество роль средовых факторов, таких как температура − 40,2 % и удобрения − 19,5 %. Вклад различий совместного влияния температур и фонов минерального питания также был велик и составил 28,5 %. Влияние генотипа оказалось незначительным, как по отдельному признаку (0,9 %), так и по совместному (1,6 %; 0,3 %; 0,8 %). 60 Таблица 5 – Результаты трехфакторного дисперсионного анализа степени жизнеспособности пыльцевых зерен гибридов F1 растений томата под воздействием абиотических и биотического факторов, ГНУ ВНИИБЗР,2008 – 2013 гг. Доля в Изменчивос ть df mS F Fst d2 общей дисперсии, % генотипов 17 4,16 9,81 3,68 0,05 0,9 температур 2 903,03 2127,82 3,68 2,09 40,2 удобрения 1 658,16 1550,83 3,68 1,02 19,5 34 3,42 8,07 3,68 0,08 1,6 17 1,67 3,93 3,68 0,02 0,3 2 321,51 757,57 3,68 1,49 28,5 34 1,94 4,58 3,68 0,04 0,8 1186 0,42 − − 0,42 8,2 генотипов + температур генотипов + удобрения температур + удобрения генотипов + температур + удобрения остаточная Примечание: df – степень свободы; mS – средний квадрат; F – критерий Фишера; Fst – критерий Фишера (табличный); d2 – дисперсия Таким образом, по результатам трехфакторного дисперсионного анализа установлены статистически достоверные эффекты всех изучаемых факторов. Однако, их доля в общей изменчивости признаков разная и 61 заслуживает отдельного обсуждения. Так, вклад различий генотипов по признакам фертильность и жизнеспособность пыльцевых зерен крайне мал и не превышал 1 %. Для этих показателей превалировала роль средовых факторов – температурного режима и дозы удобрений. Для признака «фертильность» вклад различия температур составил 61,3 %, а для жизнеспособности – 40,2 %. Вклад совместных различий температур и фонов минерального питания также был велик для фертильности пыльцевых зерен 27,3 %, для жизнеспособности пыльцы 28,5 %. 3.3 Количество пыльцевых зерен у гибридов F1 растений томата под воздействием абиотических и биотического факторов При меняющейся экологической ситуации практики, стоит задача отбора генотипов с для селекционной высокой пыльцевой продуктивностью, а также устойчивых по фертильности и жизнеспособности пыльцевых зерен к действию абиотических и биотических стрессоров [Тараканов, 1994]. Наибольшее влияние на пыльцевую продуктивность, т.е. количество пыльцевых зерен, оказывает температура. Количество пыльцевых зерен в пыльниках цветка возрастает в течение трех-четырех дней от начала цветения, несмотря на то, что часть пыльцы высыпается. Во втором и третьем соцветиях у растений томата, по сравнению с первым, ее бывает больше. Однако, если цветки раскрываются одновременно, независимо от их местоположения на растении, количество пыльцы в них одинаковое [Цаценко и др., 2009]. Репродуктивная система растений находится в прямой зависимости от условий выращивания растений и генотипа. При отдаленной гибридизации у растений томата, по мнению С.Ф. Гавриш и С.Н. Галкина [1990] изменяется в 62 первую очередь количество пыльцевых зерен, за счет вовлечения дикорастущих видов растений томата в селекционный процесс. Эффективность опыления и оплодотворения определяется количеством пыльцевых зерен в цветке. Количество пыльцы у томата на каждую яйцеклетку приходится от 1 до 5 тыс. пыльцевых зерен [Бочарникова, 2007]. В одной завязи растений томата закладывается 200-300 и более семяпочек, в каждой завязи в оптимальных условиях может образовываться от 22 до 288 семяпочек [Жученко мл., 1990]. Для завязывания плода томата, необходимо оплодотворение примерно 6 % семяпочек [Жученко, 1973]. По количеству пыльцы дикие виды томатов превосходят культурные сорта. Дикие виды оплодотворяются перекрестным опылением в отличие от культурных сортов, которые склонны к самоопылению [Бочарникова, 2007]. Однако каким бы ни был сорт или вид томатов, их способность к самоопылению в любом случае ограничена, так как она производится вследствие воздействия сторонних факторов, например: температуры, вируса и т.д. [Pacinie, 1985]. В нашей работе анализ количества пыльцевых зерен растений томата, зараженных ВТМ, подвергшихся влиянию температур и различным дозам минерального удобрения, выполнен с помощью схемы трехфакторного дисперсионного анализа (таблица 6). Таблица 6 – Результаты трехфакторного дисперсионного анализа степени количества пыльцевых зерен гибридов F1 растений томата под воздействием абиотических и биотического факторов, ГНУ ВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. Доля в Изменчивость общей df mS F Fst d2 дисперсии, % 1 2 3 4 5 6 7 63 Продолжение таблицы 6 1 2 3 4 5 6 7 генотипов 17 13,56 20,37 3,68 0,18 11,6 температур 2 38,54 57,88 3,68 0,09 5,7 удобрения 1 3,68 5,53 3,68 0,00 0,3 34 6,76 10,15 3,68 0,17 10,9 17 5,92 8,90 3,68 0,07 4,7 2 56,75 85,22 3,68 0,26 16,7 34 4,62 6,94 3,68 0,11 7,1 1187 0,67 − − 0,67 43,0 генотипов + температур генотипов + удобрения температур +удобрения генотипов + температур + удобрения остаточная Примечание: df – степень свободы; mS – средний квадрат; F – критерий Фишера; Fst – критерий Фишера (табличный); d2 – дисперсия. Проведенные нами исследования показали статистически достоверные различия для всех изучаемых факторов. Наибольшее влияние на признак количество пыльцевых зерен оказывают различия между генотипами − 11,6 %. На взаимодействие факторов температуры и минерального удобрения приходится − 16,7 %, а генотипа и температуры − 10,9 % от общей изменчивости. Для данного показателя наиболее существенным оказался эффект остаточной изменчивости, который составил − 43 %. Таким образом, при исследовании пыльцеобразующей способности под воздействием абиотических и биотического факторов установлено статистически достоверное влияние генотипа на количество пыльцевых зерен − 11,6 %. В 64 структуре данного эксперимента ее источником являлась метамерная изменчивость и индивидуальная изменчивость отдельных растений. 3.4 Классификация генотипов, подвергнутых влиянию разных температур Создание и сохранение генетически устойчивых гибридов растений томата является необходимым условием для повышения эффективности селекции и генетических исследований. Крупные коллекции важнейших сельскохозяйственных культур созданы в Голландии, Германии, США и других странах. Банки генов не всегда представлены образцами, в которых локализованы гены, отвечающие за морфологические, адаптивные и хозяйственные признаки, необходимые для проведения селекционных работ [Бочарникова, 2008]. Одним из условий использования генетического потенциала культурных, полукультурных и диких видов томатов является принцип создания коллекций, их правильная организация и классификация на группы, качественно отличающиеся по специфике источников и маркированию генов [Яшина и др., 1965; Щелкунов и др., 2004]. В наших исследованиях была предпринята попытка провести классификацию генотипов растений томата, подвергшихся влиянию различных температур по признакам − фертильность, жизнеспособность дисперсионного и количество анализа. По пыльцевых результатам зерен с помощью дисперсионного анализа установлено, что температура является важнейшим фактором, влияющим на анализируемые признаки. Так, вклад различия температур для признака фертильность составил − 61,3 %, для признака жизнеспособность – 40,2 %, а признака количество пыльцевых зерен − 5,7 %. Однако, для последнего признака выявлен значительный эффект взаимодействия генотип-температура – 10,9 %. 65 Характер температурных различий раскрывают результаты множественного сравнения средних значений признаков, выполненные по принципу рангового теста (таблица 7, 8, 9). Полученные данные подтверждают, что наибольшее среднее значение фертильности пыльцевых зерен у зараженных растений томата ВТМ было в оптимальных условиях выращивания при +25 °С, и составило − 48,3 %, при этом самые низкие показатели фертильности выявлены при критической температуре +12 °С и они не превышали 1 %. При температуре выращивания +30 °С, среднее значение показателя составило − 31,8 %. Таблица 7 – Результаты множественного рангового теста различия среднего значения фертильности пыльцевых зерен растений томата, пораженных ВТМ в условиях разных температур, ГНУ ВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. Температура Среднее значение, % +12 °С 1,0 +30 °С 31,8 +25 °С 48,3 Ранговый тест * * * Примечание: Здесь и в других подобных таблицах расположение знака «*» на разных вертикалях указывает на достоверность различия средних значений признака Таблица 8 – Результаты множественного рангового теста различия среднего значения жизнеспособности пыльцевых зерен растений томата, пораженных ВТМ в условиях разных температур, ГНУ ВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. Температура Среднее значение, % +12 °С 0,8 +30 °С 2,4 +25 °С 3,6 Ранговый тест * * * 66 Из представленных данных следует, что наибольшее среднее значение жизнеспособности пыльцевых зерен растений томата наблюдалось при +25 °С и составило 3,6 % и достоверно отличалось от других средних значений 0,8 % и 2,4 % при +12 °С и +30 °С соответственно. Таблица 9 – Результаты множественного рангового теста различия среднего значения количества пыльцевых зерен растений томата, пораженных ВТМ в условиях разных температур, ГНУ ВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. Температура Среднее значение, Ранговый тест тыс. шт. +12 °С 5,1 +30 °С 5,5 +25 °С 5,7 * * * Согласно представленных данных наибольшее количество пыльцевых зерен у растений томата выявлено при температуре +25°С и составило 5,7 тыс. шт., это значение достоверно отличается от значений при +12 °С и +30 °С. Таким образом, подтверждают, что результаты оптимальной множественного температурой рангового для теста процесса микроспорогенеза является +25 °С, так как при этом отмечаются достоверно высокие качественные и количественные показатели пыльцы. Наименьшие средние значения изучаемых признаков наблюдались при температуре +12 °С. В дальнейших исследованиях эта температура не рассматривалась, так как была неблагоприятна для роста и развития растений томата и их репродуктивной системы. Для решения задачи выбора лучших генотипов, выращенных в условиях +25°C и +30°С, проведена их классификация методом кластерного анализа (рисунок 24). При кластеризации использовались не собственно сами 67 значения признаков, а их линейные комбинации, полученные в рамках метода главных компонентов. Причина заключается в значительных различиях значений признаков. Так, значения фертильности превосходили значения жизнеспособности и продуктивности на порядок величин. В этом случае требуется стандартизация значений признаков, которая и обеспечивается в главных компонентах [Тюрин, 2010]. Linkage слияния Distance усл. ед. Коэффициент 10 8 6 4 2 0 14 11 16 15 10 8 3 12 9 6 13 2 17 7 5 18 4 1 Рисунок 24 − Кластеризация генотипов, выращенных при температуре +25 °C: 1) Marglob; 2) Гаидас; 3) Мо 393 × L. esculentum var. racemigerum; 4) Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum; 5) Мо 628 × L. esculentum var. racemigerum; 6) Мо 628× L. hirsutum var. glabratum; 7) Мо 755 × L esculentum var. racemigerum; 8) Мо 755 × L. hirsutum var. glabratum; 9) Marglob × Мо 393; 68 10) Гаидас × Мо 393; 11) Marglob × Мо 628; 12) Гаидас × Мо 628; 13) Marglob × Мо 755; 14) Гаидас × Мо 755; 15) Marglob × L. hirsutum. var. glabratum; 16) Marglob × L. esculentum var. racemigerum; 17) Гаидас × L. hirsutum var. glabratum; 18) Гаидас × L. esculentum var. racemigerum. При разрезании кластерного дендрита по уровню сходства в 30 усл. ед. генотипы разделяются на три кластера. В первый из них входит 5 генотипов: Гаидас × Мо 755, Marglob × Мо 628, Marglob × L. esculentum var. racemigerum, Marglob × L. hirsutum. var. glabratum, Гаидас × Мо 393. Во второй – 7 генотипов: Мо 755 × L. hirsutum var. glabratum, Мо 393 × L. esculentum var. racemigerum, Гаидас × Мо 628, Marglob × Мо 393, Мо 628 × L. hirsutum var. glabratum, Marglob × Мо 755, Гаидас. В третий кластер вошло 6 генотипов: Гаидас × L. hirsutum var. glabratum, Мо 755 × L. esculentum var. racemigerum, Мо 628 × L. esculentum var. racemigerum, Гаидас × L. esculentum var. racemigerum, Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum, Marglob. Проверка кластерного решения была выполнена нами с помощью однофакторного дисперсионного анализа, где в качестве фактора выступала кластерная принадлежность генотипов (таблица 10). Таблица 10 – Результаты однофакторного дисперсионного анализа признаков с фактором кластер генотипов, выращенных при температуре +25 °C, ГНУВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. Доля в Изменчивость df mS F Fst d2 общей дисперсии, % 1 2 3 4 5 6 7 Фертильность пыльцевых зерен, % 69 Продолжение таблицы 11 6 7 1 2 3 4 5 между кластерами 2 396,08 22,4 3,68 63,03 77,9 остаточная 15 17,88 − − 17,88 22,1 Жизнеспособность пыльцевых зерен, % между кластерами остаточная 2 1,57 6,5 3,68 0,22 47,7 15 0,24 − − 0,24 52,3 Количество пыльцевых зерен тыс.шт. между кластерами остаточная 2 1,64 9,2 3,68 0,24 57,6 15 0,18 − − 0,18 42,4 Примечание: df – степень свободы; mS – средний квадрат; F – критерий Фишера; Fst – критерий Фишера (табличный); d2 – дисперсия. Согласно дисперсионного полученным анализа данным, полностью положительные подтверждают результаты различия между кластерами по всем признакам. Доля соответствующей дисперсии между кластерами варьирует от 47,7 % до 77,9 %. Доля в общей дисперсии остаточной изменчивости варьирует от 22,1 % до 52,3 %. Завершением дисперсионного анализа был ранговый тест, который позволил выявить лучший кластер между средними значениями каждого из изучаемых признаков (таблицы 11-13). 70 Таблица 11 – Ранговый тест средних значений фертильности пыльцевых зерен растений томата пораженных ВТМ, выращенных в условиях 25°C в разных кластерах Кластер 1 2 3 Среднее значение % 37,91 50,65 54,26 Ранговый тест *** *** *** Таблица 12 – Ранговый тест средних значений жизнеспособности пыльцевых зерен растений томата пораженных ВТМ, выращенных в условиях 25°C в разных кластерах Кластер 2 3 1 Среднее значение % 3,12 3,92 4,03 Ранговый тест *** *** *** Таблица 13 – Ранговый тест средних значений количества пыльцевых зерен растений томата пораженных ВТМ, выращенных в условиях 25°C в разных кластерах Кластер 2 1 3 Среднее значение % 5,05 5,33 6,04 Ранговый тест *** *** *** Генотипы, относящиеся к первому кластеру: Гаидас × Мо 755, Marglob × Мо 628, Marglob × L. esculentum var. racemigerum, Marglob × L. hirsutum. var. glabratum, Гаидас × Мо 393, характеризуются низкой фертильностью, но имеют высокие показатели жизнеспособности и количества пыльцевых зерен. Генотипы второго кластера: Мо 755 × L. hirsutum var. glabratum, Мо 393 × L. esculentum var. racemigerum, Гаидас × Мо 628, Marglob × Мо 393, Мо 628 × L. hirsutum var. glabratum, Marglob × Мо 755, Гаидас, имели низкие 71 показатели жизнеспособности и количества пыльцевых зерен, но характеризовалась высокими значениями фертильности пыльцевых зерен гибридов F1 растений томата. В число лучших входят генотипы кластера 3 − Marglob, Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum, Мо 628 × L. esculentum var. racemigerum, Мо 755 × L. esculentum var. racemigerum, Гаидас × L. hirsutum var. glabratum, Гаидас × L. esculentum var. racemigerum, характеризующихся высокими показателями фертильности, жизнеспособности и количества пыльцевых зерен. Аналогичным образом был выполнен поиск лучших генотипов, зараженных ВТМ, выращенных в условиях +30 °С. Результат кластеризации генотипов для данного варианта данных представлен на рисунке 25. При разрезании кластерного дендрита по уровню сходства в 6 усл. ед. также выделяется три кластера генотипов. В первый из них входит 6 генотипов: Marglob × Мо 755, Мо 628 × L. esculentum var. racemigerum, Гаидас × Мо 628, Мо 628 × L. hirsutum var. glabratum, Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum, Мо 393 × L. esculentum var. racemigerum. Во второй только 3 генотипа: Marglob × Мо 393, Гаидас, Гаидас × Мо 393. В третий кластер вошли остальные 9 генотипов: Marglob × L. esculentum var. racemigerum, Мо 755 × L.hirsutum var. glabratum, Гаидас × L. hirsutum var. glabratum, Мо 755 × L. esculentum var. racemigerum, Marglob × L .hirsutum. var. glabratum, Гаидас × Мо 755, Гаидас × L. esculentum var. racemigerum, Marglob × Мо 628, Marglob. 72 12 слияния Коэффициент Linkage Distanceусл. ед. 10 8 6 4 2 0 13 5 12 6 4 3 9 10 2 16 8 17 7 15 14 18 11 1 Рисунок 25 − Кластеризация генотипов, выращенных при температуре +30 ºС: 1) Marglob; 2) Гаидас; 3) Мо 393 × L. esculentum var. racemigerum; 4) Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum; 5) Мо 628 × L. esculentum var. racemigerum; 6) Мо 628× L. hirsutum var. glabratum; 7) Мо 755 × L esculentum var. racemigerum; 8) Мо 755 × L. hirsutum var. glabratum; 9) Marglob × Мо 393; 10) Гаидас × Мо 393; 11) Marglob × Мо 628; 12) Гаидас × Мо 628; 13) Marglob × Мо 755; 14) Гаидас × Мо 755; 15) Marglob × L. hirsutum. var. glabratum; 16) Marglob × L. esculentum var. racemigerum; 17) Гаидас × L. hirsutum var. glabratum; 18) Гаидас × L. esculentum var. racemigerum. В нашей работе установлены статистически значимые различия между кластерами по признакам фертильности, жизнеспособности, и количеству пыльцевых зерен. Результаты представлены в таблице 14. 73 Таблица 14 − Результаты однофакторного дисперсионного анализа признаков с фактором кластер генотипов, выращенных при температуре +30 °C Доля в Изменчивость df mS F Fst d общей 2 дисперсии, % Фертильность пыльцевых зерен, % между кластерами остаточная 2 84,21 7,30 3,68 12,11 51,2 15 11,54 − − 11,54 48,8 Жизнеспособность пыльцевых зерен, % между кластерами остаточная 2 0,07 10,44 3,68 0,01 61,2 15 0,01 − − 0,01 38,9 Количество пыльцевых зерен, тыс. шт. между кластерами остаточная Согласно 2 1,94 26,44 3,68 0,31 80,9 15 0,07 − − 0,07 19,1 полученным данным, результаты однофакторного дисперсионного анализа подтверждают различия между кластерами по всем признакам. Доля влияния генотипов на признак фертильности пыльцевых зерен в условиях +30 °C составила 51,2 %, на жизнеспособность 61,2 %, количество пыльцевых зерен 80,9 %. В заключение дисперсионного анализа был проведен ранговый тест, который позволил выявить различия между средними значениями каждого из изучаемых признаков (таблицы 15-17). 74 Таблица 15 – Ранговый тест средних значений фертильности пыльцевых зерен растений томата пораженных ВТМ, выращенных в условиях 30°C в разных кластерах Кластер 2 1 3 Среднее значение % 25,71 31,08 34,25 Ранговый тест *** *** *** Таблица 16 – Ранговый тест средних значений жизнеспособности пыльцевых зерен растений томата пораженных ВТМ, выращенных в условиях 30°C в разных кластерах Кластер 2 3 1 Среднее значение % 2,18 2,40 2,44 Ранговый тест *** *** *** Таблица 17 – Ранговый тест средних значений количества пыльцевых зерен растений томата пораженных ВТМ, выращенных в условиях 30°C в разных кластерах Кластер 2 3 1 Среднее значение % 5,24 5,39 6,33 Ранговый тест *** *** *** В результате анализа исследуемые образцы разделились на три кластера. В первый кластер вошли генотипы: Marglob × Мо 755, Мо 628 × L. esculentum var. racemigerum, Гаидас × Мо 628, Мо 628 × L. hirsutum var. glabratum, Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum, Мо 393 × L. esculentum var. 75 racemigerum с высокими показателями жизнеспособности и количества пыльцевых зерен 6,33 тыс. шт. Во второй кластер вошли генотипы: Гаидас, Marglob × Мо 393, Гаидас × Мо 393 характеризующиеся низкими показателями фертильности и жизнеспособности и количеством пыльцевых зерен, 25,71 % и 2,18 % соответственно. В третий кластер вошли генотипы: Marglob, Marglob × L. esculentum var. racemigerum, Мо 755 × L.hirsutum var. glabratum, Гаидас × L. hirsutum var. glabratum, Мо 755 × L. esculentum var. racemigerum, Marglob × L .hirsutum. var. glabratum, Гаидас × Мо 755, Гаидас × L. esculentum var. racemigerum, Marglob × Мо 628 характеризующиеся высокими показателями фертильности пыльцевых зерен − 34,25 %, жизнеспособности − 2,44 % пыльцевых зерен растений томата. Таким образом, можно сделать заключение, что в число лучших генотипов вошли представители первого и третьего кластеров. Именно они имели максимальные статистически достоверно отличающиеся значения по признакам фертильность и жизнеспособность пыльцевых зерен растений томата от генотипов второго кластера. По количеству пыльцевых зерен растений томата был выделен один культурный сорт томата Marglob и 8 гибридов F1: Мо 755 × L. esculentum var. racemigerum, Мо 755 × L. hirsutum var. glabratum, Marglob × Мо 628, Гаидас × Мо 755, Marglob × L. hirsutum. var. glabratum, Marglob × L. esculentum var. racemigerum, Гаидас × L. hirsutum var. glabratum, Гаидас × L. esculentum var. racemigerum, вошедшие в третий кластер. В результате анализа можно сделать заключение, что один культурный сорт и 2 генотипа: Гаидас, Marglob × Мо 393, Гаидас × Мо 393, вошедшие во второй кластер не являются перспективными для дальнейшей селекционной работы. Несовпадение результатов отбора генотипов при выращивании в разных температурных условиях, является следствием выявленного в 76 трехфакторном дисперсионном анализе достоверного эффекта взаимодействия генотипа и температуры. Это означает, что разные генотипы по-разному реагируют на воздействие температур +25 °C и +30 °С. 77 4 ВЛИЯНИЕ ВТМ НА ПЫЛЬЦЕВОЕ ЗЕРНО ГИБРИДОВ F1 РАСТЕНИЙ ТОМАТА 4.1 Влияние вируса табачной мозаики на пыльцевые зерна растения томата Процесс гаметогенеза заканчивается образованием одноядерных пыльцевых зерен [Козлова и др., 1957]. У пыльцевых зерен растений томата спородерма состоит из двух главных слоев — экзины и интины. Строение этих двух слоев, так же как и их толщина, является важным признаком, характеризующим пыльцевые зерна растений. Интина, в данном случае представляет собой внутренний слой оболочки пыльцевого зерна. Она облегает его содержимое и служит материалом, образующим в дальнейшем пыльцевую трубку. Химический состав интины неоднороден. Наружный слой образован преимущественно пектином. В состав внутреннего слоя – эктины, входят, главным образом, целлюлоза и пектин (рисунок 26.3). Эктина у пыльцевых зерен томата состоит из двух основных слоев — эктэкзины и эндэкзины. Эктэкзина представляет собой наиболее устойчивую часть экзины и отличается исключительным разнообразием строения [Тертяк, 1981; Schleif, 1993]. В густо окрашенных, созревших пыльцевых зернах было обнаружено вегетативное ядро (рисунок 26.1). При большом увеличении митохондрии яйцевидной формы (рисунок 26.2). Клеточная мембрана имела гладкую поверхность (рисунок 26.3). Эндоплазматический ретикулум расположен вблизи генеративного и вегетативного ядер (рисунок 26.4). Большое количество вакуолей различной формы, часто угловатой формы, особенно там, где они сосредоточенны около вегетативного и генеративного ядер (рисунок 26.6). Вегетативные ядра были сферической формы и обычно содержали одно и более ядрышек. Другие органеллы были скрыты в густой цитоплазме. 78 Рисунок 26 − Пыльцевое зерно в пыльнике растений томата при электронной микроскопии: 1 − вегетативное ядро; 2 − митохондрия; 3 − клеточная мембрана (интина); 4 − эндоплазматический ритикулум; 5 − поры; 6 − вакуоли. Для пыльцевого зерна гибрида F1 Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum пораженного ВТМ характеризовалось маленькими вакуолями, хотя они похожи на нормальные, но большинство из них были сжаты. Эндоплазматический ретикулум был разрежен. Митохондрии имели форму от сферической до яйцевидной, пузырьки в многочисленных местах, мембрана пыльцевого зерна деформирована (рисунок 27а). Пыльцевое зерно у незараженного растения томата было правильной формы, содержало небольшое ядрышко, вакуоли, которые были 79 расположены по периферии пыльцевого зерна (рисунок 27б). Рисунок 27 – Гибрид F1 Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum: а) пораженное пыльцевое зерно: 1 – мелкие вакуоли, митохондрии сферической и яйцевидной формы, 3 – разреженный ретикулум, 4 – деформированная мембрана пыльцевого зерна; б) нормальное пыльцевое зерно Пыльцевое зерно, пораженное ВТМ, гибрида F1 Гаидас × L. hirsutum var. glabratum имело ядро с неправильными очертаниями и ядрышко сферической формы. Рисунок 28 – Гибрид F1 Гаидас × L. hirsutum var. glabratum: а) пораженное пыльцевое зерно, стрелкой указано ядрышко неправильной формы, с нечеткими очертаниями; б) нормальное пыльцевое зерно, стрелкой указано 80 ядрышко с четкими контурами. Эндоплазматический ретикулум не просматривался (рисунок 28а). У незараженной формы ВТМ растений томата пыльцевое зерно содержало эндоплазматический ретикулум, который представляет собой систему плоских дисковидных замкнутых цистерн, располагающихся одна над другой в виде стопки. В цитоплазме содержатся хорошо развитые митохондрии. Ядро заключено в матрикс (рисунок 28б). В пораженном пыльцевом зерне гибрида F1 Marglob × L. esculentum var. racemigerum, большинство органелл были повреждены, имели неправильную форму. Стрелкой на рисунке 29а отмечены липоиды зерна неправильной формы. В не зараженном пыльцевом ядре гибрида F1 растения томата хорошо выражены генеративное и вегетативные ядра, хорошо развиты митохондрии, большое количество вакуолей (рисунок 29б). Рисунок 29 – Гибрид F1 Marglob × L. esculentum var. racemigerum: а) пораженное пыльцевое зерно, стрелками указаны липоиды зерна неправильной формы; б) нормальное пыльцевое зерно: 1 – генеративное ядро, 2 – вегетативное ядро. В пораженном пыльцевом зерне гибрида F1 Мо 755 × L. hirsutum var. glabratum мембрана была повреждена и пронизана многочисленными 81 порами, плазменная мембрана отходила от стенок пыльцевого зерна, наличие вакуолей, эндоплазматический ретикулум был разрежен, митохондрии от сферической до яйцевидной формы, пузырьки в многочисленных местах, (рисунок 30а). Рисунок 30 – Гибрид F1 Мо 755 × L. hirsutum var. glabratum : а) пораженное пыльцевое зерно: 1 – разряженный ретикулум, митохондрии от сферической до яйцевидной формы; б) нормальное пыльцевое зерно: 1- вегетативное ядро, 2 - генеративное ядро, 3 - хорошо развитые митохондрии. Пыльцевое зерно у незараженной ВТМ формы растений томата было правильной формы, содержащее генеративное и вегетативное ядра, вакуоли, которые были распределены по всей цитоплазме, хорошо развиты митохондрии (рисунок 30б). Таким образом, выполненный цитологический анализ пыльцевых зерен с помощью электронной микроскопия позволил показать разнокачественность пыльцы по основным органоидам, которая является причиной гетерогенности пыльцы у гибридных форм томата. Отклонениями в строении пыльцевых зерен, пораженных вирусом ВТМ у гибридных комбинаций растений томата являлись: деформация 82 клеточной мембраны, изменение структуры органелл (митохондрий, вакуоли, эндоплазматический ретикулум, а также ядрышек). Наличие повреждений структуры митохондрий, что было выявлено при пыльцевом анализе, дает объяснение снижения жизнеспособности пыльцевых зерен и соответственно обуславливает уменьшение репродуктивного потенциала, пораженных вирусом гибридных комбинаций растений томата. 4.2 Влияние абиотических и биотического факторов на количество ДНК в пыльцевом зерне растения томата В нашей работе количество ДНК определяли методом быстрого оптического измерения параметров клетки, ее органелл и происходящих в ней процессов. Методика определения количества ДНК в клетке заключается в выявлении рассеяния света лазерного луча, при прохождении через него в струе жидкости, причём, степень световой дисперсии позволяет получить представление о размерах и структуре клетки [Агроскин и др., 1976]. Кроме того, в ходе анализа учитывается уровень флуоресценции химических соединений, (аутофлуоресценция) или входящих внесённых в в состав образец клеточной перед стенки проведением цитометрии [Хачатуров 1980]. Методом цитофотометрии исследовалось генеративное ядро 2-х клеточной пыльцы гибридов F1 Гаидас × L. hirsutum var. glabratum и Marglob × L. esculentum var. racemigerum подвергнутых воздействию ВТМ. Полученные данные показывали увеличение содержания ДНК в генеративном ядре зрелой пыльцы у этих гибридов, что свидетельствует о нестабильности генома гибридных комбинаций растений томата. Объяснение этому процессу может быть связано с тем фактом, что при создании гибридной формы в ядре сочетаются хромосомы обоих родителей, 83 относящихся к разным генотипам, которые при прохождении процесса мейоза неравномерно расходятся к полюсам в стадии анафазы I. При прохождении мейоза у отдаленных гибридов возможны генетические изменения структуры хромосом, вызванные хромосомными [Pound, 1955; Yarwood, 1963]. Известно, что пыльце гибридов F1 растений томата свойственна гетерогенность, наличие стерильной и фертильной пыльцы, различие по размерам пыльцевых зерен. Рисунок 31 − Количество ДНК в ядре гибридов растений томатов: a) F1 Гаидас × L. hirsutum var. glabratum и б) Marglob × L. esculentum var. racemigerum. Ряд 1 − количество ДНК зараженного растения томата; Ряд 2 − количество ДНК здорового растения томата; кл – градация деления количества ДНК в приборной школе. Вместе с тем, ядра стерильной пыльцы гибридов содержат меньшее количество ДНК, чем ядра фертильной пыльцы. В то же время размер пыльцевых зерен коррелирует с уровнем плоидности. Возможно, сочетание этих особенностей и приводит к различию по содержанию ДНК. 84 Количественные данные свидетельствуют, о том, что в опыте c гибридом F1 Гаидас × L. hirsutum var. glabratum, зараженного ВТМ, содержится большее количество ДНК, чем в контроле (рисунок 31а, Ряд 2). В опыте с гибридом F1 Marglob × L. esculentum var. racemigerum, наоборот количество ДНК меньше, чем в контроле (рисунок 31б, Ряд 2). Если посмотреть распределение ДНК, то можно отметить, что во всех вариантах количество ДНК варьирует от 1С до 1,5 и 2С. Причем, количество ДНК зараженных растений гибридов F1 Гаидас × L. hirsutum var. glabratum уменьшается до 1С ДНК и возрастает до 1,5С ДНК. В то же время количество ДНК F1 Marglob × L. esculentum var. racemigerum увеличивается 1С и 1,5 ДНК и снижается 2С ДНК. Это можно объяснить более стабильным геномом гибрида F1 Гаидас × L. hirsutum var. glabratum по сравнению F1 Marglob × L. esculentum var. racemigerum. Существует несколько предположений о действии вируса ВТМ на клеточные структуры. По мнению ряда авторов C.E. Yarwood [1960], репликация ВТМ происходит только в цитоплазме. Однако, некоторые данные, полученные при цитологических и цитохимических исследованиях, позволяют предполагать, что первичным местом репликации РНК этого вируса является, вероятно, ядро. 85 ВЫВОДЫ 1. У межвидовых гибридов F1 растений томата проявление фенотипических признаков, таких как: тип куста, длина междоузлия, высота растений, тип соцветия, процент пораженности ВТМ, базовые характеристики цветка и плода проявляются в соответствии с генотипом отцовской формы, в качестве которого выступают дикорастущие виды томатов. 2. Полученные межвидовые Гибриды F1: Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum, Мо 628 × L. hirsutum var. glabratum, Мо 755 × L. hirsutum var. glabratum, Marglob × L. hirsutum var. glabratum, Гаидас × L. esculentum var. racemigerum характеризовались устойчивостью к вирусу табачной мозаики, процент поражения составлял от 40 до 45 %. 3. Достоверно показано при изучении влияния абиотических факторов на репродуктивную систему гибридных комбинаций растений томата, что наибольшее влияние на фертильность пыльцевых зерен у всех исследуемых генотипов оказали температура и совокупность факторов – температуры и удобрения. Доля дисперсии соответственно составила 61,3 % и 27,3 %. 4. Установлено, что вклад различий генотипов исследуемых комбинаций по признаку жизнеспособность пыльцевых зерен крайне мал и не превышал одного процента. Для этого показателя превалировала роль средовых факторов – температурного режим а и дозы удобрений. Так, вклад различия температур составил – 40,2 %, а удобрений − 19,5 %. Вклад различий совместного влияния температур и фонов минерального питания также был велик и составил 28,5 %. Влияние генотипа оказалось незначительным, как по отдельному признаку (0,9 %), так и по совместному (1,6 %; 0,3 %; 0,8 %). 5. Установлено статистически достоверное влияние генотипа на 86 количество пыльцевых зерен (11,6 %). На взаимодействие факторов температуры и минерального удобрения приходится 16,7 %, а генотипа и температуры – 10,9 % от общей изменчивости. 6. В результате статистической обработки материала выявлено, что оптимальной температурой для процесса микроспорогенеза у гибридных комбинаций является температура 25°С, так как при этом отмечаются достоверно высокие качественные (фертильность пыльцы 48,5 %, жизнеспособность 3,6 %). и количественные показатели пыльцы (количество пыльцевых зерен 5,7 тыс. шт). 7. Доказана с помощью метода электронной микроскопии разнокачественность и гетерогенность пыльцы у гибридных форм растений томата. 8. Выявлено, что к общим отклонениям в строении пыльцевых зерен, зараженных ВТМ у гибридных комбинаций растений томата относились: деформация клеточной мембраны, изменение структуры органелл (митохондрий, вакуоли, эндоплазматический ретикулум, а также ядрышки). 9. Показано, что распределение ДНК в ядре зараженных растений ВТМ варьирует, во всех вариантах количество от 1С до 1,5 и 2С. По показателю количества ДНК, выявлено, что ВТМ в ядре клеток гибридных комбинаций растений томата не обнаруживается, по всей видимости, он доходит до ядра клетки у растений томата, но внутрь не проникает. 87 РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ 1. Межвидовые гибриды F1: Мо 393 × L. hirsutum var. glabratum, Мо 628 × L. hirsutum var. glabratum, Мо 755 × L. hirsutum var. glabratum, Marglob× L. hirsutum var. glabratum, Гаидас × L. esculentum var. racemigerum могут быть рекомендованы для дальнейшей селекционной практики так как, они отличались устойчивостью к вирусу табачной мозаики. 2. Гибридные комбинации, содержащие геномы диких видов растений томатов: Мо 755 × L. esculentum var. racemigerum, Мо 755 × L. hirsutum var. glabratum, Marglob × Мо 628, Гаидас × Мо 755, Marglob × L. hirsutum. var. glabratum, Marglob × L. esculentum var. racemigerum, Гаидас × L. hirsutum var. glabratum, Гаидас × L. esculentum var. racemigerum могут быть использованы в дальнейшей селекционной работе как перспективные по показателям фертильности и количеству пыльцевых зерен в пыльнике при оптимальных и повышенных условиях выращивания (+25 °C и +30 °C), что актуально для климатических условий Краснодарского края. 88 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 1. Авдеев Ю.И. Селекция томатов. – Кишинев: Штиинца, 1982. – 281 с. 2. Авдеев Ю.И. Теоретические и прикладные исследования по овощным культурам. – Астрахань, 2004. – 489 с. 3. Авдеев Ю.И,. Авдеев А.Ю., Иванова Л.М. Создание наукоемких доноров растений на примере томата. − Современные наукоемкие технологии, 2008. − №.3. − С. 35-37. 4. Агроскин Л.С., Бродский В.Я., Папаян Г.В. Стандарт в цитофотометрии. − Цитология, 1976.− Т.18. − № 4. С. 513-523. 5. Албертс Б., Брей Д., Льюс Дж., Рэфф М., Робертс К., Уотсон Дж. − Молекулярная биология клетки. − Т. 1. М., 1994. − С. 231-240. 6. Анохина B.C., Тимошенко М.К., Саук И.Б., Таранухо Г.И. − Сельскохозяйственная биотехнология. − Материалы междунар. науч.практ. конф. − Горки, 2001. − С. 125-126. 7. Александров Н. Выращивание томатов. − Уральский садовод, 2009. −N 4. − С. 7. 8. Аллашов Б.Д. Изучение межгибридных скрещиваний по хозяйственно ценным признакам в селекции средневолокнистого хлопчатника. Состояние селекции и семеноводства хлопчатника и перспективы ее развития./ Тезисы докл. межд. науч. практ. конф. – Ташкент, УзНИИССХ. – 2006. – С. 49–50. 9. Алпатьев А.В. Помидоры. – М.: Колос, 1981. – 304 с. 10. Атабекова А.И., Устинова Е.И. Цитология растений. −М.: Агропромиздат, 1987. − 246 с. 11. Ахатов А.К. Мир томата глазами фитопатолога. – М.: Издательство «КМК», 2010. − 288 с. 89 12. Багдасарян А.З. Вирусные заболевания пасленовых (томат, табак, перец, баклажан) в Азербайджане и меры борьбы с ними: Автореф. дис. кандидата биол. наук. −Баку, 1969. − 32 с. 13. Багдасарян А.З. Вирусные заболевания тепличных томатов в Азербайджане, 1972. − Труды Азерб.НИИ защиты растений. − Т.2. − С.117-121. 14. Богданов Ю.Ф., Коломиец О.Л. Синаптонемный комплекс – индикатор динамики мейоза и изменчивости хромосом. – М.: Товарищество научных изданий КМК, 2007. – 358 с. 15. Богданов Ю.Ф. Эволюция мейоза одноклеточных и многоклеточных эукариот. Ароморфоз на клеточном уровне// Журнал общ. биологи, 2008. − T.29. − С.102-107. 16. Болотских А.С. Помидоры. – Харьков: Фолио, 2003. − 320 с. 17. Боуден Ф. Вирусы и вирусные болезни растений. −M., 1952. − 47 с. 18. Бочарникова Н.И. Особенности формирования генетической изменчивости в роде Lycopersicon Tourn. и ее значение для селекции. – Автореф. дис. доктора с.-х. наук. – Астрахань, 2007. – 46 с. 19. Бочарникова Н.И. Генетическая коллекция мутантных форм томата и ее использование в селекционно-генетических исследованиях./ ВНИИССОК. – М.: Издательство ВНИИССОК, 2011. – 120 с. 20. Брежнев Д.Д. Томаты. – М.: Государственное изд. с/х. литературы, 1955. – 352 с. 21. Брежнев Д.Д. Томаты. – Л.: Колос, 1964. – 320 с. 22. Брежнев Д.Д., Власов Ю.И. Проблема семеноводства томатов на безвирусной основе. Труды по прикл. ботанике, генетике и селекции. Л: Колос 1977. − Т.61. №1. С.75-80. 23. Брежнев Д.Д.. Методика селекции и семеноводства овощных культур. −Л: Колос, 1964. − 312 с. 90 24. Бухарова А.Р., Бухаров А.Ф. Межвидовая гибридизация овощных паслёновых культур. – Мичуринск: Изд-во МичГАУ, 2008. – 274 с. 25. Бухарова А.Р., Бухаров А.Ф. Общность и специфика интрогрессивных процессов в родовых комплексах томата, перца и баклажана. – Вестник Алтайского гос. аграр. ун-та, 2009. – №6. – С. 4-10. 26. Вавилов Н. И. Теоретические основы селекции. — Москва: Наука, 1987. − 512 с. 27. Валько О.В., Поликсенова В.Д., Анохина B.C., Тимошенко М.К. Овощеводство на рубеже третьего тысячелетия. − Материалы междунар. науч. конф., 2000. − С. 119-120. 28. Веселовский И.А. Селекция и семеноводство овощных и плодовых культур. – Л.: Колос, 1965. – 232 с. 29. Власов Ю.И. Профилактика вирусных болезней растений. − Л.: Колос, 1967. −.93 с. 30. Власов Ю.И. Новые данные о природе заболевания томатов внутренним некрозом плодов. − Овощные и бахчевые культуры, 1970 − Вып.1. − С. 249-252. 31. Власов Ю.И., Редько Т.А., Лытаева Г.К. Вирусные болезни овощных и бахчевых культур.− Л.: Колос, 1973.−.72 с. 32. Власов Ю.И. Закономерности развития вирусных эпифитотий. − M.: Колос, 1974. − 160 с. 33. Власов Ю.И., Теплоухова Т.Н., Ларина Э.И. Методические указания по диагностике вирусов, поражающих овощные культуры. −M., 1975. − 32с. 34. Воробьева Г.А., Приходько Н.И. Использование культуры зародышей in vitro для получения межвидовых гибридов томатов − Тр. по прикл. генет. и сел., 1980. − Т.67.− С. 64-69. 35. Воробьев А.А. Микробиология. − М.: Колосс, 1999. − 267с 91 36. Гавриленко В.Ф., Ладыгина М.Е., Хандобина Л.М.Большой практикум по физиологии растений. − М: Высшая школа, 1975. – 327 с. 37. Гавриш С.Ф. Томаты. М.: Колосс, 1987. − 167с. 38. Гавриш С.Ф. Томаты. – М.: Москва, НИИОЗГ, Издательство «Скрипторий », 2003. − 184 с. 39. Гавриш С.Ф. Томаты. – М.: Вече, 2005. – 160 с. 40. Гиббс А., Харрисон Б. Основы вирусологии. Пер. с англ. − М.: Мир, 1978. – 430 с. 41. Глазер А.А. Структура вирусов. – М.: Колос , 1970. – 76 c. 42. Голубовская И.Н. Генетический контроль поведения хромосом в мейозе. Цитология и генетика мейоза. М.: Наука, 1975. – С.312-338. 43. Голубовская И.Н. Генетическая регуляция гомологичной конъюгации и сегрегации хромосом. Генетика, биохимия и цитология мейоза. – М.: Нау-ка. – 1982. – С. 18-24. 44. Гольдин М.И. О возможности передачи ВТМ семенами томата. − Микробиология, 1939. − Т.8. №5. − С. 610-618. 45. Гольдин М.И. Мозаичная болезнь томатов в закрытом грунте и меры борьбы с нею. − Микробиология, 1940. − Т.7. №8. − С. 730-740. 46. Гольдин М.И. Классификация вируса стрика томата. − Микробиология, 1947. − Т.16. №4. − С. 321-323. 47. Горанько И.Б. Выращивание томатов в защищенном грунте Нечерноземной зоны России. – М.: Колос , 1985. – 116 c. 48. Горки С.С. Интенсивное плодоовощеводство. − Наука, 1990. − 75с. 49. Государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию – М.: Издательство ГНУ ЦНСХБ Россельхозакадемии, 2011. – 328 с. 50. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта: (с основами статистической обработки результатов исследований). – М.: Колос, 1979. – 416 с. 51. Дубинин Н.П. Генетика. − Кишинев: Штиинца, 1985. − 533 c. 92 52. Дьяченко H.H. Повышение устойчивости помидоров к вирусным заболеваниям: Автореф.дисс.кавд.биол.наук. − М., 1959. − 25с. 53. Ефремова В.В., Аистова Ю.Т. Генетика. – Краснодар: КубГАУ, 2001. – 241 с. 54. Журбицкий З.И. Теория и практика вегетационного метода. – М.: Наука, 1968. – 224 с. 55. Жученко А.А. Генетика томатов. – Кишинев: Штиинца, 1973. – 663 с. 56. Жученко А.А. Экологическая генетика культурных растений. – Кишинев: Штиинца, 1980. – 587 с. 57. Жученко А.А. Экологическая генетика культурных растений и проблемы агросферы (теория и практика) – М.: Изд-во «Агрорус», 2004. – Т. 1 и 2. – 1154 с. 58. Жученко А.А. Адаптивное растениеводство (эколого-генетические основы) теория и прктика. – М.: Изд-во «Агрорус», 2008. – Т. 1-3. – Т.2. – 1098 с. 59. Жученко А.А. мл. Учёт изменчивости рекомбинационных параметров в пределах соцветия томата (на примере квазисцепления). – Рекомбиногенез: его значение в эволюции и селекции. – Кишинёв: Штиинца, 1986. – С. 209-211. 60. Жученко А.А. мл. Влияние фактора загущения на репродуктивное развитие томата. – Селекция, агротехника и орошение овощных культур. – Кишинев: Штиинца, 1989. – С. 36-47. 61. Жученко А.А. мл. Архитектура репродуктивной системы томата. – Кишинев: Штиинца, 1990. – 201 с. 62. Жученко А.А., Андрющенко В.К., Балашова Н.Н., Король М.М., Грати В.Г., Сокова С.А., Анюховская Г.А. Комплексная оценка рода Lycopersicon Tourn. в условиях орошаемого земледелия Молдавии. – Кишинёв: Картя Молдовеняскэ, 1973. – 308 с. 93 63. Жученко А.А., Андрющенко В.К., Медведев В.В. К технике постановки вегетационных опытов с томатами. – Методика. – Физиол. и биохим. к. р.,1974. – Т. 6. Вып. 1. – С. 99-105. 64. Жученко А.А., Андрющенко В.К., Медведев В.В. Влияние минерального питания на частоту рекомбинаций у томата в F2. – Адаптация и рекомбиногенез у культурных растений. – Тез. докл. Всес. конф. – Кишинёв, 1979. – С. 19-20. 65. Жученко А.А., Бочарникова Н.И., Грати В.Г., Король А.Б. Ограничение рекомбинации при скрещиваниях в пределах рода Lycopersicon Tourn. – Экологическая генетика растений и животных. Кишинёв, 1984. – С. 105-108. 66. Жученко А.А, Король А.Б. Индуцированное увеличение изменчивости частоты кроссинговера в F2 у томатов. – Цитология и генетика, 1981. – Т. 15. № 3. – С. 23-28. 67. Жученко А.А., Король А.Б. Рекомбинация в эволюции и селекции. – М.: Наука, 1985. – 400 с. 68. Жученко А.А., Король М.М., Король А.Б., Сокова С.А. Влияние экологических условий на частоту генетических рекомбинаций у томатов. – Адаптация и рекомбиногенез у культурных растений: Тез. докл. Всес. конф. – Кишинев, 1979. – С. 14-15. 69. Жученко А.А. мл., Ущаповский И.В. Взаимосвязь гетерозиса и частоты кроссинговера у томата. – Изв. АН МССР. Сер. биол. и хим. наук, 1989. – № 1. – С. 39-42. 70. Жученко А.А. Адаптивная система селекции растений (экологогенетические основы). – М.: Изд-во РУДН и «Агрорус», 2001. – Т. 1 и 2. – 1492 с. 71. Загорулько Ю.В., Жуков О.С., Рязанова А.А., Монаенкова С.И. Генетические особенности формирования ряда хозяйственно ценных 94 признаков отдаленных гибридов. – Материалы VIII Международного семинара-совещания фитофизиологов. – Тамбов, 2001. – С. 99-101. 72. Иванова С.В., Долгодворова Л.И., Кирцова М.В., Зверкова С.В. Варакина С.А. Цитогенетическая характеристика мей-мутантов томата. – Известия ТСХА, Вып. 3. – М.: Изд-во МСХА, 1996. – С. 54−63 73. Игнатьева И.Н. Плодовые и овощные культуры. − Альбом. − М.: Агропром издат., 1990. − 182с. 74. Инге-Вечтомов С.Г. Введение в молекулярную генетику. − М.: Высш. шк., 1983. − С. 122-130. 75. Карпеченко Г.Д. Теоретические основы селекции растений. – М., 1935. – Т. 1.– С. 397-437 76. Кидин В.В., Дерюгин И.П., Кобзаренко В.И. Практикум по агрохимии. − М.: Колосс, 2008. − 599 с. 77. Кильчевский А.В., Хотылева Л.В. Генотип и среда в селекции растений. – Институт генетики и цитологии АН БССР, Белорусская сельскохозяйственная академия, Белорусское общество генетиков и селекционеров. – Минск: Наука и техника, 1989. – 191 с 78. Кильчевский А.В., Анохина В.А., Кильчевский М.К. Сельскохозяйственная биотехнология. − Материалы междунар. науч.практ. конф. − Горки, 2001. − С 179 79. Козлова В.И., Власов Ю.И. Методические указания по проведению мер борьбы с заболеваниями томатов мозаикой и стриком в условиях защищенного грунта. Л.: − 1957. − 12-32с. 80. Козлова В.М. Жизнеспособность пыльцы маркерных форм томата. – Научные труды по селекции и семеноводству (к 75-летию ВНИИССОК). – М., 1995. – Т. 1. – С. 261-263. 95 81. Козлова В.М., Балашова Н.Н. Селекция томата на холодостойкость по спорофиту и микрогаметофиту. – Докл. Рос. академии с/х наук, 2000. – №3. – С. 7-12. 82. Корнеева М.А., Балков И.Я. Пыльцеобразовательная способность исходных популяций и создание на их основе линий сахарной свеклы. Цитогенетические и цитоэмбриологические исследования в селекции сахарной свеклы. – Киев, 1988. – С. 148-156. 83. Король А.Б., Бочарникова Н.И. Рекомбинация и межвидовой перенос генов. – Interspecific hybridization in plant. – Sofia, 1988. 84. Кокорева В.А. Влияние физиологически активных веществ типа материнских растений на завязывание семян при межвидовых скрещиваниях лука Докл. ТСХА, 1980.− В.266. – С. 85-86. 85. Косова А.И., Кику В.Н. Цитоэмбриология томата. – Кишинев: Штиинца, 1986. – 230 с. 86. Круглова Н.Н. Критические фазы развития спорогенной клетки пыльника: к постановке проблемы. – Цитология, 2001. – Т. 43. №3. – С. 86-87. 87. Куземенский А.В. Селекционно-генетические исследования мутантных форм томата. – Харьков, 2004. – 392 с. 88. Куперман Ф.М., Современное состояние и очередные задачи морфофизиологии растений. Морфогенез растений. – М.: Изд. Московского ун-та, 1961. − С. 53-54 89. Куприянов П.Г. Диагностика систем семенного размножения в популяцияхцветковых растений. − Саратов: Изд-во Сарат. ун-та, 1989. – 160 с. 90. Лобанов Г.А. Влияние различного количества пыльцы на оплодотворение. – Агробиология, 1950. – №3. – С.78-86. 91. Лосева Е.Ф., Сухачева Т.В., Коломиец О.Л. Генетика, 1996. − Т.32. №4. 96 92. Лудилов В.А. Межвидовая гибридизация культурных и диких видов баклажан. − Овощеводство открытого и защищенного грунта 1973. − Науч. тр. НИИОХ. − Т.4. − С. 162-166. 93. Лудилов В.А. Семеноводство овощных и бахчевых культур. −М.: Глобус, 2000. − 256 с. 94. Лях В.А., Калинова М.Г., Сорока А.И. Микрогаметофитный отбор на устойчивость к пониженной температуре у рапса ярового. – Цитология и генетика, 1997. – №3. – С. 71-76. 95. Лях В.А., Шегда В.Н. Жирнокислотный состав пыльцы у линий подсолнечника с разным содержанием в семенах олеиновой кислоты. – Селекция и семеноводство, 1998. – №3. – С. 7-8. 96. Лях В.А., Сорока А.И., Мищенко Л.Ю., Калинова М.Г., Мирошниченко Е.Н. Методы отбора ценных генотипов на уровне пыльцы. – Методические рекомендации. – Запорожье: Ин-т масличных культур укр. академии наук, 2000. – 213 с. 97. Матвеев В.П., Рубцов М.И. Овощеводство. − М.: Колос, 1985. − С. 424 98. Меркулов В.Т. Высокорентабельная культура томата.− Картофель и овощи, 1987. − №5. − С. 25-32. 99. Методика Госкомиссии по сортоиспытанию сельскохозяйственных культур при Минсельхозе СССР. М.: Колос, 1977. −79 с. 100. . Мир культурных растений. Справочник М.: Мысль, 1994. − 381 с 101. Мюнтцинг А. Генетические исследования. – М.: Издательство иностранной литературы, 1963. – 488 с. 102. Нокс Р.Б. Биология пыльцы.– М.: Агропромиздат. Пер. с англ., 1985. – 83 с. 103. Олдендерфер М.С., Блэшфилд С.К. Кластерный анализ. − Факторный, дискриминантный и кластерный анализ. – М., 1989. – С.139-210. 97 104. Папихин Р.В., Яндовка Л.Ф. Особенности процесса микроспорогенеза отдаленных гибридов семечковых и косточковых плодовых растений. – Вестник Тамбовского ун-та, 2009. – Т.14. №3. – С. 559-661. 105. Паушева З.П. Практикум по цитологии растений. 4-е изд., перераб. и доп. – Москва: Агропромиздат, 1988. – 271 с. 106. Петров А. Приусадебное хозяйство . − М., март 2011. − № 3. С 67−69. 107. Пехов А.П. Биология и общая генетика. − М.: РУДН, 1993. − 439 c. 108. Пивоваров С.В., Балашова Н.Н. Генетические основы селекции сельскохозяйственных растений. – М., 1995. – С. 19-34. 109. Пивоваров В.Ф., Скворцова Р.В., Кондратьева И.Ю. Частная селекция пасленовых культур (томат и физалис).– М., 2002. − 187с. 110. Поглазов Б. Ф., Сборка биологических структур. − М.: Наука, 1970. − 158с. 111. Полевой В.В. Физиология растений. – М.: Высшая школа, 1989. – 464 с. 112. Положение дел в области продовольствия и сельского хозяйства. ФАО, 2012. − http://www.fao.org/docrep/017/i3028r/i3028r.pdf. −166 p. 113. Полумордвинова И.В. Органогенез томатов. – Бюллетень ВИР, 1976. – Вып.64. – С. 23-28. 114. Прохоров И.А., Крючков А.В., Комиссаров В.А. Селекция и семеноводство овощных культур. – М.: Колос, 1997. – 480 с. 115. Пухальский В.А. Введение в генетику. – М.: Колос, 2007. – 224 с. 116. Пухальский В.А., Соловьев А.А., Бадаева Е.Д., Юрцев В.Н. Практикум по цитологии и цитогенетике растений. – М.: Колос, 2007. – 198 с. 117. Руденко И.С. Отдаленная гибридизация и полиплоидия у плодовых растений. – Кишинев: Штиинца, 1978. – 195 с. 118. Рыжков В.Л., Корачевский И.К. Вирусные болезни помидора в опытах по искусственному заражению. Вирусные болезни растений в Крыму и на Украине. − Симферополь, 1934. − С.7−30. 98 119. Серебряков И.Г. Морфология вегетативных органов высших растений. – М.: Советская наука, 1960. – 390 с. 120. Симоненко В.К. Развитие пыльника и микроспор в фертильных и ЦМС-линиях подсолнечника. – Цитология и генетика, 1982. – Т.16. №5. – С. 34-41. 121. Сладков А.Н. Введение в спорово-пыльцевой анализ. – М.: Наука, 1967. – 270 с. 122. Сухов К.С., Извекова Л.И., Вострова Н.Г., Подъяпольская Т.С., Андреева Э.Н. − Природа защитных реакций на вирусную инфекцию. − Защита растений, 1983. №.5. − С. 20-21. 123. Тараканов, Г.И. Биологические особенности овощных растений и некоторые проблемы селекции. − Методы комплексной оценки продуктивности и устойчивости сельскохозяйственных растений. − Москва, 1994.- 48с . 124. Тахтаджян А. Л. Система магнолиофитов. − Л.: Наука, 1987. – 439 с. 125. Твердюков А.П. Биологические методы борьбы с вредителями и болезнями в защищенном грунте. − Справочник. − М.: Колос, 1993. – С. 123-124. 126. Тертяк Д.Д. Изучение вирусных болезней томатов в Молдавии. Фитопатогенные микроорганизмы культурных растений Молдавии. − Кишинев, 1981. − С. 63-69. 127. Туйлор А. Общая биология. . − М: Колосс, 2007. − Т.1. − 152с. 128. Тюрин. В.В. Анализ изменчивости комплексов количественных признаков как методология эколого-генетического изучения селекционируемых и естественных популяций рыб. − Кубанский государственный университет, 2010. − 28с 129. Фотев Ю.В., Игнатова С.И. Использование дикорастущих видов при селекции гибридов томата для зачищенного грунта, устойчивых к экологическим стрессам. Использование гетерозиса у овощных и 99 бахчевых культур. – Сборник научных трудов по прикладной ботанике, генетике и селекции. – Л.: ВИР, 1992. – С. 122-127. 130. Хасанова О.С., Вагин Д.А., Хасанов Ф.К. Рекомбинационная репарация в Schizosaccharomyces pombe роль медиаторных белков. − Молекулярная биология, 2012. – №46 – С. 725-729. 131. Хачатуров Ε.Н. Элиминация значительной части ДНК при смене ядерных форм в жизненном цикле развития организмов. Энциклопедия русской мысли. − Москва: «Общественная польза», 1995. – С. 67-80. 132. Цаценко Л.В. Использование пыльцевого теста в цитогенетическом мониторинге агроценоза. – Кариология, кариосистематика и молекулярная филогения растений: тезисы докладов и стендовых сообщений V Международного совещания и Школы молодых ученых по кариологии, кариосистематике и молекулярной систематике растений. – СПб, 2005. – С. 100-103. 133. Цаценко Л.В., Бойко Ю.С. Цитология/ Учебное пособие. – Ростов-наДону, 2009. – 185 с. 134. Цаценко Л.В., Синельникова А.С., Нековаль С.Н. Пыльцевой анализ сельскохозяйственных растений: метод. пособие. – Краснодар: КубГАУ, 2012. – 56 с. 135. Цицин Н. В. Отдалённая гибридизация растений. − М: Колосс, 1954. − 432 с. 136. Цэрану Л.А., Ганя А.И. Коллекция рода Lycopersicon (Tourn.) Mill. и возможности её использования в селекции культурного томата. – Овощеводство и бахчеводство, 2005. – Вып. 51. – С. 53-60. 137. Чебышев Н.Б. Биология. − М: Колосс, 2007. − 152 с. 138. Шафранский В. Г. Питательные грунты для рассады. Уральский садовод. − 2009. −№ 6. − С. 6. 139. Шафранский В. Г. Способы выращивания помидоров. На дачном участке. − 2009. − № 11. − С. 5. 100 140. Шмаль В.В. государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию. − ООО «Хлебпродинформ», 2013. − 392 с. 141. Шумный В.К., Токарев Б.И., Трофимова О.С. К вопросу о механизмах межаллельных взаимодействий. – Генетика, 1972. – Т. 8, № 5. – С. 1520. 142. Щелкунов С., Саляев Р. Вакцины завтрашнего дня. – Наука из первых рук. – Новосибирск. Сибирское отд. РАН: Инфолио, декабрь 2004. – С. 56-61. 143. Эйхфельд И.Г. Руководство по апробации сельскохозяйственных культур. − Овощные культуры и кормовые корнеплоды, 1948. − Том 5. −С. 243. 144. Ягодин Б.А., Жуков Ю.П., Волобуева В.Ф., Янушевская О.Л. Вегетационный методисследования. − М.: МСХА, 2007. − 72 с. 145. Яндовка Л.Ф., Никифорова Н.Н., Туровцева Н.М. Фертильность и жизнеспособность пыльцы cerasus vulgaris и c. tomentosa в связи с уфоблучением. − Успехи современного естествознания, 2006. – № 11 – С. 55-56. 146. Ячевская Г.Л., Иванова С.В., Наумов А.А. Особенности мейоза при отдаленной гибридизации. – М., 1990. – 69 с. 147. Albrecht E., Escobar M. Genetic diversity and population structure in the tomato-like nightshades Solanum lycopersicoides and S. sitiens. − Annals of Botany, 2010– V. 105. №4. P. 535-554. 148. Anderson L.K., Hooker K.D. The distribution of early recombination nodules on zygotene bivalents from plants. − Stack SM Genetics, 2001. − V 159. – P. 1259–1269. 149. Azhar F.M., Naveed M., Asif A. Correlation analysis of seed cotton yield with fiber characteristics in G.hirsutum L. International Journal of Agriculture and Biology, 2004. – Vol. 6. −№. 4. – P. 656–657. 101 150. Batygina T.B., Vasilyeva V.E. Periodization of development of reproductive structures. Critical periods. – Acta Biologica Cracoviensia Series Botanica, 2003. – V.45. №1. – P. 27-36. 151. Bancroft J. B., Pound G. S. Effect of air temperature on the multiplication of tobacco mosaic virus in tobacco. − Phytopathology, 1954. − P. 480 – 482. 152. Bawend F.C., Kassanis B., Some effects of host nutrition on the susceptibility of plants to infection by certain viruses. − Ann. Appl. Biol., 1950. − P. 45-56. 153. Bione N., Pagliarini M., Ferraz deToledo J. Meiotic behavior of several Brazilian soybean varietic. – Genetics and Molecular Biology, 2000. – V.23. №3. – P. 623-631. 154. Bhullar N.K., Zhang Z., Wicker T., Keller B. Wheat gene bank accessions as a source of new alleles of the powdery mildew resistance gene a large scale allele mining project. − BMC Plant Biol, 2010. – V.10. − P. 88. 155. Bohmert K., Camus I., Bellini C., Bouchez D., Caboche M., Benning, C. AGO1 defines a novel locus of Arabidopsis controlling leaf development. EMBO, 1998. − №. 17.− P. 170-180. 156. Boldrini K.P., Adamowski E.V., Silva N., Pagliarini M.S., Valle C.B. Meiotiv behavior in nonaploid accessions of Brachiaria humidicola (Poaceae) and implications for breeding. – Genetic and molecular research, 2011. – V.10. №1. – P. 169-176. 157. Brown S. W. The structure and meiotic behaviour of the differentiated chromosomes of tomato. Genetics, 1949. − V.34. −P. 437−461. 158. Brown C. R., Yang C. -P., Mqjtahedi H., Santo G. S., Masuelli R. RFLP analysis of resistance to Columbia root-knot nematode derived from Solarium bulbocastanum in a BC2 population. − TAG. 1996. − V.92. − P. 572−576. 102 159. Caetano-Pereira C.M., Pagliarini M.S. A new meiotic abnormality in Zea mays: multiple spindle associated with abnormal cytokinesis in both divisions. – Genome, 2001. – V.44. – P. 865-871. 160. Chen Q., Atkinson A., Otsuga D., Christensen T. The arabidopsis filamentous flower gene is required for flower formation. − Development, 1999. − №. 126. − P. 2715-2726. 161. Davies P.J. Current theories on the mode of action of auxin. — Bot. Rev., 1973. − V.39. − №2. − P. 139-172. 162. Domenichini S., Raynaud C., Ni D.A., Henry Y., Bergounioux C. Atmnd1delta1 is sensitive to gamma-irradiation and defective in meiotic DNA repair. – DNA Repair (Amst), 2000. – V.5. − №.4. – P. 455-464. 163. Dubey R. S. Pollen abortion in chemically induced male sterile ciriander. − J. Indian Bo't. Sci., 1970. − V.48. − №. 1. − P. 18—24. 164. Echlin P. The role of the tapetum duri microsporogenesis of angiosperms. Pollen Development and Physiology. − London, 1971. − P. 41-46. 165. Edwardson J. R. Cytoplasmic male sterility. — Bot. Rev., 1970. − V.36. −№.4. − P. 41-42. 166. Eshed Y., Baum S.F., Perea J.V., Bowman J.L. Establishment of polarity in lateral organs of plants. − Curr. Biol., 2001 − №.11. − P. 1251-1260. 167. Falistocco E., Tosti N., Falcinelli M. Cytomixis in pollen mother cells of diploid Dactylis, one of the origins of 2n gametes. – Journal Heredity, 1995. – V.86. – P. 448-453. 168. Feijo J., Pais S. Cytomix is in meiosis during the microsporogenesis of Ophris lutea: an ultrastructural study. – Caryologya, 1989. – V.42. – P. 3748. 169. Freeling M. A conceptual framework for maize leaf development. Dev. Biol, 1992 −№.153. − P 47-59. 103 170. Frova C., Portaluppi P., Villa M., Sari-Gorla M. Sporophytic and gametophytic components of thermotolerance affected by pollen selection. – Journal Heredity, 1995. – V. 86. – P. 50-54. 171. Griffing B. Iowa Agr. Exp. Sta. res. Bull., 1953. – 397 p. 172. Griffing B., Langridge J. Factors affecting crossing over in the tomato. – Australian Journal Biological Sciences, 1963. – V.16. – P. 826-837. 173. Grun P., Aubertin M. Cvtological expressions of a cvtoplasmic male sterility in solanum. −. Bot., 1966. − . V.53. − №.3. − P. 295-301. 174. Hall T.J. Resistance at the Tm-2 locus in the tomato to tomato mosaic virus. − Euphytica, 1980. − №29. − P. 184-198. 175. Harlan J.B. Plant breeding Ed. R.J. Frey. Iowa State Univ. − Press, 1966. – P 53-75. 176. Hanawalt P. C. Molecular Mechanisms for Repair of DNA. − Plenum Press. New York, 1975. − P. 247. 177. Howlett F.S. The effect of carbohydrate and of nitrogen deficiency upon microsporogenesis and the development of the male gametophyte in the tomato Lycopersicum esculentum Mill. – Ann. Bot., 1936. – V.50. – P. 767803. 178. Hsu S.-Y., Huang Y.-Ch., Peterson P.A. Development pattern of microspores in Zea mays L. – Maydica, 2003. – V.33. №2. – P. 77-98. 179. Izmaiɫow R. Reproduction of Vicia cracca L. in the polluted environment of the Legnica-Glogow Cooper Basin (Poland). – Acta Biologica Cracoviensia Series Botanica, 2000. – V.42. №2. – P. 125-133. 180. Izmaiɫow R. The effects of soil from polluted sites on reproductive success in Ranunculus repens (Ranunculus). – Series Polish botanical studies, 2002. – V.15. – P. 5-10. 181. James J., Bass L.M., Clark D.C. Journal of the American Society for Horticultural Science, 1967. – V.91. – P. 521-528. 104 182. Jourdren C., Simonneaux D., Renard M. Selection on pollen for linolenic acid content in rapeseed, Brassica napus L. – Plant breeding, 1996. – V.115. – P. 11-15. 183. Justice O.L., Bass L.M. Principles and practices of seed storage. – Washington, 1978. – 289 р. 184. Kadyk L. C., Hartwell L. H. Sister chromatids are preferred over homologs as substrates for recombinational repair in Saccharomyces cerevisiae. − Genetics, 1992. − P. 387—404. 185. Kalloo G. Genetic Improvement of Tomato. − Berlin, 1991. −358 p. 186. Keeney S., Giroux C.N., Kleckner N. Meiosis-specific DNA double-strand breaks are catalyzed by Spo11, a member of a widely conserved protein family. − Cell, 1997 – №88. – P. 375–384. 187. Kessler S., Kim M., Pham T., Weber N. Mutations altering leaf morphology in tomato. Int. J. − Plant Sci., 2001. −V.162.− P. 475-492. 188. Kuzin B., Tillib S., Sedkov I., Mizrokhi L., Mazo A. − Genes and Develop, 1994. − V.8. − P. 478–490. 189. Li J.T., Yang. J., Chen D.C., Zhangand X.L., Tang Z.S. An optimized minipreparation method to obtain high-quality genomic DNA from mature leaves of sunflower. − Genetics and Molecular Research, 2007. − V.6. − P. 10641071. 190. Ma H. Molecular genetics analyses of microsporogenesis and microgametogenesis in flowering plants. Annu Rev Plant Biol, 2005. − P 393–434. 191. Macias W., Michalik L., Bakowski J. Obserwacje nad wplywem wirusa mozaiki tytoniu na plonowanie pomidorow. Zeszyty problem. − Postepow. Nauk roln. − Warszawa, 1976. −V.174. − P. 145-156. 192. Macias W. Transmission of TMV with tomato seeds. In Probleme der pflangenvirologic. − Tagungsberichte der ADL DDR, 1980. − V.184. − P. 235-255. 105 193. Mercer D. et al. Transmission of tobacco mosaic virus by Epitrix hirtipennic (Melsheimer) Tobacco, 1982. − V.184. − N. 23. − P.60-63. 194. Migliori A., Marrou J. Le virus de la mosaique du tabac dans le sol: influence sur la dissemination de ce virus dans les cultures de tomates. − Ann. Phytopath, 1970. − V.2. − N. 4. − P.669-680. 195. Niemyski K. Inaktywowanic wirusa mozaiki tytonuc w nasionach pomidorow. Acta agrobot, 1963. V.14. − P.233-244. 196. Okamoto G. Properties of Pollen Tube Growth Inhibitors Extracted from Grape. − Hort, 1989. − P. 520-528. 197. Okamoto G.I. Shibuya K. Gametophytic and sporophytic selection. − Principles and prospects. − London, 1993.− P. 332-351. 198. Pacinie P., Franchi G.G. The tapetum: its form, function, and possible phylogeny in Embryophyta. Plant Syst. − Evol, 1985. − V.149. − P.155-185. 199. Paigen K., Petkov P. Mammlian recombination hot spotspropeties control and evolution. Nature Rev. Genetics, 2010. − V.11. − P. 221 233. 200. Palmerr G., Johnsc W., Muir P.S.. Genetics and cytology of the soybean. J. Hered. − 1980. − V.71. − P.341-347. 201. Pelham J. Resistance in tomato to tobacco mosaic virus. − Euphytica, 1966. − V.15. − N 2. − P. 258-267. 202. Pedersen S., Simonsen V., Loeschche V. Overlap of gametophytic and sporophytic gene expression in barley. − Theor. Appl. Genetic, 1987. − V.75. − P. 200-206. 203. Pelham J. Resistance in tomato to tobacco mosaic virus. − Euphytica, 1966. − 347 204. Polowick P.L., Sawhney V.K. Ultrastructural changes in the cell wall, nucleus and cytoplasm of pollen mother cells during meiotic prophase in Lycopersicorl esculenturn Mill. − Protoplasma, 1992. − P. 136- 146. 205. Pound G. S., Helms K. Effects of temperature on multiplication of potato virus X in Nicotiana species. − Phytopathology, 1955. − P. 494 – 498. 106 206. Rastogri P., Sawhneyv K. Flower culture of a male sterile stamenless-2 mutant of tomato (Lycopersicon esculentum). − Bot.,1988. − V.75. − P. 513518. 207. Rick C.M. Tomato Genet. Coop. Rept., 1959. – №9. – P. 41-42. 208. Rick C.M. Further studies on segregation and recombination in backcross derivatives of a tomato species hybrid. – Biol. Zbl., 1972. – V.91. №.2. – P. 209-220. 209. Samuel G. Some experiments on inoculating methods with plant viruses and on local lesions. − Ann. Appl. Biol., 1933. − №18. − P. 494 – 506. 210. Sanchez-Moran E., Mercier R., Higgins J.D., Armstrong S.J., Jones G.H., Franklin F.C. A strategy to investigate the plant meiotic proteome. − Cytogenet Genome Res, 2005. − V.10. №3. – P. 181-189. 211. Santucci-Darmanin S., Baudat F. Meotic recombination in mammals. Genesis. − Ltd, 2010. − P. 141-177. 212. Schleif R. Genetics and Molecular Biology. The Johns Hopkins Univesity Press, 1993. − 698 p 213. Schwacha A., Kleckner N. Interhomolog bias during meiotic recombination: meiotic functions promote a highly differentiated interhomolog-only pathway. − Cell, 1997. − №90. − P. 1123—1135. 214. Smith H.L. Effect of temperature of pollen germination and tube growth in the tomato. − Cornel Unit.. − Agr. Exp. Sta Memoir, 1935. − V.175.−P. 111. 215. Smith I.M. European Handbook of Plant Diseases. Blackwell Scientific Publications.− 1989. −583 p. 216. Stevens M.A., Rick C.M. Genetics and breeding. In The Tomato Crop. − London Chapman and Hall Ltd., 1986. −. P. 35–109. 217. Tanaka K., Watanabe Y. Sister Chromatid cohesion and centromere organization in meiosis. Recombination and Meiosis. − Lankenau. Berlin, 2008. − P. 57-79. 107 218. Tanksley S.D., Ganal M.W., Prince J.P. High-density molecular linkage maps of the tomato and potato genomes. − Genetics, 1992. − №132. P. 1141-1160 219. Taylor R.H., Grogan R.G. and Kimble K.A. Transmission of tobacco mosaic virus in tomato seed. − Phytopathol, 1961. − V.51. − №.12. − P. 837-842. 220. Van Winckel A. Natuurlijke inactivering van het tabakmo-zaickvirus (TMV) op tomatenzaad. − Parasitica, 1968. − V.24. − №.1. − P. 4-9. 221. Valleau W.D., Johnson E.M. Some possible causes of streak in tomates. − Phytopathol, 1930. − №20. −P. 821-839. 222. Warren R.L., Sutton G.G., Jones S.J., Holt R.A. Assembling millions of short DNA sequences using SSAKE. − Bioinformatics, 2007. −V.23. − №4. – P. 500-50. 223. Wetzler Chr., Schuster G. Virus-induced virus inhibitors from systemically virus-infected plants. −Biol. PIantarum (Praha), 1983. − V.25. − №.2. −P. 147-150. 224. Yarwood C.E. Topical susceptibility of plants to viruses. − Virology, 1960. − V.12. − P. 45. 225. Yorganci U., Erkan S. Vergleich ende Untersuchungen über die Anwendungsmoglichkeiten von Milch und Captenpflanzen gegen Tomatonmosaik. − Phytopathol, 1983 − V.12. − №. 1. − P. 27-31. 108 ПРИИЛОЖЕНИЯ 109 детерминантный 3 – 4 настоящих листа c; m c; m e; ful; e; ful; 2 2 hl; a; hl; a; детерминантный Tm-1 Гаидас × L. esc. var. racemigerum wv; aa; d Гаидас × L.hirsutum var. glabratum wv; aa; d Marglob × L. esc. var. racemigerum Гаидас × Мо 755 Гаидас × Мо 628 Marglob × Мо 628 Гаидас × Мо 393 Marglob × Мо 393 Мо 628 × L.hirsutum var. glabratum wv; aa; d Мо 628 × L.esc.var. racemigerum e; ful; e; ful; wv; hl; a; hl; a; aa; d индетерминантный Marglob × Мо 755 - c; m 2 Мо 755 × L.hirsutum var. glabratum тип куста длина междоузлия (см) высота растения (см) % пораженной листовой пластинки число цветков на 1-ом соцветии - c; m 2 Мо 755 ×L. esc. var. racemigerum фаза гены Мо 393 × L.hirs. var. glabrftum Признаки Мо 393 × L.esc. var. racemigerum Гаидас к. Marglob к. Генотип Marglob × L.hirsutum var. glabratum Таблица 1 – Морфологические признаки F1 гибридов растений томата зараженных ВТМ, выращенных при 25°C, N30P20K30, ГНУ ВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. Tm-1 индетерминантный 5,56 5,49 5,54 4,45 5,01 4,87 5,09 4,56 4,56 4,90 4,08 4,0 4,05 3,18 4,19 3,78 3,89 4,46 15,45 14,96 20,34 23,18 12,34 11,23 10,98 12,09 12,98 14,98 13,67 12,45 10,56 10,34 17,34 16,34 17,89 18,98 51 50 46 40 45 40 45 45 50 48 48 48 50 48 40 45 40 45 6 8 10 8 6 6 6 6 6 6 6 7 6 4 4 6 8 6 число цветков на 2-ом соцветии 6 6 6 6 6 8 8 6 6 6 4 7 8 2 4 2 4 4 число цветков на 3-ем соцветии 4 6 4 6 6 8 8 8 6 6 6 6 7 4 4 6 6 2 0 0 1 2 1 1 0 1 1 1 0 0 0 0 1 1 0 1 1 1 0 1 0 0 0 1 1 0 0 1 0 1 1 1 2 0 1 1 1 0 0 2 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 12,51 10,11 10,11 15,23 5,52 13,61 4,45 15,23 16,74 5,55 6,32 10,11 9,33 10,34 25,21 18,66 16,72 16,71 число плодов на 1-ой кисти число плодов на 2-ой кисти число плодов на 3-ей кисти реализованная продуктивность, % 110 Гаидас × L. esc. var. racemigerum Гаидас × L.hirsutum var. glabratum Marglob × L. esc. var. racemigerum Marglob × L.hirsutum var. glabratum wv; aa; d Гаидас × Мо 755 Marglob × Мо 755 Marglob × Мо 628 Гаидас × Мо 393 Marglob × Мо 393 Мо 755 × L.hirsutum var. glabratum Мо 755 × L. esc. var. racemigerum e; ful; hl; a; 3 – 4 настоящих листа - тип куста длина междоузлия (см) высота растения (см) % пораженной листовой пластинки число цветков на 1-ом соцветии Гаидас × Мо 628 фаза гены Мо 628 × L.hirsutum var. glabratum Признаки Мо 628 × L.esc. var. racemigerum Мо 393 × L.esc. var. racemigerum Гаидас к. Marglob к. Генотип Мо 393 × L.hirs. var. glabrftum Таблица 2 – Морфологические признаки F1 гибридов растений томата зараженных ВТМ, выращенных при 25°C, N60P40K60,ГНУ ВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. - c; m -2 c; m 2 e; ful; hl; a; детерминантный e; ful; hl; a; wv; aa; d wv; aa; d c; m -2 c; m 2 индетерминантный e; ful; hl; a; wv; aa; d детерминантный Tm-1 Tm-1 индетерминантный 3,54 3,09 2,24 2,12 2,01 2,06 3,15 2,23 3,32 3,94 2,12 2,09 2,26 2,67 2,07 2,21 2,45 2,46 12,25 11,96 15,45 18,30 10,92 10,09 9,67 10,45 11,38 11,58 11,64 10,56 11,08 11 ,23 10,31 13,44 14,67 16,48 50 50 48 48 45 40 45 45 50 48 48 48 50 38 40 45 40 45 7 8 10 10 10 10 8 12 8 8 8 8 12 8 8 14 14 12 число цветков на 2-ом соцветии 8 9 8 8 6 8 8 6 6 7 7 7 8 6 6 12 14 14 число цветков на 3-ем соцветии 7 7 8 8 6 8 8 8 6 6 6 6 7 6 6 10 8 8 2 2 4 4 1 2 0 1 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 2 0 1 0 1 0 3 2 0 2 3 0 2 3 2 0 2 1 2 3 0 2 0 2 0 0 2 0 2 2 2 0 1 0 2 1 27,31 20,81 19,21 21,41 9,11 15,14 12,15 11,15 10,11 9,15 19,31 7,17 14,81 20,12 20,11 2,81 11,11 8,81 число плодов на 1-ой кисти число плодов на 2-ой кисти число плодов на 3-ей кисти реализованная продуктивность, % 111 Гаидас × Мо 628 Marglob × Мо 755 Гаидас × Мо 755 Marglob × L.hirsutum var. glabratum Marglob × L. esc. var. racemigerum Гаидас × L.hirsutum var. glabratum Гаидас × L. esc. var. racemigerum Гаидас × Мо 393 Marglob × Мо 393 Мо 755 × L.hirsutum var. glabratum Мо 755 × L. esc. var. racemigerum Мо 628 × L.hirsutum var. glabratum e; ful; hl; a; e; ful; hl; a; wv; aa; d wv; aa; d Tm-1 - Tm-1 - 3 – 4 настоящих листа - тип куста длина междоузлия (см) высота растения (см) % пораженной листовой пластинки число цветков на 1-ом соцветии число цветков на 2-ом соцветии число цветков на 3-ем соцветии число плодов на 1-ой кисти число плодов на 2-ой кисти число плодов на 3-ей кисти реализованная продуктивность, % Marglob × Мо 628 фаза гены Мо 628 × L.esc. var. racemigerum Признаки Мо 393 × L.hirs. var. glabrftum Гаидас к. Marglob к. Генотип Мо 393 × L.esc. var. racemigerum Таблица 3 – Морфологические признаки F1 гибридов растений томата зараженных ВТМ, выращенных при 30°C, N30P20K30, ГНУ ВНИИБЗР , 2008 – 2013 гг. - c; m 2 c; m 2 детерминантный e; ful; hl; a; e; ful; hl; a; wv; aa; d wv; aa; d c; m 2 c; m -2 индетерминантный детерминантный индетерминантный 3,35 3,12 3,54 2,45 3,01 2,87 3,09 2,56 2,56 3,90 3,08 3,0 2,05 2,18 2,18 2,78 2,89 3,46 12,36 14,96 20,34 23,18 12,34 11,23 10,98 12,09 12,98 14,98 13,67 12,45 10,56 10,34 10,34 16,34 17,89 18,98 51 50 46 40 45 40 45 45 50 48 48 48 50 38 40 45 40 45 8 8 10 8 8 8 6 10 6 6 8 8 10 8 12 8 12 10 6 8 6 4 4 6 8 6 6 7 7 7 8 6 6 10 10 12 8 8 4 4 4 8 8 8 6 6 6 6 7 6 6 10 8 8 3 2 2 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 2 1 0 2 1 1 1 0 0 0 0 1 2 1 1 2 1 0 1 0 2 0 0 0 0 1 0 2 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 18,21 12,61 15,11 6,31 6,31 13,61 9,11 12,15 12,98 10,15 9,15 14,13 8,22 10,23 12,15 7,14 10,12 10,12 112 тип куста длина междоузлия (см) высота растения (см) % пораженной листовой пластинки число цветков на 1-ом соцветии - - c; m 2 детерминантный e; ful; e; ful; wv; hl; a; hl; a; aa; d индетерминантный wv; aa; d Tm-1 Гаидас × L. esc. var. racemigerum wv; aa; d Гаидас × L.hirsutum var. glabratum wv; aa; d Marglob × L. esc. var. racemigerum Гаидас × Мо 628 Marglob × Мо 628 Гаидас × Мо 393 3 – 4 настоящих листа c; m c; m e; ful; e; ful; 2 2 hl; a; hl; a; детерминантный Гаидас × Мо 755 гены c; m 2 Marglob × Мо 755 фаза Marglob × Мо 393 Мо 755 × L.hirsutum var. glabratum Мо 755 × L. esc. var. racemigerum Мо 628 × L.hirsutum var. glabratum Мо 628 × L.esc. var. racemigerum Признаки Мо 393 × L.hirs. var. glabrftum Мо 393 × L.esc. var. racemigerum Гаидас к. Marglob к. Генотип Marglob × L.hirsutum var. glabratum Таблица 4 – Морфологические признаки F1 гибридов растений томата зараженных ВТМ, выращенных при 30°C, N60P40K60, ГНУ ВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. Tm-1 индетерминантный 2,46 2,45 2,78 2,41 3,01 2,87 3,09 2,56 2,56 3,90 3,08 3,0 2,05 2,18 2,18 2,78 2,89 3,46 15,45 14,96 20,34 23,18 12,34 11,23 10,98 12,09 12,98 14,98 13,67 12,45 10,56 10,34 10,34 16,34 17,89 18,98 49 40 43 40 45 40 45 45 50 48 48 48 50 38 40 45 40 45 8 8 10 8 10 10 8 12 8 8 8 8 12 8 8 14 14 12 число цветков на 2-ом соцветии 8 9 8 8 6 8 8 6 6 7 7 7 8 6 6 12 14 14 число цветков на 3-ем соцветии 8 8 8 6 6 8 8 8 6 6 6 6 7 6 6 10 8 8 2 1 1 2 1 1 0 1 0 1 1 0 0 1 1 3 3 3 1 1 1 2 0 0 0 1 2 1 1 1 1 1 1 1 2 0 1 1 1 1 0 2 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 1 16,71 12,12 11,52 22,71 4,51 11,51 4,21 11,51 15,11 14,11 14,11 9,11 13,52 1554 15,23 5,39 13,48 11,81 число плодов на 1-ой кисти число плодов на 2-ой кисти число плодов на 3-ей кисти реализованная продуктивность, % 113 фаза гены тип куста длина междоузлия (см) высота растения (см) % пораженной листовой пластинки число цветков на 1-ом соцветии число цветков на 2-ом соцветии число цветков на 3-ем соцветии число плодов на 1-ой кисти число плодов на 2-ой кисти число плодов на 3-ей кисти реализованная продуктивность, % - - c; m 2 c; m 2 детерминантный e; ful; e; ful; wv; hl; a; hl; a; aa; d индетерминантный wv; aa; d 3 – 4 настоящих листа c; m c; m e; ful; e; ful; 2 2 hl; a; hl; a; детерминантный wv; aa; d wv; aa; d Tm-1 Гаидас × L. esc. var. racemigerum Гаидас × L.hirsutum var. glabratum Marglob × L. esc. var. racemigerum Marglob × L.hirsutum var. glabratum Гаидас × Мо 755 Marglob × Мо 755 Гаидас × Мо 628 Marglob × Мо 628 Гаидас × Мо 393 Marglob × Мо 393 Мо 755 × L.hirsutum var. glabratum Мо 755 × L. esc. var. racemigerum Мо 628 × L.hirsutum var. glabratum Признаки Мо 628 × L.esc. var. racemigerum Мо 393 × L.esc. var. racemigerum Гаидас к. Marglob к. Генотип Мо 393 × L.hirs. var. glabrftum Таблица 5 – Морфологические признаки F1 гибридов растений томата зараженных ВТМ, выращенных при 12°C, N30P20K30, ГНУ ВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. Tm-1 индетерминантный 3,56 3,49 3,54 2,45 3,01 2,87 3,09 2,56 2,56 3,90 3,08 3,0 2,05 2,18 2,18 2,78 2,89 3,46 15,45 14,96 20,34 23,18 12,34 11,23 10,98 12,09 12,98 14,98 13,67 12,45 10,56 10,34 10,34 16,34 17,89 18,98 51 50 46 40 45 40 45 45 50 48 48 48 50 38 40 45 40 45 6 4 6 4 4 6 4 8 6 8 6 4 4 4 8 8 10 10 6 6 4 4 6 6 4 6 4 7 4 6 6 6 6 8 8 6 4 6 4 4 3 4 2 4 4 6 4 6 4 4 4 8 6 6 1 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 1 0 0 1 1 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 1 1 0 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 6,31 12,52 12,15 8,13 7,16 12,51 10,11 5,61 12,15 9,15 12,15 12,12 12,15 18,18 16,17 8,13 8,31 9,11 114 фаза гены - - тип куста длина междоузлия (см) высота растения (см) % пораженной листовой пластинки число цветков на 1-ом соцветии число цветков на 2-ом соцветии число цветков на 3-ем соцветии число плодов на 1-ой кисти число плодов на 2-ой кисти число плодов на 3-ей кисти реализованная детерминантный продуктивность, % c; m -2 c; m 2 e; ful; e; ful; wv; hl; a; hl; a; aa; d индетерминантный wv; aa; d 3 – 4 настоящих листа c; m c; m e; ful; e; ful; wv; 2 2 hl; a; hl; a; aa; d детерминантный wv; aa; d Tm-1 Гаидас × L. esc. var. racemigerum Гаидас × L.hirsutum var. glabratum Marglob × L.hirsutum var. glabratum Гаидас × Мо 755 Marglob × Мо 755 Гаидас × Мо 628 Marglob × Мо 628 Гаидас × Мо 393 Marglob × Мо 393 Мо 755 × L.hirsutum var. glabratum Мо 755 × L. esc. var. racemigerum Мо 628 × L.hirsutum var. glabratum Мо 628 × L.esc. var. racemigerum Признаки Мо 393 × L.hirs. var. glabrftum Мо 393 × L.esc. var. racemigerum Гаидас к. Marglob к. Генотип Marglob × L. esc. var. racemigerum Таблица 6– Морфологические признаки F1 гибридов растений томата зараженных ВТМ, выращенных при 12°C, N60P40K60, ГНУ ВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. Tm1 индетерминантный 2,98 3,78 2,94 2,95 2,01 2,77 3,09 2,32 2,34 2,49 3,48 3,60 2,14 2,19 2,34 2,56 2,78 3,46 15,40 14,56 20,20 22,78 11,34 10,23 11,48 11,79 11,58 12,18 14,20 11,25 11,56 10,23 10,12 15,24 16,89 17,72 50 50 45 41 43 40 41 41 50 48 49 50 51 40 41 44 41 45 6 8 10 8 6 6 6 6 6 6 6 7 6 4 4 6 8 6 6 6 6 6 6 8 8 6 6 6 4 7 8 2 4 2 4 4 4 6 4 6 6 8 8 8 6 6 6 6 7 4 4 6 6 2 0 0 1 2 1 1 0 1 1 1 0 0 0 0 1 1 0 1 1 1 0 1 0 0 0 1 1 0 0 1 0 1 1 1 2 0 1 1 1 0 0 2 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 12,52 10,11 10,11 15,14 5,52 13,62 4,15 15,12 16,37 5,25 6,33 10,12 9,13 10,13 25,21 18,16 16,27 16,17 115 wv; aa; d Гаидас × L. esc. var. racemigerum wv; aa; d Гаидас × L.hirsutum var. glabratum Гаидас × Мо 755 Marglob × L.hirsutum var. glabratum Marglob × Мо 755 Marglob × Мо 628 Гаидас × Мо 393 Marglob × Мо 393 Мо 755 × L.hirsutum var. glabratum Мо 755 × L. esc. var. racemigerum Мо 628 × L.hirsutum var. glabratum e; ful; hl; a; 3 – 4 настоящих листа - тип куста длина междоузлия (см) высота растения (см) % пораженной листовой пластинки число цветков на 1-ом соцветии Гаидас × Мо 628 фаза гены Мо 628 × L.esc. var. racemigerum Признаки Мо 393 × L.hirs. var. glabrftum Мо 393 × L.esc. var. racemigerum Гаидас к. Marglob к. Генотип Marglob × L. esc. var. racemigerum Таблица 7– Морфологические признаки F1 гибридов растений томата, выращенных при 25°C, N30P20K30, ГНУ ВНИИБЗР, 2008 – 2013 гг. - c; m 2 c; m 2 детерминантный e; ful; hl; a; e; ful; hl; a; wv; aa; d wv; aa; d c; m 2 c; m 2 индетерминантный e; ful; hl; a; Tm-1 детерминантный Tm1 индетерминантный 3,56 3,49 3,54 2,45 3,01 2,87 3,09 2,56 2,56 3,90 3,08 3,0 2,05 2,18 2,18 2,78 2,89 3,46 15,45 14,96 20,34 23,18 12,34 11,23 10,98 12,09 12,98 14,98 13,67 12,45 10,56 10,34 10,34 16,34 17,89 18,98 51 50 46 40 45 40 45 45 50 48 48 48 50 38 40 45 40 45 6 8 8 6 6 6 4 6 4 6 4 4 4 4 4 4 4 4 число цветков на 2-ом соцветии 4 3 3 3 6 4 5 6 4 4 4 6 6 4 4 2 4 4 число цветков на 3-ем соцветии 2 6 4 6 6 8 6 6 6 6 6 6 6 4 4 6 4 2 0 0 1 2 1 1 0 1 1 1 0 0 0 2 1 1 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 1 0 0 0 1 1 1 0 0 0 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 0 8,33 11,76 13,33 20,00 5,55 5,55 6,66 11,11 21,42 5,25 6,25 6,25 6,25 33,33 25,00 16,67 8,33 10,00 число плодов на 1-ой кисти число плодов на 2-ой кисти число плодов на 3-ей кисти реализованная продуктивность, % 116
