Акушерство и гинекология 71 ВЛИЯНИЕ ОКСИТОЦИНА НА

Ак ушерство и г инек о л ог и я
УДК 612.111.44:615.373.34
ВЛИЯНИЕ ОКСИТОЦИНА НА СКОРОСТЬ АГГЛЮТИНАЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ
ЧЕЛОВЕКА ИНДУЦИРОВАННОЙ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩЕЙ СЫВОРОТКОЙ
О.М. Безмельцева1, А.И. Махнева1, Е.Г. Шушканова1, В.И. Циркин2,
Т.В. Черепанова3, С.Л. Дмитриева4, В.С. Попова4, С.В. Хлыбова5, А.А. Костяев6,
1ФГБОУ ВПО «Вятский государственный гуманитарный университет», г.
2ФГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет»,
3КОГБУЗ «КГБ № 9 Женская консультация», г. Киров,
4КОГБУЗ «Кировский областной клинический перинатальный центр»,
5ФГБОУ ВПО «Кировская государственная медицинская академия»,
6КНИИГП
Киров,
«Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови»
Безмельцева Оксана Михайловна – e-mail: oksana_bezmeltseva@mail.ru
Оценивали окситоцинореактивность эритроцитов венозной крови человека по изменению
времени начала их агглютинации в изогемагглютинирующей сыворотке крови человека с
I группой крови в присутствии окситоцина, используемого в одной из концентраций (от 10-7 до 10-3
МЕ/мл). Установлено, что окситоцинореактивность эритроцитов зависит от пола (у мужчин она
выше, чем у небеременных женщин, а у женщин зависит от этапа репродуктивного процесса). В
частности, окситоцинореактивность относительно высокая в I триместре, крайне низкая – во
II и III триместрах неосложненной беременности и вновь становится относительно высокой в I
периоде срочных родов. При угрозе преждевременных родов, не перешедших в преждевременные
роды, окситоцинореактивность эритроцитов такая же низкая, как у женщин с неосложненным
течением беременности. У лактирующих женщин эритроциты рефрактерны к окситоцину.
Предполагается, что данная методика может быть использована для прогноза вероятности
развития преждевременных родов.
Ключевые слова: окситоцин, окситоциновые рецепторы, эритроциты,
мужчины, женщины, беременность, роды.
Evaluated oxytocinoreactivity of human erythrocytes from venous blood by changing the start time of its
agglutination in isogemagglutinаnation serum blood group I in the presence of oxytocin used at a concentration (10-7–10-3 IU/ml). Established that oxytocinoreactivity of erythrocytes depends on gender (males is
higher than in non-pregnant women), and women – on the stage of the reproductive process. In particular,
oxytocinoreactivity was relatively high in the I trimester of f pregnancy, very low – in the II and III trimester
and again becomes relatively high in the I period of urgent delivery. With the threat of premature birth, not
fallen into premature labor, oxytocinoreactivity of erythrocytes was also low, as in women with uncomplicated pregnancy. Erythrocytes of lactating women was refractory to oxytocin. It is expected that this
technique can be used to predict the likelihood of preterm birth.
Key words: oxytocin, oxytocin receptors, erythrocytes, men, women, pregnancy, delivery.
Введение
Общепризнано, что окситоцин является участником
индукции и поддержания родовой деятельности у человека. Однако вопрос о том, на каких сроках беременности
появляется высокая чувствительность миоцитов матки к
окситоцину, остается открытым. Предполагается, что это
может быть накануне родов и обусловлено ростом экспрессии окситоциновых рецепторов и/или снижением
влияния бета-адренорецепторного ингибирующего механизма [1]. Однако до настоящего времени каких-либо
данных, подтверждающих это предположение, не имеется. Исходя из представлений о том, что характер изменения скорости агглютинации эритроцитов под влиянием
адренергических средств может отражать изменение
эффективности активации альфа- и бета-адренорецепторов [2, 3], мы предположили, что изменение скорости
агглютинации эритроцитов человека под влиянием окситоцина также может отражать эффективность активации
окситоциновых рецепторов миометрия и других клеток,
являющихся мишенью для окситоцина.
71
Цель настоящей работы: оценить влияние окситоцина,
используемого в диапазоне концентраций от 10-7 до 10-3
МЕ/мл, на скорость агглютинации эритроцитов у мужчин,
небеременных женщин (независимо от фазы цикла), у
женщин в I, II и III триместрах неосложненной беременности, у рожениц (в латентную фазу 1-го периода срочных
неосложненных родов), у женщин с угрозой преждевременных родов, а также у лактирующих женщин.
Материал и методы
Исследовали гепаринизированную кровь мужчин
(n=16), небеременных женщин (n=9), беременных женщин, в том числе в I (n=10), во II (n=10) и в III (n=10) триместрах, у рожениц в первом периоде родов (n=10), у
лактирующих женщин (n=10) и женщин с угрозой преждевременных родов (n=10). Кровь мужчин и небеременных женщин получали в Кировском НИИ гематологии и
переливания крови, кровь беременных женщин получали
в условиях женской консультации, кровь рожениц, а также
беременных женщин с угрозой преждевременных родов и
кровь 6 лактирующих родильниц – в Кировском област№ 5 ( 3 5) ноябрь 2014 МЕДИЦ ИНСК ИЙ А ЛЬМАНАХ
Аку ш е рс т в о и ги некол оги я
ном перинатальном центре. У 4 лактирующих женщин
забор крови проводили в условиях женской консультации
в первые 2 месяца после родов. Отметим, что кровь у женщин с угрозой преждевременных родов была взята до
начала лечения, которое проводилось гинипралом или
магнезией по стандартной схеме и которое оказалось
эффективным у всех 10 исследуемых. Во всех случаях
забор венозной крови проводился с согласия исследуемых. Для забора крови применяли вакуумные пробирки с
Li-гепарином, объемом 6 мл (фирма Ningbo Greetmed
Medical Instruments Co, LTD).
Для оценки окситоцинореактивности эритроцитов мужчин и женщин со II (А), III (Вa) или IV (АВ) группами
крови использовали метод В.И. Циркина и соавт. [2, 3],
первоначально предложенный для оценки адренореактивности эритроцитов по изменению времени начала
агглютинации (ВНА) эритроцитов в изогемагглютинирующей сыворотке человека I группы (0, a) крови при действии окситоцина (опыт) в сравнении с действием раствора Кребса, на котором готовился окситоцин (контроль).
Окситоцин использовали в концентрациях 10-7, 10-6, 10-5,
10-4 и 10-3 МЕ/мл раствора Кребса. Раствор Кребса имел
состав (мМ): NaCl – 136; KCl – 4,7; CaCl2 – 2,52; MgCl2 – 1,2;
KH2PO4 – 0,6; NaHCO3 – 4,7; глюкоза – 11; pH – 7,4. Для
оценки окситоцинореактивности эритроцитов на плоскость с помощью стеклянных глазных пипеток наносили
три капли: 1) каплю гепаринизированной крови, 2) каплю
раствора Кребса (контроль) или каплю окситоцина в
одной из исследуемых концентраций (опыты), 3) каплю
изогемагглютинирующей сыворотки 0a(I) группы. Затем
смешивали стеклянной палочкой первую и вторую капли,
а через 10 секунд к ним примешивали каплю сыворотки, и
с этого момента определяли время начала агглютинации
(ВНА) эритроцитов по появлению ее первых визуальных
признаков [2, 3]. В работе использовали окситоцин фирмы
«Санитас» (Литва).
Результаты исследования, в том числе их различия, оценивали методами статистики [4], используя для зависимых
выборок непараметрический критерий Вилкоксона (В), а
для независимых – непараметрический критерий МаннаУитни (М-У). Различия считали статистически значимыми
(*) при р<0,05. Результаты в тексте и таблице представлены в виде медианы, 25 и 75 центилей.
Результаты и их обсуждение
Установлено (табл.), что в условиях раствора Кребса
ВНА эритроцитов, судя по значениям медианы, составляет
8–10 с, независимо от пола, а у женщин – от этапа репродукции.
При действии окситоцина в концентрациях 10-7, 10-6, 10-5,
10-4, 10-3 МЕ/мл ВНА эритроцитов (медиана) у мужчин
составило соответственно 100,0%, 110,0%, 112,0%, 115,5%*В
и 120,0% *В от контроля (*В означает, что различие с контролем статистически значимо по критерию Вилкоксона,
р<0,05). Таким образом, в концентрациях 10-4 и 10-3 МЕ/
мл окситоцин повышает ВНА эритроцитов мужчин, т. е.
снижает скорость агглютинации эритроцитов (таблица).
ВНА эритроцитов небеременных женщин (без учета
фазы цикла) при действии окситоцина (10-7,…, 10-3 МЕ/мл)
составило соответственно 111,0%, 117,0%, 100,0%, 89,0% и
89,0% от контроля – все эти изменения были статистиче-
72
ски не значимы (р>0,05 по критерию Вилкоксона). Это
означает, что окситоцин в концентрациях 10-7,…, 10-3 МЕ/мл
не изменяет скорость агглютинации эритроцитов. Косвенно
это означает, что эритроциты небеременных женщин рефрактерны к окситоцину.
ВНА эритроцитов женщин в I триместре беременности
при действии окситоцина в концентрациях 10-7,…, 10-3 МЕ/мл)
составило соответственно 113,0%, 117,5%, 117,5%*В,
111,5%*В и 119,5% от контроля. Это означает, что окситоцин
во всех концентрациях повышает ВНА, причем статистически значимо – в концентрациях 10-5 и 10-4 МЕ/мл. То есть в
I триместре беременности окситоцин снижает скорость
агглютинации эритроцитов. Это означает, что эритроциты
женщин в I триместре приобретают чувствительность к
окситоцину.
ВНА эритроцитов женщин во II триместре беременности
при действии окситоцина в концентрациях 10-7,…, 10-3 МЕ/мл
составило соответственно 91,5%, 100,0%, 100,0%, 100,0%
и 94,0% от контроля, а у женщин в III триместре беременности – соответственно 89,0%, 105,0%, 100,0%, 100,0% и
104,0% от контроля. При этом все изменения были статистически незначимы (р>0,05 по критерию Вилкоксона).
Таким образом, во II триместре беременности эритроциты
утрачивают чувствительность к окситоцину, т. е. становятся
рефрактерны к нему и сохраняют такое состояние в III триместре.
ВНА эритроцитов рожениц (латентная фаза I периода
неосложненных родов) при действии окситоцина в концентрациях 10-7,…, 10-3 МЕ/мл составило соответственно
96,0%, 100,0%, 100,0%, 103,0% и 118,0%*В от контроля.
Это означает, что в родах окситоцин в концентрации
10-3 МЕ/мл статистически значимо увеличивает ВНА
(р<0,05 по критерию Вилкоксона), т. е. снижает скорость
агглютинации. Таким образом, в родах эритроциты вновь
приобретают чувствительность к окситоцину. Вопрос о
том, за сколько суток до начала срочных родов эритроцит
утрачивает рефрактерность к окситоцину и приобретает
чувствительность к нему как к фактору, уменьшающему
скорость агглютинации, требует отдельного исследования.
ВНА эритроцитов женщин с угрозой преждевременных
родов при действии окситоцина в концентрации 10-7,…, 10-3
МЕ/мл составило соответственно 100,0%, 115,5%, 111,0%,
100,0% и 104,0% от контроля. При этом все изменения
статистически незначимы (р>0,05 по критерию
Вилкоксона). Это означает, что при угрозе преждевременных родов эритроциты остаются такими же рефрактерными к окситоцину, как и эритроциты женщин с неосложненным течением беременности. Эти данные указывают на
перспективность оценки окситоцинореактивности эритроцитов для прогнозирования вероятности перехода угрозы
преждевремененых родов в преждевременные роды.
ВНА эритроцитов лактирующих женщин при действии
окситоцина в концентрациях 10-7,…, 10-3 МЕ/мл составило
соответственно 109,5%, 109,5%, 105,5%, 105,0% и 105,0%
от контроля. Все эти изменения были статистически незначимыми (р>0,05 по критерию Вилкоксона). Следовательно,
в послеродовом периоде у лактирующих женщин эритроциты вновь снижают свою окситоцинореактивность, хотя,
как принято считать [1], окситоцин причастен к регуляции
лактации.
№ 5 ( 3 5) ноябрь 2014 МЕДИЦ ИНСК ИЙ А ЛЬМАНАХ
Ак ушерство и г инек о л ог и я
ТАБЛИЦА.
Время начала агглютинации эритроцитов мужчин и женщин
(медиана, 25 и 75 центили) в присутствии раствора Кребса (с)
или окситоцина (10-7–10-3 МЕ/мл; в % от контроля, т. е.
в присутствии раствора Кребса)
Концентрация окситоцина, МЕ/мл
Контроль,
(раствор
Кребса)
10-7
10
100
110
112
115,5 *
120,0 *
(8,5; 11,0)
(100; 114,0)
(100; 114)
(100; 120)
(100; 125)
(109; 133)
10-6
10-5
10-4
10-3
Группа 1 - мужчины (n=16)
Группа 2 - небеременные (без учета фаз; n=9)
6
111
(5; 9)
117
(81,5; 119,25) (81,5; 121,5)
100
89
89
(81,5; 115)
(81,5; 100)
(81,5; 119,5)
Группа 3 - беременные, I триместр (8-12 недель; n=10)
10
113
117,5
117,5* 2
111,5* 2
119,5
(9; 13,5)
(105; 145)
(102; 131,5)
(104; 140)
(107; 134,5)
(97; 165,5)
Группа 4 - беременные, II триместр (13-24 недели; n=10)
9
(9; 11,5)
91,5
100
100,0 3
100
94,0 1
(88,5; 111)
(82; 111)
(90,5; 116,5)
(94,5; 118)
(85,5; 116,5)
Группа 5 - беременные III триместр (25-38 недели; n=10)
10
89
105
100
100
104
(9; 13)
(77,5; 127,5)
(90; 112)
(91; 121)
(88; 124)
(100;144)
Группа 6 - роженицы, (38-40 недель, латентная фаза I периода родов; n=10)
9,5
96
100
100
103
118,0 *
(6,5; 14,5)
(88,5; 124)
(97,0; 136,0)
(91,5; 131,5)
(100; 123,5)
(104; 140,5)
Группа 7 - беременные с угрозой преждевременных родов (24-36 недель; n=10)
8
100
115,5
111
100
104
(7,5; 15,5)
(90; 113,5)
(97,5; 127)
(91,5; 153)
(91,5; 129)
(94; 138,5)
Группа 8 - лактирующие женщины (8-29 дней после родов; n=10)
9,5
109,5
109,5
105,5
105
105
(8,5; 12)
(100; 145)
(100; 132,5)
(100; 128,5)
(87,5; 132,5)
(96; 120)
Примечания: * – различия с контролем статистически значимы
(p<0,05) по критерию Вилкоксона. 1 – различия между группами
статистически значимы по критерию Манна-Уитни (p<0,05).
Результаты исследования позволяют предположить,
что эритроциты мужчин, а также эритроциты женщин на
различных этапах репродуктивного процесса содержат
окситоциновые рецепторы. При их активации ВНА возрастает, что говорит о снижении скорости агглютинации
при активации окситоциновых рецепторов. Очевидно,
что эффективность активации окситоциновых рецепторов эритроцитов, т. е. окситоцинореактивность эритроцитов, зависит от пола – у мужчин, у которых, как известно
[1], окситоцин причастен к эякуляции, она выше, чем у
небеременных женщин. У женщин окситоцинореактивность зависит от наличия беременности и родов – в I
триместре эритроциты приобретают чувствительность к
окситоцину, во II и III триместрах эритроциты утрачивают
ее, т. е. они становятся рефрактерными к окситоцину, а
уже в пером периоде срочных родов (или за несколько
дней до начала родов?) эритроциты вновь становятся
чувствительными к окситоцину. Наши данные показывают, что при угрозе преждевременных родов эритроциты
по-прежнему сохраняют рефрактерность к окситоцину.
Мы не исключаем, что при переходе к преждевременным
родам эритроциты станут окситоцинореактивными, т. е.
подобно женщинам при срочных родах их эритроциты
будут снижать скорость агглютинации под влиянием
окситоцина. С этих позиций мы не исключаем, что оценка
73
окситоцинореактивности эритроцитов может быть очень
информативным тестом при диагностике и при лечении
угрозы преждевременных родов, выполнимым в условиях женской консультации и акушерско-гинекологического стационара. Относительная простота метода, его высокая скорость выполнения и несложность чтения результата позволяют надеяться, что метод оценки окситоцинореактивности эритроцитов по изменению их скорости
агглютинации найдет широкое применение. Хотя в данной работе при использовании гемагглютинирующей
сыворотки крови мы не могли оценить окситоцинореактивность женщин с I группой в связи с отсутствием в эритроцитах агглютиногена А или В, полагаем, что переход
на цоликлон анти-D или на стандартизованные фитогемагглютинины, выделенные, например, из гороха или
фасоли, и которые способны вызывать агглютинацию
эритроцитов независимо от их групповой принадлежности по системе АВО или по наличию в них резус-фактора,
– перспективный путь модификации предлагаемой методики. Предварительные эксперименты с экстрактом гороха, проведенные в нашей лаборатории [5], подтверждают
это утверждение.
Выводы
1. Окситоцинореактивность эритроцитов человека, определяемая по изменению времени начала агглютинации
эритроцитов изогемагглютинирующей сыворотки человека
I группы в присутствии окситоцина в концентрациях 10-7,
10-6, 10-5, 10-4 и 10-3 МЕ/мл раствора Кребса, зависит от пола
(у мужчин она выше, чем у небеременных женщин, а у
женщин она зависит от этапа репродуктивного процесса).
2. У мужчин окситоцин не влияет на ВНА при его концентрации 10-7, 10-6, 10-5 МЕ/мл, но повышает ВНА в концентрациях 10-5 и 10-4 МЕ/мл, а у небеременных женщин
окситоцин не влияет на ВНА ни в одной из концентраций.
3. У беременных женщин в I триместре окситоцин повышает ВНА в концентрациях 10-5 и 10-4 МЕ/мл, но не влияет
на ВНА у женщин во II и III триместрах, в том числе и при
наличии угрозы преждевременных родов. В то же время
окситоцин повышает ВНА у рожениц в концентрации 10-3
МЕ/мл, но не влияет на ВНА у лактирующих женщин.
4. Метод определения окситоцинозависимой агглютинации эритроцитов, индуцированной изогемагглютинирующей сывороткой можно рекомендовать для использования в клинической практике для оценки окситоцинореактивности эритроцитов с целью определения срока наступления срочных родов и для прогнозирования развития
преждевременных родов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Циркин В.И., Дворянский С.А. Сократительная деятельность матки
(механизмы. регуляции). Киров. 1997 270 с.
Tsirkin V.I., Dvoryanskiy S.A. Sokratitelnaya deyatelnost matki (mehanizmyi.
regulyatsii) – Kirov, 1997.- 270 s.
2. Володченко А.И., Циркин В.И., Хлыбова С.В., Дмитриева С.Л. Изменение
скорости адренозависимой агглютинации эритроцитов у женщин на различных этапах репродуктивного процесса //Российский вестник акушера-гинеколога. 2013. Т. 13, № 6. С. 10-15.
Volodchenko A.I., Tsirkin V.I., Hlyibova S.V., Dmitrieva S.L. Izmenenie skorosti
adrenozavisimoy agglyutinatsii eritrotsitov u zhenschin na razlichnyih etapah
reproduktivnogo protsessa //Rossiyskiy vestnik akushera- ginekologa. 2013.
T. 13, № 6. S. 10-15.
№ 5 ( 3 5) ноябрь 2014 МЕДИЦ ИНСК ИЙ А ЛЬМАНАХ
Аку ш е рс т в о и ги некол оги я
3. Циркин В. И., Громова М. А., Колчина Д. А., Михайлова В. И., Плясунова
Я. К. Оценка адренореактивности эритроцитов, основанная на способности
адреналина повышать скорость агглютинации эритроцитов //
Фундаментальные исследования. – 2008. – № 7. – С. 59–60.
Tsirkin V. I., Gromova M. A., Kolchina D. A., Mihaylova V. I., Plyasunova Ya. K.
Otsenka adrenoreaktivnosti eritrotsitov, osnovannaya na sposobnosti
adrenalina povyishat skorost agglyutinatsii eritrotsitov // Fundamentalnyie
issledovaniya. – 2008. – № 7. – S. 59–60.
4. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. — М., Практика,
1999. — 459 с.
Glants S. Mediko-biologicheskaya statistika. Per. s angl. — M., Praktika,
1999. — 459 s.
74
5. Махнёва А. И., Безмельцева О. М., Мойсеенко Н. А, Циркин В.И.
Влияние адреналина на скорость агглютинации эритроцитов человека, вызванную фитогемагглютинином // Вопросы фундаментальной
и прикладной физиологии в исследованиях студентов вузов:
Материалы VI всероссийской молодежной научной конференции,
посвященной 100-летию ВятГГУ, Киров, 20 мая 2014.- Киров: ВятГГУ,
2014.- С.68-73.
Mahnyova A. I., Bezmeltseva O. M., Moyseenko N. A, Tsirkin V.I. Vliyanie
adrenalina na skorost agglyutinatsii eritrotsitov cheloveka, vyizvannuyu
fitogemagglyutininom // Voprosyi fundamentalnoy i prikladnoy fiziologii v
issledovaniyah studentov vuzov: Materialyi VI vserossiyskoy molodezhnoy
nauchnoy konferentsii, posvyaschennoy 100-letiyu VyatGGU, Kirov, 20 maya
2014.- Kirov: VyatGGU, 2014.- S.68-73.
№ 5 ( 3 5) ноябрь 2014 МЕДИЦ ИНСК ИЙ А ЛЬМАНАХ