Иммунохимические методы анализа в

Иммунохимические методы анализа
в клинической лаборатории
Иммунохимические методы исследований
Иммунохимические методы исследований – методы,
основанные на специфической реакции взаимодействия
антигена с антителом.
Cфера применения - показаны в ситуациях, когда необходимо
количественно определить концентрации химических
веществ, содержащихся в очень низких концентрациях в
биологическом материале.
 Белки сыворотки крови: Иммуноглобулины, липопротеины
 Опухолевые маркёры: Раково-эмбриональный антиген
(РЭА), альфа-фетопротеин и др.
 Гормоны
 Инфекционные маркёры: Нbs Ag,Anti-HIV
 Маркеры
воспаления:
Ревматоидный
Фактор,
СРеактивный Белок
 Лекарственные вещества: Теофиллин, Дигоксин, Фенитоин
и др.
Специфичность и чувствительность
иммунохимических методов
Специфичность:
иммунохимические
методы
высокоспецифичны (95-98%), можно легко и
точно дифференцировать в биологической пробе
химические вещества, имеющие очень схожую
молекулярную структуру (например, Тироксин и
Трийодтиронин).
Чувствительность:
При
помощи
иммунологических методов исследования в
биологической
пробе
можно
определить
химические вещества в концентрациях вплоть до
10 - 23 моль/л.
Принцип иммунологических методов
исследования
Основа
технологии
любого
иммунологического метода исследования –
реакция между антигеном и антителом.
Антиген вещество, распознающееся
иммунной системой
Антитела (иммуноглобулины) - белки,
специфически реагирующие с Аг.
Антиген подходит к определенному антителу
как «ключ к замку».
Общая схема строения иммуноглобулинов
Схема взаимодействия антигена с
комплементарным ему антителом
Перекрестное взаимодействие.
Связывание вещества, структура которого очень
схожа
со
структурой
антигена,
с
соответствующим
антителом
называется
перекрёстной реакцией Связывающее сродство
в перекрестных реакциях как правило более
низкое чем в процессе реагирования между
абсолютно специфичными партнёрами.
Методы иммунохимического тестирования

Ag + At = Комплекс AgAt.
1. Детекция антигена - тест-система должна иметь в
своём составе соответствующее антитело (для
определения концентрации дигоксина надо иметь в
тест- системе антитела к нему)
2. Детекция антител - тест-система должна содержать в
своём составе соответствующий антиген (для
определении антител к НbSAg в тест системе должен
содержаться синтетический HbSAg)
3. Детекция иммунного комплекса (т.е. связанных
между собой Антигена и Антитела) – реакция
преципитации, агглютинации и т.д. ( в зависимости от
молекулярной массы и концентрации в сыворотке крови
исследуемого антигена
Антитела, применяемые
в иммунохимических тест-системах
1. Моноклональные антитела - полученные от
одной
клеточной
линии
(
клона),
синтезируются клетками гибридомы. Такие Ат
при
взаимодействии
со
специфическим
антигеном
обладают
одинаковой
специфичностью и связывающей способностью.
2. Поликлональные антитела - смесь антител,
полученных от различных клеточных линий.
Получают из сыворотки иммунизированных
животных. Антитела в такой смеси могут
различаться по связывающей способности.
Иммунохимические методы –
основные технологические подходы
Гомогенные иммунохимические методы
Не предусматривается использование «твёрдой фазы»
Отсутствуют
процедуры
разделения
между
несколькими реакционными стадиями
Выполняются относительно быстро.
Иммунохимические методы - основные
технологические подходы (продолжение)
Устраняется влияние на процесс исследования
других
компонентов,
содержащихся
в
исследуемой пробе. Чувствительность выше.
Основные виды гетерогенного
иммунохимического анализа
1. Конкурентные методы
2. Сэндвич-методы
Иммунохимические методы - основные
технологические подходы (продолжение)
3. Иммунохимические методы на основе диффузии и
электрофореза
Растворённый АГ + растворённое АТ (в
жидкостях или в гелях)→ преципитат (АГ+АТ)
→ детекция
визуально, либо при помощи
измерительной аппаратуры.
Необходима
точность
в
соотношении
концентраций между антигенами и антителами.
Пассивная иммунодифузия антигена и антитела
может быть активизированна при помощи
различных электрофоретических методик.
Изменение свойств преципитата
в зависимости от соотношения АГ:АТ