МЕРОПРИЯТИЯ, НАПРАВЛЕННЫЕ ПРОТИВ ЛЕЙКОЗА Рафиков А.А., Иванов А.И

МЕРОПРИЯТИЯ, НАПРАВЛЕННЫЕ ПРОТИВ ЛЕЙКОЗА
Рафиков А.А., Иванов А.И.
ФГБОУ ВО Башкирский ГАУ
Уфа. Россия
ACTIONS AGAINST A LEUKOSIS
Rafikov A.A., Ivanov A.I.
The Bashkir State Agrarian University
Ufa, Russia
Одним из основных методов диагностики лейкоза является регулярные,
через каждые 30-45 дней, серологические исследования крови по РИД.
Во время производственной практики мной была взята кровь, на
исследование наличия вируса лейкоза крупного рогатого скота, у 115 голов
животных.
Пробы крови для исследований брали не ранее чем через 15 суток после
введения животным вакцин или аллергенов, за 30 суток до отела и спустя такой
же срок - после него. Серологическому исследованию на лейкоз подвергали
сыворотки крови от животных в возрасте 6 месяцев (телок) и старше.
Для постановки РИД использовали диагностический набор, который
состоит из специфического антигена вируса лейкоза крупного рогатого скота,
специфической преципитирующей сыворотки к вирусу лейкоза крупного
рогатого скота, отрицательной сыворотки и других компонентов.
Кровь у крупных животных брали из подхвостовой вены. Использовали
одноразовые вакуумные пробирки. От крупного рогатого скота брали 7-10 мл
крови. На каждую пробирку прикрепляли этикетку с порядковым номером
животного и делали соответствующую запись в журнале регистрации
обработанных животных. Затем кровь в пробирках помещалась на 1-2 часа в
тёплое место для свёртывания; затем в прохладное - для отстаивания.
Направляли
в
лабораторию
с
сопроводительную и опись животных.
нарочным.
Оформляли
при
этом
2
В
лаборатории лиофилизированный
антиген,
специфическую преципитирующую и отрицательную сыворотки растворяли
дистиллированной водой в объеме, указанном на этикетке. Расплавленный
агаровый гель, имеющий температуру 50—65°С, разливали слоем 2—3 мм в
обезжиренные чашки Петри, установленные в горизонтальном положении, и
оставляли их при комнатной температуре на 1 час.
В затвердевшем агаре с помощью штампа-пробойника прорезали лунки
для тест-систем — для каждой тест-системы требуется семь лунок диаметром
5—7 мм: одна в центре и шесть по периферии, расстояние между лунками
соответственно 2,5—3 мм.
Лиофилизированный антиген, контрольные и испытуемые сыворотки
вносили
в
лунки
пастеровскими
пипетками,
которые
для
каждого
диагностикума были отдельные.
Антиген
вносили
противоположные
лунки
в
центральную
заполняли
лунку,
специфической
две
диаметрально
преципитирующей
сывороткой, четыре оставшиеся — испытуемыми.
После заполнения лунок чашки Петри выдерживали 48 ч при температуре
18—27°С в термостате (стеклянные пластинки — при той же температуре во
влажной камере).
Реакцию учитывали через 48 ч в проходящем свете и оценивали при
наличии четкой контрольной линии преципитации между антигеном и
специфической преципитирующей сывороткой и отсутствии таковой с
отрицательной контрольной сывороткой.
При оценке результатов реакции с испытуемыми сыворотками прежде
всего устанавливали специфичность образовавшихся линий преципитации.
В зависимости от наличия специфических антител против ВЛКРС и типа
получившихся линий преципитации реакцию оценивали как положительную
или отрицательную.
3
Животное,
сыворотка
крови которого
дала
положительный
результат в РИД, считали зараженным вирусом лейкоза. Его исследовали
гематологическим методом исследования.
Для количественной и качественной оценки лейкоцитов брали пробу крови
в пробирку с антикоагулянтом. В качестве антикоагулянта использовали
трилон-Б из расчета одна капля 10%-ного раствора (на дистиллированной воде)
на 1 мл крови.
Для предотвращения свертывания крови пробирку сразу же (не отходя от
исследуемого
животного)
закрывали
резиновой
пробкой
и
тщательно
перемешивали, переводя попеременно пробирку из вертикального положения в
горизонтальное. Проба крови исследовалась не позднее 36 ч с момента ее
взятия.
В лунки полистироловых пластин разливали по 0,4 мл жидкости Тюрка.
Стеклянным капилляром набирали предварительно перемешанную кровь до
метки 0,02 мл. Марлевой салфеткой протерли наружную поверхность
капилляра от крови и плавно выдували содержимое на дно пробирки с
жидкостью Тюрка. Несколько раз капилляр промывали, насасывали и выдували
содержимое пробирки.
Для следующего этапа работы готовили камеры Горяева, притирали к ним
шлифованные стекла из комплекта камеры Горяева. В подготовленную для
работы камеру Горяева при помощи глазной пипетки внесли разведенную в
жидкости Тюрка пробу крови от животного. Если в камере обнаруживали
пузырьки воздуха, то ее перезаряжали вновь. Выждав 1—2 мин, пока клетки
осядут, их подсчитывали под микроскопом при увеличении 10x10 или 10x20.
Клетки подсчитывали в 25 больших квадратах, начиная с левого верхнего угла
сетки и далее сверху вниз. В каждом квадрате считали клетки, находящиеся
внутри, а также лежащие на левых и нижних линиях и в левых углах квадрата.
Для подсчета содержания лейкоцитов в 1 мкл крови число подсчитанных в
25 квадратах клеток умножали на 200.
4
Обнаружив
повышенное количество
лейкоцитов
провели
дифференцированный подсчет лейкоцитов. Для этого приготовили мазки
крови.
Для приготовления мазков крови использовали чистые обезжиренные
предметные стекла без царапин и шероховатостей. Для предотвращения
возможного травмирования клеток крови при производстве мазков, предметные
стекла слегка подогревали (до температуры тела).
Каплю крови нанесли на правый конец стекла, не доходя на 1 см до края.
Шлифованное
стекло
ставили
впереди
капли
крови,
надвигали
до
прикосновения с ней и равномерным движением влево делали мазок.
После высушивания на воздухе мазки маркировали простым карандашом,
указывая
номер
экспертизы,
инвентарный
номер
животного,
дату
приготовления мазка, и фиксировали в этиловом спирте 20-30 минут.
Окрашивали мазки в течение 20—30 минут краской Романовского —
Гимза в чашках Петри. Затем краску многократно смывали дистиллированной
водой и мазки высушивали на воздухе. Качество окраски контролировали под
микроскопом.
Лейкоцитарную формулу выводили по результатам дифференцированного
подсчета 100 клеток в окрашенных мазках крови под микроскопом с
иммерсионной системой. При подсчете предметное стекло продвигали по
зигзагообразной линии в направлении к концу мазка.
Таким образом, одним из основных методов диагностики лейкоза является
серологические исследования крови по РИД. Благодаря данным исследованиям
мы периодически делаем выводы о возникновении или распространении вируса
лейкоза крупного рогатого скота среди животных.
При гематологическом исследование был получен один положительный
результат. Животное было отправлено на убой в мясокомбинат, остальное
поголовье повторно исследовано в РИД и получен отрицательный результат.