ЗАО «Северо-Западный центр доказательной медицины» г. Санкт-Петербург, ул. Олеко Дундича, д.8/2 Лицензия: _____________ от _______________ Тел.: (812) 600-42-00 www.cdmed.ru Биологическое исследование ___________________ Заказчик исследования: ____________________ Код : 6228 (Установление биологического родства в паре – «предполагаемый отец – ребенок» Дата: _______________ Материал: 2 пробирки с ЭДТА и венозной кровью (первая – предполагаемый отец, образец 1, анонимно, вторая – ребенок, образец 2, анонимно) Метод исследования: ТАПОТИЛИ Заключение: Для проведения исследования по установлению биологического родства двух лиц на условиях анонимности, в ЗАО «Северо-Западный центр доказательной медицины» (СЗ ЦДМ) обратилась _______________________. Забор крови методом венопункции проводился в медицинском центре СЗ ЦДМ в г. ____________, ул. __________, д.___. Был составлен Договор № ____________ и заполнен Протокол получения двух анонимных биологических образцов от ___________ г., удостоверенный администратором ________________. и медицинской сестрой, проводившей забор крови, _________________. Кровь была забрана в две пробирки с ЭДТА, четко обозначенные как «образец 1», и «образец 2», каждой пробирке с кровью был присвоен свой индивидуальный штрих-код: ___________ для _________________., ___________ для анонима ____________. В лабораторию в г. Санкт-Петербург пробирки с сопроводительными документами прибыли в запечатанном конверте без признаков повреждений. Для проведения анализа из каждого образца для исследования была выделена геномная ДНК с помощью набора реагентов Wizard® Genomic DNA Purification Kit Страница 1 из 3 фирмы Promega, США. Оставшиеся образцы вместе с выделенной ДНК хранятся в лаборатории СЗ ЦДМ при температуре –72 оС. Полученная ДНК была проанализирована методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на циклере Eppendorf Mastercycler с применением сертифицированного оборудования фирм Andreas Hettich, BioHit, BioRad, Хеликон и аналогичных. Анализу были подвергнуты тандемные повторы в независимых полиморфных локусах геномной ДНК человека. Был использован набор реагентов «ТАПОТИЛИ» (ТАндемные ПОвторы для ТИпирования ЛИчности) производства Научно- производственного центра при Институте биохимической физики им. Н.М. Эммануэля (ИБХФ РАН), г. Москва. Все реакции проводились в соответствии с инструкцией изготовителя. Результаты ПЦР были проанализированы в полиакриламидном геле (для микросателлитов) и в агарозном геле (для минисателлитов) с использованием реактивов «ТАПОТИЛИ» в соответствии с рекомендациями изготовителя. Детекция произведена с применением флуоресцентных красителей в УФ свете на трансиллюминаторе Vilber Lourmat. Фотографии гелей в электронном виде хранятся в СЗ ЦДМ. Результаты исследования, автоматически созданные программой “Pindex” (*) № Локус Генотип отца Генотип ребенка Генотип матери Формула Частота аллеля Частота аллеля 1 D17S5 2/6 2/3 Нет/Нет 1/4p(2) p(2)=0,136 1,84 2 IL1RN 4/4 4/4 Нет/Нет 1/p(4) p(4)=0,620 1,61 3 10/10 10/12 Нет/Нет 1/2p(10) p(10)=0,380 1,32 4 IgH ApoB3'VNTR 35/49 37/49 Нет/Нет 1/4p(49) p(49)=0,068 3,68 5 D7S820 10/10 10/10 Нет/Нет p(10)=0,284 LR 6 D8S1179 12/13 12/13 Нет/Нет 7 D13S317 8/13 8/13 Нет/Нет 1/p(10) (p(12)+p(13))/4p( 12)p(13) (p(8)+p(13))/4p(8) p(13) 8 D16S539 11/11 11/13 Нет/Нет 1/2p(11) p(11)=0,284 1,76 9 D22S1045 11/15 15/15 Нет/Нет 1/2p(15) p(15)=0,360 1,39 10 LPL 9/9 9/10 Нет/Нет 1/2p(9) p(9)=0,049 10,20 11 TPOX 8/11 8/8 Нет/Нет 1/2p(8) p(8)=0,580 0,86 p(12)=0,163 p(8)=0,156 3,52 p(13)=0, 342 p(13)=0, 102 2,26 4,05 12 TH01 9/9.3 7/9 Нет/Нет 1/4p(9) p(9)=0,231 1,08 13 vWFII 11/11 11/11 Нет/Нет 1/p(11) p(11)=0,440 2,27 14 CSF1PO 11/12 11/11 Нет/Нет 1/2p(11) p(11)=0,295 1,69 Индекс отцовства (Combined Paternity Index) CPI= 47933(**) Вероятность отцовства P=99,998% ( pp=0,5 ) Страница 2 из 3 При расчетах были приняты следующие допущения (***): 1) Использовались референтные частоты аллелей для русских; 2) Значение априорной вероятности было выбрано равным 0,5; 3) Никому из заинтересованных лиц в течение как минимум шести месяцев не производилось переливание крови и ее компонентов. По результатам исследования (индекс CPI >400) биологическое отцовство «образца 1» в отношении «образца 2» следует считать практически доказанным. (***) Таким образом, биологическое отцовство «образца 1» в отношении «образца 2» практически доказано. Исследование выполнила биолог Заведующий отделом генетики: (*) Ефремов И.А., Серегин Ю.А., 2009. Свидетельство о регистрации № 2009610058 (**) Морлинг Н. и др., 2003. Международные рекомендации по стандартам проверки отцовства. (***) В соответствии с Приказом МЗ РФ № 346н от 12.05.2010 «Об утверждении порядка организации производства судебно-медицинских экспертиз в государственных судебно-экспертных учреждениях Российской Федерации». Страница 3 из 3