1_2013_

УДК 612.112.94:615.916] – 092.9
Шейбак В.М., Павлюковец А.Ю.
Гродненский государственный медицинский университет, Гродно, Беларусь
Sheibak V.M., Pavlyukovets A.Y.
Grodno State Medical University, Grodno, Belarus
Влияние природных иммуномодуляторов
на метаболическую активность лимфоцитов
тимуса и селезенки интактных и получавших
ацетат свинца животных
The influence of natural immunomodulators on metabolic activity
of lymphocytes isolated from intact animals or animals exposed
to the lead acetate
______________________ Резюме __________________________________________________________________________
Повышение функциональной активности лимфоцитов сопровождается увеличением поглощения и утилизации глюкозы. Скорость поглощения глюкозы может служить маркером
активации лимфоцитов. Цель данной работы – тестирование функциональной активности
лимфоцитов интактных и подвергнутых свинцовой интоксикации животных по способности
клеток поглощать глюкозу из инкубационной среды. Проведено изучение иммуномодулирующей активности аминокислотной композиции «Тритарг» и экстракта коры ольхи – Орегонина.
Показано, что предлагаемый метод оценки функционального состояния лимфоцитов позволяет достаточно эффективно тестировать их активность, а также оценивать иммуномодулирующую активность химических соединений. С использованием лимфоцитов, выделенных из
тимуса и селезенки, доказано, что аминокислотная композиция «Тритарг» и диарилгептаноид
Орегонин обладают иммунотропной активностью.
Ключевые слова: лимфоциты, глюкоза, свинцовая интоксикация, аминокислоты, Орегонин.
______________________ Resume __________________________________________________________________________
The increase of lymphocytes functional activity is accompanied by the increase in the absorption and utilization of glucose. The rate of glucose absorption can serve the marker of lymphocyte
activation. The aim of this study was to test the lymphocytes functional activity in the ability to
absorb glucose from the incubation medium of the animals subjected to lead intoxication. Immunomodulatory activity amino acid composition «Tritarg» and Oregonin have been study. It is shown
that the proposed method of assessing the functional state lymphocytes assessment of can effec46
Экспериментально-лабораторные исследования
tively test their activity, and evaluate the immunomodulatory activity of chemical compounds. With
the use of lymphocytes isolated from the thymus and spleen, it has been proved that the amino acid
composition «Tritarg» and diarilgeptanoid Oregonin have immunotropic activity.
Key words: lymphocytes, glucose, lead intoxication, amino acids, Oregonin.
_________________________________________________________________________________________________
 ВВЕДЕНИЕ
Клетки иммунной системы (лимфоциты) – одни из наиболее метаболически активных и быстро пролиферирующих клеток в организме.
Иммунный ответ основывается на распознавании Т-лимфоцитами комплекса антигенного эпитопа с молекулой главного комплекса гистосовместимости, который при получении дополнительных полноценных
сигналов обеспечивает их активацию, дифференцировку и пролиферацию. Все эти процессы, а также кооперация клеток иммунной системы реализуются с участием цитоплазматических протеинкиназ, которые фосфорилируют или дефосфорилируют белки, передавая сигнал
внутрь клетки с последующей реализацией ее функции.
Повышение функциональной активности лимфоцитов сопровождается изменением направленности метаболических потоков. В первую
очередь изменяются транспортные процессы, происходящие, как правило, с участием катионов одно- или двухвалентных металлов (К+, Na+, Ca2+),
обеспечивающих перенос в клетку аминокислот, глюкозы, компонентов
для синтеза нуклеотидов. Активация синтеза макромолекул в цитоплазме и ядре клеток приводит к резкому увеличению (в 11 раз) числа молекул главного комплекса гистосовместимости [10]. Обеспечение данных
процессов необходимым количеством энергии путем стимуляции окислительного фосфорилирования является важным для полноценной реализации Т-лимфоцитами своих функций [20]. Очевидно, что изменение
энергетического статуса коррелирует с пролиферацией и функциональной активностью лимфоцитов [6, 17]. Известно, что ведущие метаболические пути, обеспечивающие лимфоциты необходимым количеством
АТФ, – гликолиз и глутаминолиз. Так, при инкубации тимоцитов с конканавалином А 90% глюкозы, содержащейся в инкубационной среде, катаболизируется до лактата, тогда как в отсутствие митогена это значение не
превышает 56%. Авторы указывают, что скорость поглощения глюкозы
может служить маркером функционального состояния лимфоцитов [5].
Несмотря на большую биосоциальную значимость изучения последствий острой и хронической интоксикации свинцом, многие аспекты
влияния этого тяжелого металла на иммунную систему не выяснены. Катионы свинца (Pb) модулируют функциональную активность иммунокомпетентных клеток, повышая экспрессию молекул главного комплекса гистосовместимости II класса на поверхности В-лимфоцитов и способствуя
кооперации В-клеток с Т-лимфоцитами, что в конечном итоге создает
условия для активации процесса пролиферации. Одновременно Pb
способствует дифференциации В-лимфоцитов, увеличивая число плазмоцитов и продукцию IgE [12]. Между тем одновременно он угнетает
способность клеток отвечать на дополнительную стимуляцию митогенами. Доказано, что катионы свинца тормозят стимулированную
«Лабораторная диагностика. Восточная Европа» № 1 (05), 2013
Важнейшее значение
в функционировании
всех клеток организма,
в том числе и клеток
иммунной системы,
имеет степень
обеспеченности
компонентами,
принимающими
участие в синтезе
клеточной мембраны
и органелл,
а также катионами,
необходимыми для
активации ферментов,
и энергетическими
субстратами,
требуемыми для
осуществления многих
внутриклеточных
реакций [9].
47
Влияние природных иммуномодуляторов на метаболическую активность
лимфоцитов тимуса и селезенки интактных и получавших ацетат свинца животных
Орегонин –
иммуномодулятор,
усиливающий
функциональную
активность макрофагов
и натуральных
киллеров.
48
липополисахаридом пролиферацию лимфоцитов мышей. Показано, что
лимфоциты, выделенные из крови лиц, находящихся в рабочей зоне с
концентрацией свинца в воздухе 64–266 мкг/м3, становятся менее чувствительны к стимуляции фитогемагглютинином и конканавалином А,
при этом степень супрессии зависит от продолжительности экспозиции
свинцом [1]. Таким образом, в механизме развития свинцовой интоксикации наблюдается комбинация иммуносупрессивного и иммуномодулирующего действия. Очевидно, что превалирование какого-либо из этих
эффектов будет определять общую клиническую картину поражения.
Аминокислоты являются не только субстратами в биосинтезе белка,
но и регуляторами многих метаболических путей, включая воздействие
на факторы транскрипции и инициацию белкового синтеза [2]. Очевидно, что ряд протеиногенных аминокислот (особенно аргинин и триптофан) выполняют функции регуляторов иммунных процессов, включая
экспрессию генов и продукцию цитокинов, активацию лимфоцитов,
медиаторов миграции лейкоцитов и фагоцитоза, участвуют в формировании внутриклеточного окислительно-восстановительного потенциала [23]. Таурин и катионы цинка оказывают взаимодополняющее действие, являясь регуляторами потока Са2+, обладая антиоксидантной
функцией и влиянием на факторы транскрипции и соединения, регулирующие клеточный цикл [18].
Ранее нами экспериментально было показано, что после введения
животным аминокислотной композиции, состоящей из аргинина, таурина, триптофана и аспартата цинка («Тритарг»), чрезвычайно быстро
возникают изменения концентраций свободных протеиногенных аминокислот в сыворотке крови и в лимфоцитах, выделенных из органов
иммунной системы, общая направленность которых свидетельствует
об активации метаболизма в клетках [3]. Этот процесс сопровождается
быстрым использованием аминокислот тканями, что подтверждается
снижением концентрации значительного числа протеиногенных аминокислот в лимфоцитах печени и тимуса уже через 24 ч после введения
«Тритарга». В лимфоцитах, выделенных из крови и селезенки, напротив,
имела место тенденция к повышению концентрации протеиногенных
аминокислот. При этом наибольшая степень колебаний концентрации
свободных протеиногенных аминокислот наблюдается именно в лимфоцитах селезенки, что, вероятно, обусловлено интенсивным синтезом
иммуноглобулинов и других медиаторов клеток иммунной системы [4].
В последнее время интерес специалистов привлекают биологически
активные вещества растительного происхождения. Это относится и к
классу соединений, выделяемых главным образом из древесины лиственных пород деревьев. Орегонин (1,7-бис-(3,4-дигидроксифенил)-гептан-3он-5-О-в-D-ксилопиронозид) – диарилгептаноид, выделенный из коры и
листьев ольхи [11]. Орегонин in vivo увеличивает скорость активации и
цитотоксическую активность натуральных киллеров (NK), которые являются основным звеном противоопухолевого иммунитета, оказывая тем
самым противоопухолевый эффект. При атипическом дерматите назначение Орегонина приводит к снижению повышенных уровней IgЕ и цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-10 и ИЛ-13), нормализует количество эозинофилов [14]. Два ароматических кольца в структуре Орегонина обуславливают его антиоксидантное действие [15, 22]. Кроме того, введение Орегони-
Экспериментально-лабораторные исследования
на снижает активность циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2) [16]. Показан антибактериальный эффект Орегонина в отношении Staphylococcus aureus [21].
Введение Орегонина мышам с меланомой B16-F10 противодействует
метастазированию [13]. Известно, что Орегонин усиливает чувствительность клеток к глюкозе. При добавлении Орегонина наблюдается усиление поглощения глюкозы клетками гепатокарциномы (HepG2). В основе
этого эффекта лежит увеличение Орегонином экспрессии мРНК инсулинового рецептора (IR) и субстрата инсулинового рецептора 1 (IRS-1) [24].
 ЦЕЛЬ
Тестирование функциональной активности лимфоцитов животных,
подвергнутых свинцовой интоксикации, а также установление иммуномодулирующей активности аминокислотной композиции «Тритарг» и
Орегонина.
 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Для анализа использовали лимфоциты, выделенные из тимуса и
селезенки белых беспородных крыс-самок массой 100–120 г. Крысам
опытной группы вводили ацетат свинца однократно в дозе 150 мг/кг
массы тела. Животных декапитировали на 11 сутки после введения
свинца. Тимус и селезенку измельчали ножницами, затем тщательно
гомогенизировали в ручном стеклянном гомогенизаторе Поттера. Лимфоциты выделяли из гомогенатов тканей селезенки, тимуса в градиенте
плотности урографина (с = 1,077). Гомогенаты органов в объеме 4 мл
наслаивали на урографин (2 мл) с последующим центрифугированием
при 4000 об/мин 5 мин (центрифуга MPW-6). Лимфоциты отбирались в
сухую коническую центрифужную пробирку. К взвеси лимфоцитов добавляли 2–3 мл физиологического раствора, тщательно перемешивали и центрифугировали при 1500 об/мин 5–7 мин (центрифуга MPW-6).
Надосадочную жидкость удаляли, а процедуру отмывки повторяли еще
один раз. Затем устанавливали количественное содержание лимфоцитов в камере Горяева.
Лимфоциты, выделенные из тимуса и селезенки, инкубировали в
иммунологическом планшете в течение 30 мин в среде, содержащей
фосфатный буферный раствор и глюкозу в концентрации 5,3 ммоль/л.
В инкубационную среду вносили аминокислотную композицию «Тритарг» (аргинин, таурин, триптофан и цинка аспарагинат) в концентрациях
0,01 или 0,001 г/л среды или Орегонин (диарилгептаноид, выделенный
из коры ольхи) – 0,01 г/л. По окончании инкубации в среде определяли
оставшееся содержание глюкозы глюкозооксидазным методом, затем
вычисляли поглощенное количество глюкозы (ммоль/109 клеток/30 мин).
Количество поглощенной лимфоцитами селезенки глюкозы колебалось
в пределах от 0,75 ± 0,10 до 1,33 ± 0,12 ммоль/109 клеток/30 мин, а лимфоцитами тимуса – от 0,34 ± 0,029 до 1,07 ± 0,10 ммоль/109 клеток/30 мин.
В процессе выполнения исследования рассчитывались средние значения, полученные при анализе 3 идентичных проб.
Анализ данных выполнен с использованием пакета программ
Statistica 6.0 и Microsoft Excel 2002. Были вычислены средняя арифметическая (Х), средняя ошибка средней (Sx) и достоверность различий
средних величин (р), существенность которой считается, если величина
«Лабораторная диагностика. Восточная Европа» № 1 (05), 2013
49
Влияние природных иммуномодуляторов на метаболическую активность
лимфоцитов тимуса и селезенки интактных и получавших ацетат свинца животных
этого показателя меньше 0,05 (р < 0,05). Достоверность различий значений определяли по таблице Стьюдента.
 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Орегонин в дозе 0,01 г/л на 293% повышал способность лимфоцитов селезенки интактных крыс поглощать глюкозу (рис. 1), тогда как инкубация этих лимфоцитов с «Тритаргом» не вызывала значимых колебаний утилизации глюкозы.
Однократное введение животным ацетата свинца (150 мг/кг) показало, что на 11 сутки количество глюкозы, поглощенной лимфоцитами
селезенки, увеличивается на 117,6% по сравнению с лимфоцитами интактных крыс (рис. 1).
Добавление «Тритарга» в дозах 0,01 или 0,001 г/л в инкубационную
среду, содержащую лимфоциты селезенки крыс, получавших ацетат
свинца, увеличивало количество поглощаемой глюкозы на 118%.
Инкубация лимфоцитов селезенки крыс, получавших ацетат свинца,
в присутствии Орегонина (0,01 г/л среды) повышала количество утилизируемой глюкозы на 71,1 % (рис. 1, 2).
Внесение в инкубационную среду с лимфоцитами тимуса интактных крыс «Тритарга» (0,01 или 0,001 мг/мл/среды) или Орегонина
(0,01 мг/мл/среды) не привело к достоверному изменению количества
поглощенной глюкозы.
Инкубация лимфоцитов тимуса крыс, получавших однократно внутрижелудочно ацетат свинца в дозе 150 мг/кг, с «Тритаргом»
(0,01 г/л среды) выявила увеличение количества поглощенной глюкозы
на 182,2%. В свою очередь, добавление в среду Орегонина (0,01 г/л среды) на 179,6% стимулировало поступление глюкозы в клетки (рис. 3, 4).
Известно, что митогенная стимуляция спленоцитов и тимоцитов
приводит к увеличению анаэробного гликолиза и тем самым – к ускорению поглощения глюкозы из среды [19]. Используемый нами метод
оценки функционального состояния клеток иммунной системы позво-
500
%
«Тритарг» 0,01 мг/мл
Орегонин 0,01 мг/мл
400
Свинец 150 мг/кг
300
«Тритарг» 0,01 мг/мл +
+ Свинец 150 мг/кг
200
«Тритарг» 0,001 мг/мл +
+ Свинец 150 мг/кг
100
0
Орегонин 0,01 мг/мл +
+ Свинец 150 мг/кг
Лимфоциты селезенки
Рис. 1. Поглощение глюкозы лимфоцитами, выделенными из селезенки интактных крыс и крыс,
получавших однократно свинец в дозе 150 мг/кг, при внесении в инкубируемую среду «Тритарга»
или Орегонина (контроль – 100%)
50
Экспериментально-лабораторные исследования
%
100
100,4%
92,5%
78,6%
«Тритарг» 0,01 мг/мл
«Тритарг» 0,001 мг/мл
Орегонин 0,01 мг/мл
0
Лимфоциты селезенки
Рис. 2. Поглощение глюкозы лимфоцитами, выделенными из селезенки крыс, получавших
однократно свинец в дозе 150 мг/кг, при внесении в инкубируемую среду «Тритарга»
или Орегонина (свинец – 100%)
ляет достаточно эффективно тестировать лимфоциты, выделенные от
животных с различной экспериментальной патологией, а также оценивать иммуномодулирующую активность химических соединений.
В ранее проводимых исследованиях по оценке способности лимфоцитов поглощать глюкозу использовали метод с [U-14C]-глюкозой с
последующим определением внутриклеточной радиоактивности. К сожалению, авторы не учитывали имеющий место метаболизм глюкозы
в клетке [5, 7], что не позволяет считать его полноценным для оценки
функциональной активности клеток иммунной системы.
В состоянии
стресса функция
иммунной системы
подавляется, что
отражает способность
глюкокортикоидов
снижать потребление
глюкозы лимфоцитами
тимуса [8].
 ВЫВОДЫ
1. Инкубация лимфоцитов тимуса и селезенки интактных животных с
«Тритаргом» (0,01 или 0,001 г/л среды) не сопровождается изменениями утилизации глюкозы.
2. Внесение в среду Орегонина (0,01 г/л среды) повышает количество глюкозы, поглощаемой лимфоцитами селезенки интактных
300
%
«Тритарг» 0,01 мг/мл
Орегонин 0,01 мг/мл
Свинец 150 мг/кг
200
«Тритарг» 0,01 мг/мл +
+ Свинец 150 мг/кг
«Тритарг» 0,001 мг/мл +
+ Свинец 150 мг/кг
100
Орегонин 0,01 мг/мл +
+ Свинец 150 мг/кг
0
Лимфоциты тимуса
Рис. 3. Поглощение глюкозы лимфоцитами, выделенными из тимуса интактных крыс и крыс,
получавших однократно свинец, при внесении в инкубируемую среду «Тритарга» или Орегонина
(контроль – 100%)
«Лабораторная диагностика. Восточная Европа» № 1 (05), 2013
51
Влияние природных иммуномодуляторов на метаболическую активность
лимфоцитов тимуса и селезенки интактных и получавших ацетат свинца животных
%
150
100
128,8%
127,6%
95,3%
«Тритарг» 0,01 мг/мл +
+ Свинец 150 мг/кг
«Тритарг» 0,001 мг/мл +
+ Свинец 150 мг/кг
50
«Орегонин» 0,01 мг/мл +
+ Свинец 150 мг/кг
0
Лимфоциты тимуса
Рис. 4. Поглощение глюкозы лимфоцитами, выделенными из тимуса крыс, получавших однократно
свинец, при внесении в инкубируемую среду «Тритарга» или Орегонина (свинец – 100%)
Орегонин
(0,01 г/л среды)
увеличивает
активность как
лимфоцитов селезенки,
так и лимфоцитов
тимуса у крыс,
подвергавшихся
действию ацетата
свинца.
животных, тогда как инкубация лимфоцитов тимуса с Орегонином
не вызывает подобных изменений.
3. Острая свинцовая интоксикация (ацетат свинца внутрижелудочно
однократно в дозе 150 мг/кг массы) увеличивает функциональную
активность лимфоцитов селезенки, при этом не изменяется количество глюкозы, утилизируемое лимфоцитами тимуса.
4. Добавление в инкубационную среду к лимфоцитам селезенки крыс,
получавших однократно ацетат свинца, «Тритарга» в дозах 0,01 или
0,001 г/л среды приводит к повышению поглощаемой ими глюкозы, хотя при инкубации лимфоцитов тимуса увеличение поглощения глюкозы наблюдается только при внесении «Тритарга» в дозе
0,01 г/л среды.
5. Анализ иммуномодулирующего действия «Тритарга» и Орегонина in
vitro на функциональную активность лимфоцитов животных, подвергнутых острой свинцовой интоксикации, указывает на целесообразность дальнейшего изучения этих соединений в условиях in vivo.
 ЛИТЕРАТУРА
1. Стежка, В.А. К вопросу об иммунотоксическом действии соединений тяжелых металлов /
В.А. Стежка, Н.Н. Дмитруха, Т.Н. Покровская и др. // Современные проблемы токсикологии. –
2003. – № 1. – С. 22–28.
2. Павлюковец, А.Ю. Влияние аминокислотно-микроэлементного комплекса на уровень
протеиногенных аминокислот в сыворотке крови, лимфоцитах тимуса и селезенки крыс /
А.Ю. Павлюковец, М.В. Горецкая, В.М. Шейбак и др. //. Материалы ежегодной итоговой научной конференции «Актуальные проблемы медицины». – Гродно, 2010. – С. 73–76.
3. Шейбак, В.М. Влияние тритарга на спектр протеиногенных аминокислот в сыворотке крови и лимфоцитах / В.М. Шейбак, А.Ю. Павлюковец, М.В. Горецкая и др. // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2011. – № 9. – С. 32–34.
4. Шейбак, В.М. Влияние композиции «Тритарг» на концентрацию свободных аминокислот в лимфоцитах и сыворотке крови крыс / В.М. Шейбак, А.Ю. Павлюковец, М.В. Горецкая и др. // Весці
Нацыянальнай акадэміі навук Беларусі. Серыя медыцынскіх навук. – 2012. – № 1. – С. 85–89.
52
Экспериментально-лабораторные исследования
5. Brand, K. Glutamine and glucose metabolism during thymocyte proliferation / K. Brand //
Вiochem.J. – 1985. – Vol. 228. – P. 353–361.
6. Buttgereit, F. A hierarchy of ATP-consuming processes in mammalian cells / F. Buttgereit,
M.D. Brand // Biochem J. – 1995. – Vol. 312. – P.163–167.
7. Calder, P.C. Fuel utilization by cells of the immune system / P.C. Calder // Nutrition Society. – 1995. –
Vol. 54. – P. 65–82.
8. Feldman, M.J. Uptake of 3-0-methyl-14C-D-glucose by rat thymic lymphocytes: insensitivity to cortisol and inhibitors of ribonucleic acid and protein synthesis, and senstivity to cytochalasin / M.J Feldman, R.E. Kraetsch, M.A. Lichtman et al. // B.J. Reticuloendothel. Soc. – 1974. – Vol. 16. – P. 318–326.
9. Fox, C.J. Fuel feeds function: energy metabolism and the T-cell response / C.J. Fox, P. S. Hammerman, C.B. Thompson // Nat. Rev. Immunol. – 2005. – Vol. 5. – P. 844–852.
10. Frauwirth, K.A. Regulation of T Lymphocyte Metabolism / K.A. Frauwirth, C.B. Thompson // J Immunol. – 2004. – Vol. 172. – P. 4661–4665.
11. Guz, N.R. Oregonin from the bark of European Alnus species / N.R. Guz, P. Lorenz, J.P. Mеtraux //
Biochem. Syst. Ecol. – 2002. – Vol. 30. – P. 471–474.
12. Heo, Y. Serum IgE elevation correlates with blood lead levels in battery manufacturing workers /
Y. Heo, B. K. Lee, K. D. Ahnand et аl. // Hum. Exp. Toxicol. – 2004. – Vol. 23. – P. 209–213.
13. Joo, S.S. Enhancement of NK cytotoxicity, antimetastasis and elongation effect of survival time
in B16-F10 melanoma cells by Oregonin / S.S. Joo, M.S. Kim, W.S. Oh et al. // Arch. Pharm. Res. –
2002. – Vol. 25. – P. 493–499.
14. Kang, M.J. Facilitated Skin Permeation of Oregonin by Elastic Liposomal Formulations and Suppression of Atopic Dermatitis in NC / M.J. Kang, J.Y. Eum // Jeong. Biol. Pharm. Bull. – 2010. –
Vol. 33. – P. 100–106.
15. Kuroyanagi, M. New diarylheptanoids from Alnus japonica and their antioxidative activity /
M. Kuroyanagi, M. Shimomae, Y. Nagashima // Chem. Pharm. Bull. – 2005. – Vol. 53. – P. 1519–523.
16. Lee, C.J. Oregonin inhibits lipopolysccharide-induced iNOS gene transcription and upregulates
HO-1 expression in macrophages and microglia / C.J. Lee, S.S. Lee, S.С. Chen // British Jurnal of
Pharmacology. – 2005. – Vol. 146. – P. 378–388.
17. Navarro, F. Changes in Glucose and Glutamine Lymphocyte Metabolisms Induced by Type I
Interferon-б / F. Navarro, A.V.N. Bacurau, A. Vanzelli et al. // Mediators. – 2010. – Vol.10. – P. 1–6.
18. Pasantes-Morales, H. Protective effect of taurine and zinc on peroxidation-induced damage
in photoreceptor outer segments. / H. Pasantes-Morales, C.J. Cruz // J Neurosci Res. – 1984. –
Vol. 11. – P. 303–311.
19. Radik, J.L. Aerobic glycolysis and lymphocyte transformation / J.L. Radik, E. Ferber, D.A. Hume //
Biochem. J. – 1978. – Vol. 174. – P. 703–709.
20. Rudrappa, S.G. Energy metabolism in developing chicken lymphocytes is altered during the embryonic to posthatch transition / S.G. Rudrappa, B.D. Humphrey // J Nutr. – 2007. – Vol. 137. – P. 427–432.
21. Saxena, G. Antimicrobial compounds from Alnus rubra / G. Saxena, S. Farmer, R.E. Hancock et al. //
Int. J. Pharmacogn. – 1995. – Vol. 33. – P. 33–36.
22. Telysheva, G. Structure and antioxidant activity of diarylheptanoids extracted from bark of grey
alder (Alnus incana) and potential of biorefinery-based bark processing of European trees /
G. Telysheva, T. Dizhbite, O. Bikovens et al. // 11th EWLP, Hamburg, Germany, 2010. – P. 16–19.
23. Yoneda, J. Regulatory Roles of Amino Acids in Immune // J. Yoneda, A. Andou, K. Takehana //
Response. Curr. Rheumatol. Rev. – 2009. – Vol. 5. – P. 252–258.
24. Weicheng, H. Diarylheotanoid from Alnus hirsuta improves glucose metabolism via insulin signal transduction in human hepatocarcinoma (HepG2) cells / H. Weicheng, W. Myeong-Hyeon //
Biotechnology and Bioprocess Engineering. – 2011. – Vol. 16. – P. 120–126.
_________________________________
Поступила в редакцию 12.10.2012
Контакты: anastasiayk@mail.ru
«Лабораторная диагностика. Восточная Европа» № 1 (05), 2013
53