ГИПОХОЛЕСТЕРОЛЕМИЯ КАК ПРИЧИНА КРОВОИЗЛИЯНИЯ В НАДПОЧЕЧНИКИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПЕРИТОНИТЕ

ÁÞËËÅÒÅÍÜ ÂÑÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ, 2011, ¹ 1 (77), Часть 1
УДК 616.153.922:616.45:616.1-008.64
С.С. Осочук, В.Н. Грушин, Л.Л. Якименко
ГИПОХОЛЕСТЕРОЛЕМИЯ КАК ПРИЧИНА КРОВОИЗЛИЯНИЯ
В НАДПОЧЕЧНИКИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПЕРИТОНИТЕ
Витебский государственный медицинский университет (Витебск)
Витебская академия ветеринарной медицины (Витебск)
Вызывали гипохолестеролемию у крыс внутрижелудочным введением «ловахола» и инициировали
перитонит внутрибрюшинным введением золотистого стафилококка. Определяли холестероловый
профиль и содержание кортизола и адренокортикотропного гормона крови. Выявили гипохолестеролемию
и увеличение содержания адренокортикотропного гормона и кортизола крови. Надпочечники
окрашивали гематоксилин-эозином. Отмечены мелкоочаговые кровоизлияния в надпочечники. Заключили
– гипохолестеролемия может быть причиной кровоизлияния в надпочечник при перитоните.
Ключевые слова: холестерол, перитонит, кровоизлияние, надпочечник
HYPOCHOLESTEROLEMIA AS A REASON OF THE HEMORRHAGE
IN ADRENAL GLANDS AT THE EXPERIMENTAL PERITONITIS
S.S. Osotchuk, V.N. Grushin, L.L. Yakimenko
Vitebsk State Medical University, Vitebsk
Vitebsk State Academy of Veterinary Medicine, Vitebsk
Hypocholesterolemia in rats was caused by intragastric introduction of «lovakhol» and peritonitis was caused by
intraabdominal introduction of staphylococcus. Cholesterol profile and concentration of adrenocorticotrophic
hormone and cortisol of blood were determined. Hypocholesterolemia and increase of adrenocorticotrophic
hormone and cortisol of blood were discovered. The adrenal glands have been tinctured with hematoxylineosin. Small-focal hemorrhages in adrenal glands are determined. Conclusion: hypocholesterolaemia can cause
hemorrhage in adrenal gland at the experimental peritonitis.
Key words: cholesterol, peritonitis, hemorrhage, adrenal gland
Сепсис определяется как системный воспалительный ответ на инфекцию (System inflammatory
response syndrome – S��S) [11], летальность при
котором достигает 4,2 % [6]. Для S��S характерно
высокое содержание адренокортикотропного гормона (АКТГ) и кортизола [7, 10], при его утяжелении развивается относительная надпочечниковая
недостаточность, характеризующаяся сниженным
выбросом кортизола на введение адренокортикотропного гормона [14]. Тяжелые формы S��S
могут завершаться летальным исходом вследствие
развития синдрома Уотерхауза – Фридериксена
[8], сопровождающегося высоким содержанием
адренокортикотропного гормона и низким кортизола [9]. Причиной этого осложнения считается
кровоизлияние в надпочечник [7]. По нашему
мнению, кровоизлияние с последующим угнетением деятельности надпочечников вторичны по
отношению к нарушению функциональной активности липидтранспортной системы крови (ЛТС)
и доставке холестерола (ХС) в надпочечники [2].
Целью работы было подтвердить возможность
ведущей роли гипохолестеролемии в кровоизлиянии в надпочечники.
Для достижения цели поставлены следующие
задачи: а) вызвать гипохолестеролемию у лабораторных крыс; б) вызвать острый перитонит у
животных с гипохолестеролемией; в) оценить состояние липидтранспортной системы крови, содержание адренокортикотропного гормона, кортизола
и морфологические изменения надпочечников.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследования проводили на 75 беспородных
крысах-самцах, полученных из питомника ФГУП
ПЛЖ «Рапполово» РАМН (Санкт-Петербургская
область). Ветеринарное свидетельство № 2904/001725 от 10 июня 2008 г. Животные содержались
в виварии Витебского медицинского университета
в соответствии с «Санитарными нормами и правилами по устройству, оборудованию и содержанию
экспериментально-биологических помещений (вивариев)» № 2.1.12-18-2006, утвержденными постановлением Главного государственного санитарного
врача РБ от 31.10.2006. Гипохолестеролемию вызывали внутрижелудочным 2-недельным введением
«ловахола» в дозе 1 мг/кг веса. Длительность и доза
введения препарата выбраны исходя из рекомендаций изготовителя. «Ловахол» предоставлен для
исследования представительством фирмы «Гедеон
Рихтер» в Республике Беларусь. Для проведения
исследований сформированы экспериментальные
группы: а) интактные; б) гипохолестеролемическая –
с забором крови через 8 и 25 часов после последнего
введения «ловахола»; в) животные с перитонитом на
фоне гипохолестеролемии (24 часа после введения
возбудителя или 25 часов после последнего введения
ловахола); г) интактные животные с перитонитом.
Перитонит моделировали внутрибрюшинным
введением золотистого стафилококка (штамм
S 581) в дозе 6 млрд. микробных тел на животное
через 1 час после последнего введения «ловахола».
Животных с перитонитом декапитировали через
Экспериментальные исследования в биологии и медицине
231
ÁÞËËÅÒÅÍÜ ÂÑÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ, 2011, ¹ 1 (77), Часть 1
24 часа после введения возбудителя (25 часов после
последнего введения «ловахола»). Всех животных
декапитировали под эфирным наркозом. Кровь
до образования сгустка выдерживали в холодильнике при +4 °С. Сгусток осаждали 15-минутным
центрифугированием при 2500 об./мин. Сыворотку расфасовывали в пластиковые пробирки и
до обработки хранили при –20 °С. Надпочечники
извлекали не позднее 15 минут после забоя животного и фиксировали в 10% растворе нейтрального
формалина. Срезы окрашивали гематоксилинэозином. Удельную площадь коркового и мозгового
вещества надпочечников определяли в 50 полях
зрения с помощью микроскопа «Olympus �X-41»
и программного обеспечения «�mageScop M».
Ширину коркового и мозгового вещества, диаметр
сосудов микроциркуляторного русла корковой
зоны измеряли линейной горизонтальной шкалой
окулярного винтового микрометра МОВ-1-15х.
Индекс кровоснабжения надпочечника определяли
методом точечного счета А.А. Глаголева.
Индекс кровоснабжения рассчитывали по
формуле:
�и = Vm(v) / Vc(v) [1],
где �и – индекс кровоснабжения; Vm(v) – удельный объем ткани; Vc(v) – удельный объем
сосудистого русла.
Содержание общего холестерола (ОХС),
холестерола липопротеинов высокой плотности
(ХС ЛПВП) и триацилглицеридов (ТГ) сыворотки
крови определяли с помощью наборов фирмы
Cormay-�iana. Содержание холестерола липопротеинов очень низкой плотности (ХС ЛПОНП) и
холестерола липопротеинов низкой плотности (ХС
ЛПНП) определяли расчетным путем [12]. Количество адренокортикотропного гормона и кортизола
определяли радиоиммунными наборами (Чехия и
Республика Беларусь).
Распределение исследуемых значений оценивали по тесту Шапиро – Уилка и равенству дисперсий двухвыборочного F-теста [3]. Поскольку
условия необходимые для проведения параметрических методов анализа не соблюдаются полностью, были применены непараметрические методы
анализа [3].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Через 8 часов после введения «ловахола» снижалось содержание общего холестерола (табл. 1)
(p = 0,001). Через 25 часов содержание общего
холестерола увеличивалось по сравнению с предыдущим сроком исследований (p = 0,012) и не
отличалось от интактных животных. Количество
триацилглицеридов и холестерола липопротеинов
очень низкой плотности возрастало по сравнению с
интактными животными и 8-часовыми животными
(p = 0,004 и p < 0,0001), что может говорить о росте
активности продукции холестерола в печени.
Через 24 часа после введения возбудителя интактным животным снижается содержание общего
холестерола (табл. 2) (p = 0,0009) за счет снижения
содержания холестерола липопротеинов высокой
плотности (p = 0,0003). У животных с исходной гипо-
Таблица 1
Влияние ловахола на параметры липидтранспортной системы крови ЛТС
Общий холестерол
(мМ/л)
Триацилглицериды
(мМ/л)
Холестерол
липопротеинов
высокой плотности
(мМ/л)
Холестерол
липопротеинов
очень низкой
плотности (мМ/л)
Холестерол
липопротеинов
низкой плотности
(мМ/л)
Интактные
2,4 ± 0,37
1,49 ± 0,3
1,26 ± 0,35
0,68 ± 0,14
0,45 ± 0,56
8 часов
1,63 ± 0,29
Pi = 0,001
1,3 ± 0,241
1,04 ± 0,37
0,6 ± 0,11
0,14 ± 0,29
0,96 ± 0,27
0,97 ± 0,17
Pi = 0,004
P8 < 0,0001
0,24 ± 0,44
Группа
животных
25 часов
2,12 ± 0,38
Pi = 0,004
P8 < 0,0001
2,05 ± 0,38
P8 = 0,012
Примечание: Pi – уровень значимости по сравнению с интактными животными; P8 – уровень значимости по сравнению с
8-часовой группой животных.
Таблица 2
Содержание гормонов и холестероловый профиль сыворотки крови
Группа
Общий
холестерол
(мМ/л)
Холестерол
липопротеино
в высокой
плотности
(мМ/л)
Интактные
2,4 ± 0,37
1,26 ± 0,35
1,49 ± 0,3
0,68 ± 0,14
П24
1,62 ± 0,45
0,7 ± 0,31
1,34 ± 0,25
0,0009
0,0003
–
1,13 ± 0,36
0,54 ± 0,18
Pi
0,0005
Pп
0,001
Pi
ГХС П 24
Холестерол
Холестерол
Триацил- липопротеинов
липопротеинов
глицеридов очень низкой
низкой плотности
(мМ/л)
плотности
(мМ/л)
(мМ/л)
Адренокортикотропного
гормона
(мМ/л)
Кортизол
(мМ/л)
0,45 ± 0,56
0,009 ± 0,005
9,02 ± 4,64
0,61 ± 0,11
0,42 ± 0,49
21,68 ± 23,3
17,54 ± 10,1
–
–
0,014
0,011
1,29 ± 0,42
0,59 ± 0,19
0,16 ± 0,29
27,7 ± 38,67
26,24 ± 7,36
0,0007
–
–
–
0,002
0,0004
–
–
–
–
–
0,0019
Примечание: ГХС – гипохолестеролемия; П24 – перитонит 24 часа; ГХС П24 – гипохолестеролемия 24 часа.
232
Экспериментальные исследования в биологии и медицине
ÁÞËËÅÒÅÍÜ ÂÑÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ, 2011, ¹ 1 (77), Часть 1
холестеролемией содержание общего холестерола
было ниже, чем в контроле и у интактных животных
(p = 0,0005, p = 0,001), что может свидетельствовать
о тяжести воспалительного процесса [4].
Содержание адренокортикотропного гормона
и кортизола в обеих группах было выше, чем у интактных животных, при этом уровень кортизола в
опытной группе превосходил таковой в контрольной (p = 0,0019), что, в том числе, могло обусловить
более низкие значения концентрации общего
холестерола, используемого для синтеза гормона.
Вместе с тем снижение активности продукции
холестерола должно было вызвать его недостаток
для надпочечников и, как следствие, привести
к снижению продукции кортизола. Отсутствие
ожидаемого эффекта, вероятно, обусловлено недостаточно высокой дозой «ловахола», вызвавшего
лишь напряжение в системе доставки холестерола,
но не блокировавшего его. Вероятно, более высокие дозы ингибитора 3-гидрокси,3-метилглутарил
редуктазы способны повлечь за собой и снижение
активности продукции кортизола.
У животных с перитонитом без введения «ловахола» ширина корковой зоны надпочечников увеличивалась, а мозговой – уменьшалась (p = 0,014;
табл. 3). Отношения площади и ширины корковой к
мозговой зонам возрастали (p = 0,014). Отмечены
рост площади и диаметра сосудов (p = 0,02), что
сопровождается снижением индекса кровоснабже-
ния (p = 0,02). Данные согласуются со способностью адренокортикотропного гормона расширять
сосуды надпочечников [5].
У животных с перитонитом на фоне введения
«ловахола» (табл. 3) мозговой слой надпочечников
был меньше, чем у интактных животных (p = 0,014).
Отношение площади коркового слоя к площади
мозгового слоя и отношение ширины коркового
слоя к ширине мозгового слоя увеличивались по
сравнению с интактными животными, но были
ниже, чем при перитоните без гипохолестеролемии
(p = 0,002 и p = 0,014 соответственно).
Диаметр сосудов был увеличен по сравнению с обеими контрольными группами (p = 0,02
и p = 0,002). Площадь сосудов увеличивалась, а
индекс кровоснабжения снижался по сравнению
с интактными животными (p = 0,002), что позволяет предположить более выраженное воздействие
адренокортикотропного гормона на сосудистое
русло у животных с перитонитом на фоне введения
«ловахола». Уменьшение индекса кровоснабжения
может обуславливаться обнаруженными мелкоточечными кровоизлияниями (рис. 1), отсутствовавшими у животных с перитонитом без исходной
гипохолестеролемии.
ВЫВОДЫ
1. Двухнедельное введение «ловахола» вызывает гипохолестеролемию, нивелирующуюся за счет
Таблица 3
Морфологические изменения надпочечников
Группа
L КЗ (мкм)
L МЗ (мкм)
SК/М
LК/М
Площадь
сосудов (мкм2)
Индекс
кровоснабжения
Диаметр сосудов
(мкм)
Интактные
1273 ± 33
1507 ± 13
2,41 ± 0,1
0,84 ± 0,02
2,26 ± 0,1
26,4 ± 1,01
0,13 ± 0,004
П24
1359 ± 134
915 ± 229
6,4 ± 1,44
1,7 ± 0,25
2,56 ± 0,8
25,87 ± 13,6
0,15 ± 0,003
0,014
0,014
0,014
0,014
0,02
0,02
0,02
Pi
ГХС П 24
1521 ± 96
1174 ± 49
4,28 ± 0,3
1,29 ± 0,06
7,65 ± 1,5
7,69 ± 3,51
0,25 ± 0,06
Pi
–
0,014
0,002
0,002
0,002
0,002
0,02
Pп
–
–
0,014
0,014
–
–
0,002
Примечание: КЗ – корковая зона; МЗ – мозговая зона; SК/М – отношение площади коркового слоя к мозговому слою;
LК/М – отношение ширины коркового слоя к мозговому слою.
Рис. 1. Мелкоочаговые кровоизлияния в надпочечниках животных с перитонитом на фоне исходной гипохолестеролемии.
Ув. × 10, окраска гематоксилин-эозином.
Экспериментальные исследования в биологии и медицине
233
ÁÞËËÅÒÅÍÜ ÂÑÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ, 2011, ¹ 1 (77), Часть 1
холестерола липопротеинов очень низкой плотности через 25 часов после отмены препарата.
2. Перитонит у интактных животных снижает
содержание общего холестерола за счет холестерола липопротеинов высокой плотности, стимулирует
продукцию адренокортикотропного гормона и кортизола и увеличивает площадь и диаметр сосудов
надпочечников.
3. Гипохолестеролемия усугубляет течение
перитонита и является причинной мелкоточечных
кровоизлияний в надпочечники.
ЛИТЕРАТУРА
1. Никоноров С.Г. Стандартизация критериев
оценки кровоснабжения тканей и органов // Архив
анатомии, гистологии и эмбриологии. – 1991. –
Т. 100, № 4. – С. 78–80.
2. Осочук С.С., Коневалова Н.Ю. Особенности
функционирования липидтранспортной системы
крови при инфекционном синдроме острой надпочечниковой недостаточности // Медицинские
новости. – 2009. – № 7. – С. 11–14.
3. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ S����S��C�. – М. : МедиаСфера,
2002. – 312 с.
4. �onnefoy M., �bidi H., Jauffret M. et al. Hypocholesterolaemia in hospitalized elderly: relations
with inflammatory and nutritional status // �ev. Med.
�nterne. – 2002. – Vol. 23, N 12. – �. 991–998.
5. Carter, �.M., �ichardson �.S., Homan J.
et al. �egional adrenal blood flow responses to adrenocorticotropic hormone in fetal sheep // �m. J.
�hysiol. Endocrinol. Metab. – 1993. – Vol. 264. –
�. 264–269.
6. Folafoluwa O.O., Gebremariam �., Freed G.L.
�atient and hospital correlates of clinical outcomes and
resource utilization in severe pediatric sepsis // �ediatrics. – 2007. – Vol. 119. – �. 487–494.
7. García García E., Milano Manso G., López
Siguero J.�. et al. �drenal function in children with
sepsis and septic shock // �n. Esp. �ediatr. – 2001. –
Vol. 54, N 5. – �. 439–443.
8. Hamilton �., Harris M.�., Foweraker J.,
Gresham G. Waterhouse – Friderichsen syndrome
as a result of non-meningococcal infection // J. Clin.
�athol. – 2004. – Vol. 57, N 2. – �. 208–209.
9. Haslund �. Waterhouse – Friderichsen syndrome. Endotoxin shock treated with massive doses
of cortisol // J. Oslo City Hosp. – 1973. – Vol. 23,
N 3. – �. 49–64.
10. �ady M.Y., Johnson �.J., �atel �. et al. Cortisol
levels and corticosteroid administration fail to predict
mortality in critical illness: the confounding effects of
organ dysfunction and sex // �rch. Surg. – 2005. –
Vol. 140. – �. 661–668.
11. �angel-Fausto, M.S., �itter �., Costigan
M. �he natural history of the systemic inflammatory response syndrome (S��S). � prospective study
// J�M�. – 1995. – Vol. 273, N 2. – �. 117–123.
12. �ifking �. �yping of hypolipoproteinemia
// �therosclrrosis. – 1970. – Vol. 11. – �. 545–546.
13. �ydvall �., �rändström �.K., �anga �. et al.
�lasma cortisol is often decreased in patients treated
in an intensive care unit // �ntensive Care Med. –
2000. – Vol. 26. – �. 545–551.
14. Weerapan K., Shigenaga K.J., Moser H.�. et al.
Cholesterol efflux by acute-phase high density lipoprotein: role of lecithin: cholesterol acyltransferase // J.
Lipid �esearch. – 2001. –Vol. 42. – �. 967–975.
Сведения об авторах
Осочук Сергей Стефанович – доктор медицинских наук, заведующий центральной научно-исследовательской лабораторией Витебского государственного медицинского университета (210023, Республика Беларусь, г. Витебск, пр-т Фрунзе,
27; тел./факс: +375 (212) 36-59-38, +375 (212) 24-25-09; e-mail: OSS62@mail.ru)
Грушин Владимир Николаевич – кандидат биологических наук, доцент кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии
Витебского государственного медицинского университета
Якименко Лилия Леонидовна – кандидат биологических наук, ассистент кафедры анатомии Витебской академии
ветеринарной медицины (210026, Республика Беларусь, г. Витебск, ул. 1-я Доватора, 7/11; тел.: +375 (212) 37-07-37,
+375 (212) 37-20-37, +375 (212) 37-23-22; факс: +375 (212) 37-02-84)
234
Экспериментальные исследования в биологии и медицине