Характеристика экспрессии толл

ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ГЛАЗА
УДК 617.713-002.6
Характеристика экспрессии толл-рецепторов на клетках
периферической крови при увеитах различного генеза
Н.А. Гаврилова1, Н.С. Гаджиева1, З.Г. Иванова1, А.М. Сапожников2, Л.М. Каневский2,
David А. Howe3
1
2
3
ГБОУ ВПО «МГМСУ им. А.И. Евдокимова» Минздрава России, Москва;
Ф ГБУН «Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова»
РАН, Москва;
Stemedica Cell Technologies, Inc., Longevity Medicine LLC, США
РЕФЕРАТ
В патогенезе увеитов играет роль иммунная реактивность
организма, которая включает звенья врожденного и приобретенного (адаптивного) иммунитета. Врожденная иммунная
система образует первую линию защиты на пути патогенных
агентов, проникающих в организм человека.
Реализация специфичности врожденной иммунной системы ложится на семейство эволюционно консервативных рецепторов, известных как толл-подобные рецепторы (TLR), которые играют решающую роль в ранней защите организма от
патогенов.
Цель. Изучить и провести сравнительную характеристику
экспрессии различных видов толл-рецепторов на клетках периферической крови при увеитах различной этиологии.
Материал и методы. В исследовании участвовали 15 пациентов (7 мужчин и 8 женщин) в возрасте 25-54 лет с диагнозом острого или обострения хронического увеита различной этиологии. Контрольную группу составили здоровые лица в возрасте 23-27 лет – 12 чел. Уровень экспрессии толл-подобных рецепторов оценивали с помощью проточно-цитометрического анализа лейкоцитов, окрашенных
по стандартным протоколам флуоресцентно-меченными антителами (HyCult Biotech, The Netherlands) к поверхностным
(TLR2, TLR4, TLR6) или внутриклеточным (TLR3, TLR9) рецепторам.
Результаты. Получены статистически достоверные результаты по снижению экспрессии TLR2 на В-лимфоцитах и моноцитах (р=0,02 и 0,014 соответственно) более чем в 2 раза;
TLR4 и TLR6 – на моноцитах (р=0,01 и 0,047 соответственно)
у пациентов с инфекционно-токсическим увеитом. У пациентов c прогредиентно протекающими увеитами с выраженным
аутоиммунным компонентом (6 чел.) экспрессия TLR отличалась полиморфизмом и имела тенденцию к повышению по
сравнению с контролем.
Заключение. При инфекционно-токсическом увеите наибольшее патогенетическое значение имеет достоверное угнетение экспрессии TLR2, TLR4 и TLR6 на моноцитах периферической крови, что, возможно, связано с чрезмерной стимуляцией толл-рецепторов экзогенными лигандами до начала или в
дебюте заболевания и развитием состояния гипочувствительности толл-рецепторов как защитной реакции сосудистой оболочки глаза от гиперэргического воспаления. Требуются дальнейшие исследования характера экспрессии толл-рецепторов
в стадию ремиссии увеита с целью оценки влияния активности воспалительного процесса и медикаментозной терапии на
характер экспрессии.
Ключевые слова: толл-рецепторы, увеит, клетки периферической крови, проточная цитометрия. 
Авторы не имеют финансовых или имущественных
интересов в упомянутых материале и методах.
Офтальмохирургия.– 2015.– № 4.– С. 78-84.
Сокращения, используемые в статье
TLR – толл-рецепторы.
IgM – иммуноглобулины М.
IgG – иммуноглобулины G.
NK – естественные киллеры.
ПАМП (PAMP) – патоген-ассоциированные
молекулярные паттерны.
ДАМП (DAMP) – дистресс-ассоциированные
молекулярные паттерны.
78
ПРР (PRR)
ДК (DK) IL-6 IL-8 ЛПС (LPS) IFN ИФА – паттерн-распознающие рецепторы.
– дендритные клетки.
– интерлейкин 6.
– интерлейкин 8.
– липополисахариды.
– интерферон.
– иммуноферментный анализ крови.
ОФТАЛЬМОХИРУРГИЯ / 4•2015
Характеристика экспрессии толл-рецепторов на клетках периферической...
ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ГЛАЗА
ABSTRACT
Expression of Toll-like receptors on peripheral blood cells by uveitis of various genesis
N.A. Gavrilova1, N.S. Gadzhieva1, Z.G. Ivanova1, A.M. Sapozhnikov2, L.M. Kanevskiy2, David А. Howe3
1
2
3
The A.I. Evdokimov Моscow State University of Medicine and Dentistr y, Moscow;
The Shemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistr y of the Russian Academy of Sciences, Moscow;
The Stemedica Cell Technologies, Inc., Longevity Medicine LLC, USA
In the pathogenesis of uveitis the immune reactivity of the
organism, which includes links of congenital and acquired
(adaptive) immunity plays an important role. The congenital
immune system forms a first line of defense towards pathogenic
agents, penetrating into the human body.
Implementation of specificity innate immune system falls into
a family of evolutionarily conserved receptors, known as Toll-like
receptors (TLR), which play a crucial role in the early protection
of the organism against pathogens.
Purpose. To study and carry out comparative characteristics
of different types of expression of Toll-like receptors on peripheral
blood cells in the control and uveitis of various etiologies.
Material and methods. The study involved 15 patients (7
male and 8 female) aged 25-54 years, with a diagnosis of acute
or exacerbation of chronic uveitis of various etiologies. The
control group consisted of healthy persons aged 23-27 years
– 12 individuals. The level of expression of Toll-like receptor
was evaluated by the flow-cytometric analysis of leukocytes
stained according to the standard protocols by fluorescentlylabeled antibodies (HyCult Biotech, The Netherlands) to the
superficial (TLR2, TLR4, TLR6) or intracellular (TLR3, TLR9)
receptors.
Results. The obtained results were statistically significant
in the reduction of the TLR2 expression on B lymphocytes and
monocytes (p=0.02 and 0.014, respectively) more than two-times;
TLR4 and TLR6 – on monocytes (p=0.01 and 0.047, respectively)
in patients with infectious-toxic uveitis. In patients with severe
autoimmune uveitis (6 individuals) the TLR expression differed
by the polymorphism and tended to an increase compared to the
control.
Conclusion. In infectious uveitis the most toxic pathogenetic
importance is a significant inhibition of the TLR2, TLR4 and
TLR6 expression on peripheral blood monocytes, that is
probably due to the excessive stimulation of Toll-like receptors by
exogenous ligands prior to or at the onset of the disease, and the
development of state of hyposensitivity of Toll-like receptors, as a
defensive reaction of the uvea from the hyperinflammation. There
are required further studies of character of Toll-like receptors
expression in uveitis remission in order to assess the influence
of inflammatory activity and drug therapy on the TLR expression.
Key words: Toll-like receptors, uveitis, peripheral blood cells,
flow-cytometric analysis. 
No author has a financial or proprietary interest in any
material or method mentioned.
The Fyodorov Journal of Ophthalmic Surgery.– 2015.– No. 4.– P. 78-84.
Для корреспонденции:
Гаврилова Наталья Александровна, докт. мед. наук, профессор, зав. кафедрой глазных болезней;
Гаджиева Нурия Саниевна, канд. мед. наук, доцент кафедры глазных болезней;
Иванова Зоя Георгиевна, канд. мед. наук, доцент кафедры глазных болезней
ГБОУ ВПО «МГМСУ им. А.И. Евдокимова» Минздрава России
Адрес: 127473, Москва, ул. Делегатская, 20, стр. 1
Тел.: (495) 609-6700
E-mail: kafedra-eye@mail.ru
Сапожников Александр Михайлович, докт. биол. наук, профессор, зав. лабораторией клеточных взаимодействий;
Каневский Леонид Михайлович, канд. биол. наук, научн. сотрудник лаборатории клеточных взаимодействий
ФГБУН «Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова» РАН
Адрес: 117997, Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10
Тел.: (495) 335-0100. Факс: (495) 335-0812
E-mail: office@ibch.ru
David A. Howe, M.D.
Longevity Medicine LLC & Stemedica Cell Technolodies, USA
Stemedica Cell Technologies, Inc. 5375 Mira Sorrento Place, Suite 100 San Diego, CA, 92121
Phone: 858-658-0910. Fax: 858-658-0986
ОФТАЛЬМОХИРУРГИЯ / 4•2015
79
ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ГЛАЗА
Н
есмотря на широкий спектр
терапевтических и хирургических методов лечения, используемых в офтальмологии, их
эффективность остается низкой
при воспалительных процессах в
сосудистой оболочке глаза – увеитах, нередко протекающих с аутоиммунным компонентом. В патогенезе увеитов играет роль иммунная реактивность организма, которая включает звенья врожденного и
приобретенного (адаптивного) иммунитета.
Врожденная иммунная система
образует первую линию защиты на
пути патогенных агентов, проникающих в организм человека [1, 14,
16]. Рецепторы врожденной иммунной системы в сравнении с приобретенной иммунной системой более консервативны, не подвергаются соматической перестройке, их
разнообразие ограничено и является результатом филогенеза. Ответ врожденной иммунной системы
развивается быстрее и может приводить к быстрой элиминации патогена без участия приобретенного иммунитета.
Врождённый иммунитет реализуется через клеточные и гуморальные факторы. К факторам неспецифической иммунной защиты относятся гуморальные – интерфероны,
интерлейкины, хемокины, система
комплемента, естественные антитела IgM и IgG и клеточные – толл-рецепторы, рецепторы цитокинов,
естественные киллеры – NK-клетки,
моноциты и макрофаги, дендритные клетки [2, 3].
Для выявления патогенной инвазии врожденная иммунная система
высших позвоночных животных использует два способа – распознавание чужеродных для организма молекулярных структур инфекционного происхождения – патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (ПАМП) – компоненты клеточной стенки бактерий и грибов,
липополисахариды,
липопептиды, липопротеины, пептидогликан,
β-глюкагон либо микробные нуклеиновые кислоты или белки (флагеллин, профилин); второй способ
– распознавание эндогенных факторов, возникающих в ответ на инфекцию, распознавание «измененного своего» – дистресс-ассоции-
80
Н. А. Гаврилова, Н.С. Гаджиева, З.Г. Иванова, А.М. Сапожников, Л.М. Каневский
рованные молекулярные паттерны
(ДАМП). К эндогенным активаторам врожденного иммунитета относят белки теплового шока и мочевую кислоту, а также продукты некроза и апоптоза [4, 5].
В распознавании ПАМП и ДАМП
участвуют паттерн-распознающие
рецепторы (ПРР), в частности
толл-рецепторы, которые распознают разнообразные классы микроорганизмов
и
обеспечивают индивидуализированную реакцию врожденной иммунной системы на разные типы инфекций. Кроме того, ПРР реализуют свое влияние на приобретенный иммунитет
с помощью дендритных клеток, основной функцией которых является индукция и регуляция Т-клеточного ответа [5, 19].
TLR являются сигнальными патоген-распознающими рецепторами и
рассматриваются исследователями
как ключевые рецепторы врожденного иммунитета [3-5, 11]. TLR участвуют в распознавании микробных
компонентов и инициируют активацию внутриклеточных сигнальных путей, в результате чего происходит экспрессия генов цитокинов
(ФНОα, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-12, ИФНa/b),
ко-стимуляторных молекул и некоторых других генов.
Общим свойством всех толл-рецепторов является их способность
взаимодействовать со структурами
бактерий, грибов, вирусов и проводить в ядро активационный сигнал,
ведущий к повышению неспецифических защитных механизмов организма, в частности воспалительной реакции, что ведет в конечном
итоге к гибели и элиминации патогена. Толл-рецепторы экспрессированы в иммунокомпетентных тканях
(миндалины, лимфоузлы, селезенка,
тимус) и в покровных тканях (кожа,
бронхо-легочный, гастроинтестинальный и урогенитальный эпителий, эпителий роговицы и конъюнктивы, периваскулярные пространства радужки и цилиарного тела).
На клеточном уровне толл-рецепторы широко экспрессированы на
структурных клетках (эпителиальные, фибробласты, эндотелиальные) и на иммунных клетках – моноцитах, макрофагах, нейтрофилах, антигенпрезентирующих дендритных клетках (ДК), естественных
киллерах (NK-гранулярные лимфоциты периферической крови и лимфоидных органов) и в меньшей степени на эозинофилах, лимфоцитах
[4, 11, 15]. Между толл-рецепторами
и системой интерферонов имеется
взаимосвязь – пять типов TLR (TLR3,
4, 7, 8, 9) участвуют в индукции биосинтеза трёх основных классов интерферонов [4, 5].
В популяции антигенпрезентирующих клеток радужки, цилиарного тела, хориоидеи человека выявлены высокие уровни экспрессии
TLR4, которые связаны с липополисахаридным рецепторным комплексом бактерий посредством корецептора – CD14/MD-2-комплекса [6, 13,
14, 17]. В сосудистой оболочке человека в норме комплекс TLR4/CD14/
MD-2 относительно богато представлен в корне радужной оболочки и строме цилиарного тела, тогда
как в хориоидее и строме радужки
обнаруживается редко [8-10]. TLR4/CD14/MD-2-комплекс в увеальной ткани локализуется периваскулярно или субэпителиально. В противоположность другим тканям, например коже, в сосудистой оболочке этот комплекс не экспрессируется в эпителии и сосудистом эндотелии увеального тракта глаза [1, 10,
16]. Такая локализация толл-рецепторов в увеальной ткани является
наиболее оптимальной для связывания с липополисахаридным комплексом грамнегативных бактерий
гематоофтальмическим или интракоокулярным барьерами [10]. Локализация липополисахаридного рецепторного комплекса внутри сосудистой оболочки предполагает ответную реакцию только при проникновении микроорганизмов через гематоофтальмический и гистогематический барьеры.
Чувствительность ПРР должна поддерживаться на таком уровне, который обеспечивал бы достаточно надежное распознавание
микробов, но, по возможности, минимизировал повреждение тканей.
Неконтролируемая активация ПРР,
в том числе толл-рецепторов, потенциально опасна для организма,
поскольку может вести к гиперэргическому воспалению [5, 14]. Поэтому негативная регуляция паттерн-распознающих рецепторов
может, с одной стороны, ингибиОФТАЛЬМОХИРУРГИЯ / 4•2015
Характеристика экспрессии толл-рецепторов на клетках периферической...
ровать функцию ПРР и препятствовать адекватной реакции врожденной иммунной системы, а с другой
стороны, играть заметную роль в
лечении патологий, обусловленных гиперактивацией этих рецепторов [5, 10].
ЦЕЛЬ
Изучить и провести сравнительную характеристику экспрессии
различных видов толл-рецепторов
на клетках периферической крови
при увеитах различной этиологии.
ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ГЛАЗА
Таблица 1
Распределение пациентов в зависимости от этиологии увеита
Этиология увеита
Иридоциклит на фоне сенсибилизации
к токсоплазмозу, вирусу герпеса 1,
цитомегаловирусу, хламидиям
Болезнь Бехтерева
Гнойный иридоциклит
Сахарный диабет
Болезнь Рейтера
ОРВИ
Кератоиридоциклит (инфекционный)
Этиология не установлена
Количество пациентов
(глаз)
5 (7)
2 (3)
1 (1)
1 (2)
1 (1)
1 (1)
1 (2)
3 (4)
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
В исследовании участвовали 15
пациентов (7 мужчин и 8 женщин)
в возрасте 25-54 лет, которые лечились по поводу острого или обострения хронического увеита различной этиологии в Межотраслевом научно-техническом комплексе «Микрохирургия глаза». Тщательно изучалась история заболевания,
начало болезни, периоды обострения, результаты лечения. Пациентам
проводили ИФА крови с целью оценки характера возбудителя, активности процесса и иммунологического
статуса; офтальмологический статус
оценивали стандартными (биомикроскопия, офтальмоскопия в прямом и обратном виде) и дополнительными методами исследования
(В-сканирование глаза, оптическая
когерентная томография сетчатки
и зрительного нерва). Контрольную
группу составили здоровые лица в
возрасте 23-27 лет – 12 чел.
Кровь в количестве 15 мл забирали натощак в стерильную гепаринизированную пробирку. Уровень
экспрессии толл-подобных рецепторов оценивали с помощью проточно-цитометрического анализа
лейкоцитов, окрашенных по стандартным протоколам флуоресцентно-меченными антителами (HyCult
Biotech, The Netherlands) к поверхностным (TLR2, TLR4, TLR6) или
внутриклеточным (TLR3, TLR9) рецепторам. Для идентификации популяций моноцитов и В-лимфоцитов в этих экспериментах использовали метод двойного иммунофлуоресцентного окрашивания с приОФТАЛЬМОХИРУРГИЯ / 4•2015
менением антител к CD14 и CD19
(Сорбент, Москва) соответственно. Измерения проводили на проточном цитофлуориметре FACScan
(Becton Dickinson, США), анализировали не менее 10000 событий в
образце.
Статистический анализ проведен
с использованием программы «Биостат» по критериям Манна-Уитни
для сравнения непараметрических
данных в двух группах. P<0,05 – статистически достоверный результат
для всех групп.
РЕЗУЛЬТАТЫ
В таблице 1 представлено распределение пациентов в зависимости от этиологического фактора, вызвавшего увеит.
По локализации воспалительного процесса в сосудистой оболочке
глаза пациенты распределились следующим образом: у 10 пациентов (11
глаз) наблюдали передний увеит или
иридоциклит; у 5 больных (10 глаз)
имел место панувеит, на трех глазах
осложнившийся тракционной отслойкой сетчатки, на 3 глазах – нейроретинитом, на одном глазу – перипапиллярной экссудативной отслойкой сетчатки. На 2 глазах двух
пациентов увеит завершился субатрофией глаза. У 5 пациентов воспалительный процесс наблюдали
на обоих глазах.
Учитывая полиморфизм клинических проявлений, этиологических факторов и результаты проточ-
ной цитометрии, нами была проведена систематизация полученных
результатов исследования. Из анализа результатов исследования был
исключен 1 пациент с кератоиридоциклитом и 2 пациента с прогредиентным течением тяжелой формы
панувеита, осложнившегося субатрофией парного глаза; 1 пациентка
– с аутоиммунным иридоциклитом
на фоне сахарного диабета, 1 пациентка – с гнойным иридоциклитом на артифакичном глазу и 1 пациентка – с рецидивирующим иридоциклитом не установленного генеза. Результаты исследования этих
пациентов описаны как клинические случаи.
Сравнительная
характеристика экспрессии различных видов
толл-рецепторов на клетках периферической крови в контроле и при
увеитах различной этиологии представлена в табл. 2-6.
Представленные результаты исследования показали, что при увеитах различной локализации имела место тенденция к значительному снижению экспрессии всех типов
TLR (TLR2, 3, 4, 6, 9) на лимфоцитах,
моноцитах и нейтрофилах по сравнению с контролем. Статистически
достоверные результаты получены
по снижению экспрессии TLR2 на
В-лимфоцитах и моноцитах (р=0,02
и 0,014 соответственно) более чем в
2 раза; TLR4 и TLR6 – на моноцитах
(р=0,01 и 0,047 соответственно). Выявлена тенденция к большему снижению экспрессии TLR2, 4, 6 (более чем в 2 раза) и менее выражен-
81
ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ГЛАЗА
Н. А. Гаврилова, Н.С. Гаджиева, З.Г. Иванова, А.М. Сапожников, Л.М. Каневский
Таблица 2
Сравнительная характеристика экспрессии ТLR2
на клетках периферической крови в контроле и при увеите
Лимфоциты
(CD19)
Моноциты
(CD14)
Нейтрофилы
Контроль (N=13)
(M±φ (m))
Увеит (N=9)
(M±φ (m))
Критерий
Манна-Уитни (р)
0,72±0,57 (0,16)
0,3±0,3 (0,09)
0,02*
137,2 ±58,2 (16,1)
71,62±35,15 (11,72)
0,014*
20,93±31,7 (8,8)
8,2±6,8 (2,3)
0,9
Таблица 3
Сравнительная характеристика экспрессии ТLR4
на клетках периферической крови в контроле и при увеите
Лимфоциты
(CD19)
Моноциты
(CD14)
Нейтрофилы
Контроль (N=13)
(M±φ (m))
Увеит (N=9)
(M±φ (m))
Критерий
Манна-Уитни (р)
1,33±1,19 (0,33)
0,74±0,73 (0,24)
0,39
165,5±158,3 (43,9)
54,12±27,54 (9,18)
0,01*
18,75±21,49 (5,96)
10,84±6,7 (2,23)
0,56
Таблица 4
Сравнительная характеристика экспрессии ТLR6
на клетках периферической крови в контроле и при увеите
Лимфоциты
(CD19)
Моноциты
(CD14)
Нейтрофилы
Контроль (N=13)
(M±φ (m))
Увеит (N=9)
(M±φ (m))
Критерий
Манна-Уитни (р)
0,57±0,61 (0,17)
0,21±0,17 (0,06)
0,09
21,2±16,96 (4,7)
9,37±9 (3)
0,047*
5,9±10,2 (2,8)
1,84±1,38 (0,46)
0,32
ное снижение TLR3 и 9 (менее чем в
2 раза) на клетках периферической
крови (табл. 2-6).
Результаты исследования образцов крови 6 пациентов представлены отдельно.
У пациентки Г., 26 лет, с тяжелым
течением сахарного диабета 1 типа,
характеризующимся аутоиммунным
полиорганным поражением, в том
числе двусторонним иридоциклитом, наблюдалось повышение экспрессии на лимфоцитах всех типов
TLR (2, 3, 4, 6, 9); снижение экспрессии TLR2 и 4 на моноцитах и нейтрофилах и увеличение экспрессии
82
TLR6, 3, 9 на моноцитах и нейтрофилах. В последующем пациентка умерла от диабетической нефропатии.
У двух пациентов с двусторонним
панувеитом прогредиентного течения, осложнившимся субатрофией
одного глаза, наблюдали рост экспрессии TLR2, 6 на лимфоцитах, моноцитах и нейтрофилах, TLR3 – на
лимфоцитах, TLR4 – на лимфоцитах и нейтрофилах; снижение экспрессии TLR9 – на всех типах клеток,
TLR3 – на моноцитах и нейтрофилах.
У пациента Д., 50 лет, с диагнозом
двустороннего рецидивирующего
кератоиридоциклита на фоне хла-
мидийной инфекции отмечали снижение экспрессии TLR2, 4, 6, 9 и повышение TLR3 на всех типах клеток
периферической крови.
Четвертая пациентка Ю. с диагнозом рецидивирующего негнойного
иридоциклита с доброкачественным течением неясного генеза показала значительное повышение, почти в 2 раза, всех типов TLR на лимфоцитах, моноцитах и нейтрофилах.
У пациентки Р. с диагнозом гнойного иридоциклита на артифакичном глазу мы отметили повышение
экспрессии всех TLR на лимфоцитах,
TLR2, 3, 9 – на моноцитах, TLR6, 3, 9
– на нейтрофилах; и снижение экспрессии TLR4 – на моноцитах.
ОБСУЖДЕНИЕ
Таким образом, обобщая представленные данные, можно заключить, что из всех изученных толл-рецепторов наибольшее патогенетическое значение имеет достоверное
угнетение экспрессии TLR2, TLR4 и
TLR6 – на моноцитах периферической крови. TLR2, TLR4 активируются липополисахаридным комплексом грамнегативных и грампозитивных микроорганизмов посредством корецепторов (CD14/MD-2комплекс), их экспрессия увеличивается под действием провоспалительных цитокинов. TLR6 активируются бактериальными липопротеинами грамнегативных и грампозитивных бактерий и функционирует
в виде гетеродимера с TLR2 [5, 10, 17].
В основной группе, где имело место
угнетение экспрессии TLR2, TLR4 и
TLR6, наблюдали увеит инфекционно-токсического рецидивирующего характера (8 случаях из 9). Кроме того, пациенты получали активную стероидную противовоспалительную терапию. Угнетение экспрессии TLR2, TLR4 и TLR6, возможно, связано с чрезмерной стимуляцией толл-рецепторов экзогенными лигандами до начала или в дебюте заболевания и развитием состояния рефрактерности или гипочувствительности толл-рецепторов
в дальнейшем развитии заболевания
на фоне проводимой терапии стероидными противовоспалительными препаратами. В зарубежной литературе это состояние носит наОФТАЛЬМОХИРУРГИЯ / 4•2015
Характеристика экспрессии толл-рецепторов на клетках периферической...
звание «state of endotoxin tolerance»
[12, 13, 19]. Это состояние индуцируется глюкокортикоидами и в ряде
случаев является защитной реакцией от гиперэргического воспаления,
по данным литературы носит транзиторный характер. Чувствительность клеток к стимуляции ПАМП
восстанавливается через 48-72 часа
[5, 6, 18].
В случаях прогредиентного или
гиперактивного течения панувеита
(у 2 пациентов) мы наблюдали рост
экспрессии TLR2, 6 – на лимфоцитах,
моноцитах и нейтрофилах, TLR3 –
на лимфоцитах, TLR4 – на лимфоцитах и нейтрофилах, что, возможно,
свидетельствует о гиперэргической
воспалительной реакции с вовлечением в процесс всего сосудистого
тракта. При аутоиммунном иридоциклите на фоне сахарного диабета
также имело место активное прогредиентное воспаление с повышением
экспрессии на В-лимфоцитах всех
типов TLR (TLR2, 3, 4, 6, 9); увеличение экспрессии TLR6, 3, 9 – на моноцитах и нейтрофилах. Экспрессия
TLR2 и 4 была снижена на моноцитах и нейтрофилах. По нашему мнению угнетение экспрессии TLR2 и 4
связано в данном клиническом случае с состоянием рефрактерности
как защитной реакции переднего
отрезка сосудистой оболочки глаза от гиперэргического воспаления.
Рост экспрессии всех толл-рецепторов на лимфоцитах свидетельствует
об активности самого аутоиммунного процесса.
ВЫВОДЫ
1. При инфекционно-токсическом
увеите выявлено достоверное угнетение экспрессии TLR2, TLR4 и TLR6 –
на моноцитах и TLR2 – на В-лимфоцитах периферической крови. Угнетение экспрессии TLR2, TLR4 и TLR6,
возможно, связано с чрезмерной стимуляцией толл-рецепторов и развитием состояния рефрактерности
толл-рецепторов в активной стадии
заболевания на фоне проводимой
противовоспалительной
терапии
стероидными препаратами.
2. Наибольшее патогенетическое
значение в развитии инфекционно-токсического увеита имеет динамическое изменение экспрессии
ОФТАЛЬМОХИРУРГИЯ / 4•2015
ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ГЛАЗА
Таблица 5
Сравнительная характеристика экспрессии ТLR3
на клетках периферической крови в контроле и при увеите
Лимфоциты
(CD19)
Моноциты
(CD14)
Нейтрофилы
Контроль (N=13)
(M±φ (m)
Увеит (N=9)
(M±φ (m)
Критерий
Манна-Уитни (р)
14,1±10,26 (2,8)
9,4±6,36 (2,12)
0,5
43,33±26,3 (7,3)
39,77±24,46 (8,15)
0,97
346,6±186 (51,6)
279,2±143 (47,68)
0,69
Таблица 6
Сравнительная характеристика экспрессии ТLR9
на клетках периферической крови в контроле и при увеите
Лимфоциты
(CD19)
Моноциты
(CD14)
Нейтрофилы
Контроль (N=13)
(M±φ (m)
Увеит (N=9)
(M±φ (m)
Критерий
Манна-Уитни (р)
5,9±4,5 (1,25)
3,39±2,39 (0,8)
0,37
28,9±12,9 (3,6)
23,66±17,26 (5,75)
0,33
211,1±135,7 (37,6)
206,1±206,7 (68,9)
0,64
* p<0,05.
TLR2, TLR4, TLR6 на моноцитах периферической крови.
3. При аутоиммунном увеите, характеризующимся прогредиентным
течением, выявлена тенденция к повышению экспрессии TLR2, TLR4,
TLR6, TLR3 на В-лимфоцитах.
4. Требуются дальнейшие исследования характера экспрессии
толл-рецепторов в неактивной стадии рецидивирующего увеального
процесса на большем количестве
пациентов, а также проведение сравнительной оценки характера экспрессии различных видов толл-рецепторов в активной и неактивной
стадии увеита с целью оценки влияния активности воспалительного
процесса и медикаментозной терапии на характер экспрессии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гаджиева Н.С., Саидов М.З., Гаврилова Н.А. и др. Толл-рецепторы – распознающие рецепторы врожденной
иммунной системы – и глаз. Литературный обзор // Офтальмохирургия. –
2012. – № 3. – С. 77-83.
2. Титов Л.П. Иммунология. Терминологический словарь. – Минск: Беларуская навука, 2004. – 512 с.
3. Титов Л.П., Карпов И. А. Противовирусный иммунитет: молекулярно-клеточные механизмы, закономерности развития и иммунопатология //
Белорусский медицинский журнал. –
2007. – № 1. – С. 5-8.
4. Хаитов P.M., Игнатьева Г. А., Сидорович И.Г. Иммунология. – М.: Медицина, 2002. –536 с.
5. Хаитов Р.М., Пащенков М.В.,
Пинегин Б.В. Биология рецепторов
врожденной иммунной системы // Физиология и патология иммунной системы. – 2008. – Т. 12, № 6. – С. 3-28.
6. Allensworth J.J., Planck S.R., Rosenbaum J.T., Rosenzweig H.L.. Investigation
of the differential potentials of TLR agonists to elicit uveitis in mice // J. Leukoc.
Biol. – 2011. – Vol. 90, № 6. – P. 1159-1166.
7. Boehme K.W., Compton T. Innate
sensing of viruses by toll-like receptors //
J. Virol. – 2004. – Vol. 78. – P. 7867-7873.
8. Brito B.E., Zamora D.O., Bonnah P.A.
et al. Toll-like receptor 4 and CD14 Expression in human ciliary body and TLR4 in human iris еndothelial cells // Exp. Eye Res. –
2004. – Vol. 79, № 2. – P. 203-208.
9. Chang J.H., Hampartzoumian T.,
Everett B. et al. Changes in Toll-like
Receptor (TLR)-2 and TLR4 Expression
and Function but Not Polymorphisms
83
ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ГЛАЗА
Are Associated with Acute Anterior Uveitis
// Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. – 2007. –
Vol. 48, № 4. – P. 1711-1717.
10. Chang J.H., McCluskey P., Wakefield D. Expression of Toll-like Receptor 4
and Its Associated Lipopolysaccharide Receptor Complex by Resident Antigen-Presenting Cells in the Human Uvea // IOVS. –
2004. – Vol. 45, № 6. – P. 1871-1878.
11. Chang
J.H.,
McCluskey
P.,
Wakefield D. Toll-like receptors in ocular
and immunopathogenesis of inflammatory
eye disease // Br. J. Ophthalmol. – 2006. –
Vol. 90, № 1. – P. 103-108.
12. Chen W., Hu X., Zhao L. et al.
Expression of toll-like receptor 4 in
uvea-resident tissue macrophages during
endotoxin-induced uveitis // Mol. Vis. –
2009. – Vol. 15. – P. 619-628.
84
Н. А. Гаврилова, Н.С. Гаджиева, З.Г. Иванова, А.М. Сапожников, Л.М. Каневский
13. Hornung V., Rothenfusser S., Britsch
S. et al. Quantitative expression of tolllike receptor 1-10 mRNA in cellular
subsets of human peripheral blood
mononuclear cells and sensitivity to CpG
oligodeoxynucleotides // J. Immunol. –
2002. – Vol. 168. – P. 4531-4537.
14. Kenneth L.R., Hearn R. A., Chen C. J.
et al. Natural endogenousadjuvants
// Springer Semin. Immunol. – 2005 –
Vol. 26. – P. 231-246.
15. Mai K., Chui J. J., Girolamo N. et al.
Role of toll-like receptors in human iris
pigment epithelial cells and their response
to
pathogen-associated
molecular
patterns // J. Inflamm (Lond). – 2014. –
Vol. 11. – P. 20.
16. Micera A.,
Stampachiacchiere B.,
Aronni S. Toll-like receptors and the eye
// Curr. Opin Allergy Clin. Immunol. –
2005.  – Vol. 5, № 5. – P. 451-458.
17. Su S.B., Silver P.B., Grajewski R.S. et
al. Essential role of the MyD88 pathway,
but nonessential roles of TLRs 2, 4, and
9, in the adjuvant effect promoting Th1mediated autoimmunity // J. Immunol. –
2005. – Vol. 175, № 10. – P. 6303-6310.
18. Willermain F., Rosenbaum J.T., Bodaghi B. et al. Interplay between
innate and adaptive immunity in the
development of non infectious uveitis
// Prog. Retin. Eye Res. – 2012. – Vol. 31,
№ 2. – P. 182-194.
19. Ziegler-Heitbrock H.W. Molecular
mechanism in tolerance to lipopolysaccharide // J. Inflamm. – 1995. – Vol. 45,
№ 1. – P. 13-26.
Поступила 03.06.2015
ОФТАЛЬМОХИРУРГИЯ / 4•2015