Генотипы и гаплотипы гена-онкосупрессора р53
advertisement
Èçó÷åíèå ýêñïðåññèè ìîëåêóëÿðíî-áèîëîãè÷åñêèõ ìàðêåðîâ â êëåòêàõ ìåòàñòàçîâ ÃÅÍÎÒÈÏÛ È ÃÀÏËÎÒÈÏÛ ÃÅÍÀ-ÎÍÊÎÑÓÏÐÅÑÑÎÐÀ Ð53: àäåíîêàðöåíîìû òîëñòîé êèøêè 37 ÀÑÑÎÖÈÀÖÈß Ñ ÏÐÎÄÎËÆÈÒÅËÜÍÎÑÒÜÞ ÆÈÇÍÈ Ó ÐÓÑÑÊÈÕ ÍÎÂÎÑÈÁÈÐÑÊÎÉ ÎÁËÀÑÒÈ Í.À. Ñìåòàííèêîâà1, Â.Í. Ìàêñèìîâ2, Ñ.Í. Óñòèíîâ2, Ò.Â. Ñòåïàíîâà1, Ë.Ã. Çàâüÿëîâà2, Ä.Â. Äåíèñîâà2, À.Â. Øàáàëèí2,3, Ì.È. Âîåâîäà2, Â.À. Áåëÿâñêàÿ1 ÃÍÖ ÂÁ «Âåêòîð» ÌÇ ÐÔ, ï. Êîëüöîâî, Íîâîñèáèðñêàÿ îáë.1 ÍÈÈ òåðàïèè ÑÎ ÐÀÌÍ, ã. Íîâîñèáèðñê2 Íîâîñèáèðñêàÿ ãîñóäàðñòâåííàÿ ìåäèöèíñêàÿ àêàäåìèÿ3 Öåëüþ íàñòîÿùåé ðàáîòû áûëî èçó÷åíèå ÷àñòîòíîãî ðàñïðåäåëåíèÿ óêàçàííûõ ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà ð53 (âêëþ÷àÿ èõ ãåíîòèïè÷åñêèå êîìáèíàöèè è ãàïëîòèïû) â ãðóïïàõ äîëãîæèòåëåé è ïîäðîñòêîâ äëÿ âûÿñíåíèÿ âîçìîæíîé àññîöèàöèè ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè. Ãåíîòèïèðîâàíèå è àíàëèç ãàïëîòèïîâ ãåíà ð53 â ãðóïïàõ ñðàâíåíèÿ áûëè âûïîëíåíû ìåòîäîì ÏÖÐ-ÏÄÐÔ. Âëèÿíèÿ ïîëèìîðôèçìîâ â ýêçîíå 4 è èíòðîíå 3 íà ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè íå îáíàðóæåíî, â òî âðåìÿ êàê ãîìîçèãîòíûé ãåíîòèï ñ îòñóòñòâèåì ñàéòà MspI â èíòðîíå 6 õàðàêòåðèçóåòñÿ âûðàæåííîé íåãàòèâíîé àññîöèàöèåé. Êîìáèíàöèÿ ãîìîçèãîòíîãî Pro-ãåíîòèïà â ýêçîíå 4 ñ ãåòåðîçèãîòíûìè ïî îáîèì èíòðîííûì ïîëèìîðôèçìàì ãåíîòèïàìè ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ñî÷åòàíèå «ïðî÷íîñòè». Ïîêàçàíî, ÷òî ðàçëè÷èÿ ãàïëîòèïíîãî ñîñòàâà ð53 âëèÿþò íà ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè â çàâèñèìîñòè îò óðîâíÿ ãåòåðîçèãîòíîñòè. GENOTYPES AND HAPLOTYPES OF P53 SUPPRESSOR GENE: ASSOCIATION WITH LIFETIME OF THE RUSSIAN PEOPLE OF NOVOSIBIRSK AREA N.A. Smetannikova1, V.N. Maksimov2, S.N. Ustinov2, T.V. Stepanova1,L.G. Zavjalova2, D.V. Denisova2, A.V. Shabalin2,3, M.I. Voevoda2, V.A. Belyavskaya1 State Scientific Center VB “Vector” of Health Ministry of RF, Koltsovo, Novosibirsk area1 Therapy Research Institute, SB RAMS2, Novosibirsk Novosibirsk State Medical Academy3 This study aimed to investigate the frequency distributions of p53 gene polymorphisms (including genotypic combinations and haplotypes) in the groups of long survivors and teenagers for determining a possible association with lifetime. Genotyping and analysis of p53 gene haplotypes in comparison groups were carried out using PCR-PDRF techniques. No impact of polymorphisms in the forth exon and in the third intron on lifetime was found, while hemozygous genotype with the absence of MspI site in the 6th intron is characterized by the marked negative association. Differences in haplotypic composition of p53 were shown to influence on lifetime depending on the level of heterozygosity. Íà ðàçâèòèå çàáîëåâàíèé, ñîêðàùàþùèõ ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè ÷åëîâåêà, â òîì ÷èñëå îíêîëîãè÷åñêèõ, âëèÿþò êàê åãî èíäèâèäóàëüíûå ãåíåòè÷åñêèå îñîáåííîñòè, òàê è óñëîâèÿ, â êîòîðûõ îíè ïðîÿâëÿþòñÿ. Toupance et al. [23] ïðåäëîæåíà êëàññèôèêàöèÿ ãåíîâ ïî àññîöèàöèè ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè: ãåíû «ïðî÷íîñòè» (robust), «áðåííîñòè» (frail) è íåéòðàëüíûå.  îñíîâå òàêîãî ïîäðàçäåëåíèÿ ëåæèò ÷àñòîòà âñòðå÷àåìîñòè èõ íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííûõ àëëåëåé ó äîëãîæèòåëåé ïî ñðàâíåíèþ ñ äðóãèìè âîçðàñòíûìè ãðóïïàìè (ñîîòâåòñòâåííî «âûøå», «íèæå» ëèáî «íå èçìåíÿåòñÿ»). Èçâåñòíî, ÷òî ñî÷åòàíèÿ àëëåëüíûõ âàðèàíòîâ ãåíîâ, ðåãóëèðóþùèõ ôóíêöèîíèðîâàíèå ãîìåîñòàòè÷åñêèõ ñèñòåì îðãàíèçìà, îïðåäåëÿþò åãî ñïîñîáíîñòü àäåêâàòíî ðåàãè- ðîâàòü íà ñòèìóëû, íàðóøàþùèå ãîìåîñòàç. Íà ïîïóëÿöèîííîì óðîâíå ìîæíî áûëî áû îæèäàòü óâåëè÷åíèÿ â ãðóïïå äîëãîæèòåëåé ÷àñòîòû ãåííûõ âàðèàíòîâ, îáåñïå÷èâàþùèõ óñòîé÷èâîñòü ê èçìåíåíèÿì, êîòîðûå èíèöèèðóþò çàáîëåâàíèÿ, ñîêðàùàþùèå ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè. Ãåí ð53 ÿâëÿåòñÿ êëþ÷åâûì ðåãóëÿòîðîì êëåòî÷íîãî äåëåíèÿ è àïîïòîòè÷åñêîé ýëèìèíàöèè ïàòîëîãè÷åñêè èçìåíåííûõ è, ñëåäîâàòåëüíî, ïîòåíöèàëüíî çëîêà÷åñòâåííûõ êëåòîê. Ïî÷òè ó ïîëîâèíû îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ â îïóõîëåâûõ êëåòêàõ íàáëþäàþòñÿ òî÷å÷íûå ìóòàöèè èëè äåëåöèè ãåíà ð53, ïðèâîäÿùèå ê óòðàòå ôèçèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè åãî áåëêà [11].  ïðåäåëàõ ãåíà ð53 èäåíòèôèöèðîâàíî 13 ðàçÑÈÁÈÐÑÊÈÉ ÎÍÊÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË. 2006. ¹2 (18) 38 Í.À. ÑÌÅÒÀÍÍÈÊÎÂÀ, Â.Í. ÌÀÊÑÈÌÎÂ, Ñ.Í. ÓÑÒÈÍΠè äð. ëè÷íûõ ïîëèìîðôèçìîâ. Ïîëèìîðôèçì â 72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, êîäèðóþùèé çàìåíó àìèíîêèñëîòû àðãèíèíà (Arg) íà ïðîëèí (Pro) â ïåðâè÷íîé ñòðóêòóðå áåëêà, ïðèçíàåòñÿ íàèáîëåå ôóíêöèîíàëüíî çíà÷èìûì [11, 26]. Îí ñâÿçàí ñ ðåàëèçàöèåé äâóõ ðàçëè÷íûõ àïîïòîòè÷åñêèõ ìåõàíèçìîâ, ñ íàðóøåíèåì êîòîðûõ àññîöèèðîâàíî ðàçâèòèå ðÿäà îíêîëîãè÷åñêèõ çàáîëåâàíèé (ðàê ëåãêîãî, ïèùåâîäà, øåéêè ìàòêè, êîæè; êîæíàÿ ìåëàíîìà) [2, 11, 26]. Ðàíåå ìû ïðîàíàëèçèðîâàëè ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòîò àëëåëåé è ãåíîòèïîâ äàííîãî ïîëèìîðôèçìà ó äîëãîæèòåëåé Íîâîñèáèðñêîé îáëàñòè (ÍÑÎ) â ñðàâíåíèè ñ êîíòðàñòíîé âîçðàñòíîé ãðóïïîé (çäîðîâûå ïîäðîñòêè ã. Íîâîñèáèðñêà). Ðàçëè÷èé â ÷àñòîòíîì ðàñïðåäåëåíèè Arg/Pro-ïîëèìîðôèçìà ìåæäó ýòèìè ãðóïïàìè îáíàðóæåíî íå áûëî [1]. Ïîäîáíî èññëåäîâàíèÿì, ïîñâÿùåííûì ôóíêöèîíàëüíîé ðîëè ïîëèìîðôèçìà ð53 â 72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, â ðÿäå ðàáîò èçó÷àëèñü àññîöèàöèè ðàçëè÷íûõ òèïîâ ðàêà (ëåãêîãî [6, 7, 14, 26], ÿè÷íèêîâ [17], ìîëî÷íîé æåëåçû [13, 14, 18, 25], îáîäî÷íîé è ïðÿìîé êèøêè [18]) ñ ïîëèìîðôèçìàìè â 3-ì è 6-ì èíòðîíàõ ýòîãî ãåíà. Èíòðîííûå ïîëèìîðôèçìû, áëàãîäàðÿ ñâîåìó ó÷àñòèþ â ðåãóëÿöèè ñïëàéñèíãà ìÐÍÊ, ýêñïðåñèè ãåíîâ è ÄÍÊ-áåëêîâûõ âçàèìîäåéñòâèé, ïðè îïðåäåëåííûõ óñëîâèÿõ òàêæå ìîãóò îêàçûâàòü âëèÿíèå íà ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü áåëêîâ [5, 12, 16]. Öåëüþ íàñòîÿùåé ðàáîòû áûëî ïðîâåñòè èññëåäîâàíèå îïóõîëåàññîöèèðîâàííûõ ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà ð53 (äóïëèêàöèÿ â 16 ïàð íóêëåîòèäîâ (dup16 bp) â 3-ì èíòðîíå è MspI-ïîëèìîðôèçì â 6-ì èíòðîíå) íà îñíîâå èçó÷åíèÿ èõ ðàñïðåäåëåíèÿ â ãðóïïàõ äîëãîæèòåëåé è ïîäðîñòêîâ äëÿ âûÿñíåíèÿ âîçìîæíîé êîððåëÿöèè ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè. Ìàòåðèàëû è ìåòîäû Èññëåäîâàëèñü îáðàçöû ãåíîìíîé ÄÍÊ çäîðîâûõ äîëãîæèòåëåé Íîâîñèáèðñêîé îáëàñòè (ÍÑÎ, n=88, âîçðàñò 84–105 ëåò) è ïîäðîñòêîâ ã. Íîâîñèáèðñêà (n=146, âîçðàñò 14–17 ëåò). Âûáîðêè áûëè ñôîðìèðîâàíû ïî ýòíè÷åñêîìó êðèòåðèþ (ïðîñëåæåííàÿ â òðåõ ïîêîëåíèÿõ ïðèíàäëåæíîñòü ê ðóññêîé íàöèîíàëüíîñòè). Ðàáîòà ïðîâîäèëàñü ñ ñîáëþäåíèåì ïðèíöèïîâ äîáðîâîëüíîñòè è êîíôèäåíöèàëüíîñòè â ñîîòâåòñòâèè ñ «Îñíîâàìè çàêîíîäàòåëüñòâà ÐÔ îá îõðàíå çäîðîâüÿ ãðàæäàí» (Óêàç Ïðåçèäåíòà ÐÔ îò 24. 12. 1993 ¹ 2288). ÄÍÊ áûëà âûäåëåíà èç öåëüíîé âåíîçíîé êðîâè ñ èñïîëüçîâàíèåì ïðîòåèíàçû Ê ñ ïîñëåäóþùåé ôåíîëüíî-õëîðîôîðìíîé ýêñòðàêöèåé [3]. Îöåíêà ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà ð53 ïðîâîäèëàñü ñ ïîìîùüþ ÏÖÐ(dup16 bp â 3 èíòðîíå) è ÏÖÐ-MspI-ÏÄÐÔ-àíàëèçà (MspI-ïîëèìîðôèçì â 6-ì èíòðîíå), êàê îïèñàíî Wu et al. [26]. Ñòàòèñòè÷åñêàÿ îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ îñóùåñòâëÿëàñü ñ ïðèìåíåíèåì ïàêåòà ïðèêëàäíûõ ñòàòèñòè÷åñêèõ ïðîãðàìì SPSS v. 9.0. Ñîîòâåòñòâèå ðàñïðåäåëåíèÿ ÷àñòîò ãåííûõ âàðèàíòîâ çàêîíó Õàðäè – Âàéíáåðãà (ÕÂ) îöåíèâàëîñü ïî êðèòåðèþ P2. Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå Íà ïåðâîì ýòàïå ìû èçó÷èëè ðàñïðåäåëåíèå àëëåëåé è ãåíîòèïîâ êàæäîãî èíòðîííîãî ïîëèìîðôèçìà ãåíà ð53 â êîíòðàñòíûõ âîçðàñòíûõ ãðóïïàõ (äîëãîæèòåëè è ïîäðîñòêè) äëÿ âûÿñíåíèÿ èõ âëèÿíèÿ íà ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè (òàáë. 1). Ò à á ë è ö à 1 Ðàñïðåäåëåíèå àëëåëåé è ãåíîòèïîâ ïîëèìîðôèçìîâ â 3-ì è 6-ì èíòðîíàõ ãåíà ð53 ó äîëãîæèòåëåé è ïîäðîñòêîâ 3-é èíòðîí (dup 16 bp) Àëëåëè Ãåíîòèïû Ãðóïïà W M W/W W/M M/M Äîëãîæèòåëè ÍÑÎ 154/176 67/88 20/88 1/88 22/176 (0,125) n=88 (0,875) (0,761) (0,227) (0,012) 245/292 33/146 7/146 Ïîäðîñòêè ã. Íîâîñèáèðñêà n=146 47/292 (0,161) 106/146 (0,726) (0,839) (0,226) (0,048) 6-é èíòðîí (MspI) Àëëåëè Ãåíîòèïû Ãðóïïà W M W/W W/M M/M Äîëãîæèòåëè ÍÑÎ 140/168 26/168 (0,167) 57/84 (0,679) 26/84 (0,310) 1/84 (0,012) n=84 (0,833) 201/266 Ïîäðîñòêè ã. Íîâîñèáèðñêà n=133 65/266 (0,254) 79/133 (0,594) 43/133 (0,325) 14/133 (0,105) * (0,756) Ïðèìå÷àíèå: 3-é èíòðîí: W (wild) – îòñóòñòâèå dup16 bp, M (minor) – íàëè÷èå dup16 bp; 6-é èíòðîí: W – íàëè÷èå ñàéòà ðåñòðèêöèè MspI, M – îòñóòñòâèå ñàéòà ðåñòðèêöèè MspI; * – ðàçëè÷èÿ ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìû ñ ãðóïïîé «Äîëãîæèòåëè». ÑÈÁÈÐÑÊÈÉ ÎÍÊÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË. 2006. ¹2 (18) Ãåíîòèïû è ãàïëîòèïû ãåíà-îíêîñóïðåññîðà ð53: àññîöèàöèÿ ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè ó ðóññêèõ Íîâîñèáèðñêîé îáëàñòè 39 Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ðàíåå Wu et al. [26], èññëåäóÿ ãåíîòèïè÷åñêèå êîìáèíàöèè òðåõ íàçâàííûõ ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà ð53 ñ èñïîëüçîâàíèåì ëèíèé ëèìôîáëàñòîèäíûõ êëåòîê îò çäîðîâûõ íîñèòåëåé ýòèõ êîìáèíàöèé, îáíàðóæèëè âûðàæåííîå ñíèæåíèå ïîêàçàòåëåé àïîïòîòè÷åñêîãî èíäåêñà è ýôôåêòèâíîñòè ðåïàðàöèè ÄÍÊ ïî ìåðå óâåëè÷åíèÿ ÷èñëà ìèíîðíûõ àëëåëåé â êàæäîì ëîêóñå ð53. Äëÿ áîëüøåé íàãëÿäíîñòè è îáîñíîâàíèÿ ñëåäóþùåãî ýòàïà íàøèõ èññëåäîâàíèé ìû ñî÷ëè íåîáõîäèìûì ïðèâåñòè ýòè äàííûå â âèäå òàáëèöû (òàáë. 2). Îáðàùàåò âíèìàíèå ôàêò, ÷òî íåãàòèâíîå âëèÿíèå ìèíîðíûõ (Ì) àëëåëåé óñèëèâàåòñÿ ïðè íàðàñòàíèè óðîâíÿ ãåòåðîçèãîòíîñòè ïî òðåì ëîêóñàì ð53: òàê, àïîïòîòè÷åñêèé èíäåêñ êëåòîê â ãðóïïàõ íîñèòåëåé, ãåòåðîçèãîòíûõ òîëüêî ïî îäíîìó ëîêóñó è ãîìîçèãîòíûõ ïî ìèíîðíîìó àëëåëþ âî âñåõ ëîêóñàõ, çíà÷èòåëüíî ñíèæàåòñÿ (â 3,2 è 8,3 ðàçà, ñîîòâåòñòâåííî) ïî ñðàâíåíèþ ñ ãðóïïîé ãîìîçèãîòíûõ íîñèòåëåé äèêîãî àëëåëÿ (òàáë. 2). Íåñîìíåííî, ñòîëü ðàçèòåëüíûå îòëè÷èÿ â àïîïòîòè÷åñêîé àêòèâíîñòè áåëêà ð53 íå ìîãóò íå îêàçûâàòü âëèÿíèå íà ýôôåêòèâíîñòü ïðåäîòâðàùåíèÿ ðàçâèòèÿ ïàòîëîãèé è ñâèäåòåëüñòâóþò î ôóíêöèîíàëüíîé çíà÷èìîñòè íå òîëüêî ãåíîòèïè÷åñêèõ êîìáèíàöèé, íî è ãàïëîòèïîâ ãåíà ð53 â çàâèñèìîñòè îò óðîâíÿ ãåòåðîçèãîòíîñòè. Ïîýòîìó íà ñëåäóþùåì ýòàïå ìû èçó÷èëè ÷àñòîòíîå ðàñïðåäåëåíèå ãàïëîòèïîâ ð53 â ãðóïïàõ äîëãîæèòåëåé è ïîäðîñòêîâ äëÿ ãîìîçèãîòíûõ íîñèòåëåé è èíäèâèäóóìîâ, ãåòåðîçèãîòíûõ ïî îäíîìó èç òðåõ ëîêóñîâ. Îïðåäåëåíèå ãàïëîòèïîâ ó ýòèõ ëèö, â îòëè÷èå îò ãåòåðîçèãîò ïî äâóì è òðåì ëîêóñàì, íå òðåáóåò ïðîâåäåíèÿ äîïîëíèòåëüíîãî ãåíîòèïèðîâàíèÿ. Ïîëó÷åííûå äàííûå ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 3. Ïî ðàñïðåäåëåíèþ ïîëèìîðôèçìà â 3-ì èíòðîíå (dup16 bp) èçó÷àåìûå âûáîðêè ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìî íå îòëè÷àþòñÿ.  òî æå âðåìÿ îáíàðóæåíî çíà÷èìîå ïîâûøåíèå ÷àñòîòû ãåíîòèïà M/M èíòðîíà 6 (ãîìîçèãîòíîñòü ïî îòñóòñòâèþ ñàéòà ðåñòðèêöèè MspI) ó ïîäðîñòêîâ ã. Íîâîñèáèðñêà ïî ñðàâíåíèþ ñ äîëãîæèòåëÿìè ÍÑÎ â 8,75 ðàçà (P2=6,97, ð=0,0083; OR=9,76, 95% CI=1,26–75,70). Âûÿâëåííîå îòëè÷èå ïîçâîëÿåò ñ÷èòàòü îòñóòñòâèå ñàéòà MspI â 6-ì èíòðîíå ð53 âàðèàíòîì «áðåííîñòè». Ýòî ïîäòâåðæäàåòñÿ ñîîáùåíèÿìè îá àññîöèàöèÿõ äàííîãî àëëåëÿ ñ ðàêîì ëåãêîãî [7, 14, 26], ÿè÷íèêîâ [17], ìîëî÷íîé æåëåçû [14, 18] è îáîäî÷íîé êèøêè [18].  íàøèõ èññëåäîâàíèÿõ ãåíà-îíêîñóïðåññîðà ð53 òàêîé îäèíî÷íûé ïîëèìîðôèçì «áðåííîñòè» îáíàðóæåí âïåðâûå ïðè ñðàâíåíèè ãðóïïû äîëãîæèòåëåé ñ äðóãèìè âîçðàñòíûìè ãðóïïàìè. Äàëåå äëÿ ãðóïï äîëãîæèòåëåé è ïîäðîñòêîâ áûë âûïîëíåí àíàëèç ãåíîòèïè÷åñêèõ êîìáèíàöèé òðåõ ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà ð53 (Arg/Pro-ïîëèìîðôèçì â 72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, dup16 bp-ïîëèìîðôèçì â 3-ì èíòðîíå, MspI-ïîëèìîðôèçì â 6-ì èíòðîíå). Èç 20 ðàçëè÷íûõ ñî÷åòàíèé ãåíîòèïîâ òðåõ ëîêóñîâ ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìûå ðàçëè÷èÿ ìåæäó êîíòðàñòíûìè âûáîðêàìè áûëè îáíàðóæåíû òîëüêî äëÿ êîìáèíàöèè MM-WM-WM (Pro/Pro-ãîìîçèãîòíîñòü è ãåòåðîçèãîòíîñòü ïî íàëè÷èþ dup16 bp- è MspI-ïîëèìîðôèçìîâ). Áûëî âûÿâëåíî ñíèæåíèå åå ÷àñòîòû ñðåäè ïîäðîñòêîâ ã. Íîâîñèáèðñêà ïî ñðàâíåíèþ ñ ãðóïïîé äîëãîæèòåëåé ÍÑÎ (0,015 è 0,1 ñîîòâåòñòâåííî; P2=7,82, ð=0,0052, OR=0,14, 95%CI=0,03–0,63), ÷òî äàåò âîçìîæíîñòü ðàññìàòðèâàòü äàííóþ êîìáèíàöèþ â êà÷åñòâå «êîìáèíàöèè ïðî÷íîñòè». Ò à á ë è ö à 2 Àïîïòîòè÷åñêèé èíäåêñ è îáúåì ðåïàðàöèè ÄÍÊ â ëèìôîáëàñòîèäíûõ êëåòî÷íûõ ëèíèÿõ ñ ðàçëè÷íûìè êîìáèíàöèÿìè ãåíîòèïîâ ð53 (4-é ýêçîí – 3-é èíòðîí – 6-é èíòðîí) (Wu et al., 2002) Ãåíîòèïû p53 WW-WW-WW n=11 WM-WW-WW WW-WM-WW WW-WW-WM n=11 (WM+MM)-WM-WM WM-(WM+MM)-WM WM-WM-(WM+MM) n=8 MM-MM-MM n=1 Àïîïòîòè÷åñêèé èíäåêñ Ñðåäíèé % 95 % CI 13,66 8,61-18,71 p Ýôôåêòèâíîñòü ðåïàðàöèè ÄÍÊ Ñðåäíèé % 95 % CI p 27,63 21,72-33,53 4,29 2,23-6,35 <0,001 20,45 13,11-27,80 0,11 3,50 1,08-5,91 0,002 17,48 7,99-26,96 0,04 1,64 15,6 Ïðèìå÷àíèå. W (wild) – Arg-àëëåëü â 72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, îòñóòñòâèå dup16 bp â 3-ì èíòðîíå, íàëè÷èå ñàéòà ðåñòðèêöèè MspI â 6-ì èíòðîíå; M (minor)– Pro-àëëåëü â 72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, íàëè÷èå dup16 bp â 3-ì èíòðîíå, îòñóòñòâèå ñàéòà ðåñòðèêöèè MspI â 6-ì èíòðîíå. ÑÈÁÈÐÑÊÈÉ ÎÍÊÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË. 2006. ¹2 (18) 40 Í.À. ÑÌÅÒÀÍÍÈÊÎÂÀ, Â.Í. ÌÀÊÑÈÌÎÂ, Ñ.Í. ÓÑÒÈÍΠè äð. Ñîïîñòàâëåíèå ÷àñòîò âñòðå÷àåìîñòè ãàïëîòèïîâ ãåíà ð53 âûÿâèëî óìåðåííîå, íî ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìîå ðàçëè÷èå â ðàñïðåäåëåíèè íàèáîëåå ðàñïðîñòðàíåííîãî ãàïëîòèïà W-W-W (Arg– îòñóòñòâèå dup16 bp– íàëè÷èå ñàéòà MspI) ìåæäó äîëãîæèòåëÿìè ÍÑÎ è ïîäðîñòêàìè ã. Íîâîñèáèðñêà, ãåòåðîçèãîòíûìè ïî îäíîìó èç òðåõ ëîêóñîâ. Îòìå÷åíî ñíèæåíèå äîëè óêàçàííîãî ãàïëîòèïà â ãðóïïå ïîäðîñòêîâ (P 2=4,32, ð=0,0378, OR=0,14; CI= 0,02–1,15).  òî æå âðåìÿ äëÿ ãîìîçèãîòíûõ íîñèòåëåé çíà÷èìûõ ðàçëè÷èé ìåæäó êîíòðàñòíûìè ãðóïïàìè îáíàðóæåíî íå áûëî. Ýòî ïîäòâåðæäàåò ïðåäïîëîæåíèå, ÷òî àññîöèàöèÿ êîíêðåòíîãî ãàïëîòèïíîãî âàðèàíòà ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè çàâèñèò íå òîëüêî îò ñî÷åòàíèÿ «äèêèõ» è ìèíîðíûõ àëëåëåé, íî è îò ñîñòîÿíèÿ ãîìî- èëè ãåòåðîçèãîòíîñòè ïî ïîëèìîðôíûì ëîêóñàì.  íàñòîÿùåå âðåìÿ èçó÷åíèþ ãàïëîòèïîâ ð53 ïî óêàçàííûì ëîêóñàì óäåëÿåòñÿ áîëüøîå âíèìàíèå [6, 7, 13, 25, 26]. Äëÿ ïîëíîãî ïðåäñòàâëåíèÿ î ñâÿçè ãàïëîòèïîâ ãåíà ð53 ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè íåîáõîäèìî ïðîàíàëèçèðîâàòü èõ ÷àñòîòíîå ðàñïðåäåëåíèå òàêæå è ó èíäèâèäóóìîâ, ãåòåðîçèãîòíûõ ïî äâóì è òðåì ïîëèìîðôèçìàì, ÷òî ïëàíèðóåòñÿ â äàëüíåéøåì. Îáîáùàÿ ðåçóëüòàòû, ïîëó÷åííûå îòíîñèòåëüíî êîððåëÿöèé ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà-îíêîñóïðåññîðà ð53 ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè, ìîæíî ñêàçàòü, ÷òî â äîïîëíåíèå ê ðàíåå îáíàðóæåííîìó «íåéòðàëüíîìó» ýôôåêòó ïîëèìîðôèçìà â 4-ì ýêçîíå [2] âûÿâëåí òàêîé æå ýôôåêò è äëÿ ïîëèìîðôèçìà â 3-ì èíòðîíå. Ãîìîçèãîòíûé ãåíîòèï ñ îòñóòñòâèåì ñàéòà MspI â 6-ì èíòðîíå õàðàêòåðèçóåòñÿ âûðàæåííîé íåãàòèâíîé àññîöèàöèåé («ýôôåêò áðåííîñòè»).  òî æå âðåìÿ êîìáèíàöèÿ «ãîìîçèãîòíûé Pro-ãåíîòèï â 4-ì ýêçîíå – ãåòåðîçèãîòíîñòü ïî îáîèì èíòðîííûì ïîëèìîðôèçìàì» ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ãåíîòèïè÷åñêîå «ñî÷åòàíèå ïðî÷íîñòè». Ïîêàçàíî, ÷òî êîððåëÿöèè òðåõ óêàçàííûõ ïîëèìîðôèçìîâ ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè îïðåäåëÿþòñÿ òàêæå èõ ãàïëîòèïíûìè ñî÷åòàíèÿìè è ñîñòîÿíèåì ãîìî- èëè ãåòåðîçèãîòíîñòè. Ýòè äàííûå â ñîâîêóïíîñòè ñâèäåòåëüñòâóþò î ïëåéîòðîïíîì (ðàçíîíàïðàâëåííîì) âëèÿíèè ãåíà ð53 íà ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè. Òåîðåòè÷åñêîå ïðåäïîëîæåíèå î ïëåéîòðîïíîì âëèÿíèè ãåíà ð53 áûëî ñäåëàíî ðàíåå èòàëüÿíñêèìè àâòîðàìè, õîòÿ â èõ ðàáîòå îíî íå ïîëó÷èëî ýêñïåðèìåíòàëüíîãî ïîäòâåðæäåíèÿ [8]. Ðàçíîíàïðàâëåííîñòü âëèÿíèÿ íà ïðîäîëæèòåëüíîñòü æèçíè îáíàðóæåíà òàêæå ïðè èçó÷åíèè ïîëèìîðôèçìîâ äðóãèõ ãåíîâ ñèñòåìû ïðîòèâîîïóõîëåâîé çàùèòû (ãåíû öèòîõðîìà ð450, ãëþòàòèîíòðàíñôåðàçû [19, 22], áåëêîâ òåïëîâîãî øîêà [4, 15], ôàêòîðà íåêðîçà îïóõîëåé àëüôà [9, 20, 24], èíòåðëåéêèíîâ 6 è 10 [10, 21, 24]). Ïðè ýòîì áûëà âûÿâëåíà çàâèñèìîñòü ýôôåêòîâ ïîëèìîðôèçìîâ îò ýòíîãåîãðàôè÷åñêîé ïðèíàäëåæíîñòè âûáîðîê. Ïðåäñòàâëåííûå íàìè äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î íåîáõîäèìîñòè ïðîâåäåíèÿ êîìáèíàöèîííîãî è ãàïëîòèïíîãî àíàëèçà ïîëèìîðôèçìîâ ãåíà ð53 äëÿ âûÿñíåíèÿ åãî ôóíêöèîíàëüíîé ðîëè â êëþ÷åâûõ êëåòî÷íûõ ïðîöåññàõ. Ó÷èòûâàÿ ïëåéîòðîïíîñòü åãî áèîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ, ðåøåíèå ýòîé ïðîáëåìû ñëåäóåò òàêæå èñêàòü ïóòåì êîìïëåêñíîãî ãåíåòè÷åñêîãî, ýïèäåìèîëîãè÷åñêîãî è ýòíîãåîãðàôè÷åñêîãî èçó÷åíèÿ ÷åëîâå÷åñêèõ ïîïóëÿöèé. Ò à á ë è ö à 3 Ðàñïðåäåëåíèå ãàïëîòèïîâ ð53 â ãðóïïàõ äîëãîæèòåëåé è ïîäðîñòêîâ (Arg/Pro-ïîëèìîðôèçì â 4-ì ýêçîíå, dup16-ïîëèìîðôèçì â 3-ì èíòðîíå, MspI-ïîëèìîðôèçì â 6-ì èíòðîíå) Ïðèìå÷àíèå: W (wild) – Arg-àëëåëü â 72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, îòñóòñòâèå dup16 bp â 3-ì èíòðîíå, íàëè÷èå ñàéòà ðåñòðèêöèè MspI â 6-ì èíòðîíå; M (minor)– Pro-àëëåëü â 72-ì êîäîíå 4-ãî ýêçîíà, íàëè÷èå dup16 bp â 3-ì èíòðîíå, îòñóòñòâèå ñàéòà ðåñòðèêöèè MspI â 6-ì èíòðîíå; * – ðàçëè÷èÿ ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìû ñ ãðóïïîé «Äîëãîæèòåëè». ÑÈÁÈÐÑÊÈÉ ÎÍÊÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË. 2006. ¹2 (18) Ãåíîòèïû è ãàïëîòèïû ãåíà-îíêîñóïðåññîðà ð53: àññîöèàöèÿ ñ ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ æèçíè ó ðóññêèõ Íîâîñèáèðñêîé îáëàñòè ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ 1. Áåëÿâñêàÿ Â.À., Ñìåòàííèêîâà Í.À., Ìàêñèìîâ Â.Í. è äð. // Ìîëåêóëÿðíàÿ ìåäèöèíà. 2005. ¹ 4. Ñ. 18–28. 2. Ñìåòàííèêîâà Í.À., Ñìåòàííèêîâà Ì.À., Áåëÿâñêàÿ Â.À. è äð. // Ñèáèðñêèé îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë. 2004. ¹ 2–3. Ñ. 124–129. 3. Ñìèò Ê., Êîëëèíç Ô., Êàíòîð ×. Àíàëèç ãåíîìà / Ïîä ðåä. Ê. Äåéâèñà. Ì.: Ìèð, 1990. C. 58–94. 4. Altomare K., Greco V., Bellizzi D. et al. // Biogerontology. 2003. Vol. 4, ¹ 4. Ð. 215–220. 5. Avigad S., Barel D., Blan O. et al. // Oncogene. 1997. Vol. 14. P. 1541–1545. 6. Birgander R., Sjalander A., Rannug A. et al. // Carcinogenesis. 1995. Vol. 16. P. 2233–2236. 7. Biros E., Kalina I., Kohut A. et al. // Lung Cancer. 2001. Vol. 31. P. 157–162. 8. Bonafe M., Olivieri F., Cavallone L. et al. // Am. J. Hum. Genet. 1999. Vol. 65. P. 1782–1785. 9. Bruunsgaard H., Benfield T.L., Andersen–Ranberg K. et al. // J. Am. Geriatr. Soc. 2004. Vol. 52, ¹ 8. P. 1361–1366. 10. Capurso C., Solfrizzi V., D’Introno A. et al. // Exp. Gerontol. 2004. Vol. 39, ¹ 7. P. 1109–1114. 11. Fan R., Wu M.-T., Miller D. et al. // Cancer Epid. Biom. Prev. 2000. Vol. 9. P. 1037–1042. 12. Hillebrandt S., Streffer C., Demidchik E.P. et al. // Mutat. Res. 1997. Vol. 381. P. 201–207. 41 13. Khaliq S., Hameed A., Khaliq T. et al. // Genet. Test. 2000. Vol. 4. ¹ 1. P. 23–29. 14. Mahasneh A.A., Abdel–Hafiz S.S. // Saudi Med. J. 2004. Vol. 25, ¹ 11. P. 1568–1573. 15. Marini M., Lapalombella R., Canaider S. et al. // Exp. Gerontol. 2003. Vol. 39, ¹ 1. P. 83–90. 16. Mattick J.S. // Curr. Opin. Genet. Des. 1994. Vol. 4. P. 823–831. 17. Mavridou D., Gornall R., Campbell I.G. et al. // Br. J. Cancer. 1998. Vol. 77. P. 676–677. 18. Peller S., Kopilova I., Slutzki S. et al. // DNA Cell Biol. 1995. Vol. 14. P. 983–990. 19. Persh B., Dusing R., Rabstein S. et al. // Toxicol. Lett. 2004. Vol. 151, ¹ 1. P. 283–290. 20. Ross O.A., Curran M.D., Rea I.M. et al. // Mech. Ageing Dev. 2003. Vol. 124, ¹ 4. P. 563–567. 21. Scola L. Crivello A., Marino V. et al. // Mech. Ageing Dev. 2003. Vol. 124. ¹ 4. P. 569–572. 22. Taioli E., Mari D., Franceschi C. et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. Vol. 280, ¹ 5. P. 1389–1392. 23. Toupance B., Godelle B., Gouyon P. et al. // Am. J. Hum. Genet. 1998. Vol. 65. P. 1525–1534. 24. Wang X.Y., Hurme M., Jylha M. et al. // Mech. Ageing Dev. 2003. Vol. 123, ¹ 1. P. 29–38. 25. Weston A., Perrin L.S., Forrester K. et al. // Cancer Epid. Biom. Prev. 1997. Vol. 6. P. 105–112. 26. Wu X., Zhao H., Amos C.I. et al. // J. Natl. Canc. Ins. 2002. Vol. 94. ¹ 9. P. 681–690. Ïîñòóïèëà 8.06.05 ÑÈÁÈÐÑÊÈÉ ÎÍÊÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË. 2006. ¹2 (18)
