ÑÅËÜÑÊÎÕÎÇßÉÑÒÂÅÍÍÀß ÁÈÎËÎÃÈß, 2011, ¹ 6 ÔÅÍÎÒÈÏÈ×ÅÑÊÈÅ ÎÑÎÁÅÍÍÎÑÒÈ ÒÐÀÍÑÃÅÍÍÛÕ ÑÂÈÍÅÉ ×ÅËÎÂÅÊÀ

реклама
ÑÅËÜÑÊÎÕÎÇßÉÑÒÂÅÍÍÀß ÁÈÎËÎÃÈß, 2011, ¹ 6
ÓÄÊ 636.4:636.018:[573.6.086.83+577.21]
ÔÅÍÎÒÈÏÈ×ÅÑÊÈÅ ÎÑÎÁÅÍÍÎÑÒÈ ÒÐÀÍÑÃÅÍÍÛÕ ÑÂÈÍÅÉ
ÐÀÇÍÛÕ ÏÎÊÎËÅÍÈÉ ÏÐÈ ÈÍÒÅÃÐÀÖÈÈ ÃÅÍÀ ÑÎÌÀÒÎËÈÁÅÐÈÍÀ
×ÅËÎÂÅÊÀ
Ë.Ê. ÝÐÍÑÒ1, Í.À. ÂÎËÊÎÂÀ2, Í.À. ÇÈÍÎÂÜÅÂÀ2
Ïðè ñðàâíèòåëüíîì èçó÷åíèè ñòåïåíè âëèÿíèÿ èíòåãðàöèè ãåíà ðèëèçèíã-ôàêòîðà ãîðìîíà ðîñòà ÷åëîâåêà íà ñîâîêóïíîñòü ôåíîòèïè÷åñêèõ ïðèçíàêîâ ó òðàíñãåííûõ æèâîòíûõ â ðàííèõ è ïîçäíèõ ïîêîëåíèÿõ ïðè îäèíàêîâûõ óñëîâèÿõ âûðàùèâàíèÿ óñòàíîâëåíî, ÷òî òàêèå îñîáè
õàðàêòåðèçóþòñÿ ïîâûøåííûì ñîäåðæàíèåì ãîðìîíà ðîñòà â êðîâè è ïðåâîñõîäÿò èíòàêòíûõ
àíàëîãîâ ïî æèâîé ìàññå è åå ñðåäíåñóòî÷íîìó ïðèðîñòó. Ïîêàçàíî, ÷òî ó òðàíñãåííûõ ñâèíåé
íàáëþäàåòñÿ óâåëè÷åíèå ìàññû îðãàíîâ æåëóäî÷íî-êèøå÷íîãî òðàêòà è ðåïðîäóêòèâíûõ îðãàíîâ,
îòìå÷àåòñÿ ñíèæåíèå òîëùèíû øïèêà ñ óâåëè÷åíèåì ÷èñëà ãåíåðàöèé.
Êëþ÷åâûå ñëîâà: ñâèíüè, ðåêîìáèíàíòíàÿ ÄÍÊ, ðèëèçèíã-ôàêòîð ãîðìîíà ðîñòà ÷åëîâåêà.
Keywords: pigs, recombinant DNA, human growth hormone releasing factor.
Ñîçäàíèå òðàíñãåííûõ ñåëüñêîõîçÿéñòâåííûõ æèâîòíûõ ñ èçìåíåííûìè õîçÿéñòâåííî öåííûìè ïðèçíàêàìè ïðåäñòàâëÿåò ïðàêòè÷åñêèé èíòåðåñ (1). Íàïðàâëåííîå èçìåíåíèå ãåíîìà ìëåêîïèòàþùèõ ìåòîäàìè òðàíñãåíåçà ïîçâîëÿåò ïîëó÷àòü ñåëåêöèîííûé ýôôåêò ïî îòäåëüíûì ïðèçíàêàì
â çíà÷èòåëüíî áîëåå êîðîòêèå ñðîêè, ÷åì ïðè èñïîëüçîâàíèè òðàäèöèîííûõ
ìåòîäîâ, è äàåò âîçìîæíîñòü ñîçäàâàòü ãåíåòè÷åñêèå âàðèàíòû, êîòîðûå
ðàíüøå íå ñóùåñòâîâàëè ó æèâîòíûõ ñîîòâåòñòâóþùåãî âèäà (èíòåãðàöèÿ
òðàíñãåíà) ëèáî äî ïîñëåäíåãî âðåìåíè íå ïîääàâàëèñü ñåëåêöèè (óñòîé÷èâîñòü ê èíôåêöèÿì).  ÷àñòíîñòè, âàæíàÿ ðîëü îòâîäèòñÿ ãåíàì, êîäèðóþùèì êàñêàä áåëêîâ èç ãðóïïû ãîðìîíà ðîñòà.  íàñòîÿùåå âðåìÿ ïî óêàçàííûì ãåíàì óæå ìîäèôèöèðîâàíû êðîëèêè, ñâèíüè è îâöû (2-6), â òîì ÷èñëå 12 ïîêîëåíèé ñâèíåé, òðàíñãåííûõ ïî ãåíó ñîìàòîëèáåðèíà ÷åëîâåêà, ïîëó÷åíû è èçó÷àþòñÿ âî Âñåðîññèéñêîì ÍÈÈ æèâîòíîâîäñòâà (ÂÈÆ) (7-12).
Ïðåäïîëàãàåòñÿ, ÷òî äîïîëíèòåëüíûé ñèíòåç áåëêîâ ñîìàòîòðîïíîãî ðÿäà áóäåò ïîëîæèòåëüíî âëèÿòü íà ñêîðîñòü ðîñòà æèâîòíûõ. Îäíàêî
âîçìîæíîñòè íàïðàâëåííîé èçìåí÷èâîñòè ïðè òðàíñãåíåçå èíîãäà ðàññìàòðèâàþòñÿ î÷åíü óïðîùåííî, íåäîîöåíèâàåòñÿ ñëîæíîñòü âçàèìîäåéñòâèé,
îáóñëîâëèâàþùèõ ìîäèôèêàöèè ôåíîòèïà ïðè èçìåíåíèè ãåíîòèïà. Ïîêà
÷òî íåäîñòàòî÷íî èçó÷åíî âëèÿíèå èíòåãðàöèè ÷óæåðîäíûõ ãåíîâ íà áèîõèìè÷åñêèå, ôèçèîëîãè÷åñêèå è ìîðôîëîãè÷åñêèå ïðèçíàêè, à òàêæå íà
ñòåïåíü è íàïðàâëåííîñòü êîððåëÿöèé ìåæäó íèìè. Åùå ìåíüøå èçâåñòíî
î äèíàìèêå ôåíîòèïè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé â ðÿäå ïîêîëåíèé, êîòîðàÿ ïîçâîëÿåò îöåíèòü ñåëåêöèîííîå çíà÷åíèå òîé èëè èíîé òðàíñãåííîé îñîáè.
Ïðè ýòîì ñëåäóåò îæèäàòü, ÷òî îðãàíèçì áóäåò ñòðåìèòüñÿ ê ñîõðàíåíèþ
ïîñòîÿíñòâà (ñòàáèëèçèðóþùèé îòáîð).
Öåëüþ íàñòîÿùåé ðàáîòû áûëî ñðàâíåíèå ñòåïåíè âëèÿíèÿ èíòåãðàöèè ãåíîâ èç ãðóïïû ãîðìîíà ðîñòà íà ñîâîêóïíîñòü ôåíîòèïè÷åñêèõ
ïðèçíàêîâ ó òðàíñãåííûõ æèâîòíûõ ðàçíûõ (ðàííèõ è ïîçäíèõ) ïîêîëåíèé
ïðè îäèíàêîâûõ óñëîâèÿõ ñîäåðæàíèÿ è âûðàùèâàíèÿ.
Ìåòîäèêà. Èññëåäîâàíèÿ ïðîâîäèëè â óñëîâèÿõ âèâàðèÿ ÂÈÆ íà
ñâèíüÿõ, òðàíñãåííûõ ïî ãåíó ñîìàòîëèáåðèíà ÷åëîâåêà (ðèëèçèíã-ôàêòîð
ãîðìîíà ðîñòà), íàõîäÿùåìóñÿ ïîä êîíòðîëåì ìåòàëëîòèîíåèíîâîãî ïðîìîòîðà ìûøè (7-12). Òðàíñãåííîñòü îïðåäåëÿëè ñ ïîìîùüþ ÏÖÐ-àíàëèçà,
íà îñíîâàíèè äàííûõ êîòîðîãî ôîðìèðîâàëè îïûòíóþ è êîíòðîëüíóþ ãðóïïû. Âûäåëåíèå ÄÍÊ èç îáðàçöîâ óøíîé òêàíè è ïîñòàíîâêó ÏÖÐ âûïîë41
íÿëè ñîãëàñíî îïèñàíèþ (13).
Äèíàìèêó ðîñòà è ðàçâèòèÿ òðàíñãåííûõ è èíòàêòíûõ ñâèíåé èçó÷àëè â óñëîâèÿõ êîíòðîëüíîãî îòêîðìà (ñ 30 äî 120 êã ñ ïîñëåäóþùèì
óáîåì) â äâóõ íåçàâèñèìûõ ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ ðàçíûõ ãåíåðàöèé:
I îïûò — 2-ÿ è 8-ÿ, II îïûò — 3-ÿ è 9-ÿ ãåíåðàöèè. Êîíòðîëüíóþ ãðóïïó â
îáîèõ îïûòàõ ôîðìèðîâàëè ïî ïðèíöèïó àíàëîãîâ (ñîîòâåòñòâèå ïî æèâîé
ìàññå, ïîðîäíîñòè, óñëîâèÿì âûðàùèâàíèÿ è ò.ä.). Îöåíèâàëè æèâóþ ìàññó è åå ñðåäíåñóòî÷íûé ïðèðîñò, ìÿñíûå êà÷åñòâà â ðàçíûå ïåðèîäû îíòîãåíåçà (ìîðôîëîãè÷åñêèé ñîñòàâ è êà÷åñòâî òóø — äëèíó òóøè, ïðîöåíòíîå ñîäåðæàíèå ìÿñà è ñàëà, òîëùèíó øïèêà), à òàêæå ñðàâíèâàëè ìàññó
ïå÷åíè, æåëóäêà, êèøå÷íèêà, ïî÷åê, ìàòêè, ÿè÷íèêîâ, ùèòîâèäíîé æåëåçû è ãèïîôèçà ó òðàíñãåííûõ îñîáåé è èõ íåòðàíñãåííûõ àíàëîãîâ.
Ñîäåðæàíèå ñîìàòîòðîïèíà â êðîâè òðàíñãåííûõ ñâèíåé îïðåäåëÿëè ñ èñïîëüçîâàíèåì äèàãíîñòè÷åñêîé ñèñòåìû íà îñíîâå èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà (ÈÔÀ) («Diagnostic Systems Laboratories Inc.», ÑØÀ). Èñïîëüçóåìûå äëÿ àíàëèçà îáðàçöû ñûâîðîòêè êðîâè õðàíèëè ïðè −20 °Ñ.
Ãèñòîëîãè÷åñêèå ïðåïàðàòû ãîòîâèëè ïî îáùåïðèíÿòîé ìåòîäèêå
(14). Äëÿ ôèêñàöèè îáðàçöîâ îðãàíîâ è òêàíåé èñïîëüçîâàëè 10 % ðàñòâîð
ôîðìàëèíà. Ñðåçû äëÿ ãèñòîëîãè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ ïîëó÷àëè íà ðîòàöèîííîì ìèêðîòîìå («TermoShandon», Âåëèêîáðèòàíèÿ). Äëÿ îöåíêè óðîâíÿ
ýêñïðåññèè íóêëåèíîâûõ êèñëîò (ÍÊ) â êëåòêàõ âíóòðåííèõ îðãàíîâ ïðîâîäèëè îêðàøèâàíèå ïîëó÷åííûõ ãèñòîïðåïàðàòîâ ïî ìåòîäó Ôåëüãåíà (ÄÍÊ)
è ñ èñïîëüçîâàíèåì ñìåñè ãàëëîöèàíèíà è õðîìîâûõ êâàñöîâ (ÄÍÊ + ÐÍÊ)
(14). Îòíîñèòåëüíîå ñîäåðæàíèå íóêëåèíîâûõ êèñëîò â êëåòêàõ èññëåäóåìûõ îðãàíîâ îïðåäåëÿëè ïî ìåòîäèêå È.ß. Øèõîâà ñ ñîàâò. (15). Îòíîñèòåëüíîå êîëè÷åñòâî ÍÊ íàõîäèëè ïî ôîðìóëå: ÍÊ = [100 ½ (1/B)] ½ S, ãäå
B ― ñðåäíÿÿ ÿðêîñòü ÿäåð, 100 ½ (1/Â) ― îòíîñèòåëüíàÿ ïëîòíîñòü ÿäåð,
S ― ïëîùàäü ÿäåð. Îòíîñèòåëüíîå ñîäåðæàíèå ÐÍÊ â öèòîïëàçìå êëåòîê
ðàññ÷èòûâàëè, êàê ðàçíîñòü ìåæäó êîëè÷åñòâîì ñóììàðíûõ íóêëåèíîâûõ
êèñëîò (îêðàñêà ñìåñüþ ãàëëîöèàíèíà è õðîìîâûõ êâàñöîâ) è êîëè÷åñòâîì
ÄÍÊ â ÿäðàõ (îêðàñêà ïî Ôåëüãåíó). Ëîêàëèçàöèþ ñîìàòîòðîïèíà â êëåòêàõ ãèïîôèçà ñâèíåé âûÿâëÿëè èììóíîãèñòîõèìè÷åñêèì ìåòîäîì ñ ïîìîùüþ íàáîðà Novostatin Super ABC Kit («Novocastra», ÑØÀ) ñ ïîñëåäóþùåé
äåòåêöèåé ñ èñïîëüçîâàíèåì ñóáñòðàòà ÀÅÑ (3-àìèíî-9-ýòèëêàðáîçîë)
(«Sigma», ÑØÀ). Îòíîñèòåëüíîå ñîäåðæàíèå ñîìàòîòðîïèíà â êëåòêàõ ãèïîôèçà îïðåäåëÿëè ïî òîé æå ôîðìóëå, ÷òî è äëÿ ÍÊ. Àíàëèç è ôîòîäîêóìåíòèðîâàíèå ãèñòîïðåïàðàòîâ îñóùåñòâëÿëè ñ ïîìîùüþ ìèêðîñêîïà
ôèðìû «Opton» (Ãåðìàíèÿ), îáîðóäîâàííîãî öèôðîâûì ôîòîàïïàðàòîì, ñ
èñïîëüçîâàíèåì êîìïüþòåðíîé ïðîãðàììû Image Scope (ÎÎÎ «Ñèñòåìû
äëÿ ìèêðîñêîïèè è àíàëèçà», ã. Ìîñêâà).
Ñòàòèñòè÷åñêóþ îáðàáîòêó ðåçóëüòàòîâ ïðîâîäèëè ñòàíäàðòíûìè ìåòîäàìè (16) ñ ïðèìåíåíèåì ïðîãðàììíîãî îáåñïå÷åíèÿ Microsoft Excel.
Ðåçóëüòàòû. Õàðàêòåð íàñëåäîâàíèÿ ãåííîé êîíñòðóêöèè ó ñâèíåé
ðàçíûõ ïîêîëåíèé ñóùåñòâåííî íå ðàçëè÷àëñÿ è îïðåäåëÿëñÿ òèïîì ñïàðèâàíèÿ, à òàêæå ïðîèñõîæäåíèåì. Òàê, åñëè òðàíñãåííûì áûë îäèí èç
ðîäèòåëåé, äîëÿ òðàíñãåííûõ îñîáåé â ïîòîìñòâå âàðüèðîâàëà â ñðåäíåì îò
28,4 äî 40,0 %, åñëè îáà ðîäèòåëÿ — îíà äîñòèãàëà 50,0-62,5 %. Â òî æå
âðåìÿ îòìå÷àëîñü èíäèâèäóàëüíîå âëèÿíèå íåêîòîðûõ îñîáåé íà ýôôåêòèâíîñòü íàñëåäîâàíèÿ òðàíñãåíà: ìåòîäîì àíàëèçèðóþùåãî ñêðåùèâàíèÿ
òðàíñãåííûõ õðÿêîâ ñ íåòðàíñãåííûìè ñàìêàìè áûëà óñòàíîâëåíà âûñîêàÿ
ñòåïåíü íàñëåäîâàíèÿ ðåêîìáèíàíòíîé ÄÍÊ â ïîòîìñòâå õðÿêà ¹ 831
(51,0 %) è, íàîáîðîò, íèçêàÿ — â ïîòîìñòâå õðÿêà ¹ 046 (10,0 %).
Êîëè÷åñòâî ñîáñòâåííîãî ñèíòåçèðóåìîãî ãîðìîíà ðîñòà — îäèí èç
42
1. Ïîêàçàòåëè ýêñïðåññèè ãîðìîíà ðîñòà ó ñâèíåé, òðàíñãåííûõ ïî ãåíó ñîìàòîëèáåðèíà ÷åëîâåêà (îïûò), è èõ íåòðàíñãåííûõ àíàëîãîâ (êîíòðîëü) â
ðàçíûõ ïîêîëåíèÿõ (Õ±õ, âèâàðèé Âñåðîññèéñêîãî ÍÈÈ æèâîòíîâîäñòâà)
Ïîêîëåíèå
ÈÔÀ, íã/ìë (Cv, %)
îïûò
êîíòðîëü
ÈÃÕ, óñë. åä. (Cv, %)
îïûò
êîíòðîëü
2-å
6,20±1,11 (54)
3,31±0,44 (56)
106,7±5,1 (45)
98,3±2,9 (28)
3-å
7,15±1,34 (56)
3,11±0,37 (51)
91,4±4,2 (44)
82,8±3,7 (42)
8-å
4,60±1,10 (72)
3,31±0,44 (56)
100,5±4,7 (44)
98,3±2,9 (28)
9-å
6,16±1,12 (54)
3,11±0,37 (51)
99,3±4,2 (33)
82,8±3,7 (42)
Ï ð è ì å ÷ à í è å. ÈÔÀ è ÈÃÕ — ñîîòâåòñòâåííî èììóíîôåðìåíòíûé è èììóíîãèñòîõèìè÷åñêèé
àíàëèç, Cv — êîýôôèöèåíò âàðèàöèè.
À
Á
Ðèñ. 1. Ýêñïðåññèÿ ãîðìîíà ðîñòà â êëåòêàõ ãèïîôèçà ó òðàíñãåííîé ïî ãåíó ñîìàòîëèáåðèíà
÷åëîâåêà (À) è íåòðàíñãåííîé (Á) ñâèíüè (ñêîïëåíèþ ãîðìîíà ñîîòâåòñòâóþò áîëåå òåìíûå
ó÷àñòêè). Èììóíîãèñòîõèìè÷åñêîå îêðàøèâàíèå ñ èñïîëüçîâàíèåì õðîìîãåíà ÀÅÑ (3-àìèíî-9-ýòèëêàðáîçîë); óâåëè÷åíèå ½400 (âèâàðèé Âñåðîññèéñêîãî ÍÈÈ æèâîòíîâîäñòâà).
êëþ÷åâûõ ïîêàçàòåëåé, ïîçâîëÿþùèõ îõàðàêòåðèçîâàòü ýêñïðåññèþ èíòåãðèðîâàííîãî ãåíà ñîìàòîëèáåðèíà ÷åëîâåêà â îðãàíèçìå òðàíñãåííûõ ñâèíåé. Ïî äàííûì èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà, òðàíñãåííûå æèâîòíûå ïðåâîñõîäèëè ñâîèõ íåòðàíñãåííûõ ñâåðñòíèêîâ ïî ñîäåðæàíèþ ãîðìîíà ðîñòà
â êðîâè â ñðåäíåì â 1,5-2,0 ðàçà (òàáë. 1). Ïðè ýòîì îñîáè ðàííèõ ïîêîëåíèé (2-å è 3-å) õàðàêòåðèçîâàëèñü áîëåå âûñîêèì ñîäåðæàíèåì ñîìàòîòðîïèíà, ÷åì æèâîòíûå ïîçäíèõ ãåíåðàöèé (8-ÿ è 9-ÿ). Ðåçóëüòàòû, ïîëó÷åííûå ìåòîäîì ÈÔÀ, áûëè ïîäòâåðæäåíû èììóíîãèñòîõèìè÷åñêèìè èññëåäîâàíèÿìè: ïðåâûøåíèå îòíîñèòåëüíîãî ñîäåðæàíèÿ ñîìàòîòðîïèíà â êëåòêàõ ãèïîôèçà ó òðàíñãåííûõ æèâîòíûõ äîñòèãàëî 20 % ïî ñðàâíåíèþ ñ ñîîòâåòñòâóþùèì ïîêàçàòåëåì ó êîíòðîëüíûõ îñîáåé (ñì. òàáë. 1, ðèñ. 1).
Ðèñ. 2. Äèíàìèêà ðîñòà ó òðàíñãåííûõ ïî ãåíó ñîìàòîëèáåðèíà
÷åëîâåêà ñâèíåé ðàçíûõ ïîêîëåíèé è èõ íåòðàíñãåííûõ àíàëîãîâ (êîíòðîëü) â äâóõ íåçàâèñèìûõ îïûòàõ ïî îòêàðìëèâàíèþ: À — I îïûò, 2-å è 8-å
ïîêîëåíèÿ (ñîîòâåòñòâåííî 1
è 2), Á — II îïûò, 3-å è 9-å
ïîêîëåíèÿ (ñîîòâåòñòâåííî 4
è 5); 3 è 6 — êîíòðîëü (âèâàðèé Âñåðîññèéñêîãî ÍÈÈ æèâîòíîâîäñòâà).
Ïðè îöåíêå ýôôåêòà èíòåãðàöèè ðåêîìáèíàíòíîé ÄÍÊ íà óëó÷øåíèå ïðîäóêòèâíûõ ñâîéñòâ (â ÷àñòíîñòè, íà ïîêàçàòåëè ðîñòà) âûÿâèëè,
÷òî òðàíñãåííûå æèâîòíûå ïðàêòè÷åñêè âî âñå èçó÷àåìûå ïåðèîäû îíòîãåíåçà ïðåâîñõîäèëè íåòðàíñãåííûõ ñâåðñòíèêîâ ïî æèâîé ìàññå (ðèñ. 2)
è åå ñðåäíåñóòî÷íîìó ïðèðîñòó. Íàèáîëüøàÿ ðàçíèöà ïî ïîêàçàòåëÿì ìå43
æäó ýêñïåðèìåíòàëüíûìè ãðóïïàìè äîñòèãàëà ñîîòâåòñòâåííî 11,9 è 35,7 %.
Ïðè ýòîì æèâîòíûå èç ðàííèõ ãåíåðàöèé õàðàêòåðèçîâàëèñü ïîâûøåííîé
ñêîðîñòüþ ðîñòà ïî ñðàâíåíèþ ñ îñîáÿìè èç ïîñëåäóþùèõ ãåíåðàöèé. Òàê,
â äâóõ íåçàâèñèìûõ îïûòàõ ïî êîíòðîëüíîìó îòêîðìó ñâèíüè 2-ãî è 3-ãî
ïîêîëåíèé â ñðåäíåì ïðåâîñõîäèëè æèâîòíûõ 8-ãî è 9-ãî ïîêîëåíèé ïî
æèâîé ìàññå è åå ñðåäíåñóòî÷íîìó ïðèðîñòó ñîîòâåòñòâåííî íà 1,8-12,4 è
3,0-14,5 %.
Òàêèå ïðîäóêòèâíûå ñâîéñòâà, êàê ìîðôîëîãè÷åñêèé ñîñòàâ è êà÷åñòâî òóø, ó òðàíñãåííûõ è êîíòðîëüíûõ ñâèíåé òîæå ðàçëè÷àëèñü.  ÷àñòíîñòè, áûëè âûÿâëåíû èçìåíåíèÿ äëèíû òóøè, ïðîöåíòíîãî ñîäåðæàíèÿ
ìÿñà è ñàëà, òîëùèíû øïèêà (òàáë. 2). Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ñ óâåëè÷åíèåì ÷èñëà ãåíåðàöèé íàáëþäàëîñü óìåíüøåíèå òîëùèíû øïèêà ó òðàíñãåííûõ îñîáåé: åñëè æèâîòíûå èç ðàííèõ ãåíåðàöèé ïî ýòîìó ïîêàçàòåëþ
ïðåâîñõîäèëè àíàëîãîâ íà 16,9 %, òî æèâîòíûå èç áîëåå ïîçäíèõ ãåíåðàöèé — íà 3,3-6,1 %.
2. Ìîðôîëîãè÷åñêèé ñîñòàâ è ïîêàçàòåëè êà÷åñòâà òóø ó ñâèíåé, òðàíñãåííûõ
ïî ãåíó ñîìàòîëèáåðèíà ÷åëîâåêà, è èõ íåòðàíñãåííûõ àíàëîãîâ (êîíòðîëü)
â ðàçíûõ ïîêîëåíèÿõ (âèâàðèé Âñåðîññèéñêîãî ÍÈÈ æèâîòíîâîäñòâà)
Ïîêîëåíèå
Äëèíà ïîëóòóøè,
Âûõîä òóøè, %
ñì (Õ±õ)
Ñîñòàâ òóøè, %
ìÿñî
ñàëî
êîñòè
Òîëùèíà øïèêà,
ñì (Õ±õ)
I îïûò
66,4
54,0
34,3
11,7
3,81±0,27
11,9
3,46±0,29
65,1
55,9
32,2
66,1
56,3
31,3
12,4
3,26±0,31
II î ï û ò
9,4
3,54±0,27
3-å
100,7±2,9
64,5
52,8
37,8
9-å
98,5±5,0
67,3
55,6
34,1
10,3
3,13±0,39
9,5
3,03±0,30
Êîíòðîëü
97,0±0,8
65,2
54,1
36,4
Ï ð è ì å ÷ à í è å. Ñðåäíþþ òîëùèíó øïèêà îïðåäåëÿëè ïî ÷åòûðåì òî÷êàì: íà õîëêå, ìåæäó 6-ì è 7-ì
ãðóäíûìè ïîçâîíêàìè, íà ïîÿñíèöå è íà êðåñòöå.
2-å
8-å
Êîíòðîëü
97,3±3,6
108,7±3,9
96,0±0,7
Òðàíñãåííûå æèâîòíûå òàêæå ïðåâîñõîäèëè íåòðàíñãåííûõ àíàëîãîâ ïî ìàññå ïå÷åíè, æåëóäêà, êèøå÷íèêà, ïî÷åê, ìàòêè, ÿè÷íèêîâ, ùèòîâèäíîé æåëåçû è ãèïîôèçà, ïðè÷åì ïî ìàññå îðãàíîâ æåëóäî÷íî-êèøå÷íîãî
òðàêòà è ðåïðîäóêòèâíûõ îðãàíîâ ýòî ïðåèìóùåñòâî äîñòèãàëî 65,2 %.
Ïðè èçó÷åíèè ãèñòîñòðóêòóðû âíóòðåííèõ îðãàíîâ è òêàíåé òðàíñãåííûõ æèâîòíûõ ìû íå âûÿâèëè êàêèõ-ëèáî îòêëîíåíèé, ñâÿçàííûõ ñ
âîñïàëèòåëüíûìè èëè ïàòîëîãè÷åñêèìè ïðîöåññàìè.  òî æå âðåìÿ â áîëüøèíñòâå îáðàçöîâ áûëè îáíàðóæåíû ìîðôîìåòðè÷åñêèå èçìåíåíèÿ ïî
ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì. Òàê, ïðàêòè÷åñêè âî âñåõ èññëåäîâàííûõ ïîêîëåíèÿõ ó òðàíñãåííûõ îñîáåé îòìå÷àëîñü óâåëè÷åíèå òîëùèíû ïå÷åíî÷íûõ
áàëîê (äî +22,7 %, ð ≤ 0,01) è æåëåçèñòîãî ñëîÿ äîííîé ÷àñòè æåëóäêà (äî
+11,2 %, ð ≤ 0,01), à òàêæå âûñîòû âîðñèíîê 12-ïåðñòíîé êèøêè (äî +24,3 %,
ð ≤ 0,05), ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î áîëåå èíòåíñèâíîé ïèùåâàðèòåëüíîé ôóíêöèè. Ó òðàíñãåííûõ æèâîòíûõ èç ðàííèõ ïîêîëåíèé íàáëþäàëîñü óâåëè÷åíèå äèàìåòðà àöèíóñîâ ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû è ôîëëèêóëîâ ùèòîâèäíîé
æåëåçû ñîîòâåòñòâåííî íà 7,3 (ð ≤ 0,05) è 6,5-19,1 %, òîãäà êàê ïîäîáíûå
îñîáè èç áîëåå ïîçäíèõ ãåíåðàöèé, íàîáîðîò, óñòóïàëè èíòàêòíûì àíàëîãàì ïî ýòèì ïîêàçàòåëÿì ñîîòâåòñòâåííî íà 6,4-8,8 (ð ≤ 0,01) è 2,6-21,8 %
(ð ≤ 0,001). Çíà÷èòåëüíûå èçìåíåíèÿ áûëè âûÿâëåíû â ñòðóêòóðå îðãàíîâ
ñåðäå÷íî-ñîñóäèñòîé è âûäåëèòåëüíîé ñèñòåìû, à òàêæå â ìûøå÷íîé òêàíè,
îäíàêî ýòè ðàçëè÷èÿ âàðüèðîâàëè â ðÿäå ïîêîëåíèé (òàáë. 3).
Ïðàêòè÷åñêè âî âñåõ èçó÷åííûõ ãåíåðàöèÿõ ó òðàíñãåííûõ ñâèíåé
ðàçìåðû êëåòîê áîëüøèíñòâà èññëåäîâàííûõ îðãàíîâ áûëè óâåëè÷åíû, ÷òî
ñâÿçàíî ïðåèìóùåñòâåííî ñ ðîñòîì êîëè÷åñòâà öèòîïëàçìû. Èçó÷åíèå õàðàêòåðà íàêîïëåíèÿ íóêëåèíîâûõ êèñëîò â êëåòêàõ òàêèõ îðãàíîâ âûÿâèëî
44
áîëåå âûñîêîå ñîäåðæàíèå ÐÍÊ ó òðàíñãåííûõ æèâîòíûõ ïî ñðàâíåíèþ ñ
êîíòðîëåì (äî +34,6 %, ð ≤ 0,001), ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò îá óñèëåíèè ñèíòåçà áåëêîâ.
3. Ìîðôîìåòðè÷åñêèå ïîêàçàòåëè ãèñòîñòðóêòóðû âíóòðåííèõ îðãàíîâ è òêàíåé ó ñâèíåé, òðàíñãåííûõ ïî ãåíó ñîìàòîëèáåðèíà ÷åëîâåêà, è èõ íåòðàíñãåííûõ àíàëîãîâ (êîíòðîëü) â ðàçíûõ ïîêîëåíèÿõ (Õ±õ, âèâàðèé Âñåðîññèéñêîãî ÍÈÈ æèâîòíîâîäñòâà)
Ïîêîëåíèå
ïå÷åíî÷íûõ áàëîê
2-å
8-å
Êîíòðîëü
25,2±0,6
21,9±0,6
26,7±0,7
3-å
9-å
Êîíòðîëü
20,7±0,2
25,4±0,6
24,9±0,6
Òîëùèíà, ìêì
Äèàìåòð ôîëëèêóëîâ
ìûøå÷íûõ âîëîêîí êàðäèîìèîöèòîâ ùèòîâèäíîé æåëåçû, ìêì
I îïûò
47,9±1,3
48,9±1,5
52,4±1,5
II î ï û ò
69,6±2,0
68,6±1,8
55,6±1,2
25,1±0,5
24,8±0,6
24,6±0,7
185±8,1
197±8,9
176±7,8
22,5±0,3
23,2±0,5
20,9±0,5
188±9,6
224±16,2
183±12,9
Èç ïðèâåäåííûõ äàííûõ ñòàíîâèòñÿ î÷åâèäíûì, ÷òî ïîâûøåíèå ñîäåðæàíèÿ ñîìàòîòðîïèíà â êðîâè ó òðàíñãåííûõ ñâèíåé â íîðìå íå ìîæåò
ïîëíîñòüþ ïðîÿâèòüñÿ íà ôåíîòèïè÷åñêîì óðîâíå, ïîñêîëüêó äðóãèå ôàêòîðû, ïðîöåññû è ìåõàíèçìû âçàèìîäåéñòâèÿ, îáóñëîâëèâàþùèå ïðîÿâëåíèå ýôôåêòà ñîìàòîòðîïèíà, íå ïðåòåðïåâàþò èçìåíåíèé. Íàïðèìåð, âîçìîæíî ïðîòèâîðå÷èå ìåæäó êîëè÷åñòâîì ñîìàòîòðîïèíà è ÷èñëîì ðåöåïòîðîâ ýòîãî ãîðìîíà. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ïîäòâåðæäàþò ðàçðàáîòàííóþ È.È. Øìàëüãàóçåíîì òåîðèþ îðãàíèçìà êàê öåëîñòíîé ñèñòåìû â èíäèâèäóàëüíîì è èñòîðè÷åñêîì ðàçâèòèè. Ñîãëàñíî ýòîé òåîðèè, âñå îðãàíû æèâîòíîãî îáðàçóþò åäèíóþ ñèñòåìó, ÷àñòè êîòîðîé çàâèñÿò äðóã îò
äðóãà è äåéñòâóþò è ïðîòèâîäåéñòâóþò îäíà ïî îòíîøåíèþ ê äðóãîé, ïîýòîìó íèêàêîå èçìåíåíèå íå ìîæåò îáíàðóæèòüñÿ â îäíîé ÷àñòè áåç òîãî,
÷òîáû íå âûçâàòü ñîîòâåòñòâóþùèå èçìåíåíèÿ âî âñåõ îñòàëüíûõ ÷àñòÿõ. Â
òî æå âðåìÿ â îðãàíèçìå òðàíñãåííûõ æèâîòíûõ ïðîèñõîäÿò îïðåäåëåííûå
ïåðåñòðîéêè, èçìåíÿþùèå ñëîæèâøóþñÿ ñèñòåìó êîððåëÿöèé, ÷òî, íåñîìíåííî, âëèÿåò íà ðàçâèòèå îñîáè.
Òàêèì îáðàçîì, èíòåãðàöèÿ ãåíà ñîìàòîëèáåðèíà ÷åëîâåêà â ãåíîì
ñâèíåé îêàçûâàåò ìíîæåñòâåííîå âîçäåéñòâèå íà ðàçëè÷íûå ïðèçíàêè. Ïðè
ýòîì íåêîòîðûå èçìåíåíèÿ ïðîÿâëÿþòñÿ â âèäå ÷åòêîé òåíäåíöèè â òå÷åíèå
âñåõ ïîêîëåíèé (íàïðèìåð, óâåëè÷åíèå ìàññû îðãàíîâ æåëóäî÷íî-êèøå÷íîãî òðàêòà è ðåïðîäóêòèâíûõ îðãàíîâ è ñíèæåíèå òîëùèíû øïèêà ñ óâåëè÷åíèåì ÷èñëà ãåíåðàöèé). Âìåñòå ñ òåì ñëåäóåò îòìåòèòü îòñóòñòâèå ñòàáèëüíî íàñëåäóåìûõ äîñòîâåðíûõ ðàçëè÷èé ïî ïîêàçàòåëÿì ðîñòà â ðàííåì
âîçðàñòå. Ýòî ìîæåò áûòü ñâÿçàíî ñ äëèòåëüíîé ñåëåêöèé íà óñêîðåíèå
ðîñòà, çíà÷èòåëüíî ñíèçèâøåé åñòåñòâåííûå ðåçåðâû ïîâûøåíèÿ ñîîòâåòñòâóþùåãî ïîêàçàòåëÿ ïî ñðàâíåíèþ ñ ëàáîðàòîðíûìè æèâîòíûìè. Ïîëó÷åííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î íåîäíîçíà÷íîñòè âëèÿíèÿ èíòåãðàöèè è
ïîñëåäóþùåé ýêñïðåññèè ãåíîâ ñîìàòîòðîïíîãî êàñêàäà íà îðãàíèçì òðàíñãåííûõ ñâèíåé, ïðîÿâëÿþùåãîñÿ â èçìåíåíèè ðÿäà ïîêàçàòåëåé ðàçâèòèÿ
îñîáåé êàê íà êëåòî÷íîì, òàê è íà îðãàíèçìåííîì óðîâíå.
ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ
1.
2.
3.
Ý ð í ñ ò Ë.Ê., Â î ë ê î â à Í.À., Ç è í î â ü å â à Í.À. Íåêîòîðûå àñïåêòû èñïîëüçîâàíèÿ òðàíñãåííûõ òåõíîëîãèé â æèâîòíîâîäñòâå. Ñ.-õ. áèîë., 2009, 2: 4-9.
Ý ð í ñ ò Ë.Ê., Ã î ë ü ä ì à í È.Ë., Ê à ä ó ë è í Ñ.Ã. Ãåííàÿ èíæåíåðèÿ â æèâîòíîâîäñòâå: òðàíñãåííûå ñåëüñêîõîçÿéñòâåííûå æèâîòíûå, êîðìîâûå ðàñòåíèÿ, ìèêðîîðãàíèçìû ðóáöà. Áèîòåõíîëîãèÿ, 1993, 5: 2-14.
M u r r a y J.D., N a n c a r r o w C.D., M a r s h a l l J.T. e.a. Production of transgenic
45
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
merino sheep by microinjection of metallotionein bovine growing hormone fusion genes. J. Reprod. Fertil. Dev., 1989, 1: 147-155.
P u r s e l V., C a m b e l l R., M i l l e r K. e.a. Growth potential of transgenic pigs expressing a bovine growth hormone gene. J. Anim. Sci., 1988, 66: 267.
R e x r o a d C.E., H a m m e r R.E., B e h r i n g e r R.R. e.a. Insertion, expression and
physiology of growth-regulating genes. J. Reprod. Fert. Suppl., 1990, 41: 119-124.
W i e g h a r t M., H o o v e r J.L., M c G r a n e M.M. e.a. Production of transgenic pigs
harboring a rat phosphoenolpyruvate carboxykinase—bovine growth hormone fusion gene. J. Reprod. Fertil. Suppl., 1990, 41: 89-96.
 î ë ê î â à Í.À., Ø è õ î â È.ß., Ç è í î â ü å â à Í.À. Ôåíîòèïè÷åñêèå îñîáåííîñòè ñâèíåé â ïåðèîä ýìáðèîãåíåçà ïðè èíòåãðàöèè ãåíà ðèëèçèíã-ôàêòîðà ãîðìîíà ðîñòà ÷åëîâåêà. Ñ.-õ. áèîë., 2007, 2: 37-42.
Ý ð í ñ ò Ë.Ê., Ç è í î â ü å â à Í.À., Â î ë ê î â à Í.À., Ï à ð õ î ì å í ê î Å.Ã.,
Ø à ò à é ë î Â.Í., Á ð å ì Ã. Âëèÿíèå èíòåãðàöèè ãåíà ðèëèçèíã-ôàêòîðà ãîðìîíà
ðîñòà íà íåêîòîðûå õîçÿéñòâåííî öåííûå ïðèçíàêè ñâèíåé. Çîîòåõíèÿ, 2007, 5: 2-5.
 î ë ê î â à Í.À.,  î ë ê î â à Ë.À., Ê ë å í î â è ö ê è é Ï.Ì., à ó ñ å â È.Â., Á àã è ð î â Â.À., Ý ð í ñ ò Ë.Ê., Ç è í î â ü å â à Í.À., Á ð å ì Ã. Öèòîãåíåòè÷åñêèå
ïðîôèëè ñâèíåé, òðàíñãåííûõ ïî ãåííîé êîíñòðóêöèè ñîìàòîëèáåðèíà ÷åëîâåêà. Äîêë.
ÐÀÑÕÍ, 2007, 5: 37-38.
Ý ð í ñ ò Ë., Ç è í î â ü å â à Í., Á à ã è ð î â Â., Â î ë ê î â à Í., Â î ë ê î â à Ë.,
Ï à ð õ î ì å í ê î Å., Ð à ë ê î â À. Ìÿñíûå è îòêîðìî÷íûå êà÷åñòâà òðàíñãåííûõ
ñâèíåé. Ñâèíîâîäñòâî, 2007, 3: 2-5.
Ý ð í ñ ò Ë.Ê., Ê ë å í î â è ö ê è é Ï.Ì., Á à ã è ð î â Â.À., Â î ë ê î â à Í.À., Ç èí î â ü å â à Í.À., Ã ó ñ å â È.Â., Ä à í ÷ Ñ.Ñ., Á ð å ì Ã. Ñîñòîÿíèå õðîìîñîìíîãî
àïïàðàòà ó ñâèíåé, òðàíñãåííûõ ïî ãåíó ñîìàòîëèáåðèíà ÷åëîâåêà MT1/RHGH. Ñ.-õ.
áèîë., 2009, 2: 31-36.
Ð à ë ê î â È.À.,  î ë ê î â à Í.À., Ç è í î â ü å â à Í.À., Ý ð í ñ ò Ë.Ê. Âëèÿíèå èíòåãðàöèè ãåíà ñîìàòîëèáåðèíà íà êëåòî÷íóþ ñòðóêòóðó íåêîòîðûõ âíóòðåííèõ îðãàíîâ ñâèíåé
â îíòîãåíåçå. Àêòóàëüíûå ïðîáëåìû ãóìàíèòàðíûõ è åñòåñòâåííûõ íàóê, 2011, 4(27): 56-60.
Ç è í î â ü å â à Í.À., Ï î ï î â À.Í., Ý ð í ñ ò Ë.Ê. è äð. Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî
èñïîëüçîâàíèþ ìåòîäà ïîëèìåðàçíîé öåïíîé ðåàêöèè â æèâîòíîâîäñòâå. Äóáðîâèöû, 1998.
Ìèêðîñêîïè÷åñêàÿ òåõíèêà: Ðóêîâîäñòâî /Ïîä ðåä. Ä.Ñ. Ñàðêèñîâà, Þ.Ë. Ïåðîâà. Ì., 1996.
Ø è õ î â È.ß., Õ à ì è ö å å â à Ì.Ï., Ë å ï í î â À.Ñ. è äð. Ìåòîäè÷åñêèå
ðåêîìåíäàöèè ïî êîëè÷åñòâåííîìó îïðåäåëåíèþ íóêëåèíîâûõ êèñëîò â êëåòêàõ è òêàíÿõ
ñåëüñêîõîçÿéñòâåííûõ æèâîòíûõ. Äóáðîâèöû, 1985.
Ì å ð ê ó ð ü å â à Å.Ê., À á ð à ì î â à Ç.Â., Á à ê à é À.Â., Ê î ÷ è ø È.È. Ãåíåòèêà. Ì., 1991.
1Ðîññèéñêàÿ
àêàäåìèÿ ñåëüñêîõîçÿéñòâåííûõ íàóê,
117218 ã. Ìîñêâà, ÃÑÏ-7, óë. Êðæèæàíîâñêîãî, 15, êîðï. 2,
e-mail: ernstrashn@mail.ru;
2ÃÍÓ Âñåðîññèéñêèé ÍÈÈ æèâîòíîâîäñòâà
Ïîñòóïèëà â ðåäàêöèþ
23 àâãóñòà 2011 ãîäà
Ðîññåëüõîçàêàäåìèè,
142132 Ìîñêîâñêàÿ îáë., Ïîäîëüñêèé ð-í, ïîñ. Äóáðîâèöû,
e-mail: natavolkova@inbox.ru
PHENOTYPIC FEATURES OF TRANSGENIC PIGS OF DIFFERENT
GENERATIONS AFTER INTEGRATION OF GENE OF
HUMAN GROWTH HORMONE-RELEASING FACTOR
L.K. Ernst1, N.A. Volkova2, N.A. Zinovieva2
Summary
The comparative study of effect of integrated gene of human growth hormone-releasing factor
on the aggregate of phenotypic signs in transgenic animals in the early and late generations at the similar conditions of keeping and growing permit to establish, that such individuals have heightened content
of growth hormone in the blood and exceed of the intact analogs on live weight and its average daily
gain. It was shown, that some stabilization of new correlations takes place in the next generations.
Íîâûå êíèãè
Ê î ñ ò î ì à õ è í Í.Ì. Ïîðîäû êðóïíîãî
ðîãàòîãî ñêîòà: Ó÷. ïîñ. äëÿ âóçîâ. Ì.: èçä-âî
«ÊîëîñÑ», 2011, 120 ñ.
Îïèñàíû ïîðîäû êðóïíîãî ðîãàòîãî
ñêîòà, èñòîðèÿ èõ ñîçäàíèÿ, ìåòîäû ðàçâåäå-
46
íèÿ, ñîâðåìåííîå ñîñòîÿíèå. Äàíà êëàññèôèêàöèÿ ïîðîä ïî àðåàëó è íàïðàâëåíèÿì
ïðîäóêòèâíîñòè. Îñâåùåíû âîïðîñû àêêëèìàòèçàöèè ïîðîä, ðàññìîòðåíû ïóòè ñîõðàíåíèÿ
èñ÷åçàþùèõ ïîðîä è ñîâåðøåíñòâîâàíèÿ ãåíîôîíäà ñåëüñêîõîçÿéñòâåííûõ æèâîòíûõ.
Скачать