АНАЛИЗ СТЕРОИДНЫХ ГОРМОНОВ С ПОМОЩЬЮ ТРОЙНОГО КВАДРУПОЛЬНОГО МАСС-СПЕКТРОМЕТРА IONICS 3Q 220 Molecular Analyzer Краткое описание технической заметки Масс спектрометр IONICS 3Q 220 Molecular Analyzer использован для анализа панели стероидов в сыворотке крови. Показано, что андрогены, глюкокортикоиды и прогестагены могут быть определены одновременно в одной пробы, и таким образом, вся панель может анализироваться одним методом. С помощью масс-спектрометра IONICS 3Q 220 стероиды определяются с высокой чувствительностью и точностью . Нижний предел определения находится на уровне пг/мл при точности определения 91 -106%. 1. ВВЕДЕНИЕ Количественное определение большого количества стероидов в одной пробе биологической жидкости важно как с точки зрения диагностики заболеваний, так и понимания протекания болезни и её лечения. В этих анализах метод ВЭЖХ/МС/МС является оптимальным. Получение высокой чувствительности при анализе панели стероидов является достаточно сложной задачей в сязи с различиями в оптимальных условиях ионизации индивидуальных стероидов. Так, например, оптимальные условия источника ионов для дельта-5 стероидов (таких как прегнанолон) отличаются от условий определения кортизола. Достижение клинически релевантной чувствительности для всей панели в одних и тех же условиаях является исключительно актуальной задачей. 2. МЕТОД 2.1. Пробоподготовка Матрица для приготовления проб была получена смешиванием одного объёма не содержащей стероиды сыворотки крови с двумя объёмами охлаждённого ацетонитрила. Смесь перемешивалась и центрифугировалась. Верхний слой отделялся и использовался в качестве матрицы. Стандартные растворы готовились в этой матрице в приведенных в таблице 3 диапазонах концентраций. Каждый образец анализировался пятикратно. Точность определялась как среднее для всего диапазона концентраций. %CV определялся по 5 инжекциям для каждой концентрации. 2.2 Параметры масс-спектрометрии. Таблица 1. Параметры масс-спектрометра: Напряжение на капилляре (V) Температура HSID (oC) Газ-распылитель Газ-осушитель Газ-нагреватель Температура источника (oC) Время детектирования (мс) Время паузы (мс) 5500 350 350 120 350 350 50 5 Таблица 2. MRM переходы Тестостерон Прогестерон 17-OH-прогестерон Дезоксикортикостерон Кортикостерон 11-Дезоксикортизол DHEA (дегидроэпиандростерон) 17-OH-прегнанолон Аллопрегнанолон 289.2/97.1 315.1/97.1 331.0/97.1 331.0/97.1 347.2/121.1 347.2/97.1 253.0/197.0 315.2/279.2 301.1/135.1 2.3 Хроматографические условия Хроматографирование проводилось на системе ВЭЖХ Shimadzu Prominence. Объём пробы 10 мкл. Колонка C18 (2.1x50 мм, 2.7 мкм), скорость подвижной фазы 0,5 мл/мин. Использовалось градиентное элюирование. Фаза А: Н2О, содержащий 5 ммоль ацетата аммония и 0,1% муравьиную кислоту. Фаза В: МеОН, содержащий 5 ммоль ацетата аммония и 0,1% муравьиную кислоту. 3. РЕЗУЛЬТАТЫ Статистически обработанные результаты приведены в таблице 3. Таблица 3. Результаты анализа панели стероидов. Соединение Нижний предел (нг/мл) Тестостерон 0.0024 Прогестерон 0.0024 17-OH-Прогестерон 0.0012 Дезоксикортикостерон 0.0024 Кортикостерон 0.025 11-Дезоксикортизол 0.0048 DHEA (дегидроэпиандростерон) 0.098 17-OH-прегнанолон 0.025 Аллопрегнанолон 0.025 Точность (%) 101 96 96 97 104 106 98 91 100 CV (%) 13 7 17 5 15 12 9 18 17 Диапазон (нг/мл) 0.0024-10 0.0024-5 0.0012-10 0.0024-20 0.025-25 0.0048-10 0.050-25 0.025-50 0.025-100 3.1. Экстрагированные ионные хроматограммы (EIC) На рисунках 1- 4 приведенны экстрагированные ионные хроматограммы тестостерона, прогестерона , DHEA и 11дезоксикортизола при концентрации в матрице 0,01 нг/мл. Эти хроматограммы являютсв репрезентативными для всей панели определяемых стероидов. Рис. 1. EIC тестостерона в матрице Рис. 2. EIC прогестерона в матрице Рис. 3 EIC DHEA в матрице Рис. 2 EIC 11-дезоксикортизола в матрице 3.2 Линейность. Для всех анализируемых соединений линейность наблюдалась в измеряемых диапазонах концентраций. Точность и прецизионность соответствуют требованиям биоаналитических анализов. Применение изотопных внутренних стандартов ещё больше повысит точность и прецизионность анализа. Рисунки 5 и 6 демонстрируют линейность для тестостерона и DHEA и являются репрезентативными для всей панели стероидов. Рис. 5 Калибровочная кривая тестостерона (289.2/97.1) Рис. 6: Калибровочная кривая DHEA (253.1/197.1) 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Масс-спектрометр IONICS 3Q 220 Molecular Analyzer обладает чувствительностью, позволяющей определять стероиды на уровне пг/мл в биологических образцах. Подобная чувствительность может быть достигнута для андрогенов, глюкокортикоидов и прогестагенов в одной пробе, и таким образом, даёт возможность определения всей панели одним методом. 5. Контактная информация Для того, чтобы узнать больше о масс-спектрометрах, услугах и других продуктах компании IONICS Вы можете посетить веб-сайт www.ionics.ca или связаться с представителями компании напрямую. Контакты: ООО «БиоФармЭксперт», т. +7-915-180-5909 sales@biopharmexpert.com