(Anti-HEp-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG))

Anti-Hep-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG), EUROIMMUN AG
1
_____________________________________________________________________________________________________
Регистрационное удостоверение ФС №2005/1125 от 18.08.2005 г.
Аутоантитела класса IgG к антигенам клеток HEp-2
(Anti-HEp-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG))
Набор EUROLINE-WB для определения аутоантител класса IgG к антигенам клеток HEp-2, рекомбинатному
белку CENP B, нативному антигенному белку SS-A (60 кДа) и рекомбинантному белку Ro-52 в сыворотке
или плазме крови человека методом Вестерн-блота.
Номер по каталогу: DW 1520-1601-3 G (набор на 16 определений)
DW 1520-3001-3 G (набор на 30 определений)
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор Anti-HEp-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG) обеспечивает качественное определение in vitro в
сыворотке (плазме) крови человека аутоантител класса IgG к антигенам клеточной культуры HEp-2 (PM-Scl,
Scl-70, Ku, CENP A – C, AMA-M2, RNP, SS-A, SS-B, Jo-1, rib.-P-Protein, Sm), а также к белку (60 кДа)
нативного антигена SS-A (из селезенки и тимуса быка), к рекомбинантному белку Ro-52 и к рекомбинатному
белку CENP B.
ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ:
Смешанное заболевание соединительной ткани (MCTD, Sharp-синдром), системная красная волчанка
(SLE), синдром Шегрена, прогрессирующий системный склероз, поли-/дерматомиозит, первичный
билиарный цирроз.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Тест Anti-HEp-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG) основан на методе Вестерн-блота. Набор содержит
тестовые стрипы с электрофоретически разделенными экстрактами клеток HEp-2. Каждый стрип
дополнительно снабжен мембранным чипом с отдельно нанесенным рекомбинантным белком
CENP B, нативным антигеном SS-A (60 кДа) и рекомбинантным белком Ro 52. Стрипы блокируют и
инкубируют на первой стадии реакции с образцом разведенной сыворотки или плазмы пациента. В случае,
если образец положительный, специфические антитела класса IgG (а также классов IgA и IgM) будут
связываться с антигенами. Для обнаружения связанных антител проводится вторая инкубация с
использованием ферментного конъюгата (антитела к IgG человека, меченные щелочной фосфатазой),
который способен вызывать развитие цветной реакции.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
Компонент
1.
6.
7.
Тестовые стрипы
Полоски с электрофоретически разогнанными антигенами
клеток HЕp-2 плюс рекомбинатный CENP B, нативный
антиген SS-A (60 кДа) и рекомбинантный белок Ro-52
Оценочный шаблон с контрольным стрипом
1 тестовый стрип, проинкубированный с положительной
контрольной сывороткой
Ферментный конъюгат
Козьи антитела к IgG человека, конъюгированные с
щелочной фосфатазой; 10×концентрат
Универсальный буфер-Плюс
10×концентрат
Раствор субстрата
NBT/BCIP, готов к использованию
Оценочный протокол
Лоток для инкубации
8.
9.
Пластиковая пленка
Инструкция по применению набора
2.
3.
4.
5.
Кол-во
Кол-во
16 × 1
30 × 1
STRIPS
1 шт.
1 шт.
–
1 × 3 мл
2 × 3 мл
1 × 50 мл
1 × 100 мл
BUFFER 10×
1 × 30 мл
1 × 50 мл
SUBSTRATE
1 лист
2 листа
---
TRAY
2 шт.
1 буклет
–
–
2×8
каналов
1 шт.
1 буклет
Обозначение
CONJUGATE 10×
–
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hep-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG), EUROIMMUN AG
2
_____________________________________________________________________________________________________
Хранение и стабильность набора: Набор следует хранить при температуре от +2 °С до +8 °С. Не
замораживать. Невскрытые компоненты набора сохраняют стабильность в течение всего указанного срока
годности набора.
Утилизация отходов: Не разведенную сыворотку пациентов и стрипы после инкубации следует
рассматривать как инфицированные отходы и обращаться с ними соответствующим образом. Все реагенты
следует утилизировать в соответствии с действующими официальными инструкциями.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Примечание: Все компоненты каждой серии набора специально подобраны друг к другу. Чтобы обеспечить
правильное выполнение теста, используйте только компоненты одной серии. Обратите внимание, что на
пакете с стрипами, кроме номера серии, отпечатан дополнительный номер партии стрипов. Этот номер,
относящийся только к партии стрипов, отпечатан также на соответствующем оценочном шаблоне с
контрольным стрипом. Правильность оценки результатов анализа может быть гарантирована только в том
случае, когда оба эти номера на пакете со стрипами и на шаблоне совпадают.
Перед использованием все реагенты необходимо прогреть до комнатной температуры (от +18 °С до +25
°С).
Прочие сведения о стабильности отдельных реагентов указаны ниже.
Стрипы, покрытые антигенами: Готовы к использованию. Во избежание конденсации влаги на стрипах, не
вскрывайте пакет до тех пор, пока он не нагреется до комнатной температуры. Вынув необходимое
количество стрипов, остальные неиспользованные стрипы немедленно плотно закройте в той же защитной
упаковке и храните при температуре от +2 °С до +8 °С. После первого вскрытия упаковки плотно
упакованные вновь стрипы с антигенами можно хранить минимум 2 месяца в сухом месте при температуре
от +2 °С до +8 °С. Для обеспечения правильной оценки результатов следите, чтобы номер пакета со
стрипами совпадал с номером на шаблоне.
Ферментный конъюгат: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Для приготовления готового к
использованию разведенного раствора ферментного конъюгата отберите необходимое количество
жидкости из флакона с концентратом с помощью чистой пипетки и разведите 1:10 готовым к использованию
универсальным буфером-Плюс. Например, для проведения анализа на 1 тестовом стрипе разведите 0,15
мл концентрата ферментного конъюгата в 1,35 мл готового к использованию универсального буфера-Плюс.
Разведенный раствор ферментного конъюгата следует использовать до конца рабочего дня.
Универсальный буфер-Плюс: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Для приготовления готового
к использованию универсального буфера-Плюс отберите необходимое количество жидкости из флакона с
концентратом с помощью чистой пипетки и разведите 1:10 деионизированной или дистиллированной
водой. Например, для проведения анализа на 1 тестовом стрипе разведите 1,5 мл концентрата
универсального буфера-Плюс в 13,5 мл деионизированной или дистиллированной воды. Разведенный
универсальный буфер-Плюс следует использовать до конца рабочего дня.
Раствор субстрата: Готов к использованию. После отбора необходимого количества реагента из флакона
немедленно вновь закройте его, так как раствор чувствителен к свету.
Предостережение: Использованная в шаблоне контрольная сыворотка была проверена на антитела к
ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и вирусу гепатита С, а также на наличие HBsAg, методами иммуноферментного анализа и
иммунофлуоресценции и при этом показала отрицательный результат. Тем не менее, все используемые
материалы следует считать потенциально опасными и обращаться с ними, соблюдая необходимые меры
предосторожности. Избегайте контакта с кожей.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ ОБРАЗЦОВ ПАЦИЕНТОВ
Материал образцов: Сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин или цитрат) крови человека.
Стабильность: Образцы пациентов, предназначенные для исследования этим методом, можно хранить до
14 дней при температуре от +2 оС до +8 оС. Разведенные образцы необходимо использовать в течение
одного рабочего дня.
Разведение образцов: Образцы пациентов разводят 1:51 разведенным универсальным буфером-Плюс.
Например: разведите 30 мкл образца в 1,5 мл разведенного универсального буфера-Плюс и тщательно
перемешайте на вортексе (пипетки для этого не подходят).
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hep-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG), EUROIMMUN AG
3
_____________________________________________________________________________________________________
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
Блокировка стрипов
Заполните лунки пластикового лотка для инкубации в соответствии с количеством исследуемых образцов
пациентов разведенным универсальным буфером-Плюс (по 1,5 мл буфера на одну лунку). Выньте из
упаковки требуемое количество стрипов и поместите каждый стрип в отдельную лунку. При этом должен
быть виден номер стрипа, указанный в его нижней части. Инкубируйте 15 минут при комнатной
температуре на шейкере рокерного типа. Затем удалите аспирацией всю жидкость из каждой лунки.
Инкубация с образцом (1 стадия)
Внесите в каждую лунку по 1,5 мл разведенного образца сыворотки или плазмы и инкубируйте при
комнатной температуре в течение 60 минут на шейкере рокерного типа.
Промывка
Удалите аспирацией жидкость из каждой лунки и затем промойте 3 раза в течение 5 минут, добавляя по
1,5 мл разведенного универсального буфера-Плюс на лунку.
Инкубация с конъюгатом (2 стадия)
Внесите в каждую лунку по 1,5 мл ферментного конъюгата (меченные щелочной фосфатазой антитела к
IgG человека). Инкубируйте в течение 60 минут при комнатной температуре на шейкере рокерного типа.
Промывка
Удалите аспирацией жидкость из каждой лунки и затем промойте 3 раза в течение 5 минут, добавляя по
1,5 мл разведенного универсального буфера-Плюс на лунку.
Инкубация с субстратом (3 стадия)
Внесите в каждую лунку по 1,5 мл раствора субстрата. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной
температуре на шейкере рокерного типа.
Остановка реакции
Удалите аспирацией жидкость из каждой лунки и затем промойте 3 раза в течение 1 минуты
деионизированной или дистиллированной водой.
ОЦЕНКА И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Регистрация результатов реакции
После остановки реакции деионизированной или дистиллированной водой выньте из лотка
проинкубированный стрип и, придерживая его двумя пинцетами, поместите в соответствующее место,
расположенное на разлинованное и покрытое листом прозрачного пластика поле оценочного протокола,
предназначенное для стрипов. Пока стрип влажный, его можно на пластике подвинуть. После высыхания
стрипы прочно пристанут к пластику. После того, как вы поместите все стрипы в оценочный протокол, их
необходимо крепко прижать листом фильтровальной бумаги. Если вы собираетесь получить результат в
цифровом выражении, сканируя стрип с помощью EURILINESCAN, поместите стрипы на пластик, как
описано выше. После сканирования высохших стрипов их следует для дальнейшего хранения закрыть
сверху другим листом пластиковой пленки.
После этого приложите оценочный шаблон к стрипам на пластике так, чтобы черные полосы,
расположенные над номерами стрипов, совпадали с черной полосой (alignment bar) контрольного стрипа на
оценочном шаблоне. При этом номер на оценочном шаблоне должен совпадать с номером используемой
партии стрипов. В оценочном протоколе следует отметить ясно различимые полосы на стрипах,
совпадающие с отмеченными полосами антигенов контрольного стрипа.
Примечание: На стрипах под номером расположена контрольная полоса. Интенсивное окрашивание
этой контрольной полосы свидетельствует о правильности проведения инкубации.
Антигены: Источником антигенов для теста Anti-HEp-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG) является
культура клеток HЕp-2. Клетки были проэкстрагированы и клеточные антигены разделены в соответствии с
их молекулярной массой методом прерывистого электрофореза в полиакриламидном геле; антигены
перенесены на нитроцеллюлозную мембрану стрипов. Затем каждый стрип дополнительно был покрыт
мембранным чипом, содержащим рекомбинатный CENP B, аффинно очищенный нативный антиген SS-A (с
белком 60 кДа; антиген из селезенки и тимуса быка) и рекомбинантный Ro-52 (52 кДа; соответствующая
кДНК была экспрессирована в клетках насекомых с использованием вектора бакуловируса). Точное
обнаружение антител к антигену SS-A возможно только с помощью нативного антигена (13). Стрип из
набора, проинкубированный с контрольной сывороткой и окрашенный включен в состав набора в качестве
контрольного.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hep-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG), EUROIMMUN AG
4
_____________________________________________________________________________________________________
Заболевания, ассоциированные с аутоантителами, обнаруживаемыми набором Anti-HEp-2 Cell
antigen EUROLINE-WB (IgG)
Полоса
103 кДа
Антиген
CENP B рекомбинантный
SS-A (60 кДа) нативный
Ro-52 рекомбинантный
PM-Scl (PM-1)
100 кДа
88 кДа
86 кДа
74 кДа
72 кДа
70 кДа
60 кДа
55 кДа
52 кДа
52 кДа
47 кДа
44 кДа
43 кДа
38 кДа
32 кДа
27 кДа
26 кДа
18 кДа
17 кДа
15 кДа
12 кДа
11 кДа
11 кДа
Scl-70
CENP B
Ku
AMA-M2
Ku
RNP
SS-A
Jo-1
SS-A
SS-B
SS-B
SS-B
SS-B
Rib. P.-Protein P0
RNP A
Sm B’
Sm B
RNP C
Sm D
Rib. P.-Protein P1/P2
CENP A
Sm E
Sm F
Ассоциированные заболевания
прогрессирующий системный склероз, ограниченная форма
синдром Шегрена; системная красная волчанка
См. стр. 6
полимиозит / дерматомиозит / Overlap-синдром и
прогрессирующий системный склероз, диффузная форма
прогрессирующий системный склероз, диффузная форма
прогрессирующий системный склероз, ограниченная форма
системная красная волчанка / полимиозит / дерматомиозит
первичный билиарный цирроз печени
системная красная волчанка / полимиозит / дерматомиозит
Sharp-синдром; системная красная волчанка
синдром Шегрена; системная красная волчанка
Полимиозит
синдром Шегрена; системная красная волчанка
синдром Шегрена; системная красная волчанка
синдром Шегрена; системная красная волчанка
синдром Шегрена; системная красная волчанка
синдром Шегрена; системная красная волчанка
системная красная волчанка
Sharp-синдром; системная красная волчанка
системная красная волчанка
системная красная волчанка
Sharp-синдром; системная красная волчанка
системная красная волчанка
системная красная волчанка
прогрессирующий системный склероз, ограниченная форма
системная красная волчанка
системная красная волчанка
Антитела класса IgG к антигенам клеток HEp-2
Для оценки сигналов необходимо учитывать как положение полос на окрашенном стрипе, так и их
интенсивность, потому что отрицательные сыворотки в некоторых случаях также могут давать слабые
сигналы в местах расположения отдельных полос. Полосы на тестовом стрипе сравнивают с полосами на
контрольном стрипе оценочного шаблона. Тест Anti-HEp-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG) предназначен
для использования в качестве подтверждающего для предыдущих тестов, выполненных на клетках HEp-2 с
использованием метода непрямой иммунофлуоресценции. Наличие аутоантител, подтвержденных с
помощью набора EUROLINE-WB, необходимо затем сравнить с результатами скринингового теста на
антиядерные антитела (ANA) (тест непрямой иммунофлуоресценции, IIFT, в котором используется
комбинированный субстрат из клеток HЕp-2 и замороженных срезов ткани печени приматов). Оценке
подлежат только те результаты, для которых наблюдается правдоподобное соответствие между
скрининговым и подтверждающим тестами.
Критерии для интерпретации отдельных положительных реакций с Ro-52
Нативный антиген SS-A – малый рибонуклеопротеин, состоящий из одной или нескольких (до пяти) молекул
РНК (Y1, Y2, Y3, Y4, Y5; от 80 до 112 оснований) и белка с молекулярной массой 60 кДа. Полоса SS-A на
антигенном чипе в наборе Anti-HEp-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG) состоит из нативного антигена SSA. С этим комплексом бывает также связан белок Ro-52 с молекулярной массой 52 кДа, но не всегда, этот
вопрос дискутируется в литературе.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hep-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG), EUROIMMUN AG
5
_____________________________________________________________________________________________________
Отдельно реакции аутоантител с Ro-52 невозможно оценить как SS-A-позитивные или специфичные для
СКВ или синдрома Шегрена, так как с Ro-52 могут давать перекрестные ложноположительные реакции
антитела к другим различным аутоантигенам (например, к Jo-1).
Мы рекомендуем интерпретировать результаты теста EUROLINE-WB с учетом результатов скринингового
теста на ANA (клетки HЕp-2/ срезы печени приматов) следующим образом:
IIFT, тест на ANA
Клетки HЕp-2
Отрицательный
ответ по ANA
Срезы печени
приматов
Отрицательный
ответ по ANA
Положительный
ответ по ANA
(отсутствует
типичная реакция
с SS-A)
Положительный
ответ по ANA
(типичная
реакция с SS-A)
Положительный
ответ по ANA
(отсутствует
типичная
реакция с SS-A)
Положительный
ответ по ANA
(типичная
реакция с SS-A)
Положительный
ответ по ANA
(типичная
реакция с SS-A)
Положительный
ответ по ANA
(типичная
реакция с SS-A)
EUROLINE-WB
Чип с антигеном
Ro-52 (52 кДа,)
SS-A (60 кДа)
Положительный
ответ
Отрицательный
ответ
Положительный
ответ
Отрицательный
ответ
Положительный
ответ
Отрицательный
ответ
Положительный
или
отрицательный
ответ
Положительный
ответ
Результат
Неспецифическая реакция;
отрицательный результат по
антителам к SS-A
Неспецифическая реакция;
отрицательный результат по
антителам к SS-A
Редкая ситуация; указывает
на присутствие антител к
SS-A. Наличие СКВ или
синдрома Шегрена должно
быть
окончательно
установлено по клиническим
результатам.
Четко
положительная
реакция по антителам к SSA
В различных исследованиях было показано, что сыворотки, позитивные по антителам к SS-A, всегда
содержат антитела к нативному антигену SS-A (к входящему в его состав белку с молекулярной массой 60
кДа) и могут дополнительно иметь антитела к Ro-52. Например, в исследовании, организованном фирмой
EUROIMMUN в Японии, были исследованы 103 пациента с СКВ (n=26) и синдромом Шегрена (n=77); они
были охарактеризованы предварительно как положительные по антителам к SS-A методом двойной
иммунодиффузии. Из всех образцов 102 сыворотки реагировали с полосой нативного SS-A и 90 сывороток
дополнительно взаимодействовали с полосой Ro-52. Но ни одна из сывороток не показала положительную
реакцию с одной только полосой Ro-52. Это исследование ясно показывает, что антитела к нативному SS-A
могут быть достоверно обнаружены с помощью нативного антигена SS-А. В некоторых редких случаях и в
прогнозируемых случаях волчаночного синдрома у новорожденных полоса Ro-52 на стрипе может
обеспечить получение дополнительной важной информации.
Соответствие теста для скрининга и подтверждающего теста
Аутоантитела
антигенам:
к
Результаты скринингового теста (непрямая
иммунофлуоресценция
с
комбинацией
субстратов HЕp-2/печень)
Ожидаемый результат подтверждающего
теста (Anti-HEp-2 Cell antigen EUROLINE-WB
(IgG)
U1-nRNP/Sm
Клетки Нер-2: Крупно-гранулярная, в
некоторых случаях средне- или тонкогранулярная
флуоресценция,
распределенная по всему клеточному
ядру,
ядрышко
исключено,
темные
хромосомы в митотических клетках.
Печень
приматов:
Гранулярная
флуоресценция клеточного ядра, ядрышко
исключено. Реакция антител с клетками
НЕр-2 и печенью приматов одинаково
сильная.
Антитела к U1-nRNP/Sm: Тройная полоса
с интенсивной средней полосой на уровне
70 кДа (RNP 70 кДа) и/или полоса на
уровне 32 кДа (RNP A) и/или полоса на
уровне 18 кДа (RNP C).
Антитела к Sm: Двойная полоса, сильнопозитивная на уровне 27 кДа (Sm-B’) и 26
кДа (Sm-B), или менее интенсивная
двойная
полоса
(Sm-B’,
Sm-B)
и
позитивные полосы на уровне 17 кДа (SmD) или 11 кДа (Sm-T или Sm-F).
SS-A
SS-B
Клетки
Нер-2:
флуоресценция
Антитела к SS-A: позитивная полоса
нативного антигена SS-A на мембранном
Тонко-гранулярная
клеточного
ядра,
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hep-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG), EUROIMMUN AG
6
_____________________________________________________________________________________________________
некоторые ядрышки не видны, темные
хромосомы в митотических клетках.
Печень приматов: Тонко-гранулярная
флуоресценция
клеточного
ядра,
некоторые ядрышки позитивны. Реакция
антител сильнее с клетками НЕр-2, чем с
печенью приматов.
PM/Scl
(PM-1)
Центромеры
Scl-70
Ku
Рибосомальны
й белок P
M2
Jo-1
Клетки Нер-2: Гомогенная флуоресценция
ядрышка
и
более
слабая
тонкогранулированная
флуоресценция
в
нуклеоплазме. Хромосомы митотических
клеток исключены, тонко-гранулированная
флуоресценция снаружи хромосом.
Печень
приматов:
Гомогенная
флуоресценция ядрышка.
Клетки Нер-2: Тонкие, одинакового
размера гранулы (46 или 92 в каждом
клеточном
ядре)
равномерно
распределенные по ядру интерфазных
клеток.
В
митотических
клетках
флуоресцентные полоски на уровне
медианы
(метафаза)
или
две
параллельные полосы (анафаза), в
зависимости от стадии митоза.
Печень приматов: От 10 до 20 гранул,
распределенных по клеточному ядру.
Реакция антител намного сильнее с
клетками НЕр-2, чем с печенью приматов.
Клетки
Нер-2:
Почти
гомогенная
флуоресценция ядра в интерфазных
клетках, ядрышки выражены и гомогенны.
Печень
приматов:
Гомогенная
флуоресценция
клеточного
ядра
и
флуоресценция ядрышек.
Клетки
Нер-2:
Тонко-гранулярная
флуоресценция клеточного ядра, ядрышки
частично позитивные.
Печень приматов: Тонко-гранулярная,
частично ретикулярная флуоресценция
клеточного ядра.
Клетки
Нер-2:
Флуоресценция
цитоплазмы от гладкой до тонкогранулярной.
Печень приматов: Флуоресценция по
всей поверхности печеночной ткани, в
виде крапинок.
Клетки
Нер-2:
Отчетливая,
грубогранулярная
флуоресценция
в
цитоплазме.
Печень
приматов:
Гранулярная
флуоресценция печеночной ткани.
Клетки Нер-2: Флуоресценция по всей
цитоплазме от гранулярной до тонкокомковатой, клеточные ядра иногда с
чипе, см. интерпретацию положительных
реакций с рекомбинантным белком Ro-52.
Оценка
антител
к
SS-A
должна
основываться на реакции с антигенами
мембранного чипа.
Кроме того, могут быть видны в
результате положительной реакции
следующие
полосы
антигенов
клеточного экстракта HЕp-2:
полоса на уровне 60 кДа (SS-A 60) и/или
узкая полоса на уровне 52 кДа (SS-A 52).
Антитела к SS-B: Четкая широкая полоса
на уровне 52 кДа и полосы на уровне 47,
44 и 43 кДа.
Антитела к PM/Scl: Позитивная полоса на
уровне 103 кДа (PM/Scl).
Антитела к центромерам: Позитивная
полоса на уровне 120 кДа (CENP C) и/или
88 кДа (CENP B) и/или 12 кДа (CENP B).
Антитела к Scl-70: Позитивная полоса на
уровне 100 кДа (Scl-70).
Антитела к Ku: Позитивная полоса на
уровне 86 кДа (Ku) и/или 72 кДа (Ku).
Антитела к рибосомальному белку Р:
Позитивная полоса на уровне 38 кДа
(рибосомальный белок Р) и/или 15 кДа
(рибосомальный белок Р- белки Р1/Р2).
Антитела к М2: Позитивная полоса на
уровне 74 кДа (М2).
Антитела к Jo-1: Позитивная полоса на
уровне 55 кДа.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hep-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG), EUROIMMUN AG
7
_____________________________________________________________________________________________________
тонкими гранулами, выраженными слабее,
чем в цитоплазме.
ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА
Диапазон определения: Метод EUROLINE-WB является качественным, диапазон определения не дается.
Принято, что предельный титр антител наблюдается при разведении образца 1:51.
Перекрестные реакции: Качество используемых антигенов и их источников гарантирует высокую
специфичность наборов EUROLINE-WB. В измерении перекрестных реакций нет необходимости, так как в
данной диагностической системе можно прямо отличать специфические антигены от неспецифических.
Интерференция: Не отмечено изменения аналитических характеристик при исследовании в данном
наборе гемолизированных, липемических или желтушных образцов.
Вариации результатов в разных опытах и в одном опыте: Вариации результатов в разных опытах
оценивали многократным повторным исследованием одних и тех же охарактеризованных образцов в
течение нескольких дней, вариации в одном опыте – многократным исследованием охарактеризованных
образцов в течение одного дня. В каждом случае интенсивность полос находилась в пределах
установленного диапазона. Таким образом, данный тест EUROLINE-WB показывает очень высокую
воспроизводимость в пределах одной постановки и между постановками.
Калибровка: Реактивность каждого антигена стандартизовали с помощью референтных сывороток
человека CDC-ANA с номерами лотов от #1 до #11 контрольного центра “Center for Disease Control”
(Атланта, США). Данные по реактивности сывороток CDC, полученные с помощью набора Anti-HEp-2 Cell
antigen EUROLINE-WB (IgG) фирмы EUROIMMUN, суммированы в нижеприведенной таблице:
Антиген
CDC-1
Гомоген
-ный/rim
SS-A
Ro-52
PM-Scl
Scl-70
KU
Центромер
RNP
Sm
SS-B
M2
Jo-1
РибосомальныйPпротеин
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
CDC-2
Крапчаты
й
/SS-B
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
CDC-3
Крапчатый
CDC4
RNP
CDC5
Sm
CDC-6
Ядрыш
-ковый
CDC7
SS-A
Пол.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
CDC-8
Центро
мерный
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
CDC9
Scl70
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
CDC10
Jo-1
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
CDC11
РМScl
Отр.
Отр.
Пол.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Отр.
Специфичность этих сывороток была исследована контрольным центром “Center for Disease Control” по
результатам реакции иммунофлуоресценции (субстрат: клетки HЕp-2 EUROIMMUN и срезы ткани печени
приматов), двойной иммунодиффузии или противоточного иммуноэлектрофореза (сыворотка не в любом
случае бывает моноспецифичной).
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Высокие титры антител к U1-nRNP характерны для смешанного заболевания соединительных тканей
(MCTD) или для Шарп-синдрома (Scharp syndrome) в 95%-100% случаев. Титр антител коррелирует с
клинической активностью заболевания. Антитела к U1-nRNP находят также у пациентов с
диссеминированной или системной красной волчанкой (systemic lupus erythematosus).
Антитела к Sm имеют высокую специфичность к системной красной волчанке. Вместе с антителами к
двухцепочечной ДНК (dsDNA) они могут считаться патогномоничными признаками этого заболевания, но
встречаются только у 5%-10% пациентов.
Антитела к SS-A связаны с различными аутоиммунными заболеваниями. Наиболее часто – у пациентов с
синдромом Шегрена (Sjörgen’s syndrome от 40% до 95% случаев), но также при системной красной
волчанке (от 20% до 60% случаев) и при первичном билиарном циррозе (20%) и иногда при активном
хроническом гепатите. Кроме этого, практически в 100% случаев красной волчанки у новорожденных
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hep-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG), EUROIMMUN AG
8
_____________________________________________________________________________________________________
(neonatal lupus erythematodes) могут быть найдены антитела к антигену SS-A. Они поступают через
плацентарный барьер к плоду и являются причиной воспалительных реакций. У новорожденных младенцев
они могут также вызывать врожденную блокаду сердца (congenital neonatal heart block).
Антитела к SS-B находят почти исключительно у женщин (29:1) при синдроме Шегрена (от 40% до 95%
случаев), но также при диссеминированной красной волчанке (от 10% до 20%). При синдроме Шегрена в
основном встречается комбинация антител к SS-A и SS-B.
Антитела к Scl-70 находят в 25%-75% случаях у пациентов с прогрессирующим системным склерозом
(диффузная форма), в зависимости от использованных методов проверки и степени активности
заболевания (Scl = склеродерма). Они не встречаются при ограниченной склеродерме.
Антитела к PM-Scl можно обнаружить у пациентов с так называемым Overlap-синдромом (частичного
совпадения), т. е. с комбинацией симптомов полимиозита (РМ), дерматомиозита и прогрессирующего
системного склероза (Scl).
Антитела к Jo-1 превалируют при полимиозите (25%-35%). Они часто связаны с интерстициальным
легочным фиброзом.
Высокие титры антител к М2 характерны для первичного билиарного цирроза печени, при котором
предпочтительными антигенами являются фермент Е2 и белок X пируватдегидрогеназного комплекса.
Антитела к М2 могут быть также обнаружены, в основном в низких титрах, при других хронических
заболеваниях печени (30 % случаев) и при прогрессирующем системном склерозе (7%-25%). У пациентов с
прогрессирующим системным склерозом, имеющих аутоантитела к М2, возможно клиническое совпадение
(оverlap) с первичным билиарным циррозом печени.
Антитела к Ku находят при системной красной волчанке (распространенность 10%).
Антитела к центромерам с высокой специфичностью и распространенностью от 80 до 95% являются
патогномоничным признаком ограниченной формы прогрессирующего системного склероза.
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
Anti-HEp-2 Cell antigen_EUROLINE-WB_DW_1520G_rus.doc
30.03.2007 11:06
Оригинал DW_1520-3G_A_UK_C02.doc 05.07.09. 07:40
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hep-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG), EUROIMMUN AG
9
_____________________________________________________________________________________________________
EUROIMMUN Anti-HEp-2 Cell antigen EUROLINE-WB (IgG)
Протокол инкубации
Блокировка:
Поместите блотовый стрип в лунку лотка для инкубации, содержащую
1,5 мл универсального буфера-Плюс
15 мин
Встряхните
1. Инкубация образца:
Аспирируйте жидкость, внесите в лунку
1,5 мл разведенного образца сыворотки (1:51)
60 мин
Встряхните
Промывка: 3 × 5 мин
2. Инкубация с конъюгатом:
Аспирируйте жидкость, внесите в лунку
1,5 мл ферментного конъюгата (1:10)
60 мин
Встряхните
Промывка: 3 × 5 мин
3. Инкубация с субстратом:
Аспирируйте жидкость, внесите в лунку
1,5 мл раствора субстрата
10 мин
Встряхните
Остановка реакции:
Аспирируйте жидкость, промойте водой
Визуальная оценка
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007, тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru