II. ИНФЕКЦИЯ И ИММУНИТЕТ 1. Понятие об инфекции и инфекционном заболевании. Периоды развития инфекционной болезни. Инфекция или инфекционный процесс, представляет собой совокупность физиологических и патологических адаптационных и репарационных реакций, которые возникают и развиваются в макроорганизме в процессе взаимодействия с патогенными микроорганизмами, вызывающими нарушения его внутренней среды и физиологических функций. Аналогичные процессы, вызванные простейшими, называют инвазиями. Периоды инфекционной болезни: 1. Инкубационный период. Начинается от момента проникновения инфекционного агента в организм человека до появления первых предвестников заболевания. Продолжительность инкубационного периода при большинстве бактериальных инфекций колеблется от нескольких часов до нескольких недель. Поведение возбудителя: адгезия на клетках дых. путей, ЖКТ, мочевывод. путей, миндалинах. Выделение возбудителя в окружающую среду: нет Иммунный ответ: АТ не обнаруживаются 2. Продромальный период Продолжается от нескольких часов до нескольких дней. В данный период возбудитель интенсивно размножается и колонизирует ткань в месте его локализации, а также начинает продуцировать соответствующие ферменты и токсины. При многих инфекционных заболеваниях возбудители в период продромы не выделяются во внешнюю среду. Поведение возбудителя: колонизация чувствительных клеток, проявление неспецифических симптомов Выделение возбудителя в окружающую среду: нет Иммунный ответ: АТ не обнаруживаются 3. Разгар заболевания Характеризуется появлением специфических симптомов. В начале данного периода обнаруживаются специфические антитела в сыворотке крови больного, титр которых в дальнейшем увеличивается. Возбудитель продолжает интенсивно размножаться в организме, накапливаются значительные количества токсинов и ферментов, поступающих в кровь. Вместе с тем происходит выделение возбудителя из организма больного, вследствие чего он представляет опасность для окружающих. Поведение возбудителя: интенсивное размножение, проявление специф.симптомов Выделение возбудителя в окружающую среду: выделяется Иммунный ответ: Появление антител класса IgM в небольших титрах. В конце периода происходит замена антител класса IgM антителами классов IgG и lgA. 4. Выздоровление Постепенно восстанавливаются физиологические функции пораженных клеток, тканей, органов и всего организма в целом. Продолжительность данного периода зависит от состояния организма хозяина, реабилитационных мероприятий и т.д. Титр антител достигает максимума. Поведение возбудителя: Прекращение размножения и гибель возбудителя. Нормализация функций больного. Выделение возбудителя в окружающую среду: Выделение возбудителя, прекращающееся после выздоровления больного или переходящее в микробоносительство. Иммунный ответ: Нарастание титра антител классов IgG, IgA. При ряде заболеваний формируется реакция гиперчувствительности замедленного типа. 2. Особенности внутриутробного инфекционного процесса (эмбриопатии и фетопатии). Пути заражения плода. Эмбриопатии – аномалии развития, которые возникают с 16 по 75 день. Проявляются различными врождёнными пороками тканей, органов, частей тела. Фетопатии – аномалии развития в фетальный период с 76 дня. Связано с нарушением плаценты или плода. Чаще всего поддаются коррекции. Протекают в хронической форме. Пути заражения: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. ч/з плаценту из специф. очага в ворсинке хориона из очага воспаления в стенке матки из влагалища ч/з фалопиевы трубы ч/з кожу из околоплодных вод из окр.среды 3. Экзотоксины и эндотоксины бактерий. Анатоксины: получение, применение. Токсические вещества, синтезируемые бактериями, по своей химической природе относятся к белкам и липополисахаридам. Первые, в зависимости от их связи со стромой бактериальной клетки, подразделяют на полностью секретируемые (экзотоксины), частично секретируемые и несекретируемые. Несекретируемые токсины освобождаются в процессе разрушения бактериальной клетки. Однако белковые токсины предназначены не только для поражения клеток, тканей и органов человека. Возможно также их участие и метаболических реакциях самих бактерий-продуцентов. Липополисахариды (ЛПС) — эндотоксины — локализуются и клеточной стенке бактерий и освобождаются только после их разрушения. Наряду с ЛПС токсическими свойствами обладают пептидогликан, тейхоевые кислоты, белки клеточной стенки грамположительных бактерий. ЭКЗОТОКСИНЫ 1. Цитотоксины Блокируют синтез белка на субклеточном уровне. К данному типу принадлежат токсины с энтеропатогенной активностью и дермонекротоксины, поражающие соответствующие ткани и органы. 2. Мембранотоксины Повышают проницаемость поверхностной мембраны эритроцитов (гемолизины) и лейкоцитов (лейкоцидины), вызывая гемолиз первых и разрушение вторых. 3. Функциональные блокаторы Включают термолабильные (ТЛ) и термостабильные (ТС) энтеротоксины, активизирующие клеточную аденилатциклазу, что приводит к повышению проницаемости стенки тонкой кишки и увеличению выхода жидкости в ее просвет — диарее. Нейротоксины блокируют передачу нервных импульсов в клетках спинного и головного мозга. 4. Эксфолианты и эритрогенины Они влияют на процесс взаимодействия клеток между собой и с межклеточными веществами. ЭНДОТОКСИНЫ К ним относятся липополисахариды (ЛПС), которые содержатся в клеточной стенке грамотрицательных бактерий. Токсические свойства эндотоксина определяются всей молекулой ЛПС. Более устойчивы к повышенной температуре, менее ядовиты и малоспецифичны. Анатоксины – некоторые экзотоксины под действием формалина способны утрачивать свою ядовитость, сохраняя иммунологические функции. Приготовление (метод Рамона): При приготовлении анатоксинов культуры бактерий выращивают в жидких питательных средах для накопления токсина. Затем фильтруют через бактериальные фильтры для удаления микробных тел. К фильтрату добавляют 0,3—0,4 % —формалина и помещают в термостат при температуре 37°— 40°С на 3—4 недели до полного исчезновения токсических свойств. Полученный анатоксин проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность. 4. Патогенность и вирулентность. Основные механизмы и факторы патогенности микробов. Вирулентность — количественная мера или степень патогенности, измеряемая в специальных единицах DLM и LDS0. 1 DLM (лат Dosis letalis minima),— минимальная смертельная доза, равная наименьшему количеству микробных клеток, которое при определенном способе заражения вызывает гибель 95% восприимчивых животных определенного вида, веса и возраста в течение заданного времени. Факторы вирулентности: 1. Адгезия Первые стадии инфекционного процесса и, связанные с адгезией микробных клеток на чувствительных клетках и последующей их колонизацией, являются конкретными проявления вирулентных свойств любого возбудителя. Феномен адгезии состоит из нескольких этапов, в результате которых микробные клетки прикрепляются или прилипают к поверхности эпителия. Способность к адгезии определяется специфическими химическими группировками определенного строения — лигандами. 2. Колонизация Процесс размножения микробов в месте адгезии. Эта стадия обеспечивает накопление микроорганизмов до такой критической концентрации, которая способна вызвать палогическое действие. 3. Пенетрация Проникновение внутрь клеточных и постклеточных структур. 4. Инвазия Проникновении через слизистые и соединительнотканные барьеры в подлежащие ткани. 5. Агрессия Факторы вирулентности, интерферирующие с защитными силами организма, иногда называют агрессинами, поскольку они обладают способностью подавлять неспецифическую и иммунную защиту организма хозяина. Патогенность является полидетерминантным генотипическим признаков, контролируемым кластером генов, ответственных за образование ряда структур бактериальной клетки (капсула, клеточная стенка), ферментов, нарушающих целостность тканей, и токсинов. Патогенность характеризуется специфичностью, т.е. способностью вызывать типичные для данного вида возбудителя патоморфологические и патофизиологические изменения в определенных тканях и органах при естественных для него способах заражения. 5. Формы инфекций: экзогенная и эндогенная, очаговая и генерализованная, моно- и смешанная, вторичная, реинфекция и суперинфекция, персистирующая инфекция. Экзогенная инфекция возникает в результате заражения человека патогенными микроорганизмами, поступающими из окружающей среды с пищей, водой, воздухом, почвой, выделениями больного человека, реконвалесцента и микробоносителя. Эндогенная инфекция вызывается представителями нормальной микрофлоры — условнопатогенными микроорганизмами самого индивидуума. Она часто возникает при иммунодефицитных состояниях организма. Аутоинфекция — разновидность эндогенной инфекции, которая возникает в результате самозараження путем переноса возбудителя (обычно руками самого больного) из одного биотопа в другой. В зависимости от локализации возбудителя различают очаговую инфекцию, при которой микроорганизмы локализуются в местном очаге и не распространяются по организму. Например, при фурункулезе стафилококки находятся в волосяных фолликулах. Однако очаговая инфекция при малейшем нарушении равновесия между макро- и микроорганизмами может перейти в генерализованную форму, при которой возбудитель распространяется по организму лимфогенным или гематогенным путем. Моноинфекция вызывается одним видом микроорганизмов, в то время как смешанная инфекция — двумя или несколькими видами. Наиболее тяжело протекают смешанные инфекции. От смешанных инфекций следует отличать вторичную инфекцию, при которой к первоначальной, основной, уже развившейся болезни присоединяется другая, вызываемая новым возбудителем Реинфекцией называют заболевание, возникающее после перенесенной инфекции в случае повторного заражения тем же возбудителем. В тех случаях, когда инфицирование макроорганизма тем же возбудителем происходит до выздоровления, возникает суперинфекция. По продолжительности взаимодействия возбудителя с макроорганизмом, а также по клиническим и патогенетическим признакам разнимают острые и хронические инфекции. Острые инфекции протекают в сравнительно короткие сроки. Они характеризуются определенными для данного заболевания патогенезом и клиническими симптомами. В ряде случаев острые инфекции переходят в хронические, продолжительность которых колеблется от нескольких месяцев до многих лет. Хронические инфекции характеризуются длительным пребыванием микроорганизмов в организме, или персистенцией. 6. Иммунная система: организация и функция. Иммунитетом называют совокупность свойств и механизмов, обеспечивающих постоянство состава организма и его защиту от инфекционных и других чужеродных для него агентов. Конкретно это сводится к контролю за развитием и действием в организме микроорганизмов и иммунологическому надзору за гомеостазом (постоянством состава) собственных клеток и тканей, включая процессы формообразования, регенерации, а также своевременного удаления отживших, поврежденных, мутантных и опухолевых клеток. Ф-ции иммунитета: Поддержание гомеостаза организма: 1. Контроль действия инфекционных и других потенциально-опасных факторов 2. Иммунологический надзор за постоянством состава организма и резистентностью к опухолевому росту 3. Контроль процессов формообразования и регенерации Иммунологические функции осуществляются на двух уровнях. Первый — филогенетически более древний уровень— составляют неспециализированные защитные механизмы, действующие против любого чужеродного фактора. Эти механизмы действуют постоянно и обеспечивают состояние, получившее название «врожденный, естественный, иммунитет, или неспецифическая резистентность». Механизмы неспецифической резистентности функционируют в организме постоянно, обуславливая в случаях массивного микробного или иного дестабилизирующего воздействия воспалительную реакцию, одинаковую при разных возбудителях. Развитие воспалительной реакции способствует возникновению специфического иммунного ответа, который можно рассматривать как развитие второй, более эффективной линии обороны против возбудителя инфекционного процесса. Второй уровень иммунологических функций составляют механизмы, определяющие способность организма к избирательному (специфическому) ответу на конкретные чужеродные структуры, именуемые антигенами. Эта способность формируется в каждом организме в ответ на воздействие конкретного антигенного вещества. Данная группа функций получила название приобретенного, или специфического, иммунитета. 7. Медиаторы иммунной системы: иммуноцитокины (интерлейкины, интерферон, туморнекротизирующий фактор, колониестимулирующий фактор и др.). Цитокинами называют гормоноподобные медиаторы, продуцируемые разными клетками организма и способные повлиять на функции других или этих же групп клеток. Цитокины — пептиды или гликопротеиды, действующие как аутокринные, паракринные или межсистемные сигналы. Цитокины формируются как активированными или поврежденными клетками, так и клетками без дополнительной стимуляции. Цитокины, регулирующие взаимодействия лейкоцитов между собой и другими клетками, называют интерлейкинами (ИЛ). Факторы роста — большая группа гликопротеинов, контролирующих пролиферацию и созревание потомков стволовой кроветворной клетки. Колониестимулирующие факторы (КСФ) получили свое название благодаря тому, что было обнаружено их свойство способствовать дифференцировке введенных мышам клеток костного мозга в зрелые гранулоциты и/или моноциты с образованием в селезенке животных колоний соответствующих клеток. Трансформирующий ростовой фактор (ТРФ-у) выполняет несколько функций, в основном действует как «анти-цитокин», подавляющий активность провоспалительных цитокинов. Цитотоксины. Такое название получили цитокины группы факторов некроза опухолей (ФНО). ФНО служит медиатором ответа организма на микробную инвазию. Эндотоксины (липиполисахариды) микробов стимулируют клетки-продуценты к образованию ФНО. Интерфероны (ИФ) были открыты как противовирусные агенты. Затем были обнаружены их иммунорегулирующие свойства. Адгезины. Среди факторов, определяющих прямые контакты клеток организма между собой и с представителями микрофлоры, существенную роль играют молекулы адгезии или адгезины. 8. Межклеточная кооперация в иммуногенезе. Механизм "двойного распознавания” чужеродной антигенной информации. Глава 13.3 9. Клонально-селекционная теория иммунитета. Теория, согласно которой в организме возникают клоны клеток, иммунокомпетентных в отношении различных антигенов; антиген избирательно контактирует с соответствующим клоном, стимулируя выработку им антител. Клонально-селекционная теория утверждает: 1. Антитела и лимфоциты с необходимой специфичностью уже существуют в организме до первого контакта с антигеном. 2. Лимфоциты, участвующие в иммунном ответе, имеют антигенспецифические рецепторы на поверхности своей мембраны. В случае B-лимфоцитов рецепторами являются молекулы той же специфичности, что и антитела, которые лимфоциты впоследствии продуцируют и секретируют. 3. Каждый лимфоцит несет на своей поверхности рецепторы только одной специфичности. 4. Лимфоциты, сенсибилизированные антигеном, проходят несколько стадий пролиферации и формируют большой клон плазматических клеток. Плазматические клетки будут синтезировать антитела только той специфичности, на которую был запрограммирован лимфоцит-предшественник. Сигналами к пролиферации служат цитокины, выделяемые другими клетками. Лимфоциты могут также сами начать выделять цитокины. Благодаря этому механизму клональной селекции антитела могут накапливаться в достаточно высокой концентрации, чтобы эффективно бороться с инфекцией. 10. Иммунологическая память: природа, биологическое значение. Особенностью приобретенного иммунитета является развитие иммунологической памяти — способности к быстрому и сильному ответу на повторное воздействие антигена. В соответствии с этим реакция организма на первое воздействие антигена получила название «первичный ответ», а реакция на повторное воздействие антигена — «вторичный ответ». После перенесения инфекционного заболевания формируется состояние, именуемое постинфекционным иммунитетом, которое состоит в высокой устойчивости к возможности повторного развития того же заболевания. Аналогом постинфекционного иммунитета является поствакциналъный иммунитет, развивающийся после проведения прививок (вакцинации). При некоторых заболеваниях (туберкулез, сифилис) устойчивость к повторному заражению сохраняется на протяжении того времени, пока в организме присутствует возбудитель болезни. Такой иммунитет называют инфекционным, или нестерильным. Формирование приобретенного имунитета — процесс активной перестройки иммунной системы, приводящий к образованию гуморального либо клеточного иммунитета — антител и клеток, способных эффективно взаимодействовать с антигенами, вызвавшими развитие иммунной реакции. В этих случаях возникший иммунитет называют активным. Антитела и клетки иммунного организма способны вызвать состояние иммунитета в другом организме, если будут перенесены искусственно или попадут естественным путем. Такой иммунитет получил название пассивный. Пассивный иммунитет возникает после введения профилактических или лечебных сывороток либо выделенных из них иммуноглобулинов. Пассивный иммунитет формируется у новорожденного ребенка за счет поступления материнских антител через плаценту при беременности (плацентарный иммунитет), либо с молозивом и молоком при кормлении ребенка. Иммунитет, воспринятый от матери, может быть назван материнским иммунитетом. 11. Иммунологическая толерантность: природа, биологическое значение и последствия срыва иммунологической толерантности. Иммунологическая толерантность — состояние организма, при котором иммунная система устойчиво воспринимает чужеродный антиген, как собственный и не отвечает на него. Аутотолерантность — это естественная иммунологическая толерантность организма к собственным тканям, формирующаяся в результате эмбрионального развития. В соответствии с представлениями «своё» с точки зрения иммунной системы организма — это комплекс макромолекул, который находился в контакте с иммунной системой в период её становления. Незрелые лимфоциты реагируют на связывание их антигенраспознающего рецептора не активацией, как зрелые клетки, а гибелью. В результате в процессе онтогенеза происходит гибель (делеция) клонов, специфичных к аутоантителам (чувствительных к собственным тканям). Нарушение иммунной толерантности к собственным антигенам приводит к развитию аутоиммунных заболеваний. 12. Антигены. Антигенные детерминанты. Протективные антигены. Полноценные и неполноценные антигены. Антигенами называют вещества любого происхождения, в том числе и микробного, которые способны вызвать в организме специфическую иммунную реакцию и принимать участие в ее осуществлении. Различают полные и неполные антигены, или гаптены. Последние — относительно простые вещества, способные участвовать в иммунологических взаимодействиях, но не способные активировать АПК (антигенпрезентующий комплекс) и самостоятельно индуцировать иммунный ответ. Структура, обладающая индивидуальной антигенной специфичностью, называется антигенным детерминантом, или эпитопом. Последнее название отражает то, что антигенной активностью обладают только струтуры лежащие на поверхности молекулы, а глубокие проявляют антигенность лишь при изменении конформации или разрушении молекулы. Протективные антигены - это совокупность антигенных детерминант (эпитопов), которые вызывают наиболее сильный иммунный ответ, что предохраняет организм от повторного инфицирования данным возбудителем. Обычно располагаются на поверхности микробной клетки. Полные АГ – это АГ способные вырабатывать АТ и реагировать с ними (протеины, нуклеопротеины, полисахара, липополисахара). АГ + АТ→ АГАТ (выводится почками). Неполные АГ (гаптены) – это органические вещества простой структуры, которые для нормального взаимодействия с АТ должны соединиться с белковым носителем и только после этого он выступает как полный АГ (бактериальные полисахара, бакт. Полипептиды, липиды, НК, моносахара, простые орг и неорг вещества, химические группировки). Гаптен + белковый носитель→ АГ+АТ →АГАТ выводится из организма). 13. Антигенная структура микробов. Сероидентификация бактерий. Структурные Жгутиковые Н-антигены. Как видно из названия, эти антигены входят в состав бактериальных жгутиков. Н-антнген представляет собой белок флагеллин. Он разрушается при нагревании, а после обработки фенолом сохраняет свои антигенные свойства. Соматический О-антиген. Ранее полагали, что О-антиген заключен в содержимом клетки, ее соме, поэтому и назвали его соматическим антигеном. Впоследствии оказалось, что этот антиген связан с бактериальной клеточной стенкой. О-антиген грамотрицательных бактерий связан с ЛПС клеточной стенки. К-антигены (капсульные). Эти антигены хорошо изучены у эшерихий и сальмонелл. Они, так же как О-антигены, тесно связаны с ЛПС клеточной стенки и капсулой. К капсульным антигенам относится так называемый Vi-антиген. Он обнаружен у брюшнотифозных и некоторых других энтеробактерий, обладающих высокой вирулентностью, в связи с чем данный антиген получил название антигена вирулентности. АГ пилий АГ цитоплазмы Антигены бактериальных токсинов. (секретируемые) Токсины бактерий обладают полноценными антигенными свойствами в том случае, если они являются растворимыми соединениями белковой природы. Ферменты, продуцируемые бактериями, в том числе факторы патогенности, обладают свойствами полноценных антигенов. Сероидентификация (серотипирование) – идентификация чистой культуры м.о. по АГ свойствам при помощи АТ (р-ция агглютинации на стекле (к неизвестным АГ хуярим диагностикум с известными АТ). 14. Гуморальные и клеточные факторы неспецифической защиты. Возрастные особенности. Клеточные факторы 1. Макрофаги – активный фагоцитоз. 2. Микрофаги – фагоцитоз но меньше и хуже. 3. Фагоцитам присущи три функции: 1 — защитная, связанная с очисткой организма от инфекционных агентов, продуктов распада тканей и т.д.; 2 — представляющая, заключающаяся в презентации лимфоцитамантигенных эпитопов на мембране фагоцита; 3 — секреторная, связанная с секрецией лизосомных ферментов и других биологически активных веществ — цитокинов, играющих важную роль в иммуногенезе 4. В организме человека и животных функционирует популяция лимфоцитоподобных клеток, обладающих естественной цитотоксичностью по отношению к клеткам-«мишеням». Они получили название естественных киллеров (ЕК). ЕК являются клетками с эффекторной противоопухолевой, противовирусной и противопаразитарной активностью. Они способны спонтанно, без предварительного контакта с антигеном убивать опухолевые клетки, а также клетки, зараженные некоторыми вирусами или паразитами. Гуморальные факторы 1. Лизоцим Он вызывает лизис многих сапрофитных бактерий, оказывая менее выраженное литическое действие на ряд патогенных микроорганизмов и не активен в отношении вирусов. Механизм бактериолитического действия лизоцима состоит в гидролизе связей между Мацетилмурамовой кислотой и N-ацетилглю-козамином в полисахаридных цепях пептидогликанового слоя клеточной стенки бактерии. Это приводит к изменению ее проницаемости, сопровождающемуся диффузией клеточного содержимого в окружающую среду, и гибели клеток. 2. Система комплимента Цитолитическое и цитотоксическое действие на клетки-мишени; способствует связыванию и захвату иммунных комплексов фагоцитами; 3. Белки острой фазы Так назвали большую группу белков, обладающих антимикробным действием, способствующих фагоцитозу, активации комплемента, формированию и ликвидации воспалительного очага. 4. Цитокины и интерфероны Цитокинами называют гормоноподобные медиаторы, продуцируемые разными клетками организма и способные повлиять на функции других или этих же групп клеток. Цитокины — пептиды или гликопротеиды, действующие как аутокринные, паракринные или межсистемные сигналы. Цитокины формируются как активированными или поврежденными клетками, так и клетками без дополнительной стимуляции. 5. Белки теплового шока При воздействии на микробные и эукариотические клетки неблагоприятных стрессовых факторов — повышенной температуры, голодания, токсинов, тяжелых металлов, вирусов, в них формируются защитные белки. Они получили название белков теплового шока 15. Система комплемента. Классический и альтернативный пути активации. Возрастные особенности. Системой комплемента называют многокомпонентную самособирающуюся систему белков сыворотки крови, которая играет важную роль в поддержании гомеостаза. Она способна активироваться в процессе самосборки, т.е. последовательного присоединения к образующемуся комплексу отдельных белков, которые называются компонентами, или фракциями комплемента. Процесс активации комплемента может запускаться (инициироваться) двумя разными путями, получившими названия классический и альтернативный. Классический путь. При активации комплемента этим путём инициирующим фактором является комплекс антигенантитело (иммунный комплекс). Причем антитела только двух классов IgG и IgM в составе иммунных комплексов могут инициировать активацию комплемента. Таким образом, при активации комплемента классическим путём, ключевыми компонентами являются С1 и СЗ, продукт расщепления которого СЗЬ активирует терминальные компоненты мембраноатакующего комплекса (С5-С9). Альтернативный путь. Существует возможность активации СЗ с образованием СЗЬ при участии СЗ-конвертазы альтернативного пути, т.е. минуя первые три компонента: Cl, С4 и С2. Особенность альтернативного пути активации комплемента состоит в том, что инициация может происходить без участия комплекса антиген-антитело за счет полисахаридов и липополисахаридов бактериального происхождения — липополисахарида (ЛПС) клеточной стенки грамотрицательных бактерий, поверхностных структур вирусов, иммунных комплексов, включающих IgA и IgE. Ф-ции: 1) Мембраноатакующий комплекс опосредует цитолитическое и цитотоксическое действие специфических антител на клетки-«мишени»; 2) Анафилотоксины участвуют в иммунопатологических реакциях; 3) Компоненты комплемента изменяют физико-химические свойства иммунных комплексов; уменьшают степень агрегации и эффективностьих фагоцитоза через Fc-рецепторы; 4) Фрагмент СЗЬ способствует связыванию и захвату иммунныхкомплексов фагоцитами, опсонизируя объекты фагоцитоза; фрагменты СЗЬ, С5а и ВЬ, обладающие свойствами хемоаттрактантов, участвуют в развитии воспаления. 16. Фагоцитарная реакция, роль лизосомного аппарата фагоцитов. Критерии оценки системы фагоцитоза. Возрастные особенности фагоцитоза. Все фагоцитирующие клетки организма, по И.И. Мечникову, подразделяются на макрофаги и микрофаги. К микрофагам относятся полиморфноядерные гранулоциты крови: нейтрофилы, эозинофилы и базофилы. Макрофаги различных тканей организма (соединительной ткани, печени, легких и др.) вместе с моноцитами крови и их костномозговыми предшественниками (промоноциты и монобласты) объединены в особую систему мононуклеарных фагоцитов. Все фагоцитирующие клетки характеризуются общностью основных функций, сходством структур и метаболических процессов. Наружная плазматическая мембрана всех фагоцитов является активно функционирующей структурой. Она отличается выраженной складчатостью и несет множество специфических рецепторов и антигенных маркеров. Стадии фагоцитоза: 1. Хемотаксис Целенаправленное передвижение фагоцитов в направлении химического градиента хемоаттрактантов в окружающей среде. Способность к хемотаксису связана с наличием на мембране специфических рецепторов для хемоаттрактантов, в качестве которых могут выступать бактериальные компоненты, продукты деградации тканей организма, активированные фракции системы комплемента. 2. Адгезия 3. Эндоцитоз Различают фагоцитоз — в отношении частиц с диаметром не менее 0,1 мкм и пиноцитоз — в отношении более мелких частиц и молекул. Наиболее эффективным является фагоцитоз, опосредованный рецепторами, для Fc-фрагмента иммуноглобулинов и для СЗ-фракции комплемента. Такой фагоцитоз называют иммунным, так как он протекает при участии специфических антител и активированной системы комплемента, опсонизирующих микроорганизм. Это делает клетку высокочувствительной к захвату фагоцитами и приводит к последующей внутриклеточной гибели и деградации. В результате эндоцитоза образуется фагоцитарная вакуоль — фагосома. 4. Внутриклеточное переваривание Переваривание начинается по мере поглощения бактерий или других объектов. Оно происходит в фаголизосомах, образующихся за счет слияния первичных лизосом с фагосомами. Захваченные фагоцитами микроорганизмы погибают в результате осуществления механизмов микробоцидности этих клеток. Различают кислородзависимые механизмы микробоцидности, связанные с «окислительным взрывом», и кислороднезависимые механизмы, опосредованные катионными белками и ферментами (в том числе лизоцимом), попадающими в фагосому в результате ее слияния с лизосомами. 5. Результат фагоцитоза Завершенный – гибель и разрушение микроорганизмов Незавершенный – бактерии, снабженные капсулами или плотными гидрофобными клеточными стенками, устойчивы к действию лизосомальных ферментов; блокировка слияния фагосом и лизосом. 17. Гуморальный иммунный ответ: классы иммуноглобулинов, возрастная динамика, защитная функция антител при инфекции. АГ-презентирующие клетки фагоцитируют микроорганизм и перерабатывают его, расщепляя на фрагменты (процессинг АГ). Фрагменты АГ выставляются на поверхность АГ-презентирующей клетки вместе с молекулой МНС. Комплекс АГ-молекула МНС2 предъявляется Т-хелперу. Распознание комплекса Т-хелпером стимулирует секрецию ИЛ-1 макрофагами. Т-хелпер под действием ИЛ-1 синтезирует ИЛ-2 и рецепторы к ИЛ-2, последний по аутокринному механизму стимулирует пролиферацию Т-хелперов, а также ЦТЛ. Таким образом, после взаимодействия с АГ-презентирующей клеткой Т-хелпер преобретает способность отвечать на действие ИЛ-2 бурным размножением. Биологический смысл этого явления состоит в накоплении Т-хелперов, обеспечивающих образование в лимфоидных органах необходимого пула плазматических клеток, вырабатывающих АТ к данному АГ. В-лимфоцит. Его активация предполагает прямое взаимодействие АГ с молекулой Ig на поверхности В-клетки. В этом случае сам В-лимфоцит перерабатывает АГ и представляет его фрагмент в связи с молекулой МНС2 на своей поверхности. Этот комплекс распознает Т-хелпер, отобранный при помощи того же АГ. Узнавание рецептором Т-хелпера комплекса АГ-МНС2 на поверхности В-лимфоцита приводит к секреции Т-хелпером ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-5 и ИНФ-гамма, под действием которых В-клетка размножается, образуя клон плазматических клеток. Плазмоциты синтезируют АТ. Секрецию АТ стимулирует ИЛ-6, выделяемый активированным Т-хелпером. Часть зрелых В-лимфоцитов после антигеннезависимой дифференцировки циркулирует в организме в виде клеток памяти. 5 классов иммуноглобулинов: 1. IgM Его содержание значительно повышено у новорожденных, перенесших внутриутробную инфекцию. Наличие IgM в АГ конкретного возбудителя указывает на острый инфекционный процесс. 2. IgG Проникает через плаценту в организм плода, чтобы обеспечить формирование у плода пассивного иммунитета, после рождения ребенка содержание его в сыворотке крови падает и достигает минимальной концентрации к 3-4 мес., после чего начинает возрастать за счет накопления собственных IgG, достигая нормы к 7 годам. Обнаружение высоких титров IgG к Аг конкретного возбудителя указывает на то, что организм находится на стадии реконвалесценци или конкретное заболевание перенесено недавно. 3. IgA Циркулирует в сыворотки крови, а также секретируется на поверхности эпителиев., присутствует в слюне, слезной жидкости, молоке. Молекулы IgA участвуют в реакциях нейтрализации и агглютинации возбудителей. Секреторные иммуноглобулины класса IgA (SIgA) отличаются от сывороточных наличием секреторного компонента, связанного с 2 или 3 мономерами IgA. 4. IgE Синтезируется плазматическими клетками в бронхиальных и перитонеальных лимфатических узлах, в слизистой оболочке ЖКТ. IgE называются также реагинами, поскольку принимают участие анафилактических реакциях, обладая выраженной цитофильностью. 5. IgD Обнаруживают на поверхности развивающихся В-лимфоцитов, его содержание достигает максимума к 10 годам, некоторое увеличение титров отмечают при беременности, при бронхиальной астме, системной красной волчанке и у лиц с иммунодефицитами. Защитная функция антител при инфекции: АТ через АГ-связывающие центры взаимодействуют с различными АГ. Тем самым АТ предотвращают инфицирование или элиминируют возбудитель либо блокируют развитие патологических реакций, активируя при этом все системы специфической защиты. Опсонизация (иммунный фагоцитоз) – Ат (через Fab-фрагменты) связываются с клеточной стенкой организма; Fc-фрагментом Ат взаимодействует с соответствующим рецептером фагоцита это опосредует последующее эффективное поглощение фагоцитом образовавшегося комплекса. Антитоксический эффект – Ат могут связывать и, тем самым, инактивировать бактериальные токсины. Активация комплимента – Ат (IgM, IgG) после связывания с Аг (микроорганизм, опухолевая клетка) активирует систему комплимента, что приводит к уничтожению этой клетки путем перфорации ее клеточной стенки, усиление хемотаксиса, хемокинеза и иммунного фагоцитоза Нейтрализация – взаимодействуя с рецепторами клетки, связывающими бактерии или вирусы, Ат могут препятствовать адгезии и проникновению микроорганизмов в клетки организма-хозяина. Циркулирующие иммунные комплексы – Ат связывают растворимые Аг и образуют циркулирующие комплексы, с помощью которых Аг выводятся из организма, преимущественно с мочой и желчью. Антителозависимая цитотоксичность – опсонируя Аг, Ат стимулируют их разрушение цитотоксическими клетками. Аппарат, обеспечивающий распознавание мишеней – рецепторы к Fc-фрагментам Ат. Разрушать опсонированные мишени способны макрофаги и гранулоциты 18. Роль секреторных иммуноглобулинов в местном иммунитете у детей и взрослых. Иммунные факторы женского грудного молока. Секреторные иммуноглобулины препятствуют адгезии микроорганизмов на эпителиальных клетках слизистых оболочек полости рта, кишечника, респираторных и мочевыводящих путей. В агрегированной форме активирует комплимент по альтернативному пути, что приводит к стимуляции местной фагоцитарной защиты. Препятствуют адсорбции и репродукции вирусов в эпителиальных клетках слизистой оболочки, например, при кори, полиомиелите. Иммуноглобулины женского молока: они представлены классами G, M и А, однако доминирующим является секреторный IgА (SIgA) SIgA синтезируется В-лимфоцитами в лимфоидных тканях молочной железы женщины и поступает в молоко. Незадолго до конца беременности в молочную железу мигрируют иммунокомпетентные В-клетки из лимфоидных образований кишечника, дых. Путей и др. локализации. В лимфоидной ткани молочной железы они размножаются и начинают активно синтезировать SIgA антитела той же специфичности, что и раньше – против возбудителей острых инфекций кишечного, респираторного тракта, мочеполовых путей. Защитная роль SIgA заключается в экранировании эпителия пищеварительного тракта от чужеродных Аг инфекционного и неинфекционного порядка. Эта фун-ия реализуется путем специфического связывания секреторными Ат бактерий, вирусов, токсинов. В результате предотвращается адгезия и колонизация бактерий, проникновение в клетки и кровоток вирусов и некоторых инвазивных микробов. Секреторные Ат класса IgA – главный фактор местного иммунитета пищеварительного тракта против разнообразных энтеропатогенных бактерий, вирусов и токсинов Усилению барьерной фун-ии слизистой кишечника ребенка также способствует и др. гуморальные факторы грудного молока – лизоцим, лактоферрин, комплемент, пропердин, лактопероксидаза. В грудном молоке ак же содержатся сывороточные Ig класса М, G, A, макрофаги, ЕК-кл-ки, В- и Тлимфоциты, иммуноцитокины (интерлейкины, интерферон) Вместе с тем замечено, что вскармливание нативным грудным молоком существенно активирует процесс становления иммунного статуса ребенка, из крови быстрее элиминируются малодифференцированные формы клеток, созревание лимфоцитов протекает более энергично. 19. Клеточный иммунный ответ: субпопуляция Т-лимфоцитов, их значение в противовирусном, трансплантационном и противоопухолевом иммунитете. Возрастные особенности клеточного иммунитета. 20. Реакция антиген-антитело. Полные и неполные антитела. Взаимодействие Ат с Аг включает специфическую и неспецифическую фазы Специфическая фаза протекает быстро и представляет специфическое взаимодействие активного центра с АГ. Неспецифическая фаза протекает медленнее, зависит от присутствия электролитов и свойств Аг. Корпускулярные Аг агрегируются в крупнодисперсные конгломераты и выпадают в осадок (феномен агглютинации). Растворимые Аг образуют мелкодисперсные конгломераты (феномен преципитации), проявляющиеся помутнения раствора или образование колец преципитации либо зон преципитации в гелях. Полные и неполные Ат: Валентность – число активных (Аг-связывающих) центров Ат. Молекула полного Igкак минимум двухвалентна. Такие Ат известны как полные Ат; мономеры с меньшей валентностью – неполные Ат. Полные Ат (IgM, IgG) вызывают агрегацию Аг, видимую невооруженным глазом (например, реакция агглютинации бактерий) Неполные Ат содержат один Аг-связывающий центр и поэтому одновалентны (напр., Ат, вырабатываемы при бруцеллезе). Второй Аг-связывающий центр у подобных Igэкранирован различными структурами либо обладает назкой авидностью. Неполные Ат функционально дефектны, т.к. не способны агрегировать Аг. Неполные Ат могут связывать эпитопы Аг, препятствуя контакту с ними полных Ат, поэтому их так же называют блокирующими. 21. Монорецепторные агглютинирующие сыворотки. Диагностикумы. Диагностические сыворотки – препараты, содержащие антитела, полученные из крови животных (лошадей, кроликов, морских свинок), иммунизированных живыми или убитыми микроорганизмами, отдельными антигенами микробов, их токсинами или анатоксинами. Монорецепторные – содержат антитела к одному специфическому антигену, используются для определения специфического антигена возбудителя в реакции простой агглютинации (сероидентификация). Агглютинирующие сыворотки – сыворотки, содержащие антитела (агглютинины) под влиянием которых происходит склеивание (агглютинация) микробов, что сопровождается выпадением хлопьев или осадка, применяются для определения рода, вида, типа возбудителя в реакции агглютинации (РА). ДИАГНОСТИКУМЫ (греч, diagnostikos способный распознавать) — взвеси обезвреженных микроорганизмов, используемые в качестве антигенов для серологических реакций. Опасность работы с живыми культурами, их способность к изменчивости и наличие широких антигенных связей делают целесообразным применение Д.— более стандартных и гомогенных препаратов, содержащих определенные антигенные компоненты. С помощью Д. в реакциях агглютинации, пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА) и др. выявляют специфические антитела в сыворотках людей и животных с целью постановки диагноза и изучения иммунного состояния организма. 22. Реакция агглютинации и ее варианты (бактериальная РА, РНГА, коагглютинация, латекс-агглютинация). Реакция агглютинации — простая по постановке реакция, при которой происходит связывание антителами корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов или других клеток, нерастворимых частиц с адсорбированными на них антигенами, а также макромолекулярных агрегатов). Она протекает при наличии электролитов, например при добавлении изотонического раствора натрия хлорида. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА) основана на использовании эритроцитов (или латекса) с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде «пуговки». Обычно в РНГА выявляют антитела с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума, который представляет собой эритроциты с адсорбированными на них антигенами. Иногда применяют антительные эритроцитарные диагностикумы, на которых адсорбированы антитела. Например, можно обнаружить ботулинический токсин, добавляя к нему эритроцитарный антительный ботулинический диагностикум (такую реакцию называют реакцией обратной непрямой гемагглютинации — РОНГА). РНГА применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительности к лекарственным препаратам, гормонам и в некоторых других случаях. Реакция коагглютинации. Клетки возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой. Стафилококки, содержащие белок А, имеющий сродство кFc-фрагменту иммуноглобулинов, неспецифически адсорбируют антимикробные антитела, которые затем взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба. Латексагглютинация - Механизм РАЛ аналогичен РИГА, в которой используют сенсибилизированные антигенами или антителами эритроциты человека или животных. Для постановки РАЛ применяют сенсибилизированные частицы полистирольного латекса, которые в присутствии гомологичного реагента склеиваются. Обычно эта реакция проходит очень быстро (3…8 мин), что позволяет применить ее в качестве экспресс-метода для выявления антигенов и антител. Преимущества РАЛ в том, что частицы латекса в отличие от эритроцитов не имеют перекрестно реагирующих антигенов, поэтому она специфичнее РИГА. 23. Реакция гемагглютинации, торможения гемагглютинации и гемадсорбции в вирусологической практике. РГА основана на том, что некоторые виды бактерий и вирусов обладают способностью адсорбироваться на поверхности эритроцитов разных видов животных (и птиц), вызывая их склеивание и образование агглютината (прямая РГА). Адсорбция антигена (бактерий, вирусов) на поверхности эритроцитов не всегда проявляется образованием видимого осадка; кроме того, РГА неспецифична, потому что эритроциты одного и того же вида животного могут адсорбировать различные антигены. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)основана на блокаде, подавлении антигенов вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты. РТГА применяют для диагностики многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных. Реакция торможения гемадсорбции — серологическая реакция, основанная на свойстве специфических противовирусных антител предотвращать (тормозить) адсорбцию эритроцитов на мембране культур клеток, инфицированных определенными гемагглютинирующими вирусами. 24. Реакция преципитации. Преципитация в геле. Иммуноэлектрофорез. Реакция преципитации (РП) – это осаждение растворимого антигена при действии антител в присутствии электролита. Видимый эффект реакции (феномен преципитации) – помутнение (образование мутного кольца или осадка – преципитата). РП применяют для обнаружения неизвестного антигена при ряде инфекционных заболеваний: при сибирской язве, туляремии, менингите, оспе. В судебной медицине ее используют для определения видовой принадлежности крови, спермы; в санитарно-гигиенических исследованиях – для установления фальсификации пищевых продуктов. РП отличается очень высокой чувствительностью и позволяет обнаружить антиген в разведении 1:1 000 000 и 1: 10 000 000. Метод преципитации в геле-серологический метод анализа антигенов и их смесей, основанный на различии скорости их диффузии в геле агара, содержащем соответствующие антитела, с образованием раздельных зон (полос, линий) преципитации. Иммуноэлектрофорез. Метод объединяет РП в геле с электрофорезом. Для этого слой агара наносят на предметное стекло; на его разных краях вырезают две лунки, а в центре — разделяющую их канавку. В лунки вносят смесь Аг и проводят электрофорез в течение 1-2 ч. Различные Аг с разной скоростью перемещаются между катодом («старт») и анодом («финиш»). Затем в канавку вносят преципитирующую сыворотку и через 5-7 сут в геле образуются зоны преципитации. Для лучшей визуализации агар окрашивают красителями (например, амидо чёрным). Более информативный и быстрый — метод встречного иммуноэлектрофореза (электросинерез). Его принцип основан на контакте Аг и AT, обусловленном не их свободной диффузией, а эффектом постоянного электрического поля, усиливающего способность к взаимодействию низкореактогенных Аг и AT. Основное условие для применения метода — наличие электрофоретической подвижности Аг, отличной от таковой у AT. Основные достоинства метода — высокая чувствительность, в 10 раз превышающая чувствительность метода двойной иммунодиффузии; возможность идентификации Аг, не выявляемых методом диффузии, и скорость — результаты можно учитывать через 1-3 ч. 25. Иммунолюминесцентный метод и его применение в диагностике инфекционных заболеваний. Реакция иммунофлуоресценции(РИФ) – это сложная серологическая реакция с участием Аг (?) и Ат, меченных флюорохромами – ФИТЦ - это флуоресцеин-изотиоцианат. Прямой метод: обработка материала на предметном стекле меченой флюорохромом диагностической сывороткой. Если на стекле был искомый Аг, Ат фиксируются на Аг и после отмывки стекла от не связавшихся Ат Аг выявляется в люминесцентном микроскопе по свечению Непрямой метод основан на использовании антивидового Ат (антиглобулиновой сыворотки) Реакции прямой и непрямой иммунофлуоресценции широко применяются для экспрессдиагностики многих инфекционных заболеваний, в частности, особо опасных инфекций Используется в основном для обнаружения микробов, светящихся в поле зрения люминесцентного микроскопа, можно выявить и Ат к микробным Аг. РИФ удачно сочетает быстроту исследования с получением инфориации не только о наличии в материале некого микроба, но и его видовой принадлежности. Этот экспресс-метод серологической индикации и идентификации микробов позволяет исследовать не только чистые культуры, но и различные биологические образцы от больных(кровь, ликвор, гной, моча), в которых могут помимо патогенных содержаться посторонние микроорганизмы. 26. Реакция связывания комплемента. Реакция иммунного гемолиза. В основу реакции легли два явления — бактерилиза и гемолиза. В их проявлении участвует комплемент. Поэтому в РСК применяют две системы компонентов: одна обеспечивает феномен бактериолиза и используется для диагностических целей, другая — гемолитическая, индикаторная, вспомогательная, позволяющая установить, связался или не связался комплемент в первой системе. Ранее в качестве антигена брали взвесь бактерий, поэтому первая система была названа бактериолитической (в положительных случаях происходил лизис бактерий). РСК осуществляют в два этапа. Сначала готовят бактериолитическую систему — в пробирках смешивают по 0,5 мл исследуемой сыворотки и антигена, добавляют комплемент в строго определенной дозе (титре). Смесь антиген—сыворотка—комплемент помещают в водяную баню (или термостат) и выдерживают при температуре 37—38 °С 20—40 мин. Результат взаимодействия компонентов в пробирке невидим, жидкость остается прозрачной и бесцветной. Чтобы определить, связался ли комплемент в бактериолитической системе, нужен второй этап реакции. В пробирки добавляют компоненты гемолитической системы — отмытые эритроциты барана и инактивированную гемолитическую сыворотку. Все компоненты бактериолитической системы встряхивают для перемешивания в пробирке, помещают в водяную баню и выдерживают при температуре 37—38 °С 20—40 мин. Затем добавляют компоненты гемолитической системы, вторично все встряхивают и вновь помещают в водяную баню на 10—15 мин. Предварительный учет результата: если сыворотка от больного животного, то в ней содержатся антитела, которые соединяются со специфическим антигеном. С этим комплексом (антиген— антитело) связывается комплемент—гемолиза не будет, результат положительный. Если сыворотка от здорового животного, она антител не содержит, комплекса антиген—антитело не образуется, комплемент в бактериолитической системе не свяжется. При добавлении эритроцитов и гемолизина (это между собой антиген и антитело) комплемент реагирует с этим комплексом — произойдет гемолиз, результат отрицательный. После этого пробирки оставляют при комнатной температуре на 15—20 ч и учитывают окончательный результат. Если в бактериолитической системе сыворотка была от больного животного, то в пробирке образуется специфический комплекс антиген—антитело, который адсорбирует (связывает) весь добавленный комплемент. Следовательно, во второй, гемолитической, системе гемолиза не произойдет, эритроциты осядут на дно пробирки, надосадочная жидкость прозрачная — результат РСК положительный. Если в исследуемой сыворотке нет специфических антител к используемому антигену (в случаях, когда сыворотка от здорового животного), то в бактериолитической системе комплекс антиген—антитело не образуется и, следовательно, комплемент в данной системе не адсорбируется, он остается свободным в пробирке. При добавлении компонентов гемолитической системы (во второй фазе реакции) комплемент вступает во взаимодействие со вторым комплексом (гемолизин— эритроциты), происходит гемолиз — осадка эритроцитов не образуется, жидкость в пробирке лаково-красная. Результат: РСК отрицательный. РСК используют: 1. для обнаружения в сыворотке больного животного специфических антител (при диагностике бруцеллеза, перипневмонии, сапа, лептоспироза, трипаносомоза и др.); 2. для выявления в исследуемом материале специфического антигена (бактериального или вирусного) при наличии специфической иммунной сыворотки. Реакция гемолиза (РГ) – это разрушение эритроцитов при действии антител при участии комплемента. Компоненты РГ. 1. Антиген - 3% взвесь эритроцитов на изотоническом растворе хлорида натрия; 2. Антитело - гемолитическая сыворотка – сыворотка, содержащая антитела к эритроцитам (гемолизины); сыворотку получают путем иммунизации кроликов эритроцитами барана; 3. Комплемент – система белков крови, которые адсорбируюся на комплексе антиген-антитело и формируют мембраноатакующий комплекс, который разрушает антиген, т.е. разрушает эритроциты или, по-другому, вызывает лизис эритроцитов (гемолиз). В качестве комплемента используется свежеприготовленная сыворотка крови морских свинок. Если в пробирку поместить в определенных количествах эритроциты, гемолитическую сыворотку и комплемент, то в течение нескольких минут произойдет разрушение (гемолиз) эритроцитов, в результате чего смесь из темно-красной станет розовой ("лаковая кровь"). Реакция гемолиза используется в качестве индикатора при постановке реакции связывания комплемента. 27. Твердофазный иммуноферментный анализ: принцип, применение для лабораторной диагностики инфекционных заболеваний. Метод иммуноферментного анализа (ИФА) во многом напоминает РИА, но включает использование коммерческих реагентов — Аг или AT, маркированных ферментами (например, пероксидазой или щелочной фосфатазой). После образования иммунного комплекса в систему вносят субстрат, расщепляемый ферментом, что приводит к окрашиванию среды в жёлтокоричневый (при использовании пероксидазы) или жёлто-зелёный цвет (при использовании фосфатазы). По сравнению с классическими методами выявления Аг, иммуноферментный анализ ( ифа ) позволяет непосредственно регистрировать взаимодействие Аг с AT в специфической фазе, а не анализировать вторичные проявления взаимодействия — агглютинацию, преципитацию или гемолиз. Метод отличает высокая чувствительность — обычно достаточно присутствия Аг в концентрации I нг/мл. К настоящему времени созданы многочисленные модификации базовой методики. Наибольшее распространение получил гетерогенный иммуноферментный анализ на твёрдой фазе (твердофазный ИФА). Для этого коммерческие моноклональные AT или Аг фиксируют на лунках пластиковых панелей, куда затем вносят исследуемый материал (содержащий Аг или AT) На практике ИФА широко применяют для выявления Аг Chlamydia trachomatis в мазках из мочеиспускательного канала и влагалища, стрептококков группы А в мазках из зева и токсина Clostridium difficile в фекалиях. Метод позволяет не только выявлять AT, но и определять их принадлежность к различным классам lg, например, выявлять IgM к Аг Mycoplasma pneumoniae. 28. Методы оценки иммунного статуса организма. Определение количественного показателя и функциональной активности иммунной системы, как в норме, так и при патологии. Критерии были предложены Петровым. Используются тесты 1 уровня или ориентировочные тесты, они предполагают: 1. определение Т и В-лимфоцитов в периферической крови 2. оценка содержания в сыворотке IgG1, IgA, IgM, 3. определение фагоцитарной активности лейкоцитов. Тесты 2 типа (аналитические) позволяют оценивать функциональную активность Т и Влимфоцитов, а также натуральных киллеров и фагоцитов. При реализации тестов применяют реакции: 1. спонтанного образования розеток (Е-РОК – е розетко-образующие клетки) – адсорбируют на мембране Т-лимфоциты, в световой микроскоп можно подсчитать количество розеток. В-лимфоциты (М-РОК) имеют рецептор к мышечным эритроцитам, которые позволяют определять количество лимфоцитов. Если к исследуемой пробе добавить теуфелин, то блокируется образование розеток цитотоксическими лимфоцитами, розетки образуют только Т хелперы, зная общее количество Т клеток и Т хелперов – вычислить содержание лимфоцитов Т8. 2. реакция бласттрансформации, к которой способны Т и В-лимфоциты (РБТА). Специфические митогены: В лабораторной практике для Т используют фитогенагелютеин (ФГА)– свидетельствуют о высокой пролиферации. В норме не менее 20% лимфоцитов должны трансформироваться в бластоформы. Применяктся еще бластотрансформация Влимфоцитов, используется вещество лаконос. Бластоформы имеют четкие отличия от зрелых форм (можно подсчитать), крупные, с вакуолизированной цитоплазмой. 3. реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) – способность сенсебилизирующих Тлимфоцитов в присутствии антитела выделять цитокины, в том числе и факторы, ингибирующие миграцию лимфоцитов. 4. реакции гиперчувствительности замедленного типа – определяют при использовании аллергена (туберкулин, кандидин и др.). Количественные определения иммуннглобулинов – используется вариант реакции преципитации, а именно радиальная иммуннодифференциация, по Манчини. В чашке Петри агаровый гель + антииммунные глобулярные тела. Добавляют сыворотку в лунку, вокруг которой образуется зона помутнения, которая тем больше, чем больше концентрация иммуноглобулинов соответствующего класса. В качестве дополнительных тестов используют определение циркулирующие иммунные комплексы. Их определяют, когда ставят диагноз аллергическая реакция. Они определяются при системных заболеваниях, полиартритах, аутоиммунных состояниях. Фагоцитарный показатель определяют при тест пробе, используют золотистый стафилоккок, подсчитывают число клеток, которые фагоцитируют в этих бактериях, число активных фагоцитов. Дополнительные тесты: оценка системы комплимента, лизосомально-катионный тест, уточняет фагоцитарную активность – тест восстановления нитросинего тетразоля. 29. Особенности иммунитета и неспецифической резистентности организма при вирусных инфекциях. Особенности вирусов как облигатных внутриклеточных паразитов определяют характер иммунитета при вирусных инфекциях. Специфические антитела против вирусных антигенов могут нейтрализовать внеклеточные формы - вирионы, препятствуя их взаимодействию с клетками организма. Против внутриклеточных форм - вирусов - антитела неэффективны. Наиболее существенно действие секреторных антител класса А, обеспечивающих местный противовирусный иммунитет во входных воротах инфекции. Очевидна также защитная роль вируснейтрализующих антител в кровяном русле в периоды вирусемии. Однако основной механизм противовирусного иммунитета связан с клеточным иммунным ответом. Поскольку клетки, зараженные вирусом, несут на своей мембране его антигенные детерминанты, они становятся клетками-«мишенями» для, Т-киллеров и клеток, участвующих в реакциях антителозависимой цитотоксичности (АЗЦТ). При этом зараженные клетки погибают вместе с вирусами. О напряженности противовирусного иммунитета судят преимущественно по нарастанию титра специфических антител в сыворотке крови больного в динамике заболевания или после специфической вакцинации. Защитные механизмы специфического, противовирусного иммунитета обеспечиваются также клетками-эффекторами (Т-киллеры, NK-клетки и другие клетки, участвующие в АЗЦТ). Специфические антитела против различных вирусных антигенов нередко присутствуют в сыворотках здоровых людей, что объясняется всеобщей иммунизацией населения против ряда вирусных инфекций (полиомиелит, корь, грипп и др.), а также возможностью скрытого (латентного) течения некоторых из них (герпес, гепатит и др.). Особенностью взаимодействия вирусов с иммунной системой организма является способность некоторых вирусов паразитировать непосредственно в клетках иммунной системы, вследствие чего развиваются иммунодефицитные состояния инфекционной природы. 30. Система интерферона: природа, роль в противовирусной защите. Применение препаратов интерферона в лечебной практике. Интерфероны — общее название, под которым в настоящее время объединяют ряд белков со сходными свойствами, выделяемых клетками организма в ответ на вторжение вируса. Благодаря интерферонам клетки становятся невосприимчивыми по отношению к вирусу. «Определяемый в качестве интерферона фактор должен быть белковой природы, обладать антивирусной активностью по отношению к разным вирусам, по крайней мере, в гомологичных клетках, опосредованной клеточными метаболическими процессами, включающими синтез РНК и белка» Интерфероны человека подразделяют на группы в зависимости от типа клеток, в которых они образуются: α, β и γ. α-Интерфероны включают несколько видов белков с молекулярной массой около 20 кДа. Особое значение имеют интерфероны альфа-2b (для лечения вирусных заболеваний) и бета-1a (применяются для лечениярассеянного склероза). При заражении клетки вирус начинает размножаться. Клетка-хозяин одновременно с этим начинает продукцию интерферона, который выходит из клетки и вступает в контакт с соседними клетками. Хотя интерферон не обладает прямым противовирусным действием, он способен вызывать такие изменения в клетках, которые препятствуют размножению вируса, формированию вирусных частиц и дальнейшему его распространению. Интерферон действует в нескольких направлениях. Во-первых, он оказывает влияние на клетки, соседние с инфицированной, запуская в них цепь событий, приводящих к подавлению синтеза вирусных белков и в некоторых случаях сборки и выхода вирусных частиц. В ответ на воздействие интерферона клетки вырабатывают большое количество протеинкиназы R. Этот ферментфосфорилирует фактор инициации трансляции eIF-2, фосфорилированный eIF-2 формирует неактивный комплекс с другим фактором, eIF-2B. В результате уровень белкового синтеза в клетке снижается. После протеинкиназы R активируется синтез рибонуклеазы L, которая расщепляет клеточные РНК и ещё больше снижает уровень белкового синтеза. В целом, интерферон-зависимое подавление трансляции является губительным как для вируса, так и для клетки-хозяина. Помимо влияния на трансляцию, интерфероны способны активировать сотни других генов (они известны как гены, стимулируемые интерфероном), играющих роль в защите клетки от вирусов. Кроме того, интерферон лимитирует распространение вирусных частиц путём активации белка p53, что ведёт к апоптотической смерти инфицированной клетки. Вторым направлением действия интерферонов является стимуляция иммунной системы для борьбы с вирусами. Интерферон повышает синтез молекул главного комплекса гистосовместимости I и II классов и активирует иммунопротеасому. Высокий уровень молекул главного комплекса гистосовместимости I класса обеспечивает эффективную презентацию вирусных пептидов цитотоксическим Т-лимфоцитам и натуральным киллерам, а иммунопротеасома осуществляет процессинг вирусных пептидов, предшествующий презентации. Высокий уровень молекул главного комплекса гистосовместимости II класса обеспечивает презентацию вирусных антигенов Т-хелперам. Т-хелперы, в свою очередь, выделяют цитокины, которые координируют активность других клеток иммунной системы. Некоторые виды интерферонов, например интерферон-γ, могут прямо стимулировать клетки иммунной системы, такие как макрофаги и натуральные киллеры. Образование интерферона могут стимулировать не только интактные вирусы, но и различные другие агенты, например некоторые инактивированные вирусы, двухцепочечные РНК, синтетические двухцепочечные олигонуклеотиды и бактериальные эндотоксины. 31. Аутоантигены. Аутоантитела. Природа аутоиммунных реакций. Аутоантигены – некоторые Аг при определенных условиях способны проявлять аутоантигенные свойства и индуцировать синтез аутоантител. Такие аутоантигены разделяют на врожденные и приобретенные. Врожденные: некоторые ткани организма обладают антигенными св-вами и запускают иммунные реакции в собственном организме. К ним относятся головной мозг, глаз, семенные канальцы, фолликулы щитовидной железы, ПЖК, волосяные луковицы, рубцовая ткань. В норме Аг этих органов находятся вне иммунного надзора. При повреждении этих органов возможен контакт аутоантигенов с иммунокомпетентными клетками и развитие аутоиммунной реакции. Приобретенные: способностью запускать аутоиммунные реакции обладают ткани, находящиеся в зоне иммунного надзора, и изменяющие свои антигенные св-ва под различными воздействиями (переохлаждение, вирусные и бактериальные инфекции) Аутоантитела - антитела, способные взаимодействовать с аутоантигенами, то есть с антигенами собственного организма. Могут образовываться спонтанно или вследствие перенесенных инфекций. Аутоантитела образуются при аутоиммунных заболеваниях, к которым относятся ревматоидный артрит, рассеянный склероз, системная красная волчанка и т. д. (более 40 заболеваний). В некоторых случаях аутоантитела начинают вырабатываться задолго до клинических проявлений заболевания. Природа аутоиммунной реакции: Аутоиммунные реакции могут быть результатом формирования новых Аг-детерминант в составе носителя Аг или повреждения существующих аутоантигенных детерминант. Толерантность к аутоантигенам может быть нарушена при самом незначительном их повреждении (например, изменении нормальной структуры Аг клеточных мембран при вирусных инфекциях). Отмена толерантности к собственным Аг может развиться при взаимодействии с Аг, эпитопы которого близки по структуре к нормальным эпитопам аутоантигена (напр., перекрестная реактивность между белками клеточной стенки стрептококка и тканевыми Аг сердца приводит к развитию ревматоидного эндокардита и патологии клапанов) Если чужеродные Аг-детерминанты связываются с клетками организма, толерантность нарушается. Иммунный ответ на такие Аг приводит к разрушению собственных клеток (напр., индуцированные ЛС гемолитической анемии). Острая травма тканей может привести к освобождению Аг, обычно изолированных от иммунной системы гистогематическим барьером. В таких обстоятельствах аутоантигены распознаются как чужеродные. Один из примеров – симпатическая офтальмия – первичное повреждение глаза, вызывающие несостоятельность офтальмогематического барьера. Контакт клеток иммунной системы с тканевыми Аг глаза с последующим развитием иммунного ответа может вызывать полную потерю глаза, даже если провоцирующие повреждения уже разрешились Аутоиммунная реакция может быть результатом поликлональной активации В-клеток митогенами (напр., бактериальными ЛПС) или секреции лимфокинов Т-клетками, стимулированные митогеном Аутоиммунная реакция может возникнуть вследствие расстройств регуляции иммунной системы. Формы нарушения регуляции – дифицит или функциональная недостаточность супрессорных клеток, атипичная экспрессия молекул МНС II на клетках, не экспрессирующих эти Аг в нормальных условиях (напр., тиреоциты при аутоиммунном тиреоидите). 32. Врожденные (первичные) и приобретенные (вторичные) иммунодефициты: этиология, проявления, диагностика. Иммунодефициты — это нарушения нормального иммунного статуса, обусловленные дефектом одного или нескольких механизмов иммунного ответа. Различают первичные, или врожденные (генетические), и вторичные, или приобретенные, иммунодефициты. Первичные, или врожденные, иммунодефициты. В качестве первичных иммунодефицитов выделяют такие состояния, при которых нарушение иммунных гуморальных и клеточных механизмов связано с генетическим блоком, т. е. генетически обусловлено неспособностью организма реализовывать то или иное звено иммунологической реактивности. Расстройства иммунной системы могут затрагивать как основные специфические звенья в функционировании иммунной системы, так и факторы, определяющие неспецифическую резистентность. Возможны комбинированные и селективные варианты иммунных расстройств. В зависимости от уровня и характера нарушений различают гуморальные, клеточные и комбинированные иммунодефициты. Врожденные иммунодефицитные синдромы и заболевания представляют собой довольно редкое явление. Причинами врожденных иммунодефицитов могут быть удвоение хромосом, точечные мутации, дефект ферментов обмена нуклеиновых кислот, генетически обусловленные нарушения мембран, повреждения генома в эмбриональном периоде и др. Как правило, первичные иммунодефицита проявляются на ранних этапах постнатального периода и наследуются по аутосомнорецессивному типу. Проявляться первичные иммунодефициты могут в виде недостаточности фагоцитоза, системы комплемента, гуморального иммунитета (В-системы), клеточного иммунитета (Т-системы) или же в виде комбинированной иммунологической недостаточности. Вторичные, или приобретенные, иммунодефициты Вторичные иммунодефициты в отличие от первичных развиваются у лиц с нормально функционировавшей от рождения иммунной системой. Они формируются под воздействием окружающей среды на уровне фенотипа и обусловлены нарушением функции иммунной системы в результате различных заболеваний или неблагоприятных воздействий на организм. При вторичных иммунодефицитах могут поражаться Т- и В-системы иммунитета, факторы неспецифической резистентности, возможны также их сочетания. Вторичные иммунодефицита встречаются значительно чаще, чем первичные. Вторичные иммунодефицита, как правило, преходящи и поддаются иммунокоррекции, т. е. восстановлению нормальной деятельности иммунной системы. Вторичные иммунодефицита могут быть: после перенесенных инфекций (особенно вирусных) и инвазий (протозойные и гельминтозы); при ожоговой болезни; при уремии; при опухолях; при нарушении обмена веществ и истощении; при дисбиозах; при тяжелых травмах, обширных хирургических операциях, особенно выполняемых под общим наркозом; при облучении, действии химических веществ; при старении, а также медикаментозные, связанные с приемом лекарств. По времени возникновения выделяют антенатальные (например, ненаследственные формы синдрома ДиДжорджи), перинатальные(например, нейтропения новорожденного, вызванная изосенсибилизацией матери к антигенам нейтрофилов плода) и постнатальныевторичные иммунодефицита. По клиническому течению выделяют компенсированную, субкомпенсированную и декомпенсированную формы вторичных иммуноде-фицитов. Компенсированная форма сопровождается повышенной восприимчивостью организма к инфекционным агентам, вызывающим оппортунистические инфекции. Субкомпенсированная форма характеризуется склонностью к хронизации инфекционных процессов. Декомпенсированная форма проявляется в виде генерализованных инфекций, вызванных условнопатогенными микробами (УПМ) и злокачественными новообразованиями. Известно разделение вторичных иммунодефицитов на: Физиологические, новорожденные, пубертатного периода, беременности и лактации, старения, биоритмичности, экологические, сезонные, эндогенные интоксикации, радиационные, СВЧ, патологические, постинфекционные, стрессовые, регуляторно-метаболические, медикаментозные, онкологические. Иммунодефициты, как первичные, так и особенно вторичные, широко распространены среди людей. Они являются причиной проявления многих болезней и патологических состояний, поэтому требуют профилактики и лечения с помощью иммунотропных препаратов. 33. Гиперчувствительность замедленного типа (Т-зависимая аллергия). Кожные аллергические реакции в диагностике инфекционных болезней. В основе формирования реакции гиперчувствительность замедленного типа (ГТЗ) лежит не гуморальный, а клеточный иммунный ответ организма на первый контакт с определенным Аг. Механизм реакции: накопление сенсибилизированных Т-лимфоцитов, реакция между Аг и сенсибилизированным Т-лимфоцитом с его активацией, выработкой лимфокининов и цитотоксические реакции при участии макрофагов. В реакции типа ГТЗ участвуют Т-эффекторы, продуцирующие лимфокины, мобилизованные ими макрофаги, продуцирующие и секретирующие медиаторы-монокины; Т-киллеры – цитотоксические клетки-эфекторы, способные убивать клетки-«мишени», несущие на мембране специфические антигенные эпитопы. Примером аллергической реакции клеточного типа может служить кожная проба на внутрикожное введение аллергена (туберкулина) в специфически сенсибилизированный (инфицированный или вакцинированный) организм. На месте введения аллергена образуется мононуклеарный инфильтрат, величина которого зависит от степени сенсибилизации и достгает максимума через 24-48 ч. Иммунопатогенетическая роль клеточно-опосредованных аллергических реакций особенно велика при некоторых хронических инфекциях и аутоиммунных заболеваний. При ряде инфекционных заболеваний организм приобретает повышенную чувствительность к аллергенам бактерий их вызывающих. Этот феномен помогает установлению этиологического диагноза. В ряде случаев специфическая бактериальная аллергия формируется рано, в первые дни болезни, что используют в целях ранней диагностики туляремии (внутрикожная аллергическая проба с тулярином становится положительной на 2-й - 3-й день). В других случаях аллергическая перестройка организма происходит позднее и выявление специфической аллергии может быть использовано в интересах ретроспективного диагноза. Методы гипосенсибилизации организма с помощью соответствующих аллергенов используют для лечения больных некоторыми хроническими формами болезней. Лечебное применение бактериальных аллергенов оправдано в случаях, когда антибактериальная терапия и другие методы лечения не достигают успеха и болезнь приобретает хроническое рецидивирующее течение. К таким нозологиям в настоящее время можно отнести ряд инфекционных болезней, дающих хронические формы нелегочный туберкулез (поражение сетчатки глаза), бруцеллез (рецидивирующий миокардит), токсоплазмоз (поражения опорно-двигательного аппарата). Аллергические пробы (накожные и внутрикожные) получили всеобщее признание в диагностике таких бактериальных инфекций, как туляремия, бруцеллез (проба Бюрне), туберкулез (накожная проба Пиркета и внутрикожная проба Манту) токсоплазмоз, грибковые поражения кожи, сап и риккетсиозы (лихорадка Ку). Наиболее проста для выполнения накожная аллергическая проба в сравнении с внутрикожной и другими способами введения аллергена. 34. Гиперчувствительность немедленного типа (В-зависимая аллергия). Реакция гиперчувствительности I типа – анафилактическая реакция. Это немедленные общие или местные реакции, обусловленные действием медиаторов, выделяемых тучными клетками, базофилами и некоторыми другими после контакта Аг с цитофильными Ат, фиксированными на этих клетках. Возникновение анафилактических реакций часто связано с наследственой предрасположенностью к формированию IgEтакие реакции называются атопическими. Аллергены, вызывающие анафилактические реакции – экзогенные ве-ва с низкой молекулярной массой, что способствует их проникновению через слизистые и стимуляции продукции IgE. Это могут быть вещ-ва растительного, животного происхождения, в том числе и пища, лекарства, компоненты микроорганизмов. Часто аллергенами бывает пыльца растений, элементы домашней пыли. Анафилактические реакции иммуноспецифичны и развиваются после попадания аллергена, к которому организм был предварительно сенсибилизирован. Состояние гиперчувствительности развивается через 7-14 суток после первого контакта с Аг и сохраняется годами Реакции гиперчувствительности II типа – цитотоксические Ведущий механизм – цитотоксическое повреждение. Образующиеся Ат связывают чужеродные Аг, фиксированные на клетках индивидума. Формирование иммунных комплексов на клеточной поверхности активирует систему комплимента. Активированные компоненты образуют мембраноповреждающий комплекс и стимулируют фагоцитарные реакции. В реакцию могут воволекаться различные популяции клеток (ЦТЛ, гранулоциты, макрофаги), несущие Fcрецепторы для IgG. Благодаря взаимодействию с IgG они вовлекаются в реакции антителозависимой цитотоксичности. Клинически реакции проявляются поражением крови, поражением легких и почек при синдроме Гудпасчера, острыми отторжениями трансплантантов, гемолитической болезнью новорожденных. Реакции гиперчувствительности III типа – иммуннокомплексные Они обусловлены образованием иммунных комплексов, фиксирующихся в тканях и вызывающих их повреждение. В норме образующиеся комплексы Ат-Аг эффективно элиминируются фагоцитами. Иногда концентрация иммунных комплексов может достигать высоких значений и они легко преципитируют (выпадают в осадок). Комплексы задерживаются в тканях и запускают местные или системные воспалительные реакции. Связывая и активируя компоненты комплимента, они привлекают фагоцитирующие клетки (макрофаги, нейтрофилы). Последние неспособны поглащать такие большие структуры и выделяют протеолитические ферменты и другие медиаторы воспаления, повреждающие ткани, в которых фиксирован комплекс. Клинические примеры реакции – сывороточная болезнь (после попадания чужеродных белков или медикаментов в кровоток), экзогенный аллергический альвеолит (после фиксирования комплексов легочных капиллярах), системная красная волчанка, ревматоидный артрит, васкулиты, гломерулонефрит. 35. Живые вирусные вакцины. Применение в педиатрической практике. Живые вирусные вакцины — это, как правило, искусственно ослабленные посредством культивирования или природные авирулентные либо слабовирулентные иммуногенные штаммы вируса, которые, размножаясь в естественно восприимчивом организме, не проявляют повышения вирулентности и потеряли способность к горизонтальной передаче. Безопасные высокоиммуногенные живые вакцины являются лучшими из всех существующих вирусных вакцин. Применение многих из них дало блестящие результаты в борьбе с наиболее опасными вирусными болезнями человека и животных. В основе эффективности живых вакцин лежит имитация субклинической инфекции. Живые вакцины вызывают иммунный ответ на каждый протективный антиген вируса. Основным преимуществом живых вакцин считается активизация всех звеньев иммунной системы, вызывающая сбалансированный иммунный ответ (системный и локальный, иммуноглобулиновый и клеточный). Это имеет особое значение при тех инфекциях, когда клеточный иммунитет играет важную роль, а также при инфекциях слизистых оболочек, где требуется как системный, так и локальный иммунитет. Местное применение живых вакцин обычно является более эффективным для стимулирования локального ответа у непраймированных хозяев, чем инактивированные вакцины, вводимые парентерально. В идеале, вакцинация должна повторять иммунологические стимулы естественной инфекции, сводя до минимума нежелательные эффекты. Она должна вызывать напряженный продолжительный иммунитет при введении в небольшой дозе. Вакцинные вирусные штаммы должны обладать генетической и фенотипической стабильностью. Их приживляемость в привитом организме должна быть выраженной, а способность к размножению ограниченной. Вакцинные штаммы обладают значительно менее выраженной инвазивностью, чем их вирулентные предшественники. Это связано в значительной мере с их частично ограниченной репликацией в месте проникновения и в органах-мишенях естественного хозяина. Репликация вакцинных штаммов в организме легче ограничивается естественными неспецифическими защитными механизмами. Вакцинные штаммы размножаются в привитом организме до тех пор, пока его защитные механизмы не затормозят их развитие. В течение этого времени образуется такое количество антигена, которое значительно превышает его при введении с инактивированной вакциной. Для аттенуации вирусов обычно применяют пассажи вируса в неестественном хозяине или культуре клеток, пассажи при пониженной температуре и мутагенез с последующей селекцией мутантов с измененным фенотипом. Большинство современных живых вакцин, используемых для профилактики инфекционных болезней человека и животных, получены пассажами вирулентного вируса в гетерологичном хозяине (животные, куриные эмбрионы, различные клеточные культуры). Аттенуированные в чужеродном организме вирусы приобретают множественные мутации в геноме, препятствующие реверсии вирулентных свойств. В настоящее время в практике широко применяют живые вакцины против многих вирусных заболеваний человека (полиомиелит, желтая лихорадка, грипп, корь, краснуха, паротит и др.) и животных (чума крупного рогатого скота, свиней, плотоядных, бешенство, герпес-, пикорна-, коронавирусные и другие болезни). Однако еще не удалось получить эффективных вакцин против ряда вирусных болезней человека (СПИД, парагрипп, респираторно-синциальная инфекция, денгевирусная инфекция и другие) и животных (африканская чума свиней, инфекционная анемия лошадей и другие). Имеется много примеров тому, что традиционные методы аттенуации вирусов еще не исчерпали своих возможностей и продолжают играть существенную роль в разработке живых вакцин. Однако их значение постепенно уменьшается по мере увеличения масштабов использования новой технологии конструирования вакцинных штаммов. Несмотря на значительный прогресс в этой области, принципы получения живых вирусных вакцин, заложенные Л. Пастером, до сих пор не потеряли своей актуальности. 36. Серотерапия и серопрофилактика. Предупреждение сывороточной болезни и анафилактического шока у детей. Серопрофилактика — профилактика заболеваний инфекционных с помощью иммунных сывороточных препаратов. Серотерапия — лечение заболеваний инфекционных иммунными сывороточными препаратами, особенно при токсинемических инфекциях. К сывороточным иммунным препаратам относят иммунные сыворотки и Ig. Эти препараты обеспечивают пассивную невосприимчивость к возбудителям инфекционных болезней. Действующее начало таких препаратов — специфические AT. Другими словами, в организм человека вводят готовые эффекторные молекулы. Поэтому их можно использовать для профилактики и лечения инфекций. Содержание AT в сывороточных иммунных препаратах (активность) выражают в титрах AT. По механизму действия AT сывороточных препаратов проявляют агглютинирующий, преципитирующий, комплементсвязывающий, нейтрализующий и другие эффекты. Обычно сывороточные препараты вводят парентерально; при этом состояние невосприимчивости развивается быстро, но длится недолго (в пределах 2-6 нед). Анафилаксия представляет собой реакцию немедленного типа, возникающую при парентеральном повторном введении антигена в ответ на повреждающее действие комплекса антиген — антитело и характеризующуюся стереотипно протекающей клинической и морфологической картиной. Основную роль в анафилаксии играет цитотропный IgE, имеющий сродство к клеткам, в частности базофилам и тучным клеткам. После первого контакта организма с антигеном образуется IgE, который вследствие цитотропности адсорбируется на поверхности названных выше клеток. При повторном попадании в организм этого же антигена IgE связывает антиген с образованием на мембране клеток комплекса IgE — антиген. Комплекс повреждает клетки, которые в ответ на это выделяют медиаторы — гистамин и гистаминоподобные вещества (серотонин, кинин). Эти медиаторы связываются рецепторами, имеющимися на поверхности функциональных мышечных, секреторных, слизистых и других клеток, вызывая их соответствующие реакции. Это ведет к сокращению гладкой мускулатуры бронхов, кишечника, мочевого пузыря, повышению проницаемости сосудов и другим функциональным и морфологическим изменениям, которые сопровождаются клиническим проявлением. Клинически анафилаксия проявляется в виде одышки, удушья, слабости, беспокойства, судорог, непроизвольного мочеиспускания, дефекации и др. Анафилактическая реакция протекает в три фазы: в 1-й фазе происходит сама реакция антиген — антитело; во 2-й фазе выделяются медиаторы анафилактической реакции; в 3-й фазе проявляются функциональные изменения. Анафилактическая реакция возникает спустя несколько минут или часов после повторного введения антигена. Протекает в виде анафилактического шока или как местные проявления. Интенсивность реакции зависит от дозы антигена, количества образующихся антител, вида животного и может закончиться выздоровлением или смертью. Анафилаксию легко можно вызвать в эксперименте на животных. Оптимальной моделью для воспроизведения анафилаксии является морская свинка. Анафилаксия может возникать на введение любого антигена любым способом (подкожно, через дыхательные пути, пищеварительный тракт) при условии, что антиген вызывает образование иммуноглобулинов. Доза антигена, вызывающая сенсибилизацию, т. е. повышенную чувствительность, называется сенсибилизирующей. Она обычно очень мала, так как большие дозы могут вызвать не сенсибилизацию, а развитие иммунной защиты. Доза антигена, введенная уже сенсибилизированному к нему животному и вызывающая проявление анафилаксии, называется разрешающей. Разрешающая доза должна быть значительно больше, чем сенсибилизирующая. Сывороточной болезнью называют реакцию, возникающую при разовом парентеральном введении больших доз сывороточных и других белковых препаратов. Обычно реакция возникает спустя 10—15 сут. Механизм сывороточной болезни связан с образованием антител против введенного чужеродного белка (антигена) и повреждающим действием на клетки комплексов антиген — антитело. Клинически сывороточная болезнь проявляется отеком кожи и слизистых оболочек, повышением температуры тела, при-пуханием суставов, сыпью и зудом кожи; наблюдаются изменения в крови (увеличение СОЭ, лейкоцитоз и др.). Сроки проявления и тяжесть сывороточной болезни зависят от содержания циркулирующих антител и дозы препарата. Это объясняется тем, что ко 2-й неделе после введения белков сыворотки вырабатываются антитела к белкам сыворотки и образуется комплекс антиген — антитело. Профилактика сывороточной болезни осуществляется по способу Безредки. Клинические проявления III типа. Сывороточная болезнь происходит при введении высоких доз антигена, например, лошадиной противостолбнячной сыворотки. Через 6-7 дней в крови появляются антитела против лошадиного белка, которые, взаимодействуя с данным антигеном, образуют иммунные комплексы, откладывающиеся в стенках кровеносных сосудов и тканях. Развиваются системные васкулиты, артриты (отложение комплексов в суставах), нефрит (отложение комплексов в почках). 37. Вакцинопрофилактика и вакцинотерапия. Вакцинопрофилактика - вакцинация против инфекционных заболеваний. Важная особенность иммунной системы человека - это ее способность к распознаванию чужеродных агентов, попадающих в организм и иммунологической памяти. Если клетки иммунной системы встретятся с каким-либо микробом, то этот контакт останется в "памяти" иммунной системы, и если тот же микроб когда-либо опять попадет в наш организм, то иммунный ответ будет гораздо более интенсивным и быстрым, по сравнению с первичным. Это происходит благодаря предварительно сформировавшейся "памяти" и различным химическим веществам, продуцируемым клетками иммунологической памяти, которые активируются при вторичном контакте. Вакцинотерапия. В основе лечебного действия вакцин лежит принцип специфической стимуляции защитных сил организма. Введение антигенного раздражителя усиливает фагоцитоз, способствует выработке специфических антител. Для вакцинотерапии используются убитые вакцины, отдельные антигены, анатоксины. Наиболее эффективны аутовакцины, приготовленные из штамма возбудителя, выделенного от больного. Вакцинотерапия показана в период затихания острых проявлений болезни, при затяжном или хроническом течении заболевания (бруцеллез, туляремия, дизентерия) и реже в разгар инфекции (брюшной тиф), обычно в сочетании с антибиотикотерапией. 38. Живые вакцины. Получение, требования к вакцинным штаммам, достоинства и недостатки живых вакцин. Живые вакцины содержат живые аттенуированные штаммы возбудителей с резко сниженной вирулентностью или штаммы непатогенных для человека микроорганизмов, близкородственных возбудителю в антигенном отношении (дивергентные штаммы). К ним относят и рекомбинантные (генно-инженерные) вакцины, содержащие векторные штаммы непатогенных бактерий/вирусов (в них методами генной инженерии введены гены, ответственные за синтез протективных антигенов тех или иных возбудителей). Поскольку живые вакцины содержат штаммы микроорганизмов-возбудителей с резко сниженной вирулентностью, то, по существу, они воспроизводят в организме человека легко протекающую инфекцию, но не инфекционную болезнь, в ходе которой формируются и активируются те же механизмы защиты, что и при развитии постинфекционного иммунитета. В связи с этим живые вакцины, как правило, создают достаточно напряженный и длительный иммунитет. 39. Убитые (инактивированные) вакцины. Принцип получения. Химические вакцины. Вакцины, содержащие убитые микроорганизмы и их структурные компоненты, относят к группе корпускулярных вакцинных препаратов. Неживые вакцины обычно проявляют меньшую (по сравнению с живыми вакцинами) иммуногенность, что диктует необходимость многократной иммунизации. В то же время неживые вакцины лишены балластных веществ, что значительно уменьшает частоту побочных эффектов, часто развивающихся после иммунизации живыми вакцинами. Корпускулярные вакцины. Для их приготовления вирулентные микроорганизмы убивают либо термической обработкой, либо воздействием химических агентов (например, формалина или ацетона). Подобные вакцины содержат полный набор Аг. Спектр возбудителей, используемых для приготовления неживых вакцин, разнообразен. Компонентные (субъединичные) вакцины — разновидность корпускулярных неживых вакцин; они состоят из отдельных (главных, или мажорных) антигенных компонентов, способных обеспечить развитие невосприимчивости. В качестве Аг применяют иммуногенные компоненты возбудителя. Для их выделения используют различные физико-химические методы, поэтому препараты, получаемые из них, также известны как химические вакцины. В настоящее время разработаны субъединичные вакцины против пневмококков (на основе полисахаридов капсул), брюшного тифа (О-, Н- и Vi-Ar), сибирской язвы (полисахариды и полипептиды капсул), гриппа (вирусные нейраминидазы и гемагглютинин). Для придания более высокой иммуногенности компонентные вакцины нередко сочетают с адъювантами (например, сорбируют на гидр оксиде алюминия). 40. Перечень вакцин для плановых профилактических прививок у детей. Оценка пост-вакцинального иммунитета. Оценка поствакцинального иммунитета – это лабораторный анализ, который направлен на определение уровня специфических иммуноглобулинов класса G (Ig G) к возбудителям инфекции. Диагностика позволяет оценить эффективность проводимой иммунизации, определить риск развития инфекционных заболевания у детей и взрослого населения. Полиомиелит, дифтерия, коклюш, краснуха, корь, паротит, ветрянка относятся к так называемым «детским» инфекциям, которые возникают преимущественно в дошкольном и младшем школьном возрасте. Это связано с низким уровнем развития иммунитета у пациентов детского возраста, что повышает риск возникновения болезней. Заражение столбняком и вирусным гепатитом В может происходить в любом возрасте, но опасность инфицирования выше у детей по тем же причинам. Для предотвращения вышеперечисленных инфекций рекомендуют специфическую иммунизацию, которая включена в список плановых профилактических прививок. Первичную иммунизацию проводят в младшем детском возрасте с последующей ревакцинацией каждые 5-10 лет. В результате вакцинации в организме формируется напряженный иммунитет против инфекции, что предупреждает развитие заболевания, либо болезнь протекает в легкой форме без появления осложнений. Диагностика направлена на оценку уровня поствакцинального иммунитета, который выражается в титре специфических иммуноглобулинов G в периферической крови. Для определения антител против возбудителей инфекции применяют серологическое исследование – иммуноферментный анализ (ИФА). Оценка поствакцинального иммунитета проводится после иммунизации. Диагностика, в первую очередь, показана группе риска с высокой вероятностью формирования низкой иммунологической реакции: часто и длительно болеющие дети, иммунодефициты, хронические инфекции, ВИЧ, нарушение правил иммунизации и т.д. Анализ не применяется для диагностики заболевания, а назначается с целью определения напряженности специфического иммунитета.
