НПО НАРВАК является разработчиком и
advertisement
РАЗРАБОТКИ В ОБЛАСТИ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ ___________________________________________________________ Теоретические и практические достижения современной науки значительно расширили методологический арсенал диагностики и эпизоотологического мониторинга инфекционных болезней животных. К одним из самых эффективных диагностических методов относится имммуноферментный анализ (ИФА), который к настоящему времени прошел путь от новейшей научной разработки до рутинного метода в лабораторной диагностике1. С его помощью можно проводить как массовое обследование поголовья, так и поставить окончательный диагноз у конкретного животного. Преимущества ИФА как метода (высокая чувствительность, позволяющая выявлять диапазоне нг/мл, и специфичность; концентрации белка в воспроизводимость полученных результатов; стабильность при хранении всех необходимых реагентов; простота проведения реакции; возможность инструментального учета реакции и автоматизации всех ее этапов) и наличие на рынке коммерчески доступных ИФА-наборов, обусловили широкое применение метода, как в медицине, так и в ветеринарии. ИФА, в основе которого лежит высокоспецифическое взаимодействие антител с антигенами, широко используется для развития и совершенствования двух основных направлений современной лабораторной диагностики. К ним относятся методы, направленные на обнаружение антигена и методы, направленные на выявление антител (табл.1). Здесь рассматриваются вопросы, связанные с использованием основных вариантов гетерогенного ИФА: непрямого, конкурентного и «сэндвич», а также современный вариант гомогенного ИФА - иммуноанализ с помощью индикаторных полосок или иммунохроматографический метод (ИХМ). 1 Таблица 1. Применение ИФА в лабораторной практике Методы, предназначенные для обнаружения антигена 2 Ранняя диагностика заболевания Этиологический анализ эпизоотии и изучение закономерности эпизоотического процесса Методы, предназначенные для выявления антител3 Эпизоотологический мониторинг инфекций Ретроспективная диагностика болезни Оценка напряженности иммунитета и иммунологической эффективности применяемых в хозяйстве вакцин Определение уровня колостральных антител у молодняка в первые дни (недели) жизни В настоящее время, согласно стандартам Всемирной организации здравоохранения животных (OIE), ИФА, наряду с традиционными тестами, широко используется в национальных программах по борьбе с инфекционными болезнями животных во многих странах мира (http://www.oie.int/eng/normes/en_mmanual.htm). Современные подходы к разработке ИФА За последнее десятилетие произошли значительные изменения в технологии производства ИФА-наборов, обусловленные результатами научно-практических разработок. Во-первых, моноклональные антитела (МкА) практически полностью вытеснили поликлональные не только в «сэндвич» вариантах ИФА, предназначенных для обнаружения антигена, но и в большинстве тест-систем, направленных на выявление антител, где они используются либо в качестве конъюгатов или для адсорбции антигена. Во-вторых, в качестве компонентов иммуноферментных тестсистем эффективно используются рекомбинантные антигены, Для этих целей используется «сэндвич» (или двухсайтный) вариант ИФА и ИХМ В большинстве случаев используются непрямой и конкурентный варианты ИФА и ИХМ 2 3 обладающие иммунохимическими представляющие собой стандартизированные свойствами хорошо препараты. нативных белков охарактеризованные И, в-третьих, в и и качестве неспецифических компонентов тест-систем и наборов стали применяться стандартизованные микропанели, стабильные химические реагенты и высокочувствительные субстратные смеси. Новые разработки АНО «НИИ ДПБ» Последнее десятилетие стало периодом интенсивного развития и внедрения в широкую ветеринарную практику иммуноферментных тестсистем и наборов, предназначенных для иммунодиагностики этиологически и экономически значимых инфекционных болезней животных. Их явные преимущества заключаются не только в высокой чувствительности и специфичности, но и в простоте применения и учета результатов, что существенно расширяет возможности их использования для проведения не только массовых, но и индивидуальных исследований. Внедряемые в практику простые и надежные высокочувствительные и специфичные тесты, созданные с использованием современных технологий и последних научных достижений, становятся основой лабораторных исследований. АНО «НИИ ДПБ» является разработчиком и производителем диагностических тест-систем на основе ИФА для практической ветеринарии. Создание тест-систем проводится в сотрудничестве с ведущими отечественными учеными и зарубежными компаниямиразработчиками диагностической продукции – «INGENASA» (Испания), «SVANOVA» (Швеция), «PRIONICS» (Швейцария), «AFFINITECH» (США) и др. Все разрабатываемые ИФА-наборы, предназначенные для выявления специфических антител к соответствующему антигену или непосредственно для выявления самого антигена, проходят широкомасштабные испытания в различных хозяйствах и регионах нашей страны и подлежат регистрации и сертификации в установленном порядке. Таблица 2. Характеристика ИФА-наборов разработанных АНО «НИИ ДПБ» Основные критерии, предъявляемые к диагностическим методам Параметры тест-систем АНО «НИИ ДПБ» Специфичность Высокая за счет использования моноклональных антител и рекомбинантных (или очищенных) антигенов Чувствительность До 1-10 нг/мл анализируемого образца Воспроизводимость результатов Время проведения анализа Коэффициент вариации 2-8 % 3 – 4 часа с учетом всех необходимых процедур Комплектация наборов Все компоненты наборов стандартизованы и готовы к применению Срок годности наборов Не менее 1 года при соблюдении условий хранения В 2008 г-2009 г. ряд высококачественных сертифицированных ИФА - наборов для диагностики инфекционных заболеваний различных видов млекопитающих и птиц были внедрены в широкую ветеринарную практику нашей страны (рисунки).
