молекулярные методы диагностики в изучении циркуляции

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ В ИЗУЧЕНИИ ЦИРКУЛЯЦИИ
РАЗЛИЧНЫХ ГЕНОТИПОВ РОТАВИРУСОВ СРЕДИ ДЕТЕЙ В УКРАИНЕ
Дзюблик И.В., Обертинская О.В., Соловьев С.А., Костенко И.Г, Трохименко Е.П.,
Вороненко С.Г., Ковалишин Г.Г, Ковалюк О.В., Самборская И.Ф., Жеребко Н.Н
Национальная медицинская академия последипломного образования имени П.Л.Шупика,
Киев, Украина
Острые кишечные инфекции (ОКИ) представляют одну из наиболее значимых
проблем здравоохранения во всех странах мира. Спектр возбудителей, вызывающих ОКИ,
разнообразен и включает в себя патогенные и условно-патогенные бактерии, простейшие
а также вирусы. Среди них именно ротавирусам принадлежит ведущая роль в структуре
вирусных диаррейных заболеваний у новорожденных и детей в возрасте до 5 лет.
Ежегодно во всем мире миллионы детей заболевают тяжелой формой ротавирусной
диареи, из которых более 440 тыс. умирают, главным образом в развивающихся странах
[1]. В 2006 году только в странах Европейского Союза было зарегистрировано 3,6 млн
случаев ротавирусной инфекции, 87 тыс.госпитализаций, 213 летальных исходов [2]. В
Украине ОКИ вирусной этиологии изучены недостаточно хорошо, в связи с тем, что
обследование пациентов с симптомами гастроэнтеритов проводится преимущественно на
наличие бактериальных патогенов с использованием стандартных микробиологических
методов. В редких случаях этот перечень дополняется исследованием клинического
материала
простыми/быстрыми
тестами
или
применяют
коммерческие
иммуноферментные тест-системы для выявления антигенов ротавирусов группы А. В
результате,
почти половина случаев ОКИ (28 381- 46 134 ежегодно) остаются
этиологически не расшифрованными и относятся к кишечным инфекциям
неустановленной этиологии [3]. Однако, в настоящее время разработаны тест-системы
для выявления РНК ротавирусов методом ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) и
методом мультиплексной ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией по
«конечной точке» и в реальном времени [4]. Методы G/P–генотипирования ротавирусов с
использованием ОТ-ПЦР стали применяться в качестве современного «инструмента» при
изучении циркуляции ротавирусов среди людей в разных регионах мира и это сегодня
особенно актуальны в контексте реализации программ по вакцинопрофилактике
ротавирусной инфекции у детей.
Цель работы состояла в изучении особенностей циркуляции ротавирусов среди
детей с ОКИ в различных городах Украины методами молекулярной диагностики, а также
определение доминирующих G/P генотипов методом ОТ-ПЦР.
Материалы и методы. Нами было исследовано 600 образцов фекалий от детей в
возрасте до 5 лет с ОКИ из 6 городов Украины: (Харьков, Одесса, Чернигов, Суммы,
Львов, Киев), отобранных в период с ноября 2006 по май 2007 гг. Клинические образцы
исследовали методом ИФА с использованием тест-систем Ridascreen® ELISA (R-biopham,
Германия) и методом ОТ-ПЦР тест-системой АмплиСенс® Rotavirus-EPh (ФГУН ЦНИИ
эпидемиологии Роспотребнадзора). Генотипирование ротавирусов в позитивных пробах
проводили с набором праймеров, специфичных для различных генотипов ротавирусов по
методу [5].
Результаты. Показано, что за исследуемый период в структуре ОКИ вирусной
этиологии в разных городах Украины ротавирусы составляли: во Львове – 51 %, в Одессе
– 42%, в Чернигове и Суммах - 15 %, в Харькове – 30 %, в Киеве – 20 %. Подтверждена
зимне- весенняя сезонность ротавирусной инфекции, максимальное число случаев РВИ
было выявлено у детей в январе-феврале месяцах 2007г. В возрастной группе детей до 3
лет средняя частота выявления ротавирусов была наибольшей и составила 70,1+4,0 %.
В результате генотипирования отобранных 210 позитивных образцов в 176
случаях (83,8%) были выявлены Р-генотипы и в 182 случаях G-генотипы ротавирусов
(86,6%). В 3,3 % образцов не было выявлено P-генотип, в 4,3 % - G-генотип, и в 5,7 %
случаев не выявлялись оба генотипа. В исследуемый период была выявлена циркуляция
четырех основных генотипов ротавирусов группы А: P[8]G1, P[8]G4, P[8]G3, P[4]G2.
Следует отметить, что в Киеве, Львове, Одессе и Харькове большинство случаев
ротавирусной инфекции ( более 70%) было вызвано ротавирусом группы А с генотипом
P[8]G1. В Суммах доминировал генотип P[8]G4. В Одессе в отдельных случаях были
выявлены ротавирусы генотипа P[8]G9.
Заключение. Показано, что ротавирусы группы А были основной причиной
развития в вирусных гастроэнтеритов у детей раннего возраста в Украине. Пик
спорадической заболеваемости ротавирусной инфекцией приходился на январь-февраль.
В исследуемый период была установлена циркуляция четырех основных генотипов
ротавирусов группы А: P[8]G1, P[8]G4, P[8]G3, P[4]G2. Метод ОТ-ПЦР можно
использовать для детекции ротавирусной инфекции и мониторинга за циркуляцией
штаммов ротавирусов в Украине. Следует предположить, что антиротавирусные вакцины,
включающие аттенуированные или реассортантные штаммы ротавирусов с генотипом
P[8]G1 будут наиболее эффективными на территории Украины при планировании
специфической профилактики РВИ у детей.
Литература:
1. Parashar U.D.,Gibson C.J., Bresse J.S., Glass R.I. Rotavirus and severe childhood diarrhea
//Emerg. Infect. Dis.-2006.-#12.-P.304-306.
2. Soriano-Gabarro M. Burden of rotavirus desease in European union countries /M. SorianoGabarro, J.Mrucowicz, T. Vesicari [et al.] //Pediatric Ivfect. Dis.-2006.-Vol.25.-P.7-11.
3. Кракович А.В. Епідеміологічна характеристика ротавіруснї інфекції та шляхи
удоскогналення епідеміологічного нагляду: Автореф. дис. … канд. мед. наук: 14.02.02/
АМНУ ІЕІХ ім. Л.В. Громашевського. - 2006.-24 с.
4. Подколзин, А. Т. Разработка методик детекции возбудителей острых кишечных
инфекций на основе мультиплексной ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
продуктов амплификации «по конечной точке»/ А. Т. Подколзин, Н. Ю. Абрамычева, Е. Б.
Фенске и др.// Генодиагностика инфекционных болезней: Материалы Российской научнопрактической конференции (25-27 октября 2005 г., Новосибирская обл.)- Новосибирск,
2005.-С.216-221.
5. Подколзин, А. Т. Адаптированная к практическому применению методика [P]G
генотипирования ротавирусов группы А / А. Т. Подколзин, Е. Б. Фенске, Н. Ю.
Абрамычева и др. // Молекулярная диагностика-2007 : сб. тр. 6-ой Всерос. науч.-практ.
конф. с международным участием. – М., 2007. – Т. 3. - С. 284-286.