СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР ПО

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ КЫРГЫЗСКОЙ РЕСПУБЛИКИ
Республиканский центр «СПИД»
Научно-производственное объединение «Профилактическая медицина»
Департамент профилактики заболеваний и госсанэпиднадзора
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ
ПРОЦЕДУР ПО ЛАБОРАТОРНОЙ
ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Бишкек 2014
Рекомендовано к изданию Ученым Советом МЗ КР…
Авторский коллектив:
Кучук Т.Э., к.м.н.
руководитель Республиканского научно-практического центра контроля
качества лабораторной диагностики инфекционных болезней НПО
«Профилактическая медицина» МЗ КР
Момушева К.Т.
врач-лаборант Республиканского центра СПИД
Нупбаева Ж. Б.
заведующая референс-лабораторией РЦ СПИД
Касымбекова К. Т., д.м.н.
руководитель
ДПЗиГСЭН
Центра
молекулярно-генетических
исследований
Рецензенты:
Семенова А.В., к. б. н.,
доцент,
заведующая лабораторией иммунологии и вирусологии ВИЧ-инфекции
ФБУН Санкт-Петербургского НИИ эпидемиологии и микробиологии им.
Пастера. Г. Санкт-Петербург.
«Сборник стандартных операционных процедур по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции», 1-ое
издание – Б.: 2014. – … с.
Сборник стандартных операционных процедур является первым официальным изданием в Кыргызской Республике по стандартизации процессов, связанных с производством качественного лабораторного анализа.
Сборник предназначен для специалистов Центров по борьбе со СПИД, лабораторий диагностики ВИЧ/
СПИД, специалистов клинико-диагностических лабораторий, руководителей лечебных учреждений
различного уровня, врачей эпидемиологов, врачей и среднего медицинского персонала общей практики, преподавателей КГМИиПК.
Сборник СОП издан при финансовой и технической поддержке совместного проекта Объединённой
программы ООН по ВИЧ/СПИДу (ЮНЭЙДС) и Программы технической помощи странам Восточной
Европы и Центральной Азии в области противодействия ВИЧ/СПИДу, ИППП и вирусным гепатитам,
при финансовой поддержке Правительства Российской Федерации.
Ответственность за содержание сборника СОП лежит на представителях рабочей группы. Сборник не
обязательно отражает точку зрения Объединённой программы ООН по ВИЧ/СПИДу (ЮНЭЙДС), её
программ и проектов.
Все права защищены. При воспроизведении и переводе ссылка на сборник СОП обязательна.
СОДЕРЖАНИЕ
Введение.............................................................................................................................................................................
Раздел 01 Общий...............................................................................................................................................................
СОП № 01-01
Составление и редактирование СОП (Кучук Т.Э.).........................................................................
СОП № 01-02
Помещения и инфраструктура, безопасность (Касымбекова К.Т.)...............................................
СОП № 01-03
Управление персоналом лаборатории (Кучук Т.Э.)........................................................................
СОП № 01-04
Управление оборудованием (Момушева К.)...................................................................................
СОП № 01-05
Управление документами (Нупбаева Ж. Б.)....................................................................................
СОП № 01-06
Порядок проведения контрольных мероприятий по обеспечению качества результатов испытаний (Кучук Т.Э.).............................................................................................................................
Раздел 02 Преаналитика.................................................................................................................................................
СОП № 02-01
Правила взятия крови из вены с помощью вакуумной системы для проведения исследований
на ВИЧ методом иммуноферментного ...........................................................................................
СОП № 02-02
Правила взятия крови у новорождённых и детей из вены для проведения исследований на
ВИЧ методом иммуноферментного анализа (ИФА) (Кучук Т.Э.).................................................
СОП № 02-03
Правила взятия крови из вены с помощью шприца для проведения исследований на ВИЧ
методом иммуноферментного анализа (ИФА) (Кучук Т.Э.)..........................................................
СОП № 02-04
Правила транспортировки и передачи образцов крови в лабораторию (Кучук Т.Э.).................
СОП № 02-05
Правила приёма, регистрации образцов крови в лабораторию для исследования методом
ИФА. (Кучук Т.Э.)..............................................................................................................................
СОП № 02-06
Правила центрифугирования для выделения сыворотки из крови (Кучук Т.Э.).........................
СОП № 02-07
Правила взятия образцов венозной крови на маркеры СД4/СД8 (Момушева К.Т.)....................
СОП № 02-08
Правила упаковки и транспортировки образцов крови в лабораторию для исследования иммунного статуса методом проточной цитометрии (Момушева К.Т.)............................................
СОП № 02-09
Правила приема и регистрации образцов крови для проведения исследований методом проточной цитометрии СД4/СД8 (Момушева КТ.)...............................................................................
СОП № 02-10
Упаковка, хранение, подготовка и транспортировка крови при первично положительных результатах экспресс-тестирования (Нупбаева Ж. Б.).......................................................................
СОП № 02-11
Забор образцов сухой капли капиллярной крови (СККК) для ранней диагностики ВИЧ у детей больше 10 месяцев (Касымбекова К.Т.)....................................................................................
СОП № 02-12
Сушка, хранение (до отправки в лабораторию), упаковка и транспортировка образцов сухой
капли капиллярной крови в лабораторию (Касымбекова К.Т.).....................................................
СОП № 02-13
Правила подготовки к отправке цельной крови в лабораторию для исследования на ВИЧ методом полимеразно-цепной реакции (Касымбекова К.Т.).............................................................
СОП № 02-14
Правила упаковки цельной крови и транспортировке в лабораторию для исследования на
ВИЧ методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) (Касымбекова К.Т.)....................................
Раздел 03 Иммуноферментный анализ (Кучук Т.Э.)...............................................................................................
СОП № 03-01
Правила приёма, хранения и движения ИФА-тест-систем...........................................................
СОП № 03-02
Правила термометрии помещений, холодильников, морозильных камер...................................
СОП № 03-03
Правила проведения исследований и учёта результатов методом иммуноферментного анализа..........................................................................................................................................................
СОП № 03-04
Правила ухода за автоматическими дозаторами «HOSPITEX DIAGNOSTIK» .........................
СОП № 03-05
СОП: Правила эксплуатации вортекса «Vortex Mixers модель M37600».....................................
СОП № 03-06
Правила внутренней калибровки дозаторов...................................................................................
Стр.
СОДЕРЖАНИЕ
СОП № 03-07
Правила эксплуатации вошера Well wash AC.................................................................................
СОП № 03-08
Правила эксплуатации ридера «Multiskan FC»...............................................................................
СОП № 03-09
Правила эксплуатации весов электронных/аналитических..........................................................
СОП № 03-10
Правила эксплуатации температурного шкафа Venticel 111..........................................................
СОП № 03-11
Правила программирования и эксплуатации автоклава................................................................
СОП № 03-12
СОП: Правила эксплуатации очистителя воды «TERMO scientiric»............................................
Раздел 04 Экспресс-тестирование (Нупбаева Ж. Б.)..............................................................................................
СОП № 04-01
Журнал регистрации экспресс-тестирования.................................................................................
СОП № 04-02
Хранение экспресс-тестов и расходных материалов.....................................................................
СОП № 04-03
Экспресс-тестирование по капиллярной крови с применением тестов
«FIRST RESPONSE».........................................................................................................................
СОП № 04-04
Экспресс-тестирование по сыворотке с применением тестов FIRST RESPONSE.....................
СОП № 04-05
Экспресс-тестирование по крови с применением тестов «ДETERMINHIV½ Ag».....................
СОП № 04-06
Экспресс-тестирование с применением тестов «ДETERMIN HIV½ Ag» по сыворотке крови
СОП № 04-07
Экспресс-тестирование по слюне с применением экспресс-тестов
«ОraQuick HIV RapidTest»...............................................................................................................
Подраздел 04-1 Инструкции по экспресс-тестированию (Нупбаева Ж. Б.)
И. № 04/1- 01
Экспресс-тестирование с применением тестов «ДETERMIN HIV½ Ag»
И. № 04/1- 02
Экспресс-тестирование по слюне с применением быстрых тестов «Оra Quick HIV Rapid
Test»....................................................................................................................................................
Раздел 05
Иммунный блотинг (Нупбаева Ж. Б.)................................................................................................
СОП № 05-01
Правила проведения исследования методом Иммунного блотинга (ИБ) на приборе производства «ТЕСАN»....................................................................................................................................
СОП № 05-02
Автоматическая промывка каналов прибора Иммунного блота “Теk
an”……………………………………………………………………….
СОП № 05-03
Обеспечение качества тест-систем на этапе приема и хранения на складе................................
Раздел 06
Проточная цитометрия (Момушева К.Т.)...........................................................................................
СОП № 06-01
Правила эксплуатации цитофлюориметра «Cytomics FC 500» Beckman Coulter........................
СОП № 06-02
Промывка цитофлюориметра «Cytomics FC 500»..........................................................................
СОП № 06-03
Методика определения клеток СД4/СД8 на проточном цитофлюориметре Cytomics FC 500»
Beckman Coulter.................................................................................................................................
СОП № 06-04
Правила эксплуатации, ремонт и транспортировка цитофлюориметра «CyFlow® Counter»
Partec».................................................................................................................................................
СОП № 06-05
Правила промывки проточного цитометра «CyFlow® Counter» Partec.......................................
СОП № 06-06
Определение количества клеток СД4 на проточном цитофлюориметре «CyFlow®
Counter»Partec ...................................................................................................................................
СОП № 06-07
Регистрация полученных результатов в журнал, передача информации в диспансерный
отдел....................................................................................................................................................
Стр.
СОДЕРЖАНИЕ
Раздел 07
Полимеразно-цепная реакция (Касымбекова К.Т.)...........................................................................
СОП № 07-01
Требования к лабораторному оборудованию ПЦР лаборатории..................................................
СОП № 07-02
Приём и хранение ПЦР тест-систем................................................................................................
СОП № 07-03
Выявление провирусной ДНК вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-1) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией в режиме «реального времени».....................................................................................
СОП № 07-04
Количественного определения РНК вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-1) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме «реального времени».......................................................................................................................................................
СОП № 07-05
Программирование, учет результатов, правила эксплуатации амплификатора «Rotor-Gene»
3000/6000............................................................................................................................................
СОП № 07-06
Экстракция ДНК из СККК при использовании комплекта реагентов «РИБО-преп».................
Раздел 08 Контроль качества.......................................................................................................................................
СОП № 08-01
Правила проведения внутрилабораторного контроля качества при тестировании на ВИЧ и
вирусные гепатиты методом иммуноферментного анализа (ИФА) (Кучук Т.Э.)........................
СОП № 08-02
Правила проведения внутрилабораторного контроля качества при тестировании на ВИЧ и
вирусные гепатиты с помощью компьютерной программы (Кучук Т.Э.)....................................
СОП № 08-03
Применение контрольных правил WESTGARD и порядок выявления лабораторных ошибок
(Кучук Т.Э.)........................................................................................................................................
СОП № 08-04
Проверка настройки проточного цитофлюорометра «Cytomics FC500» Beckman-Coulter (Момушева К.Т.).......................................................................................................................................
СОП № 08-05
Проверка настройки проточного цитофлюорометра «CyFlow® Counter» Partec (Момушева
К.Т.).......................................................................................................................................................
СОП № 08-06
Разработка внутрилабораторного стандарта для ПЦР исследований (Касымбекова К.Т.)........
СОП № 08-07
Контроль контаминации помещений ПЦР (Касымбекова К.Т.)....................................................
Раздел 09 Безопасность в лаборатории......................................................................................................................
СОП № 09-01
Требования к обработке помещений ПЦР (Касымбекова К.Т.).....................................................
СОП № 09-02
Мероприятия при аварийной ситуации (Касымбекова К.Т.).........................................................
СОП № 09-03
Правила использования, обработки средств индивидуальной защиты (СИЗ) при работе в
ПЦР лаборатории с ВИЧ инфицированным материалом (Касымбекова К.Т.)............................
СОП № 09-04
Обработка ламинарного бокса и правила эксплуатации (Касымбекова К.Т.)..............................
СОП № 09-05
Правила текущей и заключительной уборки помещений ПЦР лаборатории (Касымбекова
К.Т.).....................................................................................................................................................
СОП № 09-06
Правила противопожарной техники безопасности при работе в лаборатории (Касымбекова
К.Т.).....................................................................................................................................................
СОП № 09-07
Правила биобезопасности при работе в лаборатории диагностики ВИЧ (Касымбекова К.Т.)..
СОП № 09-08
Утилизация медицинских отходов Класс Б (Касымбекова К.Т.)..................................................
СОП № 09-09
Правила приготовления дезинфицирующих растворов (Кучук Т.Э.)...........................................
СОП № 09-10
Правила уборки помещений ИФА-лаборатории (Кучук Т.Э.).......................................................
СОП № 09-11
Правила обеззараживания жидких и твёрдых отходов (Кучук Т.Э.)............................................
Стр.
6
АИВ - ИНФЕКЦИЯСЫН ЛАБОРАТОРИЯЛЫК АНЫКТОО БОЮНЧА СТАНДАРТТЫК
ОПЕРАЦИЯЛАР ПРОЦЕДУРАСЫНЫН ЖЫЙНАГЫ
ВВЕДЕНИЕ
7
ВВЕДЕНИЕ
В соответствии с требованиями международных стандартов и принципов1 все процессы в
лаборатории должны быть стандартизированы. Стандартизация условий выполнения процедур на
всех этапах лабораторного процесса повышает надёжность проводимых исследований, обеспечивает
достоверность получаемых результатов и способствует управлению качеством в лаборатории.
Стандартные операционные процедуры (СОП) являются неотъемлемой частью стандартизации и
позволяют пошагово, в логическом порядке и хронологической последовательности выполнять все
необходимые действия, а также гарантировать их воспроизведение повторно.
Данный сборник включает типовые СОП по всем применяемым в лабораториях республики методам
диагностики ВИЧ/СПИД: иммуноферментному анализу, экспресс-тестированию, иммунному блотингу,
проточной цитометрии, полимеразной цепной реакции. Сборник включает разделы, посвящённые
вопросам управления основными процессами для обеспечения их качества (персоналом, оборудованием,
документами и записями, контролю качества), обеспечения стандартных условий проведения
долабораторного (преаналитического) и лабораторного (аналитического) этапов в зависимости от
используемого метода исследования, правилам проведения внутрилабораторного контроля качества и
безопасной лабораторной практики.
Следует отметить, что сборник стандартных операционных процедур разработан для референслаборатории Республиканского центра СПИД Кыргызстана и может быть принят за основу другими
лабораториями при создании собственных СОП. При создании и внедрении СОП лабораториям следует
учитывать два основных условия: 1) необходимо соблюдать единый принцип оформления разделов СОП
в соответствии с требованиями, сформулированными в ISO 15189 и представленными в СОП № 01-01
данного документа; и 2) необходимо обучить сотрудников лаборатории работать с СОП.
1
ISO 9000 «Системы менеджмента качества. Основные положения и словарь»; 9001 «Системы менеджмента качества.
Требования»; ISO 15189 «Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности».
8
АИВ - ИНФЕКЦИЯСЫН ЛАБОРАТОРИЯЛЫК АНЫКТОО БОЮНЧА СТАНДАРТТЫК
ОПЕРАЦИЯЛАР ПРОЦЕДУРАСЫНЫН ЖЫЙНАГЫ
РАЗДЕЛ 01
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Раздел: Общий
ОБЩИЙ
9
СОП № 01-01
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: СОСТАВЛЕНИЕ И РЕДАКТИРОВАНИЕ СОП
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
НАЗНАЧЕНИЕ
1. Стандартная операционная процедура (далее - СОП) является неотъемлемой частью системы
обеспечения качества лабораторий диагностики ВИЧ/СПИД и помогает понять ее структуру.
2. СОП снижает риск ошибок, возникающих при устной передаче информации.
3. СОП гарантирует, что: персонал детально инструктирован; каждая процедура выполняется в
логическом порядке и может быть воспроизведена повторно.
1.
2.
3.
4.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Все СОП должны быть составлены по одной стандартной форме.
Все СОП в лаборатории составляются на языке, используемом в лаборатории (кыргызском и
русском).
Собственный перевод терминов должен сопровождаться термином на первоначальном языке,
заключенным в круглые скобки.
При использовании аббревиатур и сокращений необходимо давать их расшифровку.
Например: Стандартная Операционная Процедура (СОП)
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Укажите должности всех, кто выполняет данную процедуру.
Например:
• Заведующий лабораторией
• Врач-лаборант
• Лаборант
ИНСТРУКЦИИ
1. Каждый сотрудник может составить черновой вариант СОП по своему разделу работы.
2. В СОП должны войти следующие главы:
НАЗВАНИЕ СОП
10
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ (Ф.И.О., ДОЛЖНОСТЬ)
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
НАЗНАЧЕНИЕ
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
МАТЕРИАЛЫ
ОБОРУДОВАНИЕ
ИНСТРУМЕНТЫ
РЕАКТИВЫ
ИНСТРУКЦИИ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ИЗМЕНЕНИЕ
ПРИЛОЖЕНИЕ
Если речь идет не о проведении испытаний и техническом обслуживании инструментов и
оборудования, главы «МАТЕРИАЛЫ», «ОБОРУДОВАНИЕ», «ИНСТРУМЕНТЫ» и «РЕАКТИВЫ»
могут быть пропущены. В таблице «РАЗРАБОТЧИКИ» укажите, кто подготовил СОП, кто проверил СОП, кто утвердил
СОП.
В разделе «СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ» расшифруйте все сокращения и аббревиатуры, используемые
в документе.
В главе «НАЗНАЧЕНИЕ» укажите, для чего нужна данная процедура.
В главе «ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ» укажите, какие имеются требования к соблюдению мер
безопасности, формату составляемого документа, требуется ли ассистент и т.д.
В главе «ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА» укажите должности всех, кто выполняет данную процедуру.
В главе «МАТЕРИАЛЫ» перечислите все необходимые для данной процедуры материалы:
наконечники, пробирки, посуда, штатив, маркёр и т.д.
В главе «ОБОРУДОВАНИЕ» перечислите все необходимое вспомогательное оборудование
(термостат, вошер, холодильник, дистиллятор, автоклав и т.д.). Если оборудование не требуется,
данный пункт пропускается.
В главе «ИНСТРУМЕНТЫ» перечислите все необходимое для процедуры измерительное
оборудование (ридер, автоматический дозатор, термометр и т.д.). Если измерительное оборудование
не требуется, данный пункт пропускается.
В главе «РЕАКТИВЫ» перечислите тест-системы, консерванты, матричные растворы и так далее.
В главе «ИНСТРУКЦИИ»:
–– Опишите каждый шаг процедуры в хронологическом порядке.
–– Перечислите все действия в порядке, в котором они следуют, и пронумеруйте их от 1 и до конца.
–– Описывайте каждый шаг детально, простыми предложениями.
–– Если на каком-то из этапов требуется помощь определенного лица, укажите его должность в
круглых скобках (рядом со строчкой).
–– Перечитайте СОП и определите, все ли этапы процедуры указаны от начала и до конца.
–– Если какой-то этап связан с другой процедурой, дайте ссылку на соответствующий СОП.
–– Если процедура требует ведения каких-либо записей, разработайте соответствующую форму.
–– Составляйте форму так, чтобы она заставляла оставлять на бумаге всю необходимую информацию.
–– Приложите разработанную форму в главе «ПРИЛОЖЕНИЕ».
РАЗДЕЛ 01
ОБЩИЙ
11
14. Направьте СОП Ответственному по качеству.
Действия лиц, ответственных за написание, проверку и утверждение СОП
15. Ответственный по качеству: Прочитайте СОП, оцените его приемлемость и применимость.
16. Если необходимо, внесите исправления ручкой и верните его составителю для комментариев.
17. Составителю: Верните СОП с Вашими комментариями по поводу исправлений ответственному по
качеству.
18. Ответственный по качеству: Подпишите СОП, если удовлетворены его содержанием.
19. Направьте СОП заведующему лабораторией на утверждение.
20. Заведующий: Подпишите СОП, если согласны с его содержанием.
21. Верните СОП Ответственному по качеству.
22. Ответственный по качеству: На утверждённый СОП вложите в папку «СОП оригиналы».
–– На каждой странице СОП в первом столбце слева верхнего формата укажите название организации
(например, РЦ СПИД) и лаборатории (например, Референс-лаборатория диагностики ВИЧ/
СПИД).
–– Во втором столбце таблицы напишите «Сборник стандартных операционных процедур по
лабораторной диагностике ВИЧ/СПИД» и укажите, к какому разделу относится СОП. Например:
Раздел ИФА.
–– В третий столбец таблицы внесите следующую информацию:
• «СОП №» для идентификации документа по его индивидуальному номеру. Первые буквы (СОП)
являются буквенным индексом документа, первые две цифры (00) – раздел документа (см.
Приложение 1) в общем списке СОП лаборатории и последние две цифры (00) – индивидуальный
номер процедуры.
• «Издание №» для указания номера редакции СОП.
• Статус документа: Оригинал или Копия. Каждая копия является контролируемой и должна иметь
индивидуальный номер.
• «Дата выпуска» для указания даты месяца и года утверждения СОП руководителем лаборатории.
• «Дата пересмотра» для указания запланированной даты месяца и года ревизии документа.
–– В четвёртый столбец таблицы внесите ответы, соответствующие графам третьего столбца.
Например:
СОП 01-01
23.
24.
25.
26.
27.
Издание
№1
Статус документа
Копия № 1
Дата выпуска
15.05.2014
Дата пересмотра
15.05.2015
–– На каждой странице СОП слева нижнего формата укажите название СОП, а справа укажите
номер текущей страницы из числа общих страниц документа.
В разделе «РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ» укажите документы, являющиеся источником для
написания СОП.
Во избежание пользования устаревшими СОП строго контролируйте их выдачу и изъятие и ведите
соответствующие записи в главе «ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ».
Заполните таблицу с указанием фамилий сотрудников, кому будет выдана СОП.
Сделайте необходимое число копий СОП и прономеруйте каждую копию индивидуальным номером.
На оригинале номер не ставится.
Контроль устанавливается только над официальными копиями. Копии без номера считаются
неофициальными и не контролируются.
12
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
28. Сотрудник, получивший копию СОП, должен расписаться и поставить дату в таблице ВЫДАЧА И
ИЗЬЯТИЕ в соответствующей графе оригинала СОП.
29. В случае внесения в СОП изменений устаревшие СОП должны быть изъяты у сотрудников в момент
выдачи обновлённых СОП.
30. Сотрудник, вернувший устаревший СОП, должен расписаться и поставить дату на оригинале СОП
в соответствующей графе таблицы.
31. На каждой странице оригинала устаревшего СОП напишите ручкой «Архив» и вложите в папку
«Архив СОП».
32. Уничтожьте все изъятые устаревшие копии СОП.
33. Все вносимые изменения регистрируются в главе «ИЗМЕНЕНИЯ» с указанием даты и причины
изменения СОП.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
ИЗЪЯТО (у кого)
Дата
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Порядок идентификации разделов СОП в референс-лаборатории диагностики ВИЧ/СПД:
№ раздела СОП
Наименование раздела СОП
01
Общий
02
Преаналитика
03
Иммуноферментный анализ
04
Экспресс-тестирование
04/1
Инструкции
05
Иммунный блотинг
06
Проточная цитометрия
07
Полимеразная цепная реакция
08
Контроль качества
09
Безопасность в лаборатории
РАЗДЕЛ 01
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Общий
ОБЩИЙ
13
СОП № 01-02
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: ПОМЕЩЕНИЯ И ИНФРАСТРУКТУРА, БЕЗОПАСНОСТЬ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ФИО – фамилия, имя, отчество
ПБА - патогенный биологический агент
ППКР - постановление правительства Кыргызской Республики
НАЗНАЧЕНИЕ
СОП описывает требования к планировке и отделке помещений лаборатории для обеспечения
качества, безопасности работы и защиты окружающей среды.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Соответствовать требованиям правил обеспечения безопасности работы с микроорганизмами I-II
групп патогенности (опасности) приказ МЗ КР № 104 от 15.03.2011г.
1.
2.
3.
4.
5.
1.
2.
3.
4.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Руководитель учреждения
Заведующий лабораторией
Ответственный по качеству
Врач-лаборант
Лаборант
ИНСТРУКЦИИ
Лаборатории, работающие с ПБА, размещаются в отдельно стоящем здании или в изолированной
части здания. Площадь и набор помещений лаборатории должны соответствовать утвержденным
нормативным документам.
Убедитесь в обеспечении лаборатории необходимым набором рабочих и вспомогательных
помещений в соответствии с номенклатурой выполняемых исследований.
Убедитесь в наличии и исправности соответствующих инженерных коммуникаций
(электроснабжение, водоснабжение и канализация, вентиляция, освещённость).
При наличии несоответствий информируйте руководство лаборатории и организации.
14
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
5. Организуйте для различных видов исследования отдельные помещения или рабочие зоны (например:
для приема и первичной обработки проб, для пробоподготовки, для проведения ИФА-исследований
и т.д.).
6. Разделите помещения на «заразную» и «чистую» зоны, которые обеспечивают поточность
продвижения ПБА.
В «чистой» зоне лабораторий расположите:
–– гардероб для верхней одежды;
–– помещение с холодильной камерой или холодильниками для хранения диагностических
препаратов;
–– комнаты для работы с документами и литературой;
–– комната отдыха;
–– кабинет заведующего;
–– кабинет персонала;
–– подсобные помещения;
–– туалет.
В «заразной» зоне:
–– комнаты приёма, сортировки и регистрации поступивших проб;
–– комнаты для проведения лабораторных исследований (в том числе серологических, молекулярногенетических, иммунологических, биохимических, общеклинических и т.п);
–– моечная;
–– автоклавная для обеззараживания материала;
7. Стены и потолки покрасьте моющейся глянцевой краской или материалом, который легко чистится
и дезинфицируется. Пол должен легко поддаваться чистке и дезинфекции, места соединения стен и
пола должны быть закругленными.
8. Проследите, чтобы поверхность пола, стен, потолка в лабораторных помещениях «заразной» зоны
была гладкой, без щелей, устойчивой к действию моющих и дезинфицирующих средств, полы не
скользкие. В помещениях «заразной» зоны выступающие и проходящие трубы (батареи отопления)
расположите на расстоянии от стен с целью возможности проведения их дезинфекции, места ввода
инженерных коммуникаций герметизируют.
9. Установите лабораторную мебель и рабочие столы, поверхность которых должна быть из прочного
материала, устойчивого к многократному воздействию моющих и дезинфицирующих средств.
10. Окна и двери помещений «заразной» зоны лаборатории должны быть плотно закрывающимися,
герметичными.
11. Боксы, предбоксники, рабочие комнаты должны обеззараживаться ультрафиолетовыми
облучателями, которые размещаются на высоте 1,8-2 м от пола.
12. Не должно быть физических препятствий для доступа в лабораторию, дверной проем комнаты
и лифта должен быть достаточным, чтобы не было проблем при доставке и обслуживании
новых аппаратов и оборудования. Ширина проходов к рабочим местам или между двумя рядами
выступающего оборудования должна быть не менее 1,5 метров.
13. Для защиты рабочих столов от попадания прямого солнечного света должны использоваться
светозащитные пленки.
14. Обеспечьте бесперебойное питание для чувствительного оборудования на случай отключения
подачи электричества в лабораторию аварийным генератором.
15. Из помещений «заразной» зоны не допускайте слив (сток) необеззараженных жидкостей в
канализационную сеть.
РАЗДЕЛ 01
ОБЩИЙ
15
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Практическое руководство по биологической безопасности в лабораторных условиях (третье
издание, Женева, 2004 г).
2. Приказ МЗ КР №104 от 15.03.2011 г. «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп
патогенности».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
16
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Общий
СОП № 01-03
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: УПРАВЛЕНИЕ ПЕРСОНАЛОМ ЛАБОРАТОРИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СПИД – синдром приобретенного иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
РЛ – референс-лаборатория диагностики ВИЧ/СПИД
СИ – средства измерения
НАЗНАЧЕНИЕ
Настоящая процедура устанавливает требования в отношении персонала референс-лаборатории
РЦ СПИД и обеспечения соответствующего уровня компетентности специалистов по всем рабочим
процедурам.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. В референс-лаборатории (РЛ) должна быть обеспечена свобода руководства и сотрудников от любого
внутреннего и внешнего влияния, которое может оказать отрицательное действие на качество их
работы.
2. Организационная структура РЛ, административная подчинённость и система оплаты труда
сотрудников должны исключать возможность оказания финансового или какого-либо другого
давления на его персонал, способного повлиять на результаты проводимых исследований, а также
позволять обеспечить защиту конфиденциальности информации, включая процедуры передач
результатов исследований.
3. РЛ не должны заниматься деятельностью, способной подорвать доверие в отношении её
компетентности, независимости в принятии решений и беспристрастности при проведении
исследований.
1.
2.
3.
4.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Генеральный директор
Инспектор по кадрам
Заведующий референс-лабораторией
Ответственный специалист по качеству
ИНСТРУКЦИЯ
1. Общие положения
1.1 Специфические задачи поручайте персоналу с учётом соответствующего образования,
подготовки, опыта и проявляемого мастерства.
РАЗДЕЛ 01
ОБЩИЙ
17
1.2 Не пользуйтесь в РЛ услугами стороннего персонала для выполнения основных функций.
1.3 В РЛ разработайте карты процесса с описанием текущих проводимых работ для
руководящего, технического и вспомогательного персонала, участвующего в проведении
исследований, обозначенные в Должностных инструкциях.
1.4 В должностных инструкциях отразите все необходимые навыки.
1.5 Передайте должностные инструкции инспектору по кадрам республиканского центра СПИД
и заведующему РЛ.
2. Приём на работу
2.1 Основанием для приёма работника на работу является его заявление на имя Генерального
директора РЦ СПИД с предоставлением необходимых для приёма документов.
2.2 При приёме сотрудника на работу вопрос о его компетентности решает заведующий РЛ на
основании собеседования, данных о предыдущем профессиональном опыте и обучении.
2.3 Принимайте специалистов на работу с условием испытательного срока на 1-3 месяца
для проверки знаний, компетентности, умения и работоспособности, обеспечивающих
достаточный уровень его готовности для выполнения своих должностных обязанностей с
учётом установленных требований данной СОП.
2.4 Окончательное решение о продолжении работы в РЛ согласуйте с заведующим РЛ.
2.5 После окончания испытательного срока, при положительных результатах проверки, на
основании заключения заведующего лабораторией зачислите сотрудника в штат.
2.6 Все данные об обучении, полученном на предыдущем месте работы, занесите в личные дела
сотрудников.
2.7 С каждым вновь поступившим в РЛ проведите общий инструктаж и инструктаж по технике
безопасности.
2.8 Инструктаж проводится лицом, уполномоченным заведующим РЛ.
3. Выполнение должностных обязанностей
3.1 Весь персонал РЛ обеспечивает выполнение основных своих функций в пределах
компетенции, установленной Положением о РЛ и утверждёнными должностными
инструкциями, в которых указываются ответственность, права и обязанности сотрудников.
3.2 Должностные инструкции, разработанные в РЛ для руководящего и технического персонала,
определяют профессиональную квалификацию, подготовку, опыт, обязанности по
руководству, планированию, проведению исследований, оценке результатов.
3.3 Ознакомьте всех сотрудников со своими должностными инструкциями под роспись.
3.4 Распределяйте работу в лаборатории в соответствии с функциональными обязанностями в
РЛ, в зависимости от квалификации персонала (допуск к работам).
3.5 В РЛ имейте сведения на сотрудников, которые уполномочены проводить конкретные виды
исследований, составлять отчёты об исследованиях, управлять конкретным оборудованием.
3.6 Следите за тем, чтобы сотрудники РЛ осуществляли работу на основании должностных
инструкций, за объёмом и сроками выполнения по каждому виду работы.
3.7 Проводите постоянный надзор за работой персонала, включая стажеров.
3.8 По распоряжению заведующего РЛ назначьте лицо, ответственное за подготовку вновь
принятого сотрудника.
3.9 Контролируйте регулярно работу исполнителей, проводящих исследования.
3.10 За нарушение правил внутреннего распорядка, нарушение технологического процесса
при проведении исследований, необъективность, неточность проводимых исследований,
разглашение конфиденциальной информации и т.п. применяйте к работнику
административные меры вплоть до увольнения его с работы.
18
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
3.11 Инспектор по кадрам ведёт записи о полномочиях, компетенции, обучении, мастерстве
и опыте всего технического персонала, с указанием даты подтверждения полномочий и
компетенции.
3.12 Ведите записи в личных карточках (Приложение 1) на каждого сотрудника о полномочиях,
компетенции, обучении, мастерстве и опыте всего технического персонала, с указанием даты
подтверждения полномочий и компетенции. Эта информация доступна персоналу РЛ только
при наличии письменного разрешения заведующего РЛ.
4. Аттестация персонала
4.1 Квалификацию сотрудников лаборатории оценивает аттестационная комиссия, назначаемая 1
раз в 3 года приказом Генерального директора РЦ СПИД.
4.2 В состав аттестационной комиссии входят лица, компетентные в вопросах
профессиональных обязанностей аттестуемого.
4.3 Порядок аттестации устанавливает Генеральный директор РЦ СПИД.
4.4 Лицо, не прошедшее аттестацию, может быть представлено на повторную аттестацию не
ранее, чем через 6 месяцев.
4.5 Оцените деятельность работника, прошедшего аттестацию. Рекомендации аттестационной
комиссии занесите в протокол заседания комиссии и аттестационный лист.
4.6 Заключение аттестационной комиссии является основанием для продолжения или
расторжения трудового соглашения с сотрудником.
5. Обучение персонала
5.1 Руководство РЦ СПИД обязуется обеспечить компетентность персонала, работающего со
специальным оборудованием и средствами измерения (СИ), проводящего исследования,
оценивающего результаты и выдающего отчёты об исследованиях.
5.2 Целью процесса обучения персонала является обеспечение его навыками и знаниями,
необходимыми для выполнения своих должностных обязанностей. Подготовка кадров и
политика обучения персонала должны быть ориентированы на развитие технологии и на
стремление непрерывного усовершенствования навыков.
5.3 Персонал, ответственный за составление отчётов об исследованиях должен обладать:
–– соответствующей квалификацией, подготовкой, опытом;
–– знаниями по технологии исследований;
–– пониманием возможных причин появления несоответствий и их значимости;
–– знаниями и навыками для усовершенствования процессов, способствующих получению
объективных результатов;
− знанием основных требований законов, стандартов.
5.4 Выявление потребности в подготовке персонала происходит при изменении технологии
процесса исследований, контроле квалифицированных специалистов за деятельностью
персонала, при аудите и при проведении внутри лабораторного контроля качества
результатов исследований.
5.5 Для обеспечения компетентности персонала РЛ вновь принимаемого сотрудника и
систематического повышения квалификации составьте ежегодный план обучения
сотрудников и утвердите у заведующей РЛ (Приложение 2).
5.6 Регулярно повышайте квалификацию сотрудников обучением на рабочем месте (внутреннее
обучение) и путём обучения в сторонних организациях.
5.7 В случае изменения процедур выполняемых работ обучите стажёров на рабочем месте.
5.8 Лица, проходящие внутреннее обучение по выполнению отдельных видов исследований или
применению конкретного оборудования, выполняют соответствующие исследования или
работают на оборудовании только под наблюдением своего наставника.
РАЗДЕЛ 01
ОБЩИЙ
19
5.9 Ответственность за проведение обучения на рабочем месте несёт заведующий РЛ или лицо,
ответственное за качество.
5.10 После проведения обучения составьте по теме проводимого обучения лист-опросник и
протестируйте стажера.
5.11 Периодически (один раз в 6 месяцев) проводите оценку навыков персонала, чтобы
гарантировать, что персонал имеет и поддерживает необходимую профессиональную
квалификацию и навыки в РЛ по результатам правильности и воспроизводимости
проводимых исследований с помощью контрольных образцов.
5.12 Ведите журнал проведения внутреннего обучения персонала РЛ (Приложение 4).
5.13 Требуйте от сотрудника, прошедшего процедуру повышения квалификации в сторонних
организациях, отчитаться перед руководством и предоставить копии документов о
повышении квалификации в отдел кадров для внесения этой информации в личное дело и в
личную карточку.
5.14 Следите за полноту и точностью информации по повышению квалификации сотрудников.
5.15 Регулярно пополняйте карточки сотрудников информацией, которая служат основанием
для допуска персонала к работе с использованием конкретного оборудования или допуска к
выполнению конкретных исследований.
5.16 Общую ответственность за проведение повышения квалификации сотрудников в сторонних
организациях несёт Генеральный директор РЦ СПИД
5.17 Данные о сотрудниках внесите в информационный лист в Паспорте лаборатории.
6. Оценка компетентности
6.1 Регулярно 1 раз в 2 года проводите оценку компетенции сотрудников в соответствии с
задачами, обозначенными в его должностных инструкциях.
6.2 Ответственность за проведение оценки возложите на того сотрудника, кто уже
продемонстрировал компетенцию в оцениваемой области заведующим РЛ.
6.3 Проведите оценку компетенции прямым наблюдением, проверьте протоколы, журналы,
проанализируйте контрольные карты, результаты внешней оценки качества:
–– Прямое наблюдение помогает выявить и предупредить разные проблемы в работе.
–– Наблюдают за техникой работы сотрудника во время процесса исследования, что
позволяет наблюдающему определить, насколько сотрудник следует СОП.
–– Во избежание субъективности при оценке компетенции наблюдающий использует
специально разработанный контрольный список (Приложение 3).
–– Контрольный список используют для оценки конкретных, поддающихся наблюдению
пунктов, действий или признаков.
–– Проверка записей, например, просмотр протоколов и журналов, заполненных
сотрудником.
–– Просмотр и анализ записей контролей качества и результатов проверки компетентности,
выполненной оцениваемым сотрудником.
–– Результаты повторных исследований или перепроверки сравниваются с результатами,
полученными сотрудниками; несоответствия должны быть разрешены.
6.4 Анализируйте и оформите результаты оценки.
6.5 Заранее свяжитесь с сотрудником и согласуйте время, когда будет проводиться оценка.
6.6 Проводите оценку в то время, когда сотрудник выполняет свои рабочие задачи, используя
обычные пробы.
6.7 Результаты занесите в формуляр и сообщите сотруднику.
6.8 При необходимости разработайте рекомендации в письменном виде, и заведующий должен
убедиться, что эти рекомендации сотруднику понятны.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
20
6.9 При неудовлетворительных результатах попросите сотрудника пройти повторную оценку в
указанные сроки.
7. Критерии оценки персонала.
7.1 Критерий компетенции:
7.1.1 Компетентен – когда работа выполняется без ошибок (или с незначительными
погрешностями, которые исправляются самостоятельно), аккуратно и тщательно.
Постоянно очень высокий уровень аккуратности и точности, не требуется
дополнительная проверка, можно полностью положиться на его работу, может
выполнять работу практически без помощи руководителя. Работа выполняется в
запланированном объёме.
7.1.2 Частично компетентен - когда работа частично принимается: работа выполняется
небрежно, встречаются ошибки, иногда приходится проверять его работу. Нуждается в
помощи со стороны наставника. Работа выполняется в неполном объёме.
7.1.3 Некомпетентен - когда работа не принимается: низкое качество работы, постоянные
ошибки, требуются постоянные проверки и исправления, работает медленно, рабочий
процесс организован нерационально, не справляется с запланированной работой.
7.2 Окончательное заключение о допуске сотрудника к работе даёт Заведующий РЛ.
7.3 Результаты оценки компетенции хранятся конфиденциально у ответственного по качеству
или уполномоченного лица.
Таблица 1.
Ответственность сотрудников РЦ СПИД за компетентность персонала РЛ
№
п/п
Проводимые работы
Ответственность
Повышение квалификации сотрудников в сторонних
организациях
Генеральный директор РЦ СПИД
Заведующий РЛ
План по проведению обучению
Ответственный по качеству
Заведующий РЛ
Подготовка вновь принятых сотрудников.
Ответственный по качеству
Контроль за работой исполнителей, проводящих
исследования
Ответственный по качеству или уполномоченный
сотрудник
Оформление личных карточек на сотрудников
Инспектор отдела кадров
Подготовка контрольных списков
Уполномоченный сотрудник
Заведующий РЛ
Оценка компетенции
Ответственный по качеству
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
РАЗДЕЛ 01
ОБЩИЙ
21
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
1.
2.
3.
4.
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
ГОСТ ИСО/МЭК 15 189 «Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и
компетентности».
ИСО 9001:2001 Системы менеджмента качества.
Требования ИСО 9004-2001 «Системы менеджмента качества. Рекомендации по улучшению
деятельности».
ИСО 9000:2001 Системы менеджмента качества. Основные положения и словарь.
Приложение 1.
ФОРМА ЛИЧНОЙ КАРТОЧКИ СОТРУДНИКА РЕФЕРЕНС-ЛАБОРАТОРИИ
ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
1. Фамилия, имя, отчество
2. Дата рождения
3. Место рождения (день, месяц, год)
5. Знание иностранного языка
6. Образование (полное среднее, начальное
профессиональное, среднее профессиональное, высшее
профессиональное)
–– Наименование образовательного учреждения, год
окончания
–– Квалификация по документу об образовании
7. Учёная степень
–– Документ об образовании, о квалификации или
наличии специальных знаний (наименование, серия,
номер)
8. Стаж работы (общий)
9. Паспорт (№, дата выдачи, название органа, выдавшего
паспорт)
АТТЕСТАЦИЯ
Дата аттеста­
ции
Решение комиссии
1
2
Доку­мент (прото­кол)
номер
дата
3
4
Основание
5
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
22
ПОВЫШЕНИЕ КВАЛИФИКАЦИИ (ПРОФЕССИОНАЛЬНАЯ ПЕРЕПОДГОТОВКА)
Дата
начала
обуче­ния
оконча­
ния
обуче­ния
1
2
Вид повы­
шения квали­
фика­ции
Документ
Наиме­нование образо­
(удосто­
в
ерение,
свиде­тельство)
ватель­ного учреж­
Примечание
дения, место его нахож­
наиме­
серия,
дата
дения
нование
номер
3
4
5
6
7
8
ЗАПИСИ ПО ОБУЧЕНИЮ
Наименование видов работ, методов и
др.
Дата проведения обучения
Ф.И.О. обучающего
Аттестация
Примечание
1
2
3
4
5
ОЦЕНКА КОМПЕТЕНТНОСТИ
Виды работ, задачи, процессы.
Дата проведения
Ф.И.О.
оценивающего
1
2
3
Результаты оценки компетентности
(удовлетворительно, оценить повторно)
Комментарии
4
5
Приложение 2
ПЛАН ОБУЧЕНИЯ СОТРУДНИКОВ РЕФЕРЕНС-ЛАБОРАТОРИИ РЦ СПИД
На _______________________
(указать период действия плана)
№
п/п
Наименование темы
Исполнитель
Дата проведения
1
2
3
4
Заведующий лабораторией: _____________________
(фио)
РАЗДЕЛ 01
ОБЩИЙ
23
Приложение 3.
КОНТРОЛЬНЫЙ СПИСОК ОЦЕНКИ КОМПЕТЕНТНОСТИ
Ф.И.О. СОТРУДНИКА
ДОЛЖНОСТЬ
Дата оценки
Ф.И.О. Оценивающего
Вид работы (Метод/процедура, часть процедуры)
Виды работ
Принято
Частично
нет
Комментарии
Суммарная оценка
Принято
Частично
нет
Комментарии
Требуется обучение для восполнения пробелов:
Рекомендуемые действия:
Повторную оценку провести через______________дней
Комментарии:
Дата:
Ф.И.О.
сотрудника:
Оценивающего:
Подпись:
Приложение 4.
Журнал проведения внутреннего обучения персонала РЛ
Дата
Ф.И.О. проходившего обучение
Тема
Ф.И.О. проводившего
обучение
1
2
3
4
Оценка знаний
Роспись
результаты теста
результаты
опроса
лица, проводившего
обучение
лица, проходившего обучение
Примечание
5
6
7
8
9
24
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Общий
СОП № 01 -04
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра СОП
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: УПРАВЛЕНИЕ ОБОРУДОВАНИЕМ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТАХ
НД – нормативный документ;
СИ – средства измерений;
ВО - вспомогательное оборудование
ЦСМ – центр сертификации и метрологии
СО – стандартный образец
НАЗНАЧЕНИЕ Целью настоящей процедуры является поддержание в рабочем состоянии
измерительного и вспомогательного оборудования.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Зав. лабораторий
2. Все лабораторные сотрудники
3. Материально ответственное лицо по оборудованию
ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Поверка средств измерений – совокупность операций, выполняемых органами государственной
метрологической службы, с целью определения и подтверждения соответствия средств измерений
установленным техническим требованиям
Средство измерений – техническое средство, предназначенное для измерений и имеющее
нормативные метрологические характеристики
Вспомогательное оборудование - техническое устройство, не относящееся к категории средств
измерений
Идентификация – признание тождественности неизвестного объекта известному на основании
совпадения признаков отождествления объектов.
Периодическая поверка оборудования всех типов – проверка соответствия его нормированных
характеристик точности требованиям НД на оборудование.
Промежуточные проверки – соответствие технического состояния оборудования указаниям,
содержащимся в инструкциях по эксплуатации, паспортах
Прослеживаемость испытаний – это соответствие полученных результатов при проведении
испытаний с учетом хода анализа, начиная от приема проб до выдачи протокола испытаний
РАЗДЕЛ 01
ОБЩИЙ
25
Общие положения
1. Эта процедура управления оборудованием направлена на поддержание в рабочем состоянии
измерительного и вспомогательного оборудования. Данная процедура осуществляется в
соответствии с правилами и требованиями НД Государственной системы обеспечения единства
измерений, с эксплуатационными документами на средства измерений, НД на методы испытаний.
2. Оборудование, используемое в лабораториях диагностики ВИЧ/СПИД для проведения испытаний,
включает в себя измерительное, вспомогательное оборудование, контроля условий окружающей
среды, обращения и хранения образцов.
Под управлением оборудованием понимается:
–– планирование закупок;
–– приобретение;
–– введение в действие;
–– идентификация;
–– регистрация;
–– калибровка/поверка/аттестация;
–– техническое обслуживание;
–– ремонт
–– списание, утилизация.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Входной контроль и учет оборудования
При поступлении в лабораторию нового оборудования СИ и ВО проводите входной контроль.
Входной контроль проводится инженером фирмы-производителя или поставщика в присутствии
уполномоченных сотрудников лаборатории и материально ответственного лица.
Проверьте наличие комплекта технической документации, внешний вид оборудования, его
целостность, наличие всех прилагаемых к нему комплектующих изделий и материалов,
предусмотренных условиями договора (контракта).
Проведите запуск оборудования.
В случае осуществления входного контроля с участием представителя поставщика оформите акт
приема-передачи и ввода в эксплуатацию оборудования по форме, предусмотренной поставщиком.
Если результаты входного контроля удовлетворительны, сделайте соответствующие записи в
карточке. Оборудование не принимается, если результаты входного контроля неудовлетворительны,
– сделайте соответствующие записи обо всех выявленных несоответствиях в акте приема-передачи
и в карточке.
Акт оформите в трех экземплярах с подписями представителей обеих сторон. Один экземпляр
храните у ответственного лица, второй экземпляр - в бухгалтерии и третий экземпляр передайте
поставщику.
Результаты данного контроля зафиксируйте в карточке учета оборудования
После приемки единицы оборудования проведите первоначальное обучение сотрудников
лаборатории основам работы на приобретенном оборудовании.
Идентификация
1. Руководитель назначает ответственного за управление оборудованием (идентификацию,
регистрацию, поверку\калибровку, аттестацию, списание и утилизацию).
2. Идентификации подлежит каждая единица оборудования.
3. Каждую единицу оборудования промаркируйте соответствующей этикеткой-наклейкой с указанием
следующих сведений:
–– идентификационный номер;
26
4.
5.
6.
7.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
–– наименование оборудования;
–– изготовитель (фирма), страна,
–– тип (марка),
–– заводской номер;
–– год изготовления;
–– № свидетельства о последней поверке/калибровке/аттестации.
Сразу же после прохождения поверки/калибровки/аттестации этикетку замените на новую,
содержащую актуализированные сведения.
В случае выхода из строя оборудования этикетку, содержащую сведения по поверке/калибровке/
аттестации, аннулируйте. Оборудование промаркируйте соответствующей этикеткой «не
используется», исключающей его использование в работе.
Оборудование, находящееся в нерабочем состоянии, по возможности удалите с рабочего места.
Оборудование малых размеров (термометры, таймеры) храните в отдельных коробках, и наклейку
прикрепите непосредственно к ним.
Регистрация данных
1. На каждую единицу оборудования заводите карточку учета оборудования
2. Карточку учета оборудования передайте в бухгалтерию ответственному за управление
оборудованием.
3. Инструкции и паспорта, относящиеся к оборудованию, храните в специально предназначенных
папках у ответственного лица.
Поверка/Калибровка
1. Периодически проводите калибровку и проверку технического состояния всего измерительного
оборудования в соответствии с указаниями, содержащимися в инструкциях по эксплуатации этого
оборудования или в паспортах на оборудование.
2. Если в протоколах результатов поверки/калибровки измерительного оборудования рекомендуется
использовать поправочный коэффициент, то информируйте персонал, работающий с этим
оборудованием, и рядом с этим оборудованием разместите табличку с указанием поправочного
коэффициента, который необходимо использовать при работе с ним.
Аттестация вспомогательного оборудования
1. Вспомогательное оборудование подвергается периодической проверке технического состояния в
соответствии с указаниями, содержащимися в инструкциях по эксплуатации этого оборудования
или в паспортах на оборудование.
2. При получении неудовлетворительных результатов аттестации ВО составьте акт о списании
или передаче его на ремонт. Акт подпишите у членов комиссии по списанию. Состав комиссии:
руководитель, зам. по АХЧ, бухгалтер учреждения, материально ответственное лицо.
1.
2.
3.
4.
Техническое обслуживания оборудования и эксплуатация оборудования
Руководитель назначает ответственного за эксплуатацию данного оборудования.
Назначенный сотрудник несет ответственность за то, что единица оборудования используется по
назначению и содержится в условиях, обеспечивающих рабочее состояние, аккуратное обращение.
Ответственный за эксплуатацию осуществляет контроль за работой оборудования согласно
программе по контролю за работой оборудования и плану обслуживания в соответствии с
инструкцией по применению к оборудованию.
В случае замены ответственного по обслуживанию единицы оборудования в карточке учета
оборудования ручкой синего цвета зачеркивается фамилия и заносится фамилия назначенного
руководителем ответственного.
РАЗДЕЛ 01
1.
2.
3.
4.
5.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
ОБЩИЙ
27
Оборудование считается неисправным в следующих случаях:
При получении сомнительных результатов;
При получении неудовлетворительных результатов поверки/ калибровки/ аттестации;
При получении неудовлетворительных результатов технического обслуживания;
Наличие видимых дефектов
Перегрузка.
Действия при обнаружении неисправностей
При выходе из строя оборудования составьте акт о его техническом состоянии (Унифицированная
форма - ф. ПР СМК–02-16.5). На оборудование вывесить ярлык, на котором укажите: с какого
времени не используется данное оборудование и причины его неисправности или консервации.
Подайте заявку на ремонт неисправного оборудования. Оборудование снимите с эксплуатации и
промаркируйте этикеткой «Не исправно».
Ремонт проводится по заявке сервисной службой, указанной в реестре основных поставщиков.
Заключите трудовой договор или трудовое соглашение с сервисной службой.
Занесите в карточку учета оборудования записи о техобслуживании и ремонте оборудования.
Оборудование, не пригодное для эксплуатации, подготовьте к списанию и снимите с учета.
Списание и утилизация
Оборудование списывается и снимается с учета, когда невозможно или экономически
нецелесообразно восстановление его работоспособности и при моральном его устаревании.
Решение о нецелесообразности дальнейшей эксплуатации оборудования принимает постоянно
действующая комиссия, назначаемая приказом руководителя.
В круг ее обязанностей входит определение технического состояния оборудования, установление его
непригодности к дальнейшему использованию, установление конкретных причин непригодности
объекта.
В случае принятия решения о списании составьте Акт о ликвидации объекта основных средств.
В бухгалтерии произведите операции по снятию с учета основных средств.
Оборудование передайте на склад для утилизации.
В карточке учета оборудования укажите дату списания и внесите записи «Списано».
Оборудование исключите из графика поверки и плана технического обслуживания.
Передайте в архив всю техническую документацию, карточку учета и инструкции по данному виду
оборудования.
ОТВЕТСТВЕННОСТЬ
№ п/п
Действие
Ответственный
Приобретение необходимого оборудования
Руководитель
Контроль работы оборудования.
Управляющий по качеству.
Уполномоченные сотрудники
Промежуточные проверки метрологических
характеристик.
Уполномоченные сотрудники
Составление и соблюдение Графика поверки
Управляющий по качеству.
Ремонт, консервация, списание оборудования. Заявки
на приобретение нового оборудования.
Управляющий по качеству/уполномоченный сотрудник
Регистрация
Соблюдение условий эксплуатации. Планирование
обслуживания
Сотрудники учреждений
28
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Закон Кыргызской Республики «Об обеспечении единства измерений»;
2. ГОСТ ИСО/МЭК 17025 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных
лабораторий»;
3. КМС 8.014-98 «Порядок аттестации испытательного оборудования. Общие положения».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 01
ОБЩИЙ
29
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ УПРАВЛЕНИЕ ДОКУМЕНТАЦИЕЙ И ЗАПИСЯМИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ФИО – фамилия, имя, отчество
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОЦПБС – областной центр борьбы со СПИД.
КР – Кыргызской Республики
НАЗНАЧЕНИЕ
Для правильного и качественного ведения документации и записей, определения порядка работы,
хранения, архивирования, уничтожения.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Вся документация и записи лаборатории должны составляться, вестись, храниться и уничтожаться в
соответствии с действующим законодательством и нормативными актами Кыргызской Республики.
2. Контроль над исполнением настоящей СОП и назначение квалифицированного персонала
для выполнения работ, связанных с ведением документации и записей, осуществляется
непосредственным руководителем или заведующим лабораторией
3. Записи должны вестись во всех колонках и строках журнала регистрации, бланках, формах актов и
протоколов.
МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ
1. Соблюдать стандартные меры безопасности.
1.
2.
3.
4.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Заведующий лабораторией.
Врач-лаборант
Ответственный специалист по качеству
Лаборанты.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Компьютер с принтером
МАТЕРИАЛЫ
1. Журнал регистрации, бланки, формы актов и протоколов.
2. Ручка
30
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИНСТРУКЦИИ
Заведующий лабораторией с ответственным по качеству или другим уполномоченным лицом
разрабатывают номенклатуру документов, необходимых в лаборатории.
Разработанная номенклатура утверждается у руководителя учреждения
Составьте и постоянно обновляйте перечень нормативной документации лаборатории.
Промаркируйте папки с документами согласно номенклатуре дел: поставьте код учреждения,
название учреждения, отдел, номер документа, название документа, дату начала ведения документа,
срок хранения данного документа.
Храните документы и записи в специально отведённых шкафах.
Обеспечьте получение необходимых документов и записей, их быстрый поиск и доведение до
персонала в установленные сроки.
Храните документы в течение срока, указанного в Номенклатуре дел.
При издании внутреннего документа назначьте лицо, ответственное за разработку данного
документа.
Проверьте подготовленный документ и подпишите у руководителя учреждения в соответствующей
графе документа.
Проинформируйте персонал лаборатории об ответственности и полномочиях персонала по
управлению документами.
При внесении изменений и издании документа доведите эту информацию до сведения персонала
лаборатории и обучите.
Отметьте изменения во внутренних документах в листе изменений.
Все входящие документы зарегистрируйте в специальном журнале «Регистрация входящей
документации», сами документы или копии храните в папке входящей документации.
Все исходящие документы регистрируйте в специальном журнале «Регистрация исходящей
документации», сами документы или копии храните в папке исходящей документации.
Устаревший первоначальный вариант обновленного внутреннего документа храните в папке
«Отмененные документы».
Проводите 1 раз в год актуализацию – пересмотр нормативной документации.
Промаркируйте по названию и идентификационному номеру Рабочие журналы и специальные
журналы.
Все журналы прошнуруйте и пронумеруйте.
На первом листе разместите инструкцию по ведению журнала, на последнем - подпись руководителя
с печатью организации и роспись уполномоченного лица.
Вносите в рабочие журналы и протоколы информацию по проведенным испытаниям, исследованиям,
нарушения, корректирующие действия.
Проверяйте периодически (1 раз в неделю) записи в журналах.
Вносите в протокол исследований информацию согласно установленной форме.
Экземпляры протоколов на каждый вид исследования на бумажных носителях прикрепите отдельно
в соответствующие папки по каждому исследуемому инфекционному агенту отдельно.
Результаты проводимого внутреннего контроля качества фиксируйте в контрольных картах на
электронных носителях и специальных журналах.
При внесении изменений в оригинал документа датируйте и визируйте руководитель учреждения и/
или ответственного специалиста по качеству.
Изымите устаревшие документы (СОП, протоколы, инструкции и т.п.) из применения сразу по
окончанию срока их годности и предотвратите их непреднамеренное использование.
РАЗДЕЛ 01
ОБЩИЙ
31
27. Передайте в архив оригинал устаревшего документа и передайте на уничтожение имеющиеся на
местах копии ответственному специалисту по качеству.
28. Устаревшие документы, имеющие информационную ценность, промаркируйте пометкой «Архив» с
сохранением идентификационного номера и передайте в соответствующих папках в Архив.
29. Доведите до сведения о новых изменениях персонал лаборатории.
30. Храните оригинал изменённого документа в шкафу для хранения документов
31. Выдайте копии предыдущим владельцам документов и проследите, чтобы копии находились на
всех местах, где проводятся конкретные работы.
32. При отмене на документе поставьте запись «Отменено», подпишите у руководителя, поставьте дату
отмены.
33. Отмененные копии документов по качеству уничтожьте: текст перечеркните, обратную сторону
листа можете использовать как черновик.
34. По истечении срока хранения документы подшейте в промаркированные и пронумерованные папки,
на лицевой стороне папки указываются наименования документов и за какой период.
35. Подшитые папки с документами маркируются пометкой «Архив» и передаются в архив.
36. В журнал регистрации документов при сдаче в архив занесите следующую информацию о документе:
–– дата
–– название документа
–– идентификационный номер (папки или журнала).
–– за какой период
–– роспись сдавшего документ
–– роспись принявшего документ
–– срок хранения, порядок хранения, способ и порядок уничтожения документа по истечении срока
хранения.
37. При изъятии из архива документов возьмите разрешение руководителя учреждения.
38. Финансовые документы по расчетам с заказчиками храните в бухгалтерии РЦ СПИД.
39. Сохраняйте конфиденциальность информации о результатах исследований.
40. Обеспечьте ограниченный допуск посетителей в помещения лаборатории и к конфиденциальным
документам.
41. Определите и утвердите генеральным директором РЦ СПИД перечень сотрудников, имеющих доступ
к конкретным документам, рабочим журналам, методикам, процедурам и прочей документации,
действующей в лаборатории.
42. При поступлении на работу возьмите у каждого сотрудника письменное обязательство о
неразглашении конфиденциальной информации.
43. Ограничьте доступ к электронному варианту документа, создав систему защиты информации путём
администрирования (прав) доступа, закрытия доступа периодически обновляемым паролём.
44. Доступ к результатам лабораторных исследований может иметь только Руководитель лаборатории,
ответственный по качеству и сотрудники соответствующего подразделения.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Закон КР «О ВИЧ/СПИДе в Кыргызской Республике» от 13 августа 2005 года № 149. Постановление
Правительства № 296 от 25 апреля 2006 года.
2. Типовая инструкция по документационному обеспечению управления (делопроизводством) в
Кыргызской Республике, утвержденная постановлением Правительства КР от 23.07.2012 №517.
3. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики,
32
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
4. противоэпидемических мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской
Республики
5. Требованиями ГОСТ ИСО/МЭК 17025, Кыргызского центра аккредитации (КЦА).
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 01
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Общий
ОБЩИЙ
33
СОП № 01-06
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ КОНТРОЛЬНЫХ МЕРОПРИЯТИЙ ПО ОБЕСПЕЧЕНИЮ
КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
РЛ – референс-лаборатория диагностики ВИЧ/СПИД
ВОК – внешняя оценка качества
ВКК – внутрилабораторный контроль качества
ВЛС – внутрилабораторный контрольный образец
КК – контрольные карты
РЦККЛДИБ – республиканский центр контроля качества лабораторной диагностики инфекционных
болезней
ПЦР – полимеразная цепная реакция
ПЦФ– проточный цитофлюориметр
НАЗНАЧЕНИЕ
Настоящая процедура устанавливает порядок проведения контрольных мероприятий по обеспечению
качества результатов проводимых исследований и определяет действия руководителя, ответственного
по качеству и сотрудников референс-лаборатории диагностики ВИЧ/СПИД.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Реализация обеспечения и контроля качества должна поддерживаться всеми специалистами,
обеспечивающими процесс исследований на всех стадиях лабораторного процесса от подготовки
образцов к исследованиям до выдачи результатов.
1.
2.
3.
4.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Заведующий лабораторией
Ответственный специалист по качеству
Врач-лаборант
Лаборант
34
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИНСТРУКЦИИ.
В РЛ осуществляется 2 вида контроля: Внешняя оценка качества (ВОК) и внутрилабораторный
контроль качества (ВКК).
1.
2.
3.
4.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
К внешнему контролю относятся:
Национальная программа ВОК по выявлению антител к ВИЧ, осуществляемая РЦККЛДИБ на
ежегодной основе.
Метод повторного тестирования при проведении ДЭН.
Международная программа ВОК по определению вирусной нагрузки РНК ВИЧ (ПЦР) и ранней
диагностики ВИЧ у новорождённых (определение провирусной ДНК).
При осуществлении ВОК даётся оценка качества испытаний, которая в виде отчёта ВОК доводится
до сведения сотрудников лаборатории и руководства организации.
Внутрилабораторный контроль
Внутрилабораторный контроль качества обязателен в отношении всех видов исследований,
выполняемых в РЛ, проводится регулярно, данные по контролю хранятся в специально
предназначенных папках и электронных носителях (контрольные карты ИФА, контрольные карты
ПЦР, контрольные карты ЦФП).
Внутрилабораторный контроль качества включает стандартное выполнение и контроль на всех
стадиях лабораторного процесса:
–– преаналитической стадии;
–– аналитической стадии;
–– постаналитической стадии.
На преаналитической стадии применяются меры, направленные на предупреждение лабораторных
погрешностей до начала проведения исследований. Предупредительные меры включают следующие
действия:
Контроль уровня подготовленности (оценка компетентности) персонала РЛ (СОП № 01-03
«Управление персоналом лаборатории»)
Контроль работы лабораторных приборов и оборудования (СОП №-01-04 «Управление
оборудованием»);
Контроль поступающих в РЛ наборов диагностических тест-систем, сывороток и плазмы крови,
условий их содержания (СОП № 02-05; СОП №03-01);
Контроль работы холодильного оборудования, обеспечивающего необходимый температурный
режим хранения (СОП № 03-02 «Правила термометрии помещений, холодильников, морозильных
камер»).
На аналитической стадии применяются меры, направленные на выявление погрешностей измерений
при проведении лабораторных испытаний. Контроль на аналитической стадии включает:
–– Оценку валидности теста (соответствие значений контрольных образцов требованиям
инструкции);
–– Контроль качества каждой аналитической серии с помощью внутрилабораторного стандарта
(ВЛС);
–– Применение методов вариационной статистики для построения контрольной карты (СОП №
08-01 или СОП № 08-02 «Правила проведения внутрилабораторного контроля качества при
тестировании на ВИЧ и вирусные гепатиты»);
–– Применение контрольных правил Westgard для определения вида лабораторной ошибки (СОП
№ 08-03 «Применение контрольных правил WESTGARD и порядок выявления лабораторных
ошибок»);
РАЗДЕЛ 01
ОБЩИЙ
35
9. На постаналитической стадии применяются меры, направленные на общую оценку результатов
внутрилабораторного контроля качества, включающие:
–– Учет результатов аналитической серии или её браковку (при нарушении контрольных правил);
–– Анализ причин лабораторных ошибок;
–– Разработку корректирующих мер;
–– Организация внутренних проверок при выявлении несоответствий ответственным по качеству и
заведующим лабораторией.
–– Отчёт заведующего РЛ об обнаруженных несоответствиях и применяемых мерах;
–– Регулярный анализ результатов внутрилабораторного контроля качества в динамике с целью
выявления тенденций в работе РЛ.
10. Порядок стандартного выполнения всех стадий лабораторного процесса и проведения
внутрилабораторного контроля описан в соответствующих СОП.
11. Заведующая РЛ вместе с ответственным по качеству в начале текущего года составляет план
внутреннего контроля. Все сотрудники РЛ, проводящие исследования и подготовку образцов к
испытаниям, участвуют во внутреннем контроле.
12. План доводится до сведения всех сотрудников, подвергается обсуждению и корректируется, затем
утверждается.
13. Внутренние проверки правильности проведения испытаний осуществляются ответственным
по качеству путём опроса сотрудников, наблюдений за их работой, контроля за документами и
записями.
14. Результаты проверки оформляются в личных карточках каждого сотрудника на основании
контрольного списка оценки компетентности (СОП 01-03 «Управление персоналом» Приложение
1).
15. В случае проведения внеплановой проверки заведующий РЛ на рабочем заседании дает
распоряжение, которое фиксируется в журнале проведения собраний, при этом указывается
основание для проверки, даты проведения проверки, методики и материалы, используемые для
проверки, и участники проверки.
16. Контрольный экземпляр плана проверки и контрольные вопросы оценки компетенции хранятся у
ответственного по качеству.
17. Данные внутрилабораторного контроля качества своевременно анализируются. Если при
этом выявлено, что данные выходят за рамки установленных критериев, разрабатываются
корректирующие действия для устранения проблемы и для предотвращения включения неверных
результатов в отчётную документацию.
18. По результатам проверок заведующий РЛ и ответственный по качеству делают заключение о:
–– правильности проведения исследований и их объективности;
–– компетентности сотрудников РЛ в области проводимых ими видов исследований и необходимости
повышения квалификации сотрудников;
–– соответствии применяемой системы управления качеством в РЛ и необходимости ее
совершенствования.
19. По результатам проверок ответственный по качеству составляет план мероприятий по
совершенствованию компетентности сотрудников в области проводимых ими видов испытаний.
20. Сотрудники, не прошедшие проверку с положительным результатом, подвергаются дополнительному
обучению уполномоченным персоналом, после чего они подлежат повторному контролю.
21. Для предупреждения негативных последствий, которые могут отрицательно сказаться на
объективности и достоверности результатов проводимых исследований, в РЛ запрещается:
–– проводить исследования с отклонениями от порядка и требований, установленных нормативной
документацией;
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
36
–– использовать средства измерений с погрешностью большей, чем указано в методиках
исследований, а также с истекшим сроком поверки и калибровки;
–– проводить исследования сотрудникам, не аттестованным на право проведения конкретных видов
исследований;
–– проводить исследования на оборудовании, параметры которого не соответствуют требованиям
методик.
–– Ответственность по обеспечению качества лабораторных исследований несут все сотрудники РЛ
(Приложение 1).
1.
2.
3.
4.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
ГОСТ ИСО 15189 «Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности»
ГОСТ Р ИСО 5725-2002. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов
измерений – части 1 – 6.
ГОСТ 27384-2002. «Нормы погрешности измерений показателей состава и свойства».
Методическое руководство «Обеспечение и внутрилабораторный контроль качества в
иммуноферментном анализе»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
ИЗЪЯТО (у кого)
Дата
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Ответственность сотрудников РЛ по обеспечению качества исследований на ВИЧ
№
п/п
Выполняемые действия
Ответственный
Внутренний лабораторный контроль.
ответственный по качеству
Подготовка отчета заведующему РЛ
ответственный по каждому методу исследований
Построение контрольных карт
Статистическая обработка результатов контроля качества
Анализ полученных данных
Выяснение причин несоответствия
исполнитель
ответственный по качеству
ответственный по каждому методу исследований
ответственный по качеству
ответственный по каждому методу исследований
Внутренний лабораторный контроль в отсутствие
ответственного по качеству
ответственный по каждому методу исследований
Исполнитель
Добросовестное выполнение требований инструкций
Исполнитель
Анализ деятельности. Предупреждающие действия
Заведующий РЛ Ответственный по качеству
РАЗДЕЛ 01
№
п/п
Выполняемые действия
Предоставление необходимых ресурсов для обеспечения
требуемого качества выполняемых исследований.
ОБЩИЙ
Ответственный
Руководитель РЦ СПИД
Заведующий РЛ
Ответственный по качеству
Руководитель РЦ СПИД
Проведение обучения персонала.
Заведующий РЛ
Ответственный по качеству
37
38
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗДЕЛ 02
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ПРЕАНАЛИТИКА
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Преаналитика
39
СОП № 02-01
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ КРОВИ ИЗ ВЕНЫ С ПОМОЩЬЮ ВАКУУМНОЙ СИСТЕМЫ ДЛЯ
ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ НА ВИЧ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
(ИФА).
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ФИО – фамилия, имя, отчество
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
HBsAg – поверхностный антиген вируса гепатита В.
ВГС- вирус гепатита С
НАЗНАЧЕНИЕ Обеспечение стандартных условий и требований безопасности при взятии крови из
вены.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Все подготовительные работы проводятся заранее, до начала процедур венепункции: уборка
и кварцевание помещения, подготовка необходимого оснащения, проверка сроков годности
пробирок, игл. Убедитесь в сохранности печати на игле, которая гарантирует стерильность. Если
она повреждена - не используйте иглу.
Кровь забирает обученный, имеющий профессиональные навыки медицинский персонал в
процедурном кабинете в спокойной обстановке.
Процедурный кабинет должен быть обеспечен водопроводной водой, иметь искусственное и
естественное освещение, естественную вентиляцию.
Стул и стол для пациента должны обеспечить максимальное удобство и безопасность.
У тяжелобольных забор крови проводят в палате отделений.
При взятии образцов крови необходимо следовать универсальным правилам безопасности при
работе с инфекционно опасным материалом.
Для каждого пациента используйте новую пару перчаток.
Халат меняется по мере загрязнения, но не реже двух раз в неделю. Должна быть предусмотрена
немедленная смена спецодежды в случае загрязнения её кровью.
Медицинские изделия, применяемые для взятия венозной крови, относятся к медицинским отходам
классов Б (опасные (рискованные) отходы), их сбор, хранение и утилизацию необходимо проводить,
соблюдая установленные санитарно-эпидемиологические правила и нормы, и инструкции, принятые
для организаций здравоохранения Кыргызской Республики.
40
10.
11.
12.
13.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Заведующий отделением, дежурный врач
Старшая медсестра
Процедурная медсестра/медбрат
МАТЕРИАЛ
Средства индивидуальной защиты: одноразовые резиновые или латексные перчатки, халат/брюки с
курткой, шапочка, маска
Вакуумные системы для взятия крови, включающие:
стерильную одноразовую вакуумную пробирку с активатором свёртывания крови; ВАЖНО! В
качестве активатора использовать вакуумные пробирки с сухим напылением (красная крышка), т.к.
они не требуют центрифугирования в местах взятия крови
–– двустороннюю иглу;
–– иглодержатель.
–– Салфетки, пропитанные антисептиком в заводской упаковке
Салфетки/тампоны стерильные одноразовые
Штатив для вакуумных пробирок
Кресло для венепункции
Подушка для выравнивания локтевого сгиба (при отсутствии кресла для венепункции).
Жгуты кровоостанавливающие одноразовые или многоразовый
Перманентный маркер с тонким стержнем
Бланк-направление посписочный и индивидуальный. (Приложение 1)
Ручка шариковая
Противошоковая и аптечка (Приложение 2)
Регистрационный журнал (Приложение 3)
Стол для проб крови
Стул для пациента
Кушетка
Стол, стул для медсестры
Шкаф для хранения расходных материалов
Моющее средство для рук
Одноразовое полотенце
Дезинфицирующее средство для обеззараживания рабочих поверхностей и использованного
материала
Настольный непрокалываемый и непротекаемый контейнер для игл
Эмалированное ведро или пластиковый биологически безопасный контейнер для сброса
контаминированных кровью материалов и перчаток
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Холодильник бытовой.
2. Бактерицидная установка.
РЕАКТИВЫ
1. Нашатырный спирт.
2. Спирт 700
3. Дезинфицирующие средства, разрешённые к использованию на территории Кыргызстана
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
41
ИНСТРУКЦИИ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
Вымойте и высушите руки согласно стандарту «Обработка рук»
Наденьте защитную одежду.
Пригласите пациента, убедитесь, что взятие крови будет проведено у пациента, указанного в
направлении. Спросите у пациента его имя и фамилию, возраст, и/или домашний адрес.
Сравните полученную информацию с указанной в направлении.
Если возникли трудности с идентификацией пациента, позовите сопровождающего или постовую
медсестру и уточните у них паспортные данные пациента.
Для неизвестных пациентов (пациентов без сознания или с сумеречным сознанием) должно быть
присвоено временное, но чёткое обозначение, пока его личность не будет выяснена.
Зарегистрируйте направление в регистрационном журнале и впишите информацию о пациенте в
общий список. Если направление отсутствует, оформите направление.
Подберите и проверьте все приспособления, используемые для взятия крови, удобно расположите
их на рабочем месте.
Возьмите вакуумную пробирку для получения сыворотки и промаркируйте её номером и фамилией,
соответствующим номеру и фамилии в направлении.
Объясните пациенту цель и ход предстоящей процедуры. Важно! Никогда не говорите пациенту
“Это не будет больно”.
Удобно разместите пациента
–– Процедура для сидящего пациента. Попросите пациента сесть удобно на стул, расположите
руку пациента на подлокотник или стол и вытяните руку так, чтобы получилась прямая линия от
плеча до запястья. Рука должна твёрдо опираться и не должна быть согнута в локте.
–– Процедура для лежачего пациента. Если необходимо, чтобы пациент лежал, попросите его
лечь на кушетку. Подложите подушку (если нужна дополнительная опора) под руку, из которой
будет браться кровь. Руку пациента выпрямите, чтобы от плеча до запястья получилась прямая
линия.
Важно! Никогда не берите кровь у стоящего пациента.
Наденьте защитные очки, маску, перчатки.
Выберите и осмотрите место венепункции. Важно! Избегать участков со следами ожогов и
обширными рубцами, внутривенной терапии и гематом.
–– Пальпируйте и отслеживайте ход вен указательным пальцем несколько раз.
–– Если поверхностные вены трудно обнаружить, можно увеличить приток крови в вену с помощью
массажа руки от запястья к локтю. Резкое лёгкое постукивание несколько раз по выбранному
участку вены указательным и вторым пальцами вызовет расширение вены. Для лучшего
наполнения вены опустить руку ниже уровня подлокотника.
–– Если видимой вены нет, для венепункции можно использовать вены другой руки или вены кисти
руки.
Наложить жгут на 7–10 см выше от места прокола вены Важно! Никогда не оставляйте жгут
более чем на одну-полторы минуты.
Если вам нужно наложить жгут для предварительного выбора вены, ослабьте его и снова наложите
через две минуты.
Обработайте место прокола с помощью стерильной спиртовой салфетки, подождите до полного
высыхания асептика.
Зафиксируйте вену, используя большой палец, твёрдо обхватите руку пациента так, чтобы натянуть
кожу, и фиксируйте вену. Ваш большой палец должен находиться в 3-5 сантиметрах ниже места
прокола вены. Важно! Нельзя дотрагиваться до места прокола после дезинфекции.
42
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
17. Возьмите иглу и снимите с неё защитный колпачок со стороны, закрытой резиновым клапаном
(рис.1). Вставьте иглу в иглодержатель и завинтите до упора (рис. 2)
18. Снимите защитный колпачок со второй стороны иглы.
19. Расположите иглу у вены под углом примерно 15 градусов к поверхности кожи (рис 3) и срезом
вверх введите иглу в вену плавным, мягким движением (рис. 4).
20. Вставьте заранее приготовленную пробирку в иглодержатель до упора, и удерживайте её, пока кровь
не перестанет поступать в пробирку. При этом игла прокалывает резиновую мембрану и резиновую
заглушку в крышке пробирки.
21. Кровь проходит в пробирку, пока не компенсирует созданный в пробирке вакуум (если кровь
не идёт — это значит, что игла прошла вену насквозь или упёрлась в стенку вены — в этом
случае нужно немного вытянуть иглу, но не вынимать пока кровь не пойдёт в пробирку!) (рис. 5).
Для визуального контроля уровня заполнения на этикетке имеется метка. Вакуумные пробирки
самопроизвольно заполняются до нужной метки.
22. Как только кровь начнёт поступать в пробирку, снимите или ослабьте жгут.
23. После того, как в пробирку прекратит поступать кровь, извлеките её из держателя, упираясь
большим пальцем в ободок держателя.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
43
24. Приложите сухую стерильную салфетку к месту венопункции, медленно извлеките иглу из вены,
сохраняя наклон в направлении вверх, и прижмите место прокола салфеткой до тех пор, пока
кровотечение не остановится.
25. Использованную иглу, иглодержатель немедленно поместите в биологически безопасный контейнер.
26. Сразу после взятия крови аккуратно переверните пробирки 5-10 раза для обеспечения полного
перемешивания реагента и крови. Поверните наполненную пробирку крышкой вниз и верните в
исходное положение. Это однократный переворот.
27. Внимание!: Не встряхивайте пробирки. Энергичное перемешивание может вызвать вспенивание
или гемолиз.
28. Поставьте пробирку в штатив.
29. Убедившись в том, что кровотечение остановилось, наложите бактерицидный пластырь поверх
салфетки. Рекомендуйте пациенту оставить пластырь по крайней мере на 15 минут, но не более 2
часов.
30. Если кровотечение продолжается дольше пяти минут, медсестра должна сообщить об этом
дежурному врачу или заведующему отделением. Продолжайте прижимать место прокола до тех
пор, пока кровотечение не прекратится.
31. Убедитесь в хорошем самочувствии пациента.
32. Контаминированные кровью материалы (салфетка, перчатки и др.) поместите в эмалированное
ведро или пластиковый биологически безопасный контейнер.
33. Проведите дезинфекцию рабочего места
34. Выполните гигиену рук, согласно стандарту мытья рук.
35. Храните пробы крови при комнатной температуре (+18 – +25 градусов по Цельсию) не более 2
часов. При более высокой температуре в помещении и/или необходимости более длительного
хранения необходимо пробы поместить в бытовой холодильник при температуре от +4 до + 8° С не
более 24 часов.
Важно! Не допускается замораживание пробирок с кровью, следует избегать попадания на пробирки
прямого солнечного света, резкого встряхивания и воздействия вибрации на пробирки.
Возможные трудности при взятии крови с помощью системы вакуумного забора крови
1. Игла введена в вену, пробирка присоединена к игле, но кровь в пробирку не поступает:
Причина 1: Вы не попали иглой в вену (рис. 6). Ваши действия: Зафиксируйте вену, слегка вытянуть
иглу и снова ввести иглу в вену. Следите, чтобы конец иглы оставался под кожей.
Причина 2: Кончик иглы прижат к стенке вены (рис.7). В этом случае в пробирку поступает
несколько капель крови, а потом она перестает заполняться.
Ваши действия: Отсоедините пробирку от иглы. Благодаря эластичности резиновой пробки вакуум
в пробирке полностью сохранится. Измените положение иглы в вене и снова присоединить пробирку.
Причина 3: Игла прошла сквозь вену (рис.8). В пробирку поступило небольшое количество крови,
потом ток крови прекратился.
Ваши действия: Постепенно вытягивать иглу до появления тока крови. Если ток крови не
возобновился, то снять пробирку и вынуть иглу из вены. Выбрать другую точку и повторить венепункцию.
Пробирка не заполнилась до указанного на этикетке объема
Причина 1: Коллапс вены (рис. 9). Сначала наблюдается медленный ток крови, а потом ток крови
прекращается.
Ваши действия: Выньте пробирку из держателя, подождите пока вена наполнится и снова вставьте
пробирку в держатель.
Причина 2: В пробирку попал воздух (это возможно, если игла с присоединённой пробиркой
находилась вне вены).
44
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Ваши действия: Если кровь забирается в пробирку для исследования сыворотки без наполнителей,
и вас устраивает объем набранной крови, то пробу можно использовать дальше для анализа
Важно!
При обмороке или других нестандартных ситуаций с пациентом примите действия, указанные
в Приложении 4. «Критерии немедленного действия».
1. Для предотвращения гематомы у пациента и гемолиза образцов выполняйте действия, указанные в
Приложении 5.
2. Критерии неприемлемости образцов указаны в Приложении 6.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
Осинова В.Л. Руководство по забору проб венозной крови для лабораторных исследований.
Издательство: BD Vacutainer®, 2010 г.
Национальное руководство по лабораторной диагностики ВИЧ – инфекции.
Постановление Правительство № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
Приказ № 59 от 18.02.2013 «Об усовершенствовании безопасной системы управления медицинскими
отходами в организациях здравоохранения»
Аптечка первой медицинской помощи универсальная противошоковая общего назначения. ТУ
9398-014-85535470-2008.
Вакуумные пробирки VACUETTE для получения сыворотки. Инструкция по использованию.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
ИЗЪЯТО (у кого)
Дата
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма направления в лабораторию диагностики ВИЧ
Учреждение-отправитель_________________________________________________________
Направление на исследование крови на наличие антител/антигенов к ВИЧ/ВГВ (HBsAg)/ВГС/
Сифилис
Регистрацип/п онный номер
№ пробы в лаборатории
Ф. И. О. пациента
Пол
Год
рождения
Домашний
адрес
Код
контингента
Дата
забора
крови
Результат
исследования
ИФА
ФИО врача, направившего на исследование__________________________________________
ФИО мед. персонала, проводившего забор материала_________________________________
Дата выдачи результата исследования_______________________________________________
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
45
Результаты*:
Дата и подпись лабораторного специалиста
_______________________________________________________________________________
*При отрицательном результате ставится штамп лаборатории с отрицательным результатом. При
положительном результате на ВИЧ информация для служебного пользования (ДСП) передается в
эпидемиологический отдел и, далее, в установленном порядке ДСП врачу-инфекционисту ЦСМ/ГСВ по месту
жительств, либо врачу стационара, направившему на тестирование. При положительном результате на ВГВ/ВГС/
Сифилис в направлении ставится печать по наличию выявленного маркера (Например: HBsAg положительный) и
передается в ЛПУ, направившему образец.
Приложение 2
Состав противошоковой аптечки
Марлевые шарики стерильные №10 - 1 уп.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
Шприц 2 мл - 2 шт.
Шприц 5 мл - 3 шт.
Шприц 10 мл - 1 шт.
Шприц 20 мл - 4 шт.
Жгут - 1 шт.
Система для капельного вливания - 1 шт.
Перчатки латексные - 1 пара
Раствор Адреналина 0,1% 1 мл №5 - 1 уп.
Раствор Супрастина 2% 1 мл. №5 - 1 уп.
Преднизолон 30 мг/мл 1 мл №3 - 1 уп.
Лазикс 10мг/1мл 2 мл. №10 - 1 уп.
Коргликард (Корглюкон) 0,06% 1 мл №10 - 1 уп.
Глюкоза 5% 200мл - 1 уп.
Глюкоза 40% 10мл №10 - 1 уп.
Метатон 1% раствор 1 мл. № 10 - 1 уп.
Тавегил 0,1% 2 мл. №5 - 1уп.
Эуфиллин 2,4% 5 мл. №10 - 1 шт.
Хлорида натрия раствор 0,9% 100мл - 1 шт.
Приложение 3
Форма регистрационного журнала в процедурном кабинете
п/п
Ф. И. О. пациента
№
Год
Пол рождения
Домашний
адрес
Дата
Кодкон- Время
Дата
ФИО медработотправки
тинген- взятия взятия
ника, взявшего
в лабората
крови крови
кровь
торию
46
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 4.
МЕРОПРИЯТИЯ НЕМЕДЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯ
8. Обморок.
Прекратите процедуру венопунктуры, будьте предельно осторожны, чтобы несмотря на возникшую
ситуацию осторожно извлечь иглу из вены. Держите стерильную сухую салфетку/тампон на месте
прокола или сразу же наложите повязку.
–– Если пациент сидит, опустите его голову и руки.
–– Ослабьте тесную одежду.
–– Примените нашатырный спирт, давая пациенту вдыхать пары аммиака. Пациент должен
отреагировать кашлем.
–– Если пациент не реагирует, сообщите врачу.
–– Если необходимо, приложите холодные компрессы на лоб и заднюю часть шеи.
–– Предложите выпить несколько глотков холодной воды.
–– Если возможно, уложите пациента и подложите подушку под ноги для облегчения притока крови
к голове.
–– Не позволяйте пациенту уходить, пока он не почувствует себя лучше.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
9. Тошнота.
–– Расположите пациента как можно удобнее.
–– Заставьте пациента дышать глубоко и медленно.
–– Прикладывайте холодные компрессы на лоб пациента (если он согласен).
10. Рвота.
–– Дайте пациенту ёмкость для рвотных масс и приготовьте салфетки.
–– Дайте пациенту воды прополоскать рот.
–– Составьте рапорт о случившемся. на имя заведующего отделением в произвольной форме.
11. Судороги.
–– Проследите, чтобы пациент не поранил себя. Не ограничивайте движения пациента полностью,
но пытайтесь предотвратить их повреждение.
–– Вызовите медсестру или врача.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
12. Отказ пациента от сдачи крови на анализ.
–– Не спорьте с пациентом.
–– Сообщите врачу или медсестре о возражениях пациента. Они смогут лучше объяснить пациенту,
почему сдача анализов необходима.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
Приложение 5.
1.
2.
3.
4.
5.
А. Предотвращение появления гематомы
Прокалывайте только верхнюю стенку вены.
Снимайте жгут перед удалением иглы.
Используйте главным образом поверхностные вены.
Удостоверьтесь, что игла полностью проколола верхнюю стенку вены. Неполное прокалывание
может привести к просачиванию крови по ходу скоса иглы в мягкие ткани, окружающие вены.
Когда накладываете повязку, слегка прижмите марлевую салфетку к месту прокола.
РАЗДЕЛ 02
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ПРЕАНАЛИТИКА
47
Б. Предотвращение гемолиза
Избегайте забора крови из гематомы.
При использовании иглы и шприца не вытягивайте поршень слишком резко.
Избегайте использования иглы слишком маленького калибра.
Чтобы избежать вспенивания, убедитесь, что игла надёжно закреплена на шприце.
Не прикасаясь к выбранному участку прокола, убедитесь, что он сухой.
Медленные “начало и конец” забора крови могут стать причиной гемолиза.
Если игла оказалась слишком маленькой для использованной вены, то по возможности попытайтесь
сделать прокол ещё раз бóльшей иглой.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
48
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Преаналитика
СОП № 02-02
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ КРОВИ ИЗ ВЕНЫ У НОВОРОЖДЕННЫХ И ДЕТЕЙ
ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ НА ВИЧ И ВИРУСНЫЕ ГЕПАТИТЫ МЕТОДОМ
ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ФИО – фамилия, имя, отчество
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
HBsAg – поверхностный антиген вируса гепатита В.
ВГС- вирус гепатита С
НАЗНАЧЕНИЕ Обеспечение стандартных условий проведения венепункции у новорождённых и
детей, соблюдение требований безопасности процедуры.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Все подготовительные работы проводятся заранее, до начала процедур венепункции: уборка и
кварцевание помещения, подготовка необходимого оснащения, проверка сроков годности систем
для взятия крови.
Кровь забирает обученный и имеющий профессиональные навыки забора крови у детей медицинский
персонал.
Кровь забирается в процедурном кабинете в спокойной обстановке.
Процедурный кабинет должен быть обеспечен водопроводной водой, иметь искусственное и
естественное освещение, естественную вентиляцию.
Стул и стол для ребёнка должны обеспечить максимальное удобство и безопасность.
У тяжелобольных детей кровь забирается в палате отделений.
Медицинские изделия, применяемые для взятия венозной крови, относятся к отходам класса Б
(опасные (рискованные) отходы), их сбор, хранение и утилизацию необходимо проводить, соблюдая
установленные санитарно-эпидемиологические правила и нормы и инструкции, принятые для
организаций здравоохранения Кыргызской Республики.
Перчатки меняются при переходе от одного пациента к другому.
Халат меняется по мере загрязнения, но не реже двух раз в неделю. Должна быть предусмотрена
немедленная смена спецодежды в случае загрязнения её кровью.
При заборе крови у ребёнка необходимо присутствие одного из родителей или взрослого
сопровождающего лица.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
49
11. Если венепункция выполняется у ребёнка младше двух лет, участок для прокола следует ограничить
поверхностными венами.
12. Максимально допустимое количество однократного забора крови зависит от веса ребёнка:
a. от 2,7 до 3,6 кг. – не более 2,5 мл.
b. от 3,6 до 4,5 кг. – не более 3,5 мл.
c. от 4,5 до 6,8 кг. – не более 5 мл.
d. от 7,3 до 9.1 кг. – не более 10 мл.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий отделением, дежурный врач
2. Старшая медсестра
3. Процедурная медсестра/медбрат
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
МАТЕРИАЛ
Одноразовые латексные перчатки
Средства индивидуальной защиты
Вакуумные системы для взятия крови, включающие:
стерильная одноразовая вакуумная пробирка педиатрического объема на 1.5 – 2.0 мл. с ЭДТА или
с вакуумная пробирка с активатором свёртывания крови, объемом 4 мл.; ВАЖНО! В качестве
активатора использовать вакуумные пробирки с сухим напылением (красная крышка), т.к. они не
требуют центрифугирования в местах взятия крови
–– иглу-бабочку 23 или 25 калибра с трубкой-удлинителем;
–– иглодержатель.
–– Салфетки, пропитанные антисептиком в заводской упаковке
Салфетки/тампоны стерильные одноразовые
Штатив для вакуумных пробирок
Жгут кровоостанавливающий детский
Медицинский пластырь
Перманентный маркер
Бланк-направление посписочный и индивидуальный (Приложение 1)
Ручка шариковая
Противошоковая аптечка (Приложение 2)
Регистрационный журнал (Приложение 3)
Стол, стул для пациента
Кушетка/пеленальный столик для детей
Стол для проб крови
Стол и стул для медсестры
Шкаф для хранения расходных материалов
Моющее средство для рук
Одноразовое полотенце
Дезинфицирующее средство для обеззараживания рабочих поверхностей и использованного
материала
Настольный непрокалываемый и непротекаемый контейнер для игл/игл-бабочек
Эмалированное ведро или пластиковый биологически безопасный контейнер для сброса
контаминированных кровью материалов и перчаток
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
50
24. ОБОРУДОВАНИЕ
25. Холодильник бытовой.
26. Бактерицидная установка.
РЕАКТИВЫ
1. Нашатырный спирт.
2. Дезинфицирующие средства, разрешённые к использованию на территории Кыргызстана
ИНСТРУКЦИИ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Наденьте защитную одежду.
Вымойте и высушите руки согласно стандарту «Обработка рук»
Пригласите родителя (сопровождающего) с ребёнком. Убедитесь, что взятие крови будет проведено
у ребёнка, указанного в направлении. Выясните у родителя (сопровождающего) имя и фамилию,
возраст и/или домашний адрес ребёнка.
Сравните полученную информацию с указанной в направлении.
Зарегистрируйте направление в регистрационном журнале и впишите информацию о ребёнке в
общий список. Если направление отсутствует, оформите направление.
Подберите и проверьте все приспособления, используемые для взятия крови, удобно расположите
их на рабочем месте.
Возьмите вакуумную пробирку для получения сыворотки и промаркируйте её номером и фамилией,
соответствующими номеру и фамилии ребёнка в направлении.
При заборе крови у ребёнка необходима помощь одного их родителей или взрослого лица для
ограничения свободы его движения (рис. 1, 2).
Рис. 1 и 2. Способы фиксации движения младенца и ребёнка
Важно! Будьте особенно внимательны, обезопасьте руку ребёнка, чтобы предотвратить её повреждение в
результате неожиданного движения, когда игла прокалывает кожу.
Выберите место прокола.
8. Наложите кровоостанавливающий жгут на два пальца выше места прокола (рис.3).
9. Важно! Никогда не оставляйте жгут более чем на одну минуту.
рис.3
10. Наденьте плотно прилегающие латексные перчатки (рис.4).
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
51
рис.4
11. Прикрепите конец крыловидного набора (иглы-бабочки) к вакуумной пробирке и вставьте трубку
для сбора крови в держатель так, чтобы она достигла иглы (рис.5).
рис.5.
12. Снимите пластиковый рукав с конца бабочки (рис.6).
рис.6.
13. Обработайте место прокола с помощью стерильной спиртовой салфетки подождите до полного
высыхания асептика (рис.7). Важно! Нельзя дотрагиваться до места прокола после дезинфекции.
.
рис.7.
14. Большими пальцами натяните кожу на два пальца ниже места прокола (рис.8).
(рис.8).
15. Вакуумную пробирку полностью насадите на иглу (рис.9).
52
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
рис.9.
16. Кровь должна начать течь в пробирку. (рис.10).
рис.10.
17. Заполните пробирку до конца или до полного выхода вакуума.
18. Ослабьте жгут после того как соберёте требуемое количество крови (рис.11).
19. Поместите сухой стерильный тампон на место венопункции и медленно вытяните иглу (рис.12).
рис.12.
20. Попросите родителя (сопровождающего) поддержать тампон, прижимая его к месту прокола (рис.
13).
рис.13.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
53
21. Снимите бабочку с держателя вакуумной трубки, не касаясь иглы руками (рис.14).
рис.14.
22. Опустите использованную иглу-бабочку в вырез контейнера для использованных игл (рис.15).
рис.15.
23. Контаминированные кровью материалы (салфетка, перчатки и др.) поместите в эмалированное
ведро или пластиковый биологически безопасный контейнер (рис.16).
рис.16.
24. Промаркируйте пробирку с указанием регистрационного номера пациента.
25. Сразу после взятия крови аккуратно переверните пробирки 5-10 раз для обеспечения полного
перемешивания реагента и крови. Поверните наполненную пробирку крышкой вниз и верните
в исходное положение. Это однократный переворот. Важно! Не встряхивайте пробирки.
Энергичное перемешивание может вызвать вспенивание или гемолиз. Недостаточное или
медленное перемешивание пробирок для сыворотки может замедлить образование сгустка.
26. Поставьте пробирку в штатив.
27. Наложите лейкопластырную повязку пациенту, если необходимо (рис.17).
рис.17.
28. Снимите перчатки, поместите их в контейнер для общих отходов
29. Вымойте руки согласно стандарта мытья рук.
30. Проведите дезинфекцию использованного оборудования. Убедитесь в хорошем самочувствии
пациента.
54
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
31. Храните пробы крови при комнатной температуре (+18 – +25 градусов по Цельсию) не более 2
часов. При более высокой температуре в помещении и/или необходимости более длительного
хранения необходимо пробы поместить в бытовой холодильник при температуре от +4 до + 8° С не
более 24 часов.
Важно! Не допускается замораживание пробирок с кровью, следует избегать попадания на пробирки
прямого солнечного света, резкого встряхивания и воздействия вибрации на пробирки.
Для успешного проведения процедуры венопункции у детей и новорождённых:
Попросите родителя/взрослого сопровождающего ритмично сжимать и разжимать запястье
руки ребёнка, чтобы обеспечить кровоток.
1. Держите ребёнка в тепле, оставив на нем почти всю одежду, и, если это новорождённый, заверните
его в одеяло;
2. Разогрейте место пункции подогретым полотенцем
Возможные трудности при взятии крови с помощью системы вакуумного забора крови
Игла введена в вену, пробирка присоединена к игле, но кровь в пробирку не поступает:
Причина 1: Вы не попали иглой в вену (рис. 18).
Ваши действия: Зафиксируйте вену, слегка вытяните иглу и снова введите её
в вену. Следите, чтобы конец иглы оставался под кожей.
Причина 2: Кончик иглы прижат к стенке вены (рис.19). В этом случае в
пробирку поступает несколько капель крови, а потом она перестает заполняться.
Ваши действия: Отсоедините пробирку от иглы. Благодаря эластичности
резиновой пробки вакуум в пробирке полностью сохранится. Измените положение
иглы в вене и снова присоединить пробирку.
Причина 3: Игла прошла сквозь вену (рис.20). В пробирку поступило
небольшое количество крови, потом ток крови прекратился.
Ваши действия: Постепенно вытягивать иглу до появления тока крови. Если
ток крови не возобновился, то снять пробирку и вынуть иглу из вены. Выбрать
другую точку и повторить венепункцию.
Пробирка не заполнилась до указанного на этикетке объема
Причина 1: Коллапс вены (рис. 21). Сначала наблюдается медленный ток
крови, а потом ток крови прекращается.
Ваши действия: Выньте пробирку из держателя, подождите, пока вена
наполнится, и снова вставьте пробирку в держатель.
Причина 2: В пробирку попал воздух (это возможно, если игла с
присоединённой пробиркой находилась вне вены).
Ваши действия: Если кровь забирается в пробирку для исследования
сыворотки без наполнителей и вас устраивает объем набранной крови, то пробу
можно использовать дальше для анализа
Важно!
В случае возникновения обморока или других нестандартных ситуаций с пациентом примите
действия, указанные в Приложении 4. «Критерии немедленного действия».
1. Для предотвращения гематомы у пациента и гемолиза образцов выполняйте действия, указанные в
Приложении 5.
2. Критерии неприемлемости образцов указаны в Приложении 6.
РАЗДЕЛ 02
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ПРЕАНАЛИТИКА
55
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
Практическое руководство по процедуре забора крови у детей и новорожденных. Руководящие
принципы ВОЗ по забору крови: Передовая практика в области флеботомии.
Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
Постановление Правительство № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР» Приказ № 59 от 18.02.2013 «Об
усовершенствовании безопасной системы управления медицинскими отходами в организациях
здравоохранения»
Национальное руководство по лабораторной диагностики ВИЧ – инфекции
Аптечка первой медицинской помощи универсальная противошоковая общего назначения. ТУ
9398-014-85535470-2008.
Вакуумные пробирки VACUETTE для получения сыворотки. Инструкция по использованию.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
56
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 1
Форма направления в лабораторию диагностики ВИЧ
Учреждение-отправитель________________________________________
Направление на исследование крови на наличие ВИЧ/ВГВ (HВsAg)/ВГС/сифилис
Регистрацип/п онный номер
Ф. И. О. пациента
№ пробы в лаборатории
Пол
Год
рождения
Домашний
адрес
Код
контингента
Дата
забора
крови
Результат
исследования
ИФА
ФИО врача, направившего на исследование__________________________________________
ФИО мед. персонала, проводившего забор материала_________________________________
Дата выдачи результата исследования_______________________________________________
Результаты*:
Дата и подпись лабораторного специалиста__________________________________________
_____________________________________________________________________________
* При отрицательном результате ставится штамп лаборатории с отрицательным результатом.
При положительном результате на ВИЧ информация для служебного пользования (ДСП) передается
в эпидемиологический отдел и далее в установленном порядке ДСП врачу-инфекционисту ЦСМ/ГСВ
по месту жительств, либо врачу стационара, направившему на тестирование. При положительном
результате на ВГВ/ВГС/Сифилис в направлении ставится печать по наличию выявленного маркера
(Например: HBsAg – положительный) и передается в ЛПУ, направившему образец.
Приложение 2
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
Марлевые шарики стерильные №10 - 1 уп.
Шприц 2 мл - 2 шт.
Шприц 5 мл - 3 шт.
Шприц 10 мл - 1 шт.
Шприц 20 мл - 4 шт.
Жгут - 1 шт.
Система для капельного вливания - 1 шт.
Перчатки латексные - 1 пара
Раствор Адреналина 0,1% 1 мл №5 - 1 уп.
Раствор Супрастина 2% 1 мл. №5 - 1 уп.
Преднизолон 30 мг/мл 1 мл №3 - 1 уп.
Лазикс 10 мг/1мл 2 мл. №10 - 1 уп.
Коргликард (Корглюкон) 0,06% 1 мл №10 - 1 уп.
Глюкоза 5% 200 мл - 1 уп.
Глюкоза 40% 10 мл №10 - 1 уп.
Метатон 1% раствор 1 мл. № 10 - 1 уп.
Тавегил 0,1% 2 мл. №5 - 1уп.
Эуфиллин 2,4% 5 мл. №10 - 1 шт.
Хлорида натрия раствор 0,9% 100 мл - 1 шт.
Состав противошоковой аптечки
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
57
Приложение 3
Форма регистрационного журнала в процедурном кабинете
п/п
№
Ф. И. О. пациента
Пол
Год
рождения
Домашний
адрес
Код
контин
гента
Время
взятия
крови
Дата отправДата взятия
ки в лаборакрови
торию
ФИО
медработника,
взявшего
кровь
Приложение 4.
МЕРОПРИЯТИЯ НЕМЕДЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯ
1. Обморок.
Прекратите процедуру венепункции, будьте предельно осторожны, чтобы, несмотря на возникшую
ситуацию, осторожно извлечь иглу из вены. Держите стерильную сухую салфетку/тампон на месте
прокола или сразу же наложите повязку.
–– Если пациент сидит, опустите его голову и руки.
–– Ослабьте тесную одежду.
–– Примените нашатырный спирт, давая пациенту вдыхать пары аммиака. Пациент должен
отреагировать кашлем.
–– Если пациент не реагирует, сообщите врачу.
–– Если необходимо, приложите холодные компрессы на лоб и заднюю часть шеи.
–– Предложите выпить несколько глотков холодной воды.
–– Если возможно, уложите пациента и подложите подушку под ноги для облегчения притока крови
к голове.
–– Не позволяйте пациенту уходить, пока он не почувствует себя лучше.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
2. Тошнота.
–– Расположите пациента как можно удобнее.
–– Заставьте пациента дышать глубоко и медленно.
–– Прикладывайте холодные компрессы на лоб пациента (если он согласен).
3. Рвота.
–– Дайте пациенту ёмкость для рвотных масс и приготовьте салфетки.
–– Дайте пациенту воды прополоскать рот.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
4. Судороги.
–– Проследите, чтобы пациент не поранил себя. Не ограничивайте движения пациента полностью,
но пытайтесь предотвратить их повреждение.
–– Вызовите медсестру или врача.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
5. Пациент возражает против сдачи анализов.
–– Не спорьте с пациентом.
–– Сообщите врачу или медсестре о возражениях пациента. Они смогут лучше объяснить пациенту,
почему сдача анализов необходима.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
58
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 5.
1.
2.
3.
4.
5.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
А. Предотвращение появления гематомы
Прокалывайте только верхнюю стенку вены.
Снимайте жгут перед удалением иглы.
Используйте главным образом поверхностные вены.
Удостоверьтесь, что игла полностью проколола верхнюю стенку вены. Неполное прокалывание
может привести к просачиванию крови по ходу скоса иглы в мягкие ткани, окружающие вены.
Когда накладываете повязку, слегка прижмите марлевую салфетку к месту прокола.
Б. Предотвращение гемолиза
Избегайте забора крови из гематомы.
При использовании иглы и шприца не вытягивайте поршень слишком резко.
Избегайте использования иглы слишком маленького калибра.
Чтобы избежать вспенивания, убедитесь, что игла надёжно закреплена на шприце.
Не прикасаясь к выбранному участку прокола, убедитесь, что он сухой.
Медленные “начало и конец” забора крови могут стать причиной гемолиза.
Если игла оказалась слишком маленькой для использованной вены, то по возможности попытайтесь
сделать прокол ещё раз большей иглой.
Приложение 6.
Критерии неприемлемости образцов
Пробирки без соответствующей маркировки.
Пробирки, маркировка которых не соответствует данным в направлении.
Неполные сведения в направлении об обследуемом (нарушение правил заполнения затребованных
лабораторией сведений).
Образцы неудовлетворительного качества, вызванные гемолизом, липемией или бактериальным
проростом. Неприемлемым считается образец, если сквозь него невозможно прочесть напечатанный
текст обычного формата.
Недостаточное количество крови для анализа (менее 3 мл. крови).
Повреждённая или протекающая пробирка.
РАЗДЕЛ 02
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ПРЕАНАЛИТИКА
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Преаналитика
59
СОП № 02-03
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ КРОВИ ИЗ ВЕНЫ С ПОМОЩЬЮ ШПРИЦА ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ
ИССЛЕДОВАНИЙ НА ВИЧ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ФИО – фамилия, имя, отчество
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
HBsAg – поверхностный антиген вируса гепатита В.
ВГС- вирус гепатита С
НАЗНАЧЕНИЕ Обеспечение стандартных условий и требований безопасности при взятии крови из
вены.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Все подготовительные работы проводятся заранее, до начала процедур венепункции: уборка и
кварцевание помещения, подготовка необходимого оснащения, проверка сроков годности шприцев
с иглами. Убедитесь в целостности упаковки со шприцем, что гарантирует его стерильность. Если
она повреждена - не используйте шприц с иглой
Кровь забирает обученный и имеющий профессиональные навыки медицинский персонал в
процедурном кабинете в спокойной обстановке.
Процедурный кабинет должен быть обеспечен водопроводной водой, иметь искусственное и
естественное освещение, естественную вентиляцию.
Стул и стол для пациента должны обеспечить максимальное удобство и безопасность
Кровь забирается в процедурном кабинете в спокойной обстановке
У тяжелобольных кровь забирается в палате стационара.
При взятии образцов крови необходимо следовать универсальным правилам безопасности при
работе с инфекционно опасным материалом.
Перчатки меняются при переходе от одного пациента к другому.
Халат меняется по мере загрязнения, но не реже одного раза в неделю. Должна быть предусмотрена
немедленная смена спецодежды в случае загрязнения её кровью.
Иглоотсекатель должен быть удобно расположен как можно ближе к месту проведения процедуры,
а вставленный в него контейнер для сбора остро-колющих отходов не переполнен
При проведении процедуры отсечения иглы персонал должен быть в перчатках.
60
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
12. Медицинские изделия, применяемые для взятия венозной крови, относятся к отходам класса Б
(опасные (рискованные) отходы). Их сбор, хранение и утилизацию необходимо проводить, соблюдая
установленные санитарно-эпидемиологические правила и нормы, и инструкции, принятые для
организаций здравоохранения Кыргызской Республики.
13. ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
14. Старшая медсестра
15. Медсестра/медбрат
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
34.
МАТЕРИАЛ
Одноразовые резиновые или латексные перчатки.
Маска, защитные очки
Защитная одежда: халат, брюки с курткой, шапочка
Салфетки, пропитанные антисептиком, в заводской упаковке.
Салфетки/тампоны стерильные одноразовые
Шприц 5-кубиковый
Штатив для пробирок
Пробирки центрифужные одноразовые или стеклянные
Одноразовые пластиковые крышки для пробирок
Кресло для венепункции
Подушка для выравнивания локтевого сгиба (при отсутствии кресла для венепункции).
Жгуты кровоостанавливающие одноразовые или многоразовый
Медицинский бактерицидный пластырь
Водостойкий фломастер
Бланк-направление (индивидуальное и посписочное). (Приложение 1)
Ручка шариковая
Аптечка противошоковая (Приложение 2)
Регистрационный журнал (Приложение 3)
Стол для проб крови
Стул для пациента
Кушетка
Стол, стул для медсестры
Шкаф для хранения расходных материалов
Моющее средство для рук
Одноразовое полотенце
Эмалированное ведро со значком «шприца» или пластиковый биологически безопасный контейнер
для сброса контаминированных кровью материалов и перчаток
ОБОРУДОВАНИЕ
Холодильник бытовой.
Бактерицидная лампа.
Иглоотсекатель с вставленным в него специальным контейнером
РЕАКТИВЫ
Нашатырный спирт.
Спирт 700
Дезинфицирующие средства, разрешённые к использованию на территории Кыргызстана
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
61
ИНСТРУКЦИИ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Вымойте и высушите руки согласно стандарту «Мытье рук»
Наденьте защитную одежду.
Пригласите пациента, убедитесь, что взятие крови будет проведено у пациента, указанного в
направлении. Для этого спросите у пациента его имя и фамилию, возраст и/или домашний адрес.
Сравните полученную информацию с указанной в направлении.
Если возникли трудности с идентификацией пациента, позовите сопровождающего или постовую
медсестру и уточните у них паспортные данные пациента.
Для неизвестных пациентов (пациентов без сознания или с сумеречным сознанием) должно быть
присвоено временное, но чёткое обозначение, пока его личность не будет выяснена.
Зарегистрируйте направление в регистрационном журнале и впишите информацию о пациенте в
общий список. Если направление отсутствует, оформите направление.
Подберите и проверьте все приспособления, используемые для взятия крови, удобно расположите
их на рабочем месте.
Возьмите пробирку, с помощью водостойкого фломастера промаркируйте её номером и фамилией,
соответствующими номеру и фамилии пациента в направлении, и поставьте в штатив.
Разместите пациента
a. Процедура для сидящего пациента. Попросите пациента сесть удобно на стул, расположите
руку пациента на подлокотник или стол и вытяните руку так, чтобы получилась прямая
линия от плеча до запястья. Рука должна твёрдо опираться и не должна быть согнута в локте
(рис 1).
Рис. 1
b. Процедура для лежачего пациента. Если необходимо, чтобы пациент лежал, попросите
его лечь на кушетку в удобную позицию. Подложите подушку (если нужна дополнительная
опора) под руку, из которой будет браться кровь. Руку пациента выпрямите, чтобы от плеча
до запястья получилась прямая линия.
Важно! Никогда не берите кровь у стоящего пациента.
10. Наденьте защитные очки, маску, перчатки.
11. Выберите и осмотрите место венепункции. Важно! Избегать участков со следами ожогов и
обширными рубцами, участков мастэктомии, внутривенной терапии и гематом.
–– Пальпируйте и отслеживайте ход вен указательным пальцем несколько раз.
–– Если поверхностные вены трудно обнаружить, можно увеличить приток крови в вену с помощью
массажа руки от запястья к локтю. Резкое лёгкое постукивание несколько раз по выбранному
участку вены указательным и вторым пальцами вызовет расширение вены. Для лучшего
наполнения вены опустить руку ниже уровня подлокотника.
62
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
–– Если видимой вены нет, для венепункции можно использовать вены другой руки или вены кисти
руки.
12. Наложить жгут на 7–10 см. выше от места прокола вены (рис. 2). Важно! Никогда не оставляйте
жгут более чем на одну минуту. Если вам нужно наложить жгут для предварительного выбора
вены, ослабьте его и снова наложите через две минуты.
Рис. 2
13. Обработайте место прокола с помощью стерильной спиртовой салфетки подождите до полного
высыхания асептика (рис. 3)
Рис. 3
14. Выполните венепункцию с помощью шприца:
–– Вставьте подходящую стерильную иглу в шприц. Чтобы убедиться в плавности хода поршня и
надёжности закрепления иглы, подвигайте поршень в пределах цилиндра шприца.
–– Зафиксируйте вену, используя большой палец, твёрдо обхватите руку пациента так, чтобы
натянуть кожу, и фиксируйте вену. Ваш большой палец должен находиться в 2,5-5 сантиметрах
ниже места прокола вены (рис. 4). Важно! Нельзя дотрагиваться до места прокола после
дезинфекции.
Рис. 4
–– Расположите шприц с иглой у вены, выбранной для венопунктуры, под углом примерно 15-20
градусов к поверхности кожи и введите иглу в вену плавным, мягким движением (рис. 5).
Рис. 5
–– Для забора нужного количества крови плавно втягивайте поршень, обеспечивая равномерное
давление и удерживая цилиндр шприца рукой.
15. Ослабьте жгут (рис. 6).
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
63
Рис. 6
16. Приложите сухую стерильную салфетку/ тампон к месту венепункции, медленно извлеките иглу из
вены, сохраняя наклон, в направлении вверх и прижмите место прокола салфеткой до тех пор, пока
кровотечение не остановится.
17. В промаркированную пробирку, стоящую в штативе, выпустите кровь из шприца. Для этого
медленно нажимайте поршень шприца, чтобы снизить риск гемолиза.
18. Сразу после этого отделите иглу от пластиковой части шприца при помощи иглоотсекателя.
Исключением является выполнение инъекций у постели лежачего в палате пациента.
19. После отсечения иглы пластиковая часть шприца сбрасывается в эмалированное ведро со значком
«шприца».
20. Оставшуюся часть шприца поместите в эмалированное ведро со знаком «шприца» или биологически
безопасный контейнер (рис 7).
Рис. 7
21. Не вынимая пробирку из штатива, плотно наденьте одноразовую пластиковую крышку на пробирку.
22. Не встряхивайте пробирку: резкое смешивание может вызвать пенообразование и гемолиз.
23. Убедившись в том, что кровотечение остановилось, наложите бактерицидный пластырь поверх
салфетки. Рекомендуйте пациенту оставить пластырь по крайней мере на 15 минут (рис. 8).
Рис. 8
24. Если кровотечение продолжается дольше пяти минут, медсестра должна сообщить об этом
дежурному врачу или заведующему отделением. Продолжайте прижимать место прокола до тех
пор, пока кровотечение не прекратится.
25. Проведите дезинфекцию использованного оборудования. Убедитесь в хорошем самочувствии
пациента.
26. Утилизируйте надлежащим образом все контаминированные материалы, включая перчатки
27. Выполните гигиену рук.
64
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
28. Храните пробы крови при комнатной температуре (+18 - +25 градусов по Цельсию) не более 2 часов.
При более высокой температуре в помещении и/или необходимости более длительного хранения
необходимо пробы поместить в бытовой холодильник при температуре от +4 до + 8° С не более 24
часов.
Важно! Не допускается замораживание пробирок с кровью, следует избегать попадания на пробирки
прямого солнечного света, резкого встряхивания и воздействия вибрации на пробирки.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Если проба крови не может быть получена
Осторожно измените положение иглы
Если игла введена слишком глубоко в вену, слегка потяните иглу назад.
Если она введена недостаточно глубоко, продвиньте её дальше в вену
Расслабьте жгут, возможно, он затянут слишком туго, что сдерживает поток крови. Наложите жгут
свободнее. Если используется жгут с липучкой, быстро его ослабьте и сразу же закрепите.
Зондирование иглой не рекомендуется, это болезненно для пациента.
В большинстве случаев, если осторожная смена положения иглы не даёт положительного результата,
целесообразно попробовать ещё один прокол вены.
Ограничьте число попыток, если удовлетворяющий требованиям образец крови не был получен
после двух попыток, проконсультируйтесь с другим специалистом и примите решение, сделать ли
ещё одну попытку или отменить процедуру.
Важно!
В случае возникновения обморока или других нестандартных ситуаций с пациентом примите
действия, указанные в Приложении 4 «Критерии немедленного действия».
1. Для предотвращения гематомы у пациента и гемолиза образцов выполняйте действия, указанные в
Приложении 5.
2. Критерии неприемлемости образцов указаны в Приложении 6.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
Практическое руководство по процедуре венопункции для проведения лабораторных анализов.
Руководящие принципы ВОЗ по забору крови: Передовая практика в области флеботомии.
Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
Постановление Правительство № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
Приказ № 59 от 18.02.2013 «Об усовершенствовании безопасной системы управления медицинскими
отходами в организациях здравоохранения»
Методическое руководство «Система управления медицинскими отходами в организациях
здравоохранения Кыргызской Республики». 2-ое издание – Б.: 2012.
Национальное руководство по лабораторной диагностики ВИЧ – инфекции
Аптечка первой медицинской помощи универсальная противошоковая общего назначения. ТУ
9398-014-85535470-2008.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
65
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма направления в лабораторию диагностики ВИЧ
Учреждение отправитель________________________________________
Направление на исследование крови на наличие ВИЧ/ВГВ (HВsAg)/ВГС/сифилис
Регистрационп/п
ный номер пробы
№
в лаборатории
Ф. И. О. пациента
Пол
Год
рождения
Домашний
адрес
Код
контингента
Дата
забора
крови
Результат
исследования
ИФА
ФИО врача, направившего на исследование__________________________________________
ФИО мед. персонала, проводившего забор материала_________________________________
Дата выдачи результата исследования_______________________________________________
Результаты*:
Дата и подпись лабораторного специалиста__________________________________________
_______________________________________________________________________________
*При отрицательном результате ставится штамп лаборатории с отрицательным результатом. При
положительном результате на ВИЧ информация для служебного пользования (ДСП) передается в
эпидемиологический отдел и, далее, в установленном порядке ДСП врачу-инфекционисту ЦСМ/ГСВ
по месту жительств, либо врачу стационара, направившему на тестирование. При положительном
результате на ВГВ/ВГС/Сифилис в направлении ставится печать по наличию выявленного маркера
(Например: HBsAg – положительный) и передается в ЛПУ, направившему образец.
Приложение 2
Состав противошоковой аптечки
Марлевые шарики стерильные №10 - 1 уп.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
Шприц 2 мл - 2 шт.
Шприц 5 мл - 3 шт.
Шприц 10 мл - 1 шт.
Шприц 20 мл - 4 шт.
Жгут - 1 шт.
Система для капельного вливания - 1 шт.
Перчатки латексные - 1 пара
Раствор Адреналина 0,1% 1 мл №5 - 1 уп.
Раствор Супрастина 2% 1 мл. №5 - 1 уп.
Преднизолон 30 мг/мл 1 мл №3 - 1 уп.
Лазикс 10 мг/1мл 2 мл. №10 - 1 уп.
Коргликард (Корглюкон) 0,06% 1 мл №10 - 1 уп.
Глюкоза 5% 200 мл - 1 уп.
66
21.
22.
23.
24.
25.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Глюкоза 40% 10 мл №10 - 1 уп.
Метатон 1% раствор 1 мл. № 10 - 1 уп.
Тавегил 0,1% 2 мл. №5 - 1уп.
Эуфиллин 2,4% 5 мл. №10 - 1 шт.
Хлорида натрия раствор 0,9% 100 мл - 1 шт.
Приложение 3
Форма регистрационного журнала в процедурном кабинете
п/п
№
Ф. И. О.
пациента
Пол
Год
рождения
Домашний
адрес
Код
контингента
Время
взятия
крови
Дата
взятия
крови
Дата отправ- ФИО медраки в лабора- ботника, взявторию
шего кровь
Приложение 4.
МЕРОПРИЯТИЯ НЕМЕДЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯ
1. Обморок.
Прекратите процедуру венопунктуры, будьте предельно осторожны, чтобы, несмотря на возникшую
ситуацию, осторожно извлечь иглу из вены. Держите стерильную сухую салфетку/тампон на месте
прокола или сразу же наложите повязку.
–– Если пациент сидит, опустите его голову и руки.
–– Ослабьте тесную одежду.
–– Примените нашатырный спирт, давая пациенту вдыхать пары аммиака. Пациент должен
отреагировать кашлем.
–– Если необходимо, приложите холодные компрессы на лоб и заднюю часть шеи.
–– Предложите выпить несколько глотков холодной воды.
–– Если возможно, уложите пациента и подложите подушку под ноги для облегчения притока крови
к голове.
–– Если пациент не реагирует, сообщите врачу.
–– Не позволяйте пациенту уходить, пока он не почувствует себя лучше.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
2. Тошнота.
–– Расположите пациента как можно удобнее.
–– Заставьте пациента дышать глубоко и медленно.
–– Прикладывайте холодные компрессы на лоб пациента (если он согласен).
3. Рвота.
–– Дайте пациенту ёмкость для рвотных масс и приготовьте салфетки.
–– Дайте пациенту воды прополоскать рот.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
4. Судороги.
–– Проследите, чтобы пациент не поранил себя. Не ограничивайте движения пациента полностью,
но пытайтесь предотвратить их повреждение.
–– Вызовите медсестру или врача.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
67
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
5. Пациент возражает против сдачи анализов.
–– Не спорьте с пациентом.
–– Сообщите врачу или медсестре о возражениях пациента. Они смогут лучше объяснить пациенту,
почему сдача анализов необходима.
–– Составьте рапорт о случившемся на имя заведующего отделением в произвольной форме.
Приложение 5.
1.
2.
3.
4.
5.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
А. Предотвращение появления гематомы
Прокалывайте только верхнюю стенку вены.
Снимайте жгут перед удалением иглы.
Используйте главным образом поверхностные вены.
Удостоверьтесь, что игла полностью проколола верхнюю стенку вены. Неполное прокалывание
может привести к просачиванию крови по ходу скоса иглы в мягкие ткани, окружающие вены.
Когда накладываете повязку, слегка прижмите марлевую салфетку к месту прокола.
Б. Предотвращение гемолиза
Избегайте забора крови из гематомы.
При использовании иглы и шприца не вытягивайте поршень слишком резко.
Избегайте использования иглы слишком маленького калибра.
Чтобы избежать вспенивания, убедитесь, что игла надёжно закреплена на шприце.
Не прикасаясь к выбранному участку прокола, убедитесь, что он сухой.
Медленные “начало и конец” забора крови могут стать причиной гемолиза.
Если игла оказалась слишком маленькой для использованной вены, то по возможности попытайтесь
сделать прокол ещё раз большей иглой.
Приложение 6.
Критерии неприемлемости образцов
Пробирки без соответствующей маркировки.
Пробирки, маркировка которых не соответствует данным в направлении.
Неполные сведения в направлении об обследуемом (нарушение правил заполнения затребованных
лабораторией сведений).
Образцы неудовлетворительного качества, вызванные гемолизом, липемией или бактериальным
проростом. Неприемлемым считается образец, если сквозь него невозможно прочесть напечатанный
текст обычного формата.
Недостаточное количество крови для анализа (менее 3 мл. крови).
Повреждённая или протекающая пробирка.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
68
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Преаналитика
СОП № 02-04
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: ПРАВИЛА ТРАНСПОРТИРОВКИ И ПЕРЕДАЧИ ОБРАЗЦОВ КРОВИ В
ЛАБОРАТОРИЮ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ФИО – фамилия, имя, отчество
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
НАЗНАЧЕНИЕ
1.
2.
3.
4.
5.
Обеспечение стандартных условий доставки и передачи образцов крови в лабораторию.
ТРЕБОВАНИЕ К ПРОЦЕДУРЕ
До транспортировки пробы с кровью в пробирках для вакуумного забора крови следует
центрифугировать (см. СОП № 02-06).
Допускается хранить пробы с кровью до отправки в лабораторию при температуре +18 +25оС не
более двух часов, в бытовом холодильнике при температуре +4- +10оС не более 48 часов.
При транспортировке образцы должны находиться в контейнерах в вертикальном положении.
Образцы крови транспортируют в плотно укупоренных пробирках.
При транспортировке запрещается оставлять контейнеры с пробами без присмотра.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Старшая медицинская сестра
2. Медицинская сестра
3. Курьер
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
МАТЕРИАЛЫ
Штатив
Перчатки латексные
Маркер перманентный
Сумка-холодильник/контейнер/бикс для транспортировки биообразцов
Хладагенты
Журнал регистрации
Ручка шариковая
Ёмкости для дезинфицирующих растворов
РАЗДЕЛ 02
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ПРЕАНАЛИТИКА
69
ИНСТРУКЦИИ
Перед отправкой проб в лабораторию убедитесь в правильной идентификации образцов:
a. сверьте номер (информацию) на пробирке с информацией, указанной в направлении и
регистрационном журнале.
b. в случае выявленных несоответствий своевременно их устраните.
c. Убедитесь, что все пробы с кровью герметично закрыты. Если кровь взята не в вакуумную
систему, то пробирка должна быть плотно закрыта пластиковой одноразовой крышкой.
Поместите штатив с укупоренными пробирками в сумку-холодильник или другой безопасный
контейнер, предназначенный для транспортировки крови.
Если пробы транспортируются при внешней температуре выше 25°С и/или на далёкое расстояние,
то на дно и по бокам контейнера поместите хладагенты. Контейнер должен быть непротекаемым и
обеспечивать температуру внутри не ниже + 4 и не выше +25о в течение 24 часов с момента забора
крови.
Направления поместите отдельно в полиэтиленовый пакет (файл) и надёжно закрепите снаружи на
крышке сумки-холодильника /контейнера с помощью скотча или передайте в руки курьеру.
Передайте сумку-холодильник/контейнер курьеру.
Транспортируйте кровь в лабораторию. При транспортировке не оставляйте контейнеры с пробами
без присмотра.
В лаборатории передайте штатив с пробами крови и направления сотруднику, ответственному за
приём образцов.
Внимание! Подготовленный и промаркированный образец крови должен быть как можно быстрее
доставлен в лабораторию. Следует иметь в виду, что несоблюдение стандартных условий транспортировки
нарушает сохранность проб, делает невозможным правильное определение концентрации антител и
антигенов к ВИЧ, вирусным гепатитам.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики».
2. Методические рекомендации «Организация преаналитического этапа при централизации
лабораторных исследований», Москва, 2013 г
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
70
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Преаналитика
СОП № 02-05
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ПРИЁМА КРОВИ В ЛАБОРАТОРИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – Республиканский центр СПИД
ИФА – иммуноферментный анализ
НАЗНАЧЕНИЕ:
Обеспечение надлежащих условий приема образцов крови в лабораторию для предотвращения
лабораторных ошибок связанных с их качеством.
3.
4.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Прием образцов крови должен проводиться с соблюдением норм работы с биоматериалом I-II групп
патогенности по Международной классификации.
Образцы должны доставляться в химически обрабатываемом контейнере с крышкой (бикс,
контейнер, сумка-холодильник)
Образцы должны доставляться в вакуумных пробирках для получения сыворотки.
Направления к поступающим образцам должны доставляться в отдельном пакете
Маркировка (номерная или ФИО) на направлении и на образцах должна совпадать
6.
7.
8.
9.
10.
Наличие одноразовых чистых перчаток в биксе курьера.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Заведующий лабораторией
Врач-лаборант
Лаборант
1.
2.
3.
4.
5.
6.
МАТЕРИАЛ
Медицинский халат, перчатки резиновые/латексные
Пустой штатив для приема вакуумных пробирок
Перманентный маркер темного цвета с тонким стержнем
Бракеражный журнал
Журнал регистрации поступивших образцов
Ручка шариковая
1.
2.
РАЗДЕЛ 02
7.
8.
9.
10.
ПРЕАНАЛИТИКА
71
Емкость с ватой или ветошью
Пинцет или корнцанг
Аптечка анти-ВИЧ/СПИД на случай аварийной ситуации
Контейнер для сброса использованных перчаток, ваты и ветоши.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Холодильник бытовой на +2º + 8º С
2. Бактерицидная лампа стационарная или переносная
3. Стол с химически обрабатываемой поверхностью
РЕАКТИВЫ
1. Раствор перекиси водорода 6%
2. Спирт 70°
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
ИНСТРУКЦИЯ
Оденьте халат и перчатки.
Проверьте целостность пробирок и отсутствие пролития крови. В жаркое время – наличие
хладэлементов при транспортировке образцов крови.
Примите пробирки с образцами, переставьте их в штатив.
Проверьте соответствие маркировки проб данным в направлении (данные маркировки на пробирках
и в направлениях должны совпадать).
Проверьте, достаточно ли понятно и ясно нанесена маркировка на пробирку (отсутствие стёртости
номера, ФИО, исправленной маркировки).
Проверьте достаточность объёма поступившего материала
Проверьте состояние пробы (отсутствие гемолиза, липемии, наличие мутности, подозрительной на
наличие бактериального пророста)
Проверьте наличие всей требуемой информации о пациенте в направлении.
Проверьте время взятия пробы в направлении.
При выявлении хотя бы одного несоответствия (Приложение 3), пробу крови забракуйте и
уничтожьте в соответствии с СОП № 09-11 «Правила обеззараживания жидких и твердых отходов».
Информацию о браке занесите в бракеражный журнал (см. Приложение 1), попросите курьера
расписаться в бракеражном журнале.
Внесите информацию о браке в направление для извещения врача и сообщите в эпидемиологический
отдел.
При соответствии образца требуемым условиям присвойте пробе крови лабораторный номер
образца, отметив его на пробирке и в направлении.
Зарегистрируйте образец крови под этим номером в журнале регистрации поступивших образцов
(Приложение 2).
Выделите сыворотку из крови путём центрифугирования (См. СОП № 02-06 «Правила
центрифугирования для выделения сыворотки из крови»).
Образцы сыворотки передайте врачу-лаборанту или лаборанту для проведения лабораторных
исследований.
Поверхность стола для приёма образцов протрите ватным тампоном, смоченным в 70% спирте.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Методические рекомендации «Организация преаналитического этапа при централизации
лабораторных исследований», Москва, 2013 г.
72
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
2. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
ИЗЪЯТО (у кого)
Дата
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма бракеражного журнала
Учреждение
№
отправитель
п/п
образца
Порядковый
номер пробы
отправителя
ФИО, год
рожд, код
данного
пациента по
направлению
ФИО и
Дата и время
роспись
доставки биома- курьера, латериала в лабора- бораторного
торию
специа-листа
Дата забора
биообразца
Причина
брака
Приложение 2.
Форма журнала регистрации материала, поступающего на выявление антител к ВИЧ
Начат______________
Окончен______________
113
112.3
112.2
112.1
112
111
111.1
220
110
219
109
218
108
217
106
215
105
213
104
212
103
210
102
209
101.5
207
101.4
205
101.3
204
101.2
203
101.1
202
201
101
Коды контингента (мужчины/женщины)
120
119
118
117
115
114
Регистрационный
Учрежде- Общее кономер
№
ние
отпра- личество
п/п лаборатовитель
образцов
рии
Приложение 3.
Критерии неприемлемости образцов
1. Пробирки без соответствующей маркировки.
2. Пробирки, маркировка которых не соответствует данным в направлении.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
73
3. Неполные сведения в направлении об обследуемом (нарушение правил заполнения затребованных
лабораторией сведений).
4. Образцы неудовлетворительного качества, вызванные гемолизом, липемией или бактериальным
проростом. Неприемлемым считается образец, если сквозь него невозможно прочесть напечатанный
текст обычного формата.
5. Недостаточное количество крови для анализа (менее 3 мл. крови).
6. Повреждённая или протекающая пробирка.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
74
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Преаналитика
СОП № 02-05
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ СЫВОРОТКИ ИЗ КРОВИ В
ЛАБОРАТОРИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
g – центробежная сила центрифуги
ВЦС – величина центробежной силы
ЛПУ – лечебно-профилактическое учреждение
НАЗНАЧЕНИЕ
Стандартизация условий выделения сыворотки из крови для предотвращения лабораторных
ошибок, связанных с её качеством и обеспечения безопасной работы на центрифуге.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Врач-лаборант
2. Лаборант
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Центрифугирование проводят в лабораторном помещении ЛПУ.
Требуйте от поставщика систем забора крови полной информации о параметрах центрифугирования
пробирок.
Строго соблюдайте параметры центрифугирования, рекомендуемые производителем систем забора
крови
До центрифугирования свежесобранную кровь следует оставить при комнатной температуре (+18º
+25°С) не менее чем на 30 минут для полного образования сгустка.
При центрифугировании вакуумных пробирок с гелем нельзя пользоваться центрифугами с
угловыми роторами, так как часть эритроцитов может попасть в сыворотку. Вакуумные пробирки с
гелем никогда не центрифугируйте повторно.
Для наиболее полного отделения сыворотки обеспечить центрифугирование при температуре не
выше +25оС. Более высокие температуры могут оказывать отрицательное воздействие на физические
свойства геля.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
75
7. Процедура центрифугирования должна быть изложена в виде инструкции на рабочем месте в
зависимости от типа используемой центрифуги.
8. Требования безопасности
9. На центрифуге разрешается работать лицам, достигшим 18 лет, прошедшим обучение, знающим
технику безопасности и руководство по эксплуатации центрифуги.
10. Заземляющий контакт розетки центрифуги должен быть соединён с магистралью защитного
заземления
11. Антисептическую обработку роторов, держателей, штативов центрифуги необходимо проводить
после каждого рабочего цикла (рабочей смены) и всякий раз, когда произошло загрязнение. При
обработке не допускается попадание растворов внутрь (в механизм) центрифуги.
12. В случае подозрения нарушения целостности пробирки с исследуемым материалом следует
немедленно остановить центрифугу, крышку центрифуги откройте не ранее, чем через 40 минут
после остановки ротора.
13. Гнездо с разбитой пробиркой залейте дезинфицирующим раствором (например: 3% Лизоформином
3000 на 30 минут), после чего с помощью пинцета или корнцанга удалите содержимое гнезда и
протрите его спиртовой салфеткой.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
МАТЕРИАЛ
Медицинский халат, перчатки резиновые/латексные
Штатив для вакуумных пробирок
Перманентный маркер темного цвета с тонким стержнем
Емкость с ватой или ветошью
Спиртовые салфетки
Пинцет или корнцанг
Аптечка анти-ВИЧ/СПИД на случай аварийной ситуации
Контейнер для сброса использованных перчаток, ваты и ветоши.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Центрифуга лабораторная на 1000–3000 мин -1 (оборотов в минуту)
2. Стол с химически обрабатываемой поверхностью
РЕАКТИВЫ
1. 3% раствор Лизоформина 3000
2. Спирт 70%
1.
2.
3.
4.
5.
ИНСТРУКЦИЯ
Оденьте халат и перчатки.
Проверьте, все ли центрифужные/вакуумные пробирки одинаковы по весу. Проверьте, все
ли центрифужные/вакуумные пробирки одинаковы по форме и величине (необходимо для
уравновешивания «плечей» ротора центрифуги).
Отберите одинаковые пары пробирок и каждую из них установите в симметричные противоположные
гнезда ротора центрифуги.
При необходимости соблюдения симметрии используйте пробирку с нужным количеством воды в
противоположном гнезде.
Вставьте пробирки в гнёзда для центрифугирования таким образом, чтобы крышка не опиралась на
стенки гнезда центрифуги, иначе она может соскочить с пробирки.
76
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
6. Закройте крышку центрифуги и настройте прибор на нужное время (длительность)
центрифугирования и скорость вращения, необходимую для разделения пробы (см. Приложение 1).
Включите центрифугу.
7. Откройте крышку центрифуги после окончания центрифугирования (после полной остановки
ротора), выньте пробирки, убедитесь в их целостности и поставьте в штатив.
1.
2.
3.
4.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
Методические рекомендации «Организация преаналитического этапа при централизации
лабораторных исследований», Москва, 2013 г.
Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики».
Выбор центрифуги для получения образцов крови в клинико-диагностических лабораториях. http://
www.medlabs.ru/EL/CF.htm
Вакуумные пробирки VACUETTE для получения сыворотки. Инструкция по использованию.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
77
Приложение 1
А. Общие рекомендации по центрифугированию для различных типов пробирок:
Тип пробирки
Центрифужные пробирки
Рекомендуемая
Темпера- величина центура (◦С) тробежной силы
(g)
20
500 - 700
Рекомендуемая скорость
вращения (об/мин; min -1)
при радиусе центрифуги (r)
= 16 см.
Время
(мин.)
1500-2000
10
Вакуумные пробирки
Пробирки без разделительных компонентов
для получения сыворотки
20
1500
2800 - 3000
10
Пробирки с разделительным гелем для
получения сыворотки
25
1800
3200 - 3300
10
Пробирки с разделительными гранулами для
получения сыворотки
20
1800
3200 - 3300
10
Б. Рекомендации по определению относительной центробежной силы для различных типов
пробирок
При выборе оптимальных условий центрифугирования вакуумных пробирок необходимо
ориентироваться на центробежную силу (g), а не на скорость вращения ротора (обороты в
минуту; min.-1). К паспорту центрифуги должна быть приложена таблица, указывающая на
связь между числом оборотов и величиной центробежной силы. Если её нет, расчёт проводят по
следующей формуле:
2
g = 1,118 × 0,00001× r n
где r – радиус центрифуги (расстояние в сантиметрах между осью ротора и центром пробирки в
гнезде центрифуги); n – число оборотов в 1 минуту (min -1).
Пример: g = 1.118 х 0,00001 х 16 см х (4000 х 4000) = 2862 (можно округлить до 2800 об/мин.)
Для промышленно выпускаемых центрифуг в паспорте дана номограмма, по которой проводится
сопоставление оборотов в минуту и величиной центробежной силы (ВЦС или RCF - от англ. relative
centrifuge force – относительная сила центрифугирования) для каждого ротора (рис. 1).
Для определения ВЦС (RCF) необходимо с помощью линейки совместить значения радиуса и числа
оборотов на соответствующих шкалах номограммы и на шкале центробежного ускорения установить
значение g (рис 1).
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
78
Рисунок 1.
Номограмма для расчёта величины g по радиусу и скорости (об/мин) вращения ротора
РАЗДЕЛ 02
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Преаналитика.
ПРЕАНАЛИТИКА
79
СОП № 02-07
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ ОБРАЗЦОВ ВЕНОЗНОЙ КРОВИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ИМУННОГО СТАТУСА (СД4/СД8)
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТАХ
ЭДТА – этилендиаментетраацетат
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СИЗ – средства индивидуальной защиты
ЛПО – лечебно-профилактические организации
СД – кластер дифференцировки
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечить качественный забор венозной крови (цельная кровь) для исследования
процентного и абсолютного числа Т-лимфоцитов.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1.
2.
3.
4.
5.
Соблюдение стандартных условий проведения процедуры.
Соблюдение правил биологической безопасности при работе с материалом 3-4 групп патогенности
(см. СОП № 09-11 Правила обеззараживания жидких и твёрдых отходов)
Соблюдение правил личной и коллективной безопасности на рабочем месте с ВИЧ- инфицированным
биоматериалом.
Использовать педиатрические пробирки с К2 или К3 ЭДТА для взятия крови у детей.
Процедуру забора крови проводят согласно утвержденному в лаборатории диагностики ВИЧ/CПИД
графику постановки анализов.
Важно!: На точность и достоверность результатов оказывают влияние техника взятия крови,
используемые при этом инструменты и расходные материалы.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Заведующий отделением в лечебно-профилактических учреждениях
1. Лечащий врач
2. Старшая медицинская сестра
3. Процедурная медсестра
80
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
МАТЕРИАЛЫ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
Средства индивидуальной защиты:
a. перчатки латексные или резиновые одноразовые соответствующих размеров
b. халат
c. маски
Одноразовая вакуумная система:
Вакуумная система для забора крови с антикоагулянтами К2 или К3ЭДТА
d. двухсторонняя игла
e. иглодержатель.
Штатив для вакутейнеров
Жгут
Салфетки одноразовые спиртовые
Сухая одноразовая стерильная, без спиртовая салфетка
Бактерицидный пластырь или клейкая гипоаллергенная лента
Журнал для регистрации забранного материала (см. приложение 1)
Бланк направления в лабораторию (см. приложение 3)
Биологически безопасный контейнер для использованных инфекционно опасных материалов
Перманентный маркер для маркировки пробирок с образцами
Ручка шариковая
Стул
Стол для пациента
Кушетка
Стол для медсестры
Шкаф для хранения расходных материалов
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Холодильник бытовой при температуре +20С +80С
2. Бактерицидная лампа стационарная или переносная
1.
2.
3.
4.
РЕАКТИВЫ
Раствор перекиси водорода 6 %
Нашатырный спирт (аммиак)
Спирт 70о
Дезинфицирующие средства
ИНСТРУКЦИИ
Внимание! Лечащий врач оформляет направление, определяет условия подготовки пациента
(см. приложение 3).
1. Забор крови производится в процедурном кабинете учреждения из локтевой вены в соответствии
с установленными нормами и осуществляться в вакуумную пробирку: вакутейнер с ЭДТА для
определения СД4/СД8 клеток - цветовой код сиреневый
2. Наденьте специальную одежду средства индивидуальной защиты (СИЗ).
3. Установите личность пациента – его полное имя и дату рождения. Сравните эту информацию с
информацией в направлении.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
81
4. Пациент должен сдавать кровь натощак и до приема лечебных процедур (см. приложение 1). Если в
момент сдачи биоматериала пациент принимает лекарственные препараты (антибиотики, гормоны),
сделайте в направлении пометки о приеме лекарств.
5. Промаркируйте вакуумную пробирку номером и фамилией пациента в соответствии с направлением.
6. Информируйте пациента о процедуре взятия венозной крови
Процедура для сидящего пациента: усадите пациента на стул, расположите руку пациента на
подлокотник или стол так, чтобы получилась прямая линия от плеча до запястья. Рука должна твёрдо
опираться и не должна быть согнута в локте.
Процедура для лежачего пациента: уложите пациента на кушетку в удобную позу. Подложите
подушку для забора крови под руку. Руку пациента выпрямите, чтобы от плеча до запястья получилась
прямая линия.
Важно! Никогда не берите кровь у стоящего пациента.
7. Обработайте руки согласно стандарту «Обработки рук» и оденьте перчатки.
8. Выберите место венепункции.
Важно! Избегать участков со следами ожогов и обширными рубцами, участков мастэктомии и
внутривенной терапии, гематом.
9. Пальпируйте и отслеживайте ход вен указательным пальцем несколько раз.
10. Если поверхностные вены трудно обнаружить, можно увеличить приток крови в вену с помощью
массажа руки от запястья к локтю. Резкое лёгкое постукивание несколько раз по выбранному участку
вены указательным и вторым пальцами вызовет расширение вены. Для лучшего наполнения вены
опустить руку ниже уровня подлокотника.
11. Если видимой вены нет, для венепункции можно использовать вены другой руки или вены кисти
руки.
12. Наложить жгут на 7–10 см выше от места прокола вены
13. Важно! Никогда не оставляйте жгут на руке более чем на одну минуту. Если вам нужно
наложить жгут для предварительного выбора вены, ослабьте его и снова наложите через две
минуты.
14. Обработайте место венепункции с помощью стерильной спиртовой салфетки и подождите до
полного высыхания асептика
15. Зафиксируйте вену, используя большой палец, твёрдо обхватите руку пациента так, чтобы натянуть
кожу, и фиксируйте вену. Ваш большой палец должен находиться в 2,5-5 сантиметрах ниже места
прокола вены.
16. Выполните венепункцию с помощью вакуумной системы.
17. Снимите жгут.
18. Возьмите иглу и снимите с неё защитный колпачок со стороны, закрытой резиновой мембраной.
19. Вставьте иглу в иглодержатель и завинтите до упора.
А.
В.
82
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
20. Снимите защитный колпачок со второй стороны иглы.
21. Расположите иглу у вены под углом примерно 15 градусов к поверхности кожи и введите иглу в
вену плавным, мягким движени
D
E
22. Вставьте заранее приготовленную пробирку с ЭДТА в иглодержатель до упора и удерживайте её,
пока кровь не перестанет поступать в пробирку. При этом игла прокалывает резиновую мембрану
и резиновую заглушку в крышке пробирки.
23. Кровь проходит в пробирку, пока не компенсирует созданный в пробирке вакуум (если кровь
не идет — это значит, что игла прошла вену насквозь или уперлась в стенку вены — в этом случае
нужно немного вытянуть иглу (но не вынимать!), пока кровь не пойдёт в пробирку).
G
I
24. Для визуального контроля уровня заполнения на этикетке имеется метка. Вакуумные пробирки
при правильном взятии самопроизвольно заполняются до нужной метки.
25. Извлеките пробирку из держателя.
26. При использовании вакутейнера с ЭДТА после взятия крови пробирку следует плавно 8 раз
перевернуть вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом и
активатором свёртывания. После плавного перемешивания пробирку поместить в штатив.
27. Поместите пробирку в штатив.
28. Пробирки нельзя встряхивать - это может вызвать пенообразование и гемолиз, а так же привести к
механическому лизису эритроцитов.
29. Наложите сухую салфетку, медленно извлеките иглу из вены, сохраняя наклон, в направлении вверх
и прижмите место прокола салфеткой до тех пор, пока кровотечение не остановится.
30. Убедившись в том, что кровотечение остановилось, наложите бактерицидный лейкопластырь.
Рекомендуйте пациенту оставить лейкопластырь, по крайней мере, на 15 минут.
31. Если кровотечение продолжается дольше пяти минут, медсестра должна сообщить об этом
дежурному врачу.
32. Важно! Время доставки биоматериала в лабораторию не должно превышать 24 часа от
момента забора крови.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
83
33. Использованные расходные материалы поместите в биологически безопасный контейнер для
утилизации.
34. Зарегистрируйте образцы в регистрационный журнал (см. приложение 2).
35. Заполняйте направление для отправки в лабораторию (см. приложение 3).
36. Образцы крови для исследования на CD4/CD8 хранятся в соответствии с требованиями приложения
4.
РУКОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
Национальное руководство по лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции
1. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
ИЗЪЯТО (у кого)
Дата
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Подготовка пациента для сдачи крови на маркеры СД4/СД8
Для исследования кровь забирают после 12-часового голодания.
Накануне дня сдачи крови пациент должен воздержаться от употребления алкоголя, жирной,
обильной пищи, чрезмерной физической нагрузки,
При проведении пациенту внутривенных вливаний взятие крови проводят на другой руке.
Если у больного наблюдается простуда или герпетическая инфекция, сдачу крови не проводят.
Не проводят забор крови у пациентов в пятницу или накануне праздников, т.к. график работы
лаборатории меняется.
Приложение 2
Форма регистрационного журнала в процедурном кабинете медицинского учреждения
п/п
№
Дата
Код
ДомашФ. И. О. пациента Пол рождеконтинний адрес
ния
гента
Время
взятия
крови
Дата взятия крови
Дата отправкив лабораторию
ФИО медработника,
взявшего
кровь
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
84
Приложение 3
5.1.4 Направление и результаты определения процентного и абсолютного числа Т лимфоцитов
(хелперов CD4 (+) и киллеров / Цитотоксические Т - клетки CD8 (+)) методом проточной
цитометрии.
Учреждение отправитель_ _____________________________________________________________
Ф.И.О. пациента______________________________________________________________________
Дата рождения__________ пол__________________ Домашний адрес__________________________
Дата и время забора биоматериала_ _____________________________________________________
Дата и время доставки в лаборатории____________________________________________________
Особые пометки______________________________________________________________________
Ф.И.О. врача, направившего на исследование_ ____________________________________________
Ф.И.О. лица, принявшего материал______________________________________________________
Регистрационный лабораторный номер образца_ __________________________________________
№
п/п
CD-маркеры лимфоцитов
%
1
Дети
Результаты исследованной
крови
клеток в мкл
CD 4(+)
Т-хелперы
Взрослые
1 год - 6 лет
7 -17 лет
%
клеток в
мкл
%
клеток в
мкл
%
клеток в
мкл
30-40
10001840
39-47
830-2110
33-50
600-1700
25-32
810-1520
23-29
490-1300
16-39
300-1000
CD 8(+)
2
4
Цитотоксические Т клетки
Абс. число
лимфоцитов
1300-7200
Иммунно-регулятор.
индекс (Th/Tc)
1000-1600
720-3150
1400-2000
1500-2000
Дата и подпись лабораторного специалиста_ ____________________________________________
Приложение 4
Исследование
Количество CD4
лимфоцитов
Объем
крови
Пробирка с
ЭДТА
Хранение с момента взятия цельной крови:
2-6 мл
Пробирку с кровью, не
вспенивая, аккуратно
перемешать
8 раз.
Транспортировка при температуре +20С +80С.
Хранение и транспортировка
2 часа темп. +180С +250С
24 часа темп. +20С +80С
Дата и подпись лабораторного специалиста_ ____________________________________________
РАЗДЕЛ 02
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Преаналитика.
ПРЕАНАЛИТИКА
85
СОП № 02-08
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗНАЧЕНИЕ ПРАВИЛА УПАКОВКИ И ТРАНСПОРТИРОВКИ ОБРАЗЦОВ КРОВИ В
ЛАБОРАТОРИЮ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ИММУННОГО СТАТУСА МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ
ЦИТОМЕТРИИ.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТАХ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СД – кластер дифференцировки
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОЦПБС – областной центр СПИД по борьбе со СПИДом
ЛПО – лечебно-профилактические организации
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение стандартных условий доставки образцов крови в лабораторию для исследования на
маркеры СД4/СД8,
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Допускается хранение пробы при комнатной температуре (+ 180C +250C) не более 2 часов. При
более длительном хранении необходимо поместить пробы в бытовой холодильник (+20C +80C).
Время доставки пробы в лабораторию не должно превышать 24 часа от момента забора.
2. При транспортировке образцы должны находиться в контейнерах/сумках-холодильниках строго в
вертикальном положении.
3. Образцы не должны оказываться под воздействием температур выше +250C или ниже +20C, при
которых они могут быть заморожены или перегреться.
1.
2.
3.
4.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Врач-клиницист, направивший на исследование
Старшая медсестра
Процедурная медсестра
Курьер
1.
2.
3.
4.
МАТЕРИАЛЫ
Вакуумные пробирки с исследуемыми образцами
Контейнер с крышкой или сумка-холодильник
Заполненный бланк направления
Пакет с зип-застежкой
86
5.
6.
7.
8.
9.
1.
2.
3.
4.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Одноразовые медицинские перчатки
Хладагенты
Штатив для пробирок
Ёмкости для дезинфицирующих растворов
Сорбирующий материал (вата, салфетка и др.)
ИНСТРУКЦИИ
Упакуйте пробы в соответствии с требованиями безопасной тройной упаковки
Безопасная тройная упаковка и транспортировка биоматериала в лабораторию.
Поместите вакуумные пробирки с образцами в закрывающийся пластиковый пакет с зип-застежкой,
подходящего размера вместе с небольшим количеством любого адсорбирующего материала, Н:
вата, салфетка и др. (см. рисунок 1).
В случае транспортировки большого числа биообразцов поместите вакуумные пробирки с
образцами в штатив.
Пластиковый пакет/штатив необходимо поместить в сумку-холодильник или контейнер.
Два или более образца от одного пациента могут быть упакованы совместно в один пластиковый
пакет большего размера.
Важно! Не допускается упаковка образцов крови от разных людей в один и тот же пакет
Рисунок 1. Двойная упаковка образцов крови в пакете с адсорбентом
Укупоренный пластиковы й пакет
клейкая лента
Пробирка с завинчиваю щейся кры ш кой
биоматериал
Адсорбирую щ ий материал
Укупоренный пластиковы й пакет
Образцы от одного больного
5. Внутри сумки-холодильника сделайте дополнительные прокладки между вторичными контейнерами
из любого подходящего материала для того, чтобы пробирки прочно стояли и не могли случайно
опрокинуться во время транспортировки (см. рисунок 2).
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
87
Рисунок 2 Тройная упаковка образцов крови
Крышка
Контейнер/ сумка-холодильник
Герметично упакованные пакеты с
образцами
Адсорбирующий материал
6. В летний период времени в сумку-холодильник/контейнер вложите замороженные хладагенты
вокруг упаковки с образцами.
7. Важно! Запрещается перевозить пробирки с кровью в личных пакетах, сумках и др. предметах
личного обихода!!!
8. Поместите направления в пакет с зип-застежкой/файл и передайте курьеру для последующей
транспортировки в лабораторию вместе с сумкой-холодильником/контейнером с образцами.
9. Транспортируйте пробы в лабораторию (см. Приложение 1).
Важно! При транспортировке не оставляйте контейнеры с пробами без присмотра.
10. В лаборатории передайте сумку-холодильник/контейнер с пробами крови и направления
лабораторному сотруднику (строго!), ответственному за приём образцов.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
2. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
3. Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
88
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 1
Адреса лабораторий, проводящих исследования на маркеры СД4/СД8:
1. Референс-лаборатория РЦ «СПИД»:
г. Бишкек, ул. Логвиненко 8, 5 этаж.
Контактные телефоны: раб 996 (312) 300434, 301083
2. Лаборатория диагностики СПИД Жалалабатской ОЦПБС
г. Жалалабад, ул. Курортная 57
Контактные телефоны: раб. (03722) 26588
3. Лаборатория диагностики СПИД Ошской ОЦПБС
г. Ош, пер. Моминова 10
Контактные телефоны: раб (03222) 77149.
РАЗДЕЛ 02
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Преаналитика.
ПРЕАНАЛИТИКА
89
СОП № 02-09
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ПРИЕМА И РЕГИСТРАЦИИ ОБРАЗЦОВ КРОВИ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ
ИССЛЕДОВАНИЙ МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ СД4/СД8.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТАХ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД - синдром приобретенного иммунного дефицита
СД – кластер дифференцировки
ОЦПБС – областной центр по борьбе со СПИДом
ЭДТА – этилендиаментетраацетат
ЛПО – лечебно-профилактические организации
ПЦ – проточной цитофлюориметрия
АРВТ – антиретровитусная терапия
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение стандартных условий при приеме образцов крови в лаборатории
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Соблюдение правил биологической безопасности
2. Соблюдение правил личной и коллективной безопасности на рабочем месте с ВИЧ- инфицированным
биоматериалом.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Зав. лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборант
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
МАТЕРИАЛЫ
Средства индивидуальной защиты (перчатки латексные, халат, маски/очки.)
Штатив для вакуумной пробирки
Вакуумные пробирки с ЭДТА с цельной кровью
Перманентный маркер
Емкость для обеззараживания использованных расходных материалов
Заполненный бланк-направление (см. приложение 1)
Регистрационный лабораторный журнал (см. приложение 2)
90
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
8. Ручка
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Холодильник бытовой при температуре +20С +80С
2. Бактерицидная лампа стационарная или переносная
РЕАКТИВЫ
1. Раствор перекиси водорода 6%
2. Спирт 700
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
ИНСТРУКЦИИ
Откройте контейнер /сумку-холодильник, проверьте правильность и целостность упаковки,
соблюдение холодового режима транспортировки образцов крови.
Проверьте полноту представленной в направлении информации (см. приложение 1)
Номер на пробирке и фамилия пациента должны совпадать с данными в направлении.
Проверьте соответствие образца крови требованиям, предъявляемым к данному виду исследований.
При соблюдении всех условий зарегистрируйте образец в регистрационном лабораторном журнале
(см. приложение 4). Присвойте регистрационный лабораторный номер пробирке и направлению
(см. приложение 1).
Передайте биоматериал в лабораторию проточной цитометрии (ПЦ) для исследования.
О доставке биоматериала сообщите сотруднику, ответственному за проведение исследований.
При выявлении несоответствий биоматериала требованиям по приложению № 2 биоматериал
считайте забракованным.
Информацию о забракованном биоматериале внесите в бракеражный журнал (см. приложение 3).
Забракованные образцы крови обеззаразьте и утилизируйте согласно СОП № 09-11 «Правила
обеззараживания жидких и твёрдых отходов».
Информируйте курьера о браке, курьер расписывается в бракеражном журнале.
Передайте информацию о браке образца сотруднику диспансерного отдела под роспись в
бракеражном журнале.
После приема биоматериала поверхности рабочего стола обработайте 70% спиртом.
Проведите сброс отработанных расходных материалов в контейнер и передайте на автоклавирование.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
2. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
3. Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
91
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Направление и результаты определения процентного и абсолютного числа Т-лимфоцитов
(хелперов CD4 (+) и киллеров / Цитотоксические Т - клетки CD8 (+)) методом проточной
цитометрии.
Учреждение-отправитель_________________________________________________________
Ф.И.О. пациента_________________________________________________________________
Дата рождения______ пол____________Домашний адрес_______________________________
_______________________________________________________________________________
Дата и время забора биоматериала_ ________________________________________________
Дата и время доставки в лаборатории_______________________________________________
Особые пометки_________________________________________________________________
Ф.И.О. врача, направившего на исследование_ _______________________________________
Ф.И.О. лица, принявшего материал_________________________________________________
Регистрационный лабораторный номер образца_ _____________________________________
Результаты исследованной крови
№ CD-маркеры лимфоп/п
цитов
%
1
CD 4(+)
Т-хелперы
клеток в
мкл
Дети
Взрослые
1 год - 6 лет
7 -17 лет
%
клеток
в мкл
%
клеток
в мкл
%
клеток
в мкл
30-40
10001840
39-47
830-2110
33-50
600-1700
25-32
810-1520
23-29
490-1300
16-39
300-1000
CD 8(+)
2
Цитотоксические Т клетки
3
Абс. число
лимфоцитов
1300-7200
4
Имунно-регулятор.
индекс (Th/Tc)
1000-1600
720-3150
1400-2000
1500-2000
Дата и подпись лабораторного специалиста_ ____________________________________________
Приложение 2
1.
2.
3.
4.
5.
Образцы, не подлежащие тестированию:
Образцы, доставленные с нарушением температурного режима транспортировки
Доставленные позже 24 часов от момента забора крови.
Гемолизированные образцы крови
Образцы, содержащие сгустки
Не сопровождаемые направлением или имеющие несоответствие информации на пробирке и в
направлении
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
92
6. Пробирки со стертым номером, ФИО, годом рождения и исправленной маркировкой
7. Приложение 3
Форма бракеражного журнала.
№ пробы
№
Учреждение
и данные о
п/п
отправитель
пациенте
Дата
забора
крови
Дата доставки образца в
лабораторию
Ф.И.О. курьера/
проводившего забор
крови
Причина
брака
Роспись курьера/
лабораторного
сотрудника
Приложение 4
Журнал регистрации поступающего биоматериала на ПЦ и результатов определения маркеров
СД4/СД8
№
п/п
Учреждение
отправитель
биоматериала.
РегистрациФ.И.О.
онный лаб.
Дата
Пол
№ образца рождения
Дата
доставки
биоматериала
Результаты исследования
Дата постановки
Примечание
анализа СД 4 СД 8 ИРИ АЧЛ
РАЗДЕЛ 02
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Экспресс тестирование.
ПРЕАНАЛИТИКА
93
СОП № 02-10
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ УПАКОВКА, ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВКА БИООБРАЗЦОВ ПРИ ПЕРВИЧНО
ПОЛОЖИТЕЛЬНОМ РЕЗУЛЬТАТЕ ЭКСПРЕСС- ТЕСТИРОВАНИЯ.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОЦПБС – областной центр борьбы со СПИД.
СИЗ – средства индивидуальной защиты.
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение качества подготовки, упаковки и транспортировки первично положительных образцов.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
При получении первично положительного результата экспресс-тестирования произведите забор
крови (см. СОП№ 02-01 или № 02-03) и транспортируйте образец в ОЦПБС для подтверждения
результата методом ИФА.
Образцы крови первично положительных при экспресс-тестировании доставляются в лабораторию
ОЦПБС при температуре не выше + 25°С в течение 48 часов после повторного взятия крови и не
позже 14.00 ч. следующих суток.
Выполняйте все требования по технике безопасности при работе с биоматериалом.
Держите сумку-холодильник с биообразцами строго в вертикальном положении.
Не оставляйте сумку-холодильник с биообразцами без присмотра.
Не вскрывайте сумку-холодильник и упаковку биообразцов.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий отделением
2. Процедурная медсестра.
3. Курьер
МАТЕРИАЛЫ
1. Медицинский халат, очки, маска.
2. Перчатки медицинские одноразовые.
3. Пластиковый пакет
94
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
4. Маркер перманентный с тонким стержнем.
5. Хладагенты
6. Сумка-холодильник
РЕАКТИВЫ
1. 70° этиловый спирт.
2. Сосуд с 6% раствором перекиси водорода.
ИНСТРУКЦИИ
1. После того, как результаты экспресс-тестов зарегистрированы в журнале, перенесите пробирки с
положительными образцами в отдельный штатив.
2. Перед отправкой проб в лабораторию убедитесь в правильной идентификации образцов:
a. сверьте номер (информацию) на пробирке с информацией, указанной в направлении и
регистрационном журнале.
b. в случае выявленных несоответствий своевременно их устраните.
c. Убедитесь, что все пробы с кровью герметично закрыты. Если кровь взята не в вакуумную
систему, то пробирка должна быть плотно закрыта пластиковой одноразовой крышкой.
3. Поместите штатив с закрытыми пробирками в сумку-холодильник или другой безопасный
контейнер, предназначенный для транспортировки крови.
4. Если пробы транспортируются при температуре выше 25°С и/или на далёкое расстояние, то
в контейнер поместите хладагенты. Контейнер должен быть непротекаемым и обеспечивать
температуру внутри в пределах +15 +20°С.
5. Направления поместите отдельно в полиэтиленовый пакет (файл) и надёжно закрепите снаружи на
крышке сумки-холодильника /контейнера с помощью скотча или передайте в руки курьеру.
6. Передайте сумку-холодильник/контейнер/бикс курьеру.
7. Транспортируйте кровь в лабораторию. При транспортировке не оставляйте контейнеры с пробами
без присмотра.
8. В лаборатории передайте штатив с пробами крови и направление сотруднику, ответственному за
приём образцов.
9. Взамен получите штатив с чистыми пробирками, поместите его в сумку-холодильник/контейнер/
бикс и доставьте в пункт забора крови.
Внимание! Подготовленный и промаркированный образец крови должен быть как можно
быстрее доставлен в лабораторию. Следует иметь в виду, что несоблюдение стандартных условий
транспортировки нарушает сохранность проб и затрудняет правильное определение антител и антигенов
к ВИЧ и вирусным гепатитам.
1.
2.
3.
4.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
Руководство по экспресс-тестированию.
Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ- инфекции.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
95
ФИО
//
//
//
МЖ
МЖ
Дата Постановки
теста
МЖ
Пол
Код контингента
Наимен-ие
теста 1
Срок годности.
Наимен-ие
теста 2
Срок годности
Наимен-ие
теста 3
Срок годности
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
Результат
(обвести
кружком)
+ -Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
ПолоОтриц-й
жит-й
ВЛК
ВЛК
(обвести)
(обвести)
Подпись
операто- Примечание
ра
Подпись Руководителя______________________
Всего положительных
Всего отрицательных
Всего недействительных
Всего
* - Недействительный результат теста. Результат считается недействительным, если не окрашивается контрольная полоска на тесте. Вне
зависимости от того, окрасилась ли полоска пациента или нет. Если результат недействителен, зарегистрируйте его в журнале и повторите тест.
№
Год
рождения
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования.
Приложение 1
96
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
97
Приложение 2.
Форма направления в лабораторию для исследования на ВИЧ
Учреждение отправитель_ ________________________________________________________
Направление №___________на исследование крови на наличие антител / антигенов к ВИЧ.
п/п
№
Регистрационный лабораторный №
образца
Ф. И. О. пациента
Пол
Год
рождения
Домашний адрес
Код контингента
Результат исследования
Особые пометки_________________________________________________________________
Дата забора________________________ Время забора_ ________________________________
Ф.И.О. врача, направившего на исследование_ _______________________________________
Дата доставки в лабораторию__________________________________________________ 20___г.
Ф.И.О. лица, принявшего материал_________________________________________________
98
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Преаналитика
СОП № 02-11
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: ЗАБОР ОБРАЗЦОВ СУХОЙ КАПЛИ КАПИЛЛЯРНОЙ КРОВИ (СККК) ДЛЯ РАННЕЙ
ДИАГНОСТИКИ ВИЧ У НОВОРОЖДЕННЫХ И ДЕТЕЙ (ПО КП ЗАБОР КРОВИ НАЧИНАЮТ С 48
ЧАСОВ ЖИЗНИ И НЕ ПОЗДНЕЕ 4-6-НЕДЕЛЬНОГО ВОЗРАСТА)
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ФИО – фамилия, имя, отчество
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
СККК - сухая капля капиллярной крови
УФО - ультрафиолетовое облучение
СИЗ - средства индивидуальной защиты
НАЗНАЧЕНИЕ
СОП описывает последовательность действий, обеспечивающих качественный забор капиллярной
крови у детей и новорожденных для приготовления образцов сухой капли.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Все образцы считаются потенциально инфекционным материалом, представляющим биологическую
опасность. Медперсонал при заборе образцов СККК должен соблюдать универсальные меры
предосторожности в соответствии с правилами техники безопасности при работе с инфекционным
материалом III группы патогенности.
Персонал, занимающийся сбором образцов СККК, должен быть обеспечен надлежащими СИЗ перчатки, медицинские халаты.
По окончании работы СИЗ и медицинские отходы должны пройти надлежащую обработку согласно
Постановлению № 32 от 12.01.2012 года.
Персонал, занятый сбором образцов СККК, должен пройти обучение по забору СККК и освоить все
процедуры данного метода.
Персонал, должен выполнять все действия, описанные в настоящей СОП, для обеспечения качества
образцов СККК.
Вся информация о пациентах должна оставаться конфиденциальной.
Матерям пациентов должно быть заранее разъяснено назначение процедуры и получено письменное
информированное согласие, составленное надлежащим образом.
Все собранные образцы СККК должны быть документально зарегистрированы, перевезены и
переданы ответственному лицу в лаборатории.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
99
9. Не брать кровь из пальцев рук у новорожденных и у детей до 10 кг веса, поскольку их пальцы
слишком маленькие.
10. Не следует прокалывать подушечки пальца, поскольку она слишком чувствительная.
11. Соблюдайте технику безопасности (надлежащее уничтожение использованных ланцетов, применение
одноразовых ланцетов, осторожность при обращении со всеми предметами, контактирующими с
образцами крови).
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Врач-эпидемиолог
2. Врач-клиницист
3. Медсестра
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
МАТЕРИАЛЫ
Ручка
Средства индивидуальной защиты - перчатки, медицинские халаты
Специальная карта из фильтровальной бумаги (типа «Whatman» или «Schleicher and Schuell Grade
903 Filter Paper»). На бумаге пунктиром обозначены кружки, которые заполняются кровью. Могут
содержать примерно 70 мкл крови.
Спиртовые салфетки
Безопасный одноразовый стерильный ланцет
Направление для лабораторного исследования
Одноразовые латексные перчатки для сотрудника, проводящего забор крови
Пакеты с зип-замком для фильтровальной бумаги
Емкости для утилизации колюще-режущих предметов и медотходов
РЕАГЕНТЫ
Дезинфектант, разрешённый к применению на территории КР
ИНСТРУКЦИЯ
Подготовка фильтровальной бумаги
Возьмите лист фильтровальной хроматографической бумаги типа « Whatman» или «Schleicher and
Schuell Grade 903 Filter Paper» (см рис.1)
Рис.1 Фильтровальная бумага для сбора СККК
1. Извлеките карту из защитной упаковки непосредственно перед использованием, чтобы избежать
воздействия влаги и УФ-света. Не используйте карту, если упаковка вскрыта, повреждена или если
индикатор влажности карты изменил цвет, что указывает на влажные условия.
2. Заполните карту ручкой, внесите ФИО, дату рождения, пол ребенка и дату забора крови.
100
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
3. Определите место забора крови у ребенка. При невозможности забора крови из пятки необходимо
указать в карте место забора и причину изменения места забора.
4. Держите карту за утолщенный край картона и не прикасайтесь к области взятия образцов с
напечатанными кругами.
5. Не используйте йодсодержащие дезинфицирующие средства.
1.
2.
3.
4.
5.
1.
Правила взятия образцов
крови
Наденьте халат и одноразовые перчатки
Подготовьте рабочую поверхность стола к работе (уберите все ненужные предметы).
Обработайте рабочую поверхность стола 70° этиловым спиртом
Убедитесь, что пациент сидит удобно. Грудного ребенка родители должны держать осторожно, но
надежно ограничить его движение.
При заборе крови из пальца/большого пальца или пятки у новорождённых и детей:
Выберите место пункции. Прокол для забора образца крови проводится в мягкую часть дистальной
фаланги IV или III пальца левой руки сбоку от подушечки пальца на расстоянии около 3 мм от
ногтевого ложа (рис.2).
Рис.2 Место забора образца крови из пальца
2. Попросите родителя или ассистента расслабить кисть ребенка, выпрямить палец.
3. Расположите руку пациента ладонной поверхностью вверх. Выберите безымянный палец
4. Обработайте палец спиртовой салфеткой (рис.3.)
Рис.3 Обработка пальца спиртовой салфеткой
5. Дайте коже высохнуть.
6. Поверните защитный колпачок на безопасном ланцете.
7. При заборе крови из пальца слегка надавливайте своим большим и указательным пальцем на палец
пациента от сустава к подушечке. Это стимулирует приток крови к месту прокола.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
101
8. Аккуратно надавив большим пальцем на подушечку пальца пациента, поместите ланцет сбоку от
подушечки (рис.4)
Рис.4 Прокол пальца ланцетом
9. Аккуратно прижмите ланцет к пальцу и надавите на поршень. Поршень активирует иглу, которая
прокалывает кожу на глубину 2,25 мм и возвращается обратно в футляр.
10. После использования сбросьте ланцет в безопасный контейнер (рис.12).
11. Удалите первую каплю крови с помощью чистой сухой марлевой салфетки, что стимулирует
вытекание крови (рис.5).
Рис.5 Удаление первой капли крови
12. Опустите палец местом прокола вниз. При необходимости слегка надавливайте на палец до
появления следующей капли крови. Избегайте выдавливания крови.
13. Капните по капле крови на каждый кружок, очерченный на фильтровальной бумаге (рис.6.).
Рис.6 Нанесение капель крови на фильтровальную бумагу
14. Заполните кровью все кружки. Убедитесь, что кровь полностью пропитала бумагу по всей
поверхности кружка
15. Не прижимайте фильтровальную бумагу к месту прокола кожи.
102
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
16. При заборе крови из большого пальца ноги и пятки у детей и новорожденных:
17. У детей от 4-х до 10 месяцев (более 10 кг) взятие крови проводите из большого пальца ножки (рис
7,8,9).
Рис.7,8,9 Места забора крови у детей из большого пальца ножки.
18. У детей до 4-х месяцев жизни проводите забор капиллярной крови из пятки (10,11).
Рис.10,11 Места забора крови из пятки у детей
При невозможности забора крови из пятки необходимо указать в направлении и в фильтровальной бумаге
место забора и причину изменения места забора.
19. Согрейте место взятия крови. Обработайте место прокола на пятке спиртовой салфеткой, высушите
кожу стерильной марлей. Придерживайте пятку и проколите кожу
20. Прокол рекомендуется проводить с латерального или медиального края (рис.9,10).
21. Стерильным ланцетом сделайте прокол.
22. Вытрите первую каплю крови стерильной салфеткой. Дождитесь, пока сформируется вторая
большая капля крови.
23. Слегка коснитесь капли крови центром первого круга на фильтровальной бумаге. Дождитесь, пока
кровь пропитает и полностью заполнит круг с первого раза.
24. Наносите кровь только на одну сторону фильтровальной бумаги.
25. Нанесите только одну каплю крови на каждый круг на фильтровальной бумаге. Убедитесь, что кровь
покрывает всю площадь круга и пропитывает обе стороны фильтровальной бумаги. Для каждого
образца выделяется одна карточка.
26. Не помещайте в один круг более одной капли крови.
27. Для выполнения анализа требуется заполнить все кружки на фильтровальной бумаге.
28. Внимание! Взятие образцов СКК может быть выполнено вместе с другими стандартными анализами
крови. При приготовлении СКК можно использовать как капиллярную, так и венозную кровь.
1. Для остановки крови придавите участок прокола стерильной спиртовой салфеткой.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
103
2. Не накладывайте лейкопластырь на место прокола у младенцев и детей, так как он может отклеиться
и ребенок может его проглотить.
3. Все отработанные материалы сбросьте в контейнер для биологически опасных отходов (рис.12,13).
Рис.12,13 Контейнер для безопасной утилизации колюще-режущих и медицинских отходов
1.
2.
3.
4.
5.
Внимание!
Никогда не превышайте глубину пункции в 2.0 мм.
Никогда не прокалывайте задний изгиб пятки или свод стопы.
Никогда не используйте участки, на которых имеются предыдущие проколы, синяки, воспаление
или краснота.
Никогда не прокалывайте место забора крови более двух раз
Критерии брака образцов СККК:
В случае, если образец не пропитал кровью фильтровальную бумагу насквозь (рис.14,15)
Рис. 14,15 Несоответствие образца СККК (вид спереди и сзади фильтровальной бумаги)
1. Когда несколько капель нанесены одна поверх другой.
2. Когда капли недостаточно хорошо просушены (при этом цвет капли крови остается ярко красным,
а не коричневатым).
3. Когда присутствуют сгустки крови, неаккуратные или размытые капли крови, обесцвеченные капли
крови (рис.16)
104
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Рис.16 Виды брака образцов СККК
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16. Guidelines for using HIV technologies in Surveillance: Selection,
Evaluation, and Implementation - 2009 update
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 02
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Преаналитика
ПРЕАНАЛИТИКА
105
СОП № 02-02
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: СУШКА, ХРАНЕНИЕ, УПАКОВКА И ТРАНСПОРТИРОВКА ОБРАЗЦОВ СУХОЙ
КАПЛИ КРОВИ В ЛАБОРАТОРИЮ.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП- стандартная операционная процедура
СКК - сухая капля крови
СИЗ - средства индивидуальной защиты
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
НАЗНАЧЕНИЕ
СОП описывает последовательность действий для обеспечения качества и условий безопасности
доставляемых в лабораторию образцов сухой капли крови.
1.
2.
3.
4.
5.
1.
2.
3.
4.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Требования по безопасности
Все образцы считаются потенциально инфекционным материалом, представляющим биологическую
опасность. Персонал (ответственное лицо) при упаковке и транспортировке образцов СКК должен
соблюдать универсальные меры предосторожности правил техники безопасности при работе с
инфекционным материалом III–IV групп патогенности.
Персонал, работающий с образцом СКК, должен быть обеспечен надлежащими средствами
индивидуальной защиты (СИЗ) - перчатки, медицинские халаты.
Требования к персоналу
Выполнять все мероприятия по обеспечению безопасности при работе с биообразцами.
Вся информация должна оставаться конфиденциальной.
Матерям пациентов должно быть заранее разъяснено назначение данной процедуры и получено
заявление об информированном согласии.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Врачи-эпидемиологи.
Врачи-клиницисты.
Медсестры.
Курьеры.
106
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
МАТЕРИАЛЫ
Штатив для просушивания образцов СКК
Пластиковые пакеты с зип-замками - индивидуальные для каждого тест-бланка.
Поглотители влаги.
Индикатор влажности.
Пергамент или калька для перекладывания образцов СКК
Сумка-холодильник
Хладогены.
ОБРУДОВАНИЕ
1. Холодильник бытовой (t +2+8 0С)
Высушивание и упаковка образцов СКК
1. Образцы СКК сложите так, чтобы они находились в горизонтальном положении отдельно друг от
друга или в штатив для сушки.
2. Обе стороны СКК должны быть открыты для циркуляции воздуха.
3. Образцы должны быть высушены при комнатной температуре (+22 +250С) в течение как минимум
4 часов в горизонтальном положении. При необходимости можно оставить сушиться все образцы
на ночь.
4. Держите вдали от прямых солнечных лучей.
Внимание! Во время сушки нельзя подогревать образцы и складывать их в стопки. Нельзя допускать
контакта пятен крови с какими-либо предметами.
5. Каждую карту с высушенными образцами СКК сложите в пакет с зип-замком (один образец СКК –
один пакет) и каждый из них должен быть с обеих сторон закрыт листами кальки.
6. Вложите в каждый пакет 1 поглотитель влаги и 1 индикатор влажности, удалите воздух из пакета и
плотно закройте.
7. Сопроводительную документацию вложите в отдельный пакет.
8. Вложите пакет с образцом и пакет с сопроводительной документацией в прочный конверт и
запечатайте.
Внимание!
Пластиковые пакеты, используемые для хранения СКК, должны иметь низкую проницаемость
для воздуха и пластиковую зип-застежку. Обычные пищевые пакеты не отвечают данным
требованиям.
Хранение СКК до отправки в лабораторию.
1. Хранение при более высокой температуре вызывает деградацию пятен крови. Храните упакованные
образцы СКК в запечатанном пластиковом пакете при температуре +2-+80С до транспортировки в
лабораторию. Рекомендуется хранить СКК не более двух недель при комнатной температуре.
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
107
2. Не допускайте попадания на пакет прямых солнечных лучей.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Транспортировка и хранение образцов СКК.
Для того чтобы не повредить образцы при транспортировке, необходимо их упаковывать в конверты
или коробки с жесткими (например, картонными) стенками и транспортировать в одноразовых или
подлежащих обработке дезинфицирующими средствами контейнерах.
Если температура окружающей среды выше +25˚С, транспортировку образцов производят в сумкаххолодильниках с хладогенами при температуре от +4 до +8˚С. При использовании хладоэлементов
заморозьте их, положите на дно и по бокам контейнера, затем в середину поместите образцы и
сверху также положите замороженные хладоэлементы
Согласуйте дату отправки с лабораторией ВИЧ.
Как только подготовка будет завершена, проинформируйте получателя о сроках и способе доставки
образцов.
После поступления образцов СКК в лабораторию, храните образцы до исследования в
промаркированных индивидуальных закрывающихся полиэтиленовых пакетах или других
воздухонепроницаемых контейнерах при температуре +4°C.
Длительное хранение (в течение 6 месяцев) возможно при –20°C в присутствии в пакете поглотителя
влаги.
Критерии брака СКК
1. В образце образован сгусток крови.
2. Кровь нанесена с двух сторон бумаги.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Кровь не впиталась в бумагу полностью
Недостаточно, не полностью заполнены обозначенные на бумаге кружки
Кровь из разных кружков слилась в одно пятно
Сыворотка на бумаге отделилась и образовала вокруг пятен крови светлые кольца
Пятна крови размыты или обесцвечены
Образцы не были до конца высушены перед отправкой в лабораторию (ярко- красные пятна)
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16. Guidelines for using HIV technologies in Surveillance: Selection,
Evaluation, and Implementation - 2009 update
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
108
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 02
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Преаналитика
ПРЕАНАЛИТИКА
109
СОП № 02-13
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: ПРАВИЛА ПОДГОТОВКИ К ОТПРАВКЕ В ЛАБОРАТОРИЮ ОБРАЗЦОВ ЦЕЛЬНОЙ
КРОВИ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ НА ВИЧ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
К2ЭДТА – калиевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты
СПИД – синдром приобретенного иммунодефицита
ПЦР - полимеразно-цепная реакция
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека типа 1
ДНК - дезоксирибонуклеи́новая кислота́
РНК – рибонуклеиновая кислота
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение стандартных условий подготовки образцов цельной крови (плазма) к отправке в
лабораторию для исследования на ВИЧ методом ПЦР в режиме «реального времени».
1.
2.
3.
4.
1.
2.
3.
4.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Взятие проб должен осуществляться с соблюдением стерильности, с использованием одноразовых
вакуумных пробирок (К2ЭДТА или К3ЭДТА).
До отправки в лабораторию допускается хранение пробы при комнатной температуре (+18-25ºС) не
более 2 часов. При более длительном хранении необходимо поместить пробы в бытовой холодильник
(+2 +8 ºС). Время доставки пробы в лабораторию не должно превышать 24 часа от момента забора.
Соблюдайте стандартные условия преаналитического этапа ПЦР исследования.
После использования одноразовые пробирки, перчатки и весь расходный материал уничтожьте
путем автоклавирования.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Врачи-клиницисты
Медсестры
Врач-лаборант
Лаборанты
МАТЕРИАЛ
1. Одноразовые вакуумные пробирки (К2ЭДТА или К3ЭДТА)
2. Одноразовые перчатки.
110
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Медицинский халат
Маски/очки
Микроцентрифужные пробирки с плотно закрывающимися крышками объемом 1,5 мл
Штативы для микропробирок объемом 1,5 мл
Штативы для наконечников
Одноразовые наконечники с маркировкой, свободные от «РНК/ДНК free», объемом от 100 до 1000
мкл с аэрозольным барьером.
9. Емкость для дезинфицирующих средств.
10. Перманентный маркер с тонким стержнем.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Бытовой холодильник с температурой +4+8оС, морозильной камерой
ИНСТРУМЕНТЫ
1. Автоматические дозаторы с переменным объемом от 100 до 1000 мкл.
РЕАКТИВЫ
1. Дезинфектант, зарегистрированный в КР, разрешенный к использованию
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
ИНСТРУКЦИЯ
Взятие крови проводится утром натощак или не ранее 3 часов после легкого завтрака.
Для проведения анализа используется цельная кровь, взятая в одноразовую вакуумную пробирку с
раствором К2ЭДТА или К3ЭДТА. После взятия вакутейнер с кровью перемешайте путем аккуратного
переворачивания не менее 6-8 раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с
антикоагулянтом.
Пронумеруйте пробирки в соответствии с направлениями (см. Приложение).
Заполняйте направления и делайте надписи на пробирках маркером четко, без исправлений и
помарок.
Пробирки с кровью должны находиться только в вертикальном положении, в штативе.
Храните пробирку с образцом крови при температуре от 20 С до 80С не более 24 часов.
Важно! Кровь нельзя замораживать.
При отсутствии холодильника вакуумную пробирку с цельной кровью храните при комнатной
температуре (+18оС-+25оС) не более 2 часов с момента взятия материала.
В референс-лаборатории процентрифугируйте кровь при 3000 об/мин в течение 20 минут.
По завершении центрифугирования полученную плазму перенесите одноразовым наконечником
с фильтром с маркировкой «ДНК/РНК free» в одноразовую пробирку объемом 1,5 мл с плотно
закрывающейся крышкой.
Поделите плазму на аликвоты по 150 мкл.
Промаркируйте пробирки.
Допускается хранение плазмы не более 3 суток в холодильнике при температуре от +2 до +80С, в
течение 1 года при температуре не выше минус 20 0 С.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Применение вакуумных систем BD Vacutainer для лабораторного анализа. Долгов В.В., Луговская
С.А., Почтарь М.Е. Методические рекомендации,2007 г.
2. Система управления качеством в лабораториях. Пособие ВОЗ.
3. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики».
РАЗДЕЛ 02
ПРЕАНАЛИТИКА
111
4. Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Форма направления биологического материала для качественного определения ДНК ВИЧ и/или
количественного определения РНК ВИЧ методом ПЦР
Учреждение-отправитель
Дата забора_________________________Время забора_________________________________
Особые пометки_________________________________________________________________
Исследование на количественное РНК ВИЧ
Исследование на качественное ДНК ВИЧ
(нужное обвести)
№ образца
№ регистрации образца
в лаборатории
Ф.И.О.
пол
Год
рождения
Домашний адрес
Дата
забора
крови.
Время
забора
крови.
1
Ф.И.О. врача, направившего на исследование________________________________________________
Дата доставки в лабораторию___________ 20_ ___ г. Время доставки в лабораторию_________
Ф.И.О. лица, принявшего материал_ _______________________________________________________
112
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
СОП № 02-14
процедур по лабораторной диагностике Издание
№1
ВИЧ-инфекции
Статус документа
Оригинал
Раздел: Преаналитика
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: ПРАВИЛА УПАКОВКИ И ТРАНСПОРТИРОВКИ ОБРАЗЦОВ ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ
В ЛАБОРАТОРИЮ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ НА ВИЧ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНОЙ
РЕАКЦИИ (ПЦР).
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ПЦР - полимеразно-цепная реакция
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота́
РНК – рибонуклеиновая кислота
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека типа 1
К2ЭДТА – калиевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты
СОП- стандартная операционная процедура
НАЗНАЧЕНИЕ
СОП описывает Правила упаковки и транспортировки цельной крови (плазмы) в лабораторию для
исследования на ВИЧ методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) в режиме «реального времени».
1.
2.
3.
4.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Необходимо соблюдать меры биобезопасности при транспортировке биоматериала.
Доставка материала должна осуществляться с соблюдением холодового режима (+2 + 8 ºС) с
соблюдением принципа безопасной тройной упаковки.
При хранении и транспортировке биообразцы должны находиться в контейнерах/сумкаххолодильниках строго в вертикальном положении.
До отправки в лабораторию допускается хранение пробы при комнатной температуре (+18ºС -25ºС)
не более 2 часов.
При более длительном хранении необходимо поместить пробы в бытовой холодильник (+2ºС-+8ºС).
Время доставки пробы в лабораторию не должно превышать 24 часа от момента забора.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Медсестры
2. Врач-лаборант
3. Курьер
МАТЕРИАЛ
1. Одноразовые вакуумные пробирки.
2. Одноразовые перчатки.
РАЗДЕЛ 02
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
ПРЕАНАЛИТИКА
113
Медицинский халат
Маски/очки
Микроцентрифужные пробирки с плотно закрывающимися крышками объёмом 1,5-2 мл
Штативы для микропробирок.
Термоконтейнер /сумка холодильник из материала, стойкого к дезинфектантам.
Емкость для дез. средств.
Перманентный маркер с тонким стержнем.
Вата
РЕАКТИВЫ
Дезинфектант, разрешённый к применению в КР.
ИНСТРУКЦИЯ
Заполните направление (см. приложение 1) и промаркируйте пробирки, без исправлений и помарок.
Упакуйте пробы в соответствии с требованиями безопасной тройной упаковки.
Поместите вакуумные пробирки с образцами в пластиковый пакет с зип-замком подходящего
размера вместе с небольшим количеством любого адсорбирующего материала, например, ваты (рис.
1).
Пластиковый пакет необходимо закрыть и поместить в сумку-холодильник или контейнер.
Два или более образца от одного пациента могут быть упакованы совместно в один пластиковый
пакет большего размера.
Важно! Не допускается упаковка образцов крови от разных людей в один и тот же пакет
Заклеенные пакеты с образцами поместите в сумку-холодильник/контейнер с крышкой.
Внутри сумки-холодильника сделайте дополнительные прокладки между вторичными контейнерами
из любого подходящего материала для того, чтобы пробирки прочно стояли и не могли случайно
опрокинуться во время транспортировки (рис.2).
Укупоренный пластиковы й пакет
клейкая лента
Пробирка с завинчиваю щейся кры ш кой
биоматериал
Адсорбирую щ ий материал
Укупоренный пластиковы й пакет
Образцы от одного больного
Рис. 1. Двойная упаковка образцов крови в пакете с адсорбентом
114
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Крышка
Контейнер/ сумка-холодильник
Герметично упакованные пакеты с
образцами
Адсорбирующий материал
Рис. 2 Тройная упаковка образцов крови
10. При температуре выше 25ºС в сумку-холодильник/контейнер вложите замороженные хладагенты
вокруг упаковки с образцами.
Важно! Запрещается перевозить пробирки с кровью в личных пакетах, сумках и др. предметах
личного обихода!!!
11. Поместите направления в пакет с зип-застежкой/файл и передайте курьеру для последующей
транспортировки в лабораторию вместе с сумкой-холодильником/контейнером.
12. Транспортируйте пробы в лабораторию.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Постановление Правительства Кыргызской Республики от 23 сентября 2011 года №583 «Об
утверждении Руководства по учёту инфекционных заболеваний в Кыргызской Республике».
2. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
3. №104 приказ МЗ КР от 15.03.2011 г. «Организация лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV
патогенности». mm m m
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 03
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммуноферментный пнплиз
115
СОП № 03-01
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ПРИЁМА, ХРАНЕНИЯ И УЧЕТА ИФА-ТЕСТ-СИСТЕМ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ИФА – иммуноферментный анализ
НАЗНАЧЕНИЕ:
Обеспечение порядка учета и хранения поступающих в лабораторию тест-систем для предотвращения
лабораторных ошибок, связанных с их качеством.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Материально ответственное лицо или уполномоченный им сотрудник лаборатории.
1.
2.
3.
4.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Тест-системы принимаются комиссионно.
Состав комиссии назначается руководителем учреждения и утверждается внутренним приказом
учреждения.
В состав комиссии должны входить представители отдела закупок и бухгалтерии.
В лабораторию тест-системы поступают с паспортом фирмы-производителя на данную серию
препарата.
Инструкция к тест-системе должна быть на официальном (русском) и/или государственном
(кыргызском) языке.
МАТЕРИАЛ
1. Журнал учета поступающих тест-систем.
2. Ручка шариковая
3. Формуляры движения запасов тест-систем – по числу холодильников для хранения тест-систем.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Холодильник +2°С - +8°С
ИНСТРУКЦИЯ
1. Проверьте наличие сертификата качества и паспорт на поступившую серию тест-системы.
116
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
2. Сверьте перечень тест-систем в накладной с фактическим наличием.
3. Проверить соблюдений условий транспортировки:
a. целостность упаковок.
b. наличие хладагентов в транспортной коробке и индикаторов температуры.
4. Выборочно проверьте комплектацию наборов тест-систем (10% от числа поступивших наборов) в
соответствии с перечнем реактивов в инструкции к набору или паспорте на данную серию.
5. При обнаружении несоответствий поставьте в известность заведующего лабораторией и/
или руководителя организации, составить рекламацию на официальном бланке учреждения
(Приложение 1) с описанием причины брака и передайте дистрибьютору с требованием замены
несоответствующих наборов тест-систем. Внимание! Бракованные наборы тест-систем в работе не
используются.
6. Поместить тест-системы на хранение в соответствии с требованиями, указанными в инструкции.
7. Внести запись в журнал «Учёт поступивших тест-систем» (Приложение 2.).
8. Паспорт на поступившую серию тест-системы храните в папке «Паспорта к тест-системам».
9. Введите данные о поступившей тест-системе в формуляры движения запасов тест-систем и
проводите учет после каждого использования тест-системы (Приложение 3.).
Внимание! Формуляр рекомендуется закрепить на дверце холодильника.
10. В первую очередь используйте тест-системы с минимальным запасом срока годности.
11. Ежедневно проверяйте соответствие температуры в холодильниках требуемым параметрам (СОП
№03-02 «Правила термометрии помещений, холодильников, морозильных камер»)
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма рекламации на качество диагностических тест-систем.
1.
2.
3.
4.
5.
РЕКЛАМАЦИЯ
на качество диагностического препарата
Полное наименование тест-системы:_ ______________________________________________
Страна-изготовитель:_ ___________________________________________________________
Фирма-производитель:_ __________________________________________________________
Код продукта: Катал. №___________________________________________________________
Серия: №_______________________________________________________________________
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
117
6.
7.
8.
9.
Срок годности: до_ ______________________________________________________________
Количество наборов, поступивших в учреждение_____________________________________
Дата получения_ ________________________________________________________________
Описание условий доставки (транспортировки) и хранения диагностических тест систем.
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
10. Описание претензии к параметрам качества тест-системы (какие параметры не соответствуют
паспортным данным)_____________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Руководитель: _ _____________________________ ____________________________________
ФИО
подпись
Приложение 2
Форма журнала учёта движения диагностических тест-систем
Серия срок годности ДТС
Количество тестов в наборе
Цена за ед.
Сумма
Источник получения
Подпись материально
ответственного лица
ДАТА выдачи
Кому, наименование учреждения
количество
Цена за ед.
Сумма
Подпись получателя
Количество
Сумма
Примечание
ОСТАТОК
Количество
наборов
РАСХОД
Дата получения
ПРИХОД
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
Приложение 3
Формуляр движения запасов тест-систем
Модель холодильника: « »
Наименование тест-системы
Инвентарный №
Производитель
Серия №
Комната №
Срок годности
Остаток тест-систем
Дата/месяц
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
118
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммуноферментный анализ
СОП № 03-02
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ТЕРМОМЕТРИИ ПОМЕЩЕНИЙ, ХОЛОДИЛЬНИКОВ, МОРОЗИЛЬНЫХ
КАМЕР
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ИФА – иммуноферментный анализ
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение надлежащего контроля над температурой в помещениях для проведения исследований,
холодильниках и морозильных камерах.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Температурный режим в холодильниках для хранения тест-систем и исследуемых биообразцов
проверяется ежедневно. Допустимый диапазон: от + 2 до + 8° С.
Температурный режим в морозильных камерах для хранения контрольных образцов и банка
образцов сывороток и плазмы проверяется ежедневно. Допустимый диапазон: от -20° С и ниже.
Температурный режим в морозильных камерах для длительного хранения контрольных образцов
и банка образцов сывороток и плазмы проверяется ежедневно. Допустимый диапазон: от -70° С и
ниже.
Если наблюдаются перепады температуры в холодильнике, то замеры следует проводить не менее
двух раз за рабочий день с интервалом в 4-5 часов.
Температура в помещении для проведения иммуноферментного анализа (ИФА) замеряется в дни
постановки анализов.
Термометр в помещении для ИФА должен быть установлен на расстоянии 1 метра от окна, стен и
дверей и местах, исключающих попадание прямых солнечных лучей.
Термометры должны быть откалиброваны в метрологической службе республики и иметь
сертификат с результатами оценки сроком не более двух лет.
При измерении температуры в холодильниках ртутным и/или спиртовым термометром во избежание
пролития ёмкость с глицерином должна находиться в устойчивом положении.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Врач-лаборант
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
119
2. Фельдшер-лаборант
3. Лаборант
1.
2.
3.
4.
5.
6.
МАТЕРИАЛ
Формуляр регистрации температуры в холодильнике и морозильной камере.
Формуляр регистрации температуры в помещении для ИФА исследований.
Формуляр регистрации температуры в помещении.
Ручка шариковая.
Ёмкость для глицерина.
Глицерин (150-200 миллилитров).
ИНСТРУМЕНТЫ
1. Термометр электронный «testo 720».
2. Термометр ртутный/спиртовой (в отсутствии термометра электронного)
ИНСТРУКЦИИ
I. Замер температуры с помощью ртутного/cпиртового термометра
1. Термометр поставьте в устойчивую ёмкость с глицерином и поместите в холодильник/ морозильную
камеру в вертикальном положении.
2. По истечению 1 часа, не доставая термометр из глицерина, отметьте температуру и занесите данные
в формуляр термометрии (Приложение 2 а, в).
3. Для достижения стабильных показаний температуры ёмкость с термометром в глицерине постоянно
держите в холодильнике.
II. Замер температуры с помощью электронного термометра «testo 720»
1. Для проведения замера в холодильнике или морозильной камере откройте дверцу холодильника и
установите датчик измерения температуры на полке.
2. При этом сам электротермометр должен оставаться снаружи, к примеру, на крыше холодильника
или другой горизонтальной поверхности.
3. Дверцу холодильника закройте.
4. Замер температуры проведите через 30 минут.
5. Для этого включите электротермометр путём нажатия правой верхней кнопки и удерживайте её в
течение 1 секунды. На дисплее (фото 1) отобразится текущая температура.
6. Занесите показания температуры в формуляр (Приложение 2 а, б).
ф. 1. Показание электротермометра.
120
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
7. Для замера температуры в помещении электротермометр с датчиком установите на уровне
поверхности стола для исследования и замерьте температуру, как описано в п. 7.
8. Занесите показания температуры в формуляр (Приложение 2 в.)
9. Если температура в холодильнике или морозильной камере не соответствует заданной норме,
необходимо провести корректирующие действия:
a. Отрегулируйте температуру согласно рекомендациям, описанным в инструкции по
применению прибора.
b. Если холодильник имеет общую наружную дверцу с морозильной камерой, то увеличьте
разделительное пространство между морозильной камерой и камерой холодильника.
10. Если температура в помещении выше нормы (>+25оС), то необходимо отрегулировать её до
допустимой (+18 +25оС) с помощью кондиционера.
11. Если температура ниже нормы (<+18оС), то необходимо отрегулировать её до допустимой (+18
+25оС) с помощью электрообогревателя.
12. Соблюдайте порядок заполнения формуляра температурного режима: заполненная форма изымается
и помещается в папку на хранение. Новой форме формуляра присваивается последующий номер.
13. Зафиксируйте отклонения температуры в журнале несоответствий и корректирующих мер
(Приложение 3.).
14. Настройка параметров электротермометра «testo 720» описана в Приложении 1.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. ИСО 15189 «Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности»
2. Инструкция по эксплуатации термометра электронного «Testo 720».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Настройка параметров электротермометра «testo 720»
Для программирования термометра осуществите следующие шаги:
a. Нажмите и удержите в течение 1 секунды левую кнопку Hold, Мах/Мin (фото 2). Вы вошли
в режим «Меню»
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
121
ф. 2 Вход в режим «Меню»
b. Путём нажатия кнопок, расположенных ниже кнопки Hold, подключите или выключите
звуковой сигнал (ALARM ON/OFF), срабатывающий при несоответствии температуры
заданным параметрам.
c. Для переход к следующей функции термометра вновь нажмите левую кнопку Hold. На
экране будет мигать Мах/Мin
d. С помощью кнопок ↑ и ↓ выберите минимально и максимально допустимый диапазона
температуры. Например, в холодильнике для хранения тест-систем этот диапазон составляет
от +2 до +8о С.
ф.3,.4 Установка допустимого максимального и минимального диапазонов измерений
e. При следующем нажатии Hold, Мах/Мin установите текущий год – на экране появится
«YEAR». С помощью кнопок установите текущий год (ф. 5).
f. Далее после очередного нажатия Hold, Мах/Мin установите «MONTH» – месяц, «DAY» –
день, «TIME» – текущее время.
ф. 6. Настройка на измерение в градусах по
Цельсию
i.
Снова нажмите кнопку Hold, Мах/Мin, после чего аппарат сохранит или удалит внесённые настроенные параметры: на 1 секунду
экран погаснет, а затем отобразится текущая температура. ф. 7 Настройка no (нет) для удаления настроенной программы
h. При следующем нажатии Hold, Мах/Мin – на экране отобразится «RESET». С помощью кнопок ↑ и ↓ выберите параметры: yes (да)
для подтверждения настроенной программы или no (нет) – для удаления настроенной программы (ф.7).
g. С помощью последующего нажатия Hold, Мах/Мin (на экране отобразится «UNITE») выберите единицы измерения в градусах по
Цельсию (оС) или в градусах по Фаренгейту (ºF). (ф.6)
ф. 5. Настройка года на электротермометре
122
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
-2
-1
0
+1
+2
+3
+4
+5
+6
+7
+8
+9
+ 10
+11
+12
Температура
°С
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
Дни месяца
18
19
20
21
22
23
25
а. Форма температурного листа для холодильника
Название учреждения______________________________________________________________________________
Название лаборатории______________________________________________________________________________
Месяц_ ____________________________ год___________________________________________________________
25
26
27
28
29
30
31
Приложение 2
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
123
-25
-24
-23
-22
-21
-20
-19
-18
-17
-16
-15
Температура
°С
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
Дни месяца
18
19
20
21
22
23
25
б. Форма температурного листа для морозильной камеры
Название учреждения______________________________________________________________________________
Название лаборатории______________________________________________________________________________
Месяц_ ____________________________ год___________________________________________________________
25
26
27
28
29
30
31
124
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
№ п/п
+12
+13
+14
+15
+16
+17
+18
+19
+20
+21
+22
+23
+24
+25
+26
+27
+28
+29
+30
1
2
3
Выявленное несоответствие
Температура
°С
4
5
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
Корректирующие меры
Срок исполнения
г. Форма журнала несоответствий и корректирующих мер
7
Причина
6
Дни месяца
22
25
25
26
Оценка результата
23
в. Форма температурного листа для помещений
Название учреждения______________________________________________________________________________
Название лаборатории______________________________________________________________________________
Месяц_ ____________________________ год___________________________________________________________
27
29
30
31
Роспись
Приложение 3.
28
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
125
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
126
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммуноферментный анализ
СОП № 03-03
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: ПРАВИЛА ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ И УЧЕТА РЕЗУЛЬТАТОВ
МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
Анти-ВИЧ 1,2 – антитела к вирусу иммунодефицита человека первого и второго типов
Аг ВИЧ 1 – антиген Р24 вируса иммунодефицита I типа
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
ВЛС – внутрилабораторный стандарт
ИФА – иммуноферментный анализ
Мкл. – микролитр
Мл. - миллилитр
ОП – оптическая плотность
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
СОП – стандартная операционная процедура
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ср. – среднее значение
ФИО – фамилия, имя, отчество
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение надёжных результатов при проведении исследований методом иммуноферментного
анализа (ИФА).
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Все подготовительные к исследованию этапы планируйте и проводите заранее.
В работе использовать метрологически поверенное измерительное оборудование (спектрофотометр
иммуноферментный, дозаторы).
Внимательно изучите инструкцию, прилагаемую к тест-системе, и строго ей следуйте.
Не используйте инструкции к тест-системам других серий.
Не используйте наборы с истекшим сроком годности.
Не смешивайте реактивы из разных серий.
Тестируемые образцы должны быть без гемолиза, бактериального пророста, липемии.
Тест-систему, исследуемые образцы, внутрилабораторный стандарт (ВЛС) выдержите 30 минут при
комнатной температуре до начала проведения исследований.
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
127
9. Соблюдайте температурный режим в помещении для проведения ИФА в соответствии с требованием
инструкции (+18 +25оС).
10. Растворы дезинфектантов должны быть свежеприготовленные.
11. Для каждого контрольного или исследуемого образца используется отдельный одноразовый
наконечник.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборант
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
МАТЕРИАЛ
Медицинский халат/брюки с курткой
Резиновые/латексные одноразовые перчатки
Маски одноразовые
Защитный экран/защитные очки
Одноразовые наконечники на дозаторы (до 300 мкл; до 1,0 мл)
Ёмкости для буферного раствора и дистиллированной воды
Ножницы для вскрытия вакуумной упаковки плашки
Ватные тампоны
Штатив для термоустойчивых пластиковых пакетов
Термоустойчивый одноразовый пакет для отходов
Ёмкость на 1 литр с 6% раствором перекиси водорода
Ручка шариковая
Бланк протокола исследования
Калькулятор
Бумага писчая формат А 4 для распечатки результатов анализа
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Термошейкер
2. Вошер
3. Вортекс
1.
2.
3.
4.
ИНСТРУМЕНТЫ
Таймер
Дозаторы одноканальные объёмом на 5 - 40 мкл; 40-200 мкл; 200-1000 мкл.
Дозатор многоканальный объёмом 30 – 300 мкл.
Ридер (спектрофотометр) с подсоединённым принтером
1.
2.
3.
4.
5.
РЕАКТИВЫ
Тест-система
ВЛС
Дистиллированная вода
70% этиловый спирт
6% раствор перекиси водорода
128
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИНСТРУКЦИИ
Наденьте защитную одежду: медицинский халат или куртку с брюками
Подготовьте рабочее место, уберите все лишние предметы со стола.
Подготовьте оборудование к работе: включите в сеть вошер, термошейкер, вортекс,
В соответствии с инструкцией приготовьте промывочный раствор, заполните им ёмкость для
промывочного раствора.
Заполните бланк протокола исследования (Приложение 1), при этом укажите:
–– номер протокола;
–– название, фирму-производителя, серию и срок годности тест-системы,
–– дату исследования и фамилию постановщика анализа;
В бланк протокола внесите обозначения контрольных проб и номера исследуемых образцов в
порядке, предусмотренном инструкцией к тест-системе и с учётом постановки ВЛС. Например:
Лунка А1 К+ Анти-ВИЧ 1,2; В1 К+ Аг ВИЧ ; лунки С1, D1, E1 К отр; лунка F1 – ВЛС и так далее.
Наденьте перчатки, защитные очки и маску или защитный экран.
Образцы сывороток и ВЛС перед внесением в лунки планшета перемешайте на вортексе без
образования пузырьков воздуха (см. СОП № 03-05. «Правила эксплуатации вортекса «Vortex mixers
модель M37600»).
В отсутствие вортекса пропипетируйте образец исследуемой сыворотки с помощью дозатора с
одноразовым наконечником 10-12 раз.
Все этапы ИФА проведите строго по инструкции, прилагаемой к данной серии тест-системы.
Наконечники по мере использования сбрасывайте в термоустойчивый пакет для автоклавирования.
Если пакет отсутствует, то осуществите сброс наконечников в ёмкость с 6% перекисью водорода.
Заранее, за 15 минут до учёта результатов подготовьте ридер к работе (СОП № 03-08 Правила
эксплуатации ридера «Multiskan FC»)
Регистрацию результатов проведите согласно требованию инструкции, при этом оцените качество
исследования с помощью:
–– оценки соответствия значений Оптической Плотности (ОП) всех Контролей прилагаемых к тестсистеме требованию инструкции (оценка валидности теста);
–– показания значений ВЛС занесите в компьютерную базу «Контрольная карта (СОП 08-02
«Правила проведения внутрилабораторного контроля качества при тестировании на ВИЧ и
вирусные гепатиты с помощью компьютерной программы»)
–– Оценку результатов ВЛС проведите согласно СОП №.08-03 «Применение контрольных правил
WESTGARD и порядок выявления лабораторных ошибок».
Только после оценки валидности теста и качества тестирования перейдите к оценке исследуемых
образцов.
При выявлении погрешности измерения проведите действия согласно Приложению 2 «Причины
ошибок в ИФА и меры их устранения».
Оформите протокол исследования и вместе с листом распечатанных на ридере результатов подшейте
в папку «Протоколы исследований на ВИЧ методом ИФА».
По окончании исследования приведите в порядок рабочее место:
–– обработайте рабочие поверхности ватным тампоном, смоченным в 96º спирте.
–– обработайте оборудование в соответствии с правилами их эксплуатации.
–– убедитесь, что все используемое оборудование отключено от сети электропитания.
–– отработанные образцы крови/сывороток и расходные материалы обеззаразьте автоклавированием
и утилизируйте (см. СОП №: 09-11 «Правила обеззараживания жидких и твёрдых отходов»).
–– проведите уборку в боксе для постановки ИФА.
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Методическое руководство «Обеспечение и внутрилабораторный контроль
иммуноферментном анализе», Бишкек, 2005 г.
2. Масяго А.В., Некоторые ошибки при постановке ИФА, Новосибирск, 2000 г.
129
качества
в
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
ИЗЪЯТО (у кого)
Дата
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
ПРОТОКОЛ №
Исследование на ВИЧ методом ИФА
Тест- система___________________________________________________________________
Производитель__________________________________________________________________
Дата постановки_____________ Серия________________ Срок годности__________________
Постановщик анализа____________________________________________________________
Схема анализа
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
A
B
C
D
E
F
G
H
Результаты анализа:
Требования инструкции:
Заключение о соответствии
Заключение о валидности теста
(нужное обвести):
К+ а-ВИЧ1,2ср
да
нет
К+ Аг ВИЧ 1
да
нет
К отр. ср.
да
нет
ОП крит.
да
нет
ОП вко
130
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Комментарии______________________________
_________________________________________
_________________________________________
_________________________________________
_________________________________________
_________________________________________
Роспись исполнителя:_______________________
Роспись ответственного над качеством_ _______
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
131
Приложение 2
Возможные ошибки в ИФА и меры их устранения
Результат ошибки
Причины
Способ устранения ошибки
1.
Уменьшенное время инкубации с конъюгатом 1.
и/или субстратной смесью
Точно выдерживать время, инкубации, указанное
в инструкции к набору.
2.
Компоненты набора и/или исследуемые 2.
образцы перед использованием не прогреты до
комнатной температуры
Перед использованием набор необходимо
выдержать при комнатной температуре в течение
30 минут
3.
Несоблюдение температурного режима при 3.
хранении набора
4.
Заниженный температурный режим при
инкубациях в термостате/шейкере
5.
Хранить наборы в холодильнике при 2-8oС
4.
Занижение сигнала 5.
ОП исследуемых
образцов или
калибровочных
6.
проб
Недостаточно
полная
аспирация
после 6.
отмывки: на дне лунок имеются остатки
промывающего раствора
7.
Длительное нахождение планшета на воздухе
8.
между этапами реакции, излишнее высыхание
лунок
7.
Использование реагентов из других наборов
9.
или другой серии;
8.
Истечение срока годности компонентов;
9.
Низкая температура в лаборатории (ниже 18 С)
10. Ошибки в работе спектрофотометра
11. Низкая чувствительность тест-системы
2.
Недостаточно
полная
аспирация
после
отмывки: на дне лунок имеются остатки 2.
промывающего раствора
3.
Загрязнение субстратной смеси вследствие 4.
использования многоразовой емкости или
воздействия прямых солнечных лучей
7.
Недостаточное время отстаивания сыворотки 5.
перед анализом.
6.
Увеличение времени инкубации с субстратной
смесью или конъюгатом
7.
Температура в помещении лаборатории выше
25-30 С
Низкая специфичность тест-системы
Заранее готовить компоненты для следующего
этапа реакции.
Внесение растворов производить быстро.
Не использовать для анализа реагенты из других
наборов или другой серии, а также с истекшим
сроком годности
Отрегулировать температуру в помещении для
постановки ИФА
работу
спекторофотометра
11. Провести оценку чувствительности тестсистемы с помощью аттестованных контрольных
образцов
Количество
промывающего
раствора, 1.
вносимого в лунки, меньше нормы, из-за чего
верхняя часть лунок не промывается
6.
Следить за работой промывочного устройства
10. Контролировать
(ридера)
1.
Увеличение
сигнала ОП во всех
лунках планшета 3.
(повышенный фон)
или увеличение
ОП исследуемых 4.
образцов или
калибровочных
5.
проб
Регулярно проверять температуру в термостате и
шейкере
Установить
в
программе
промывочного
устройства указанное в инструкции значение для
количества, вносимого в лунки промывающего
раствора
Отладить правильную аспирацию
Использовать только одноразовые емкости
Сыворотку следует отбирать после отстаивания
крови в термостате (37oС) через 30 минут или до
2 часов при комнатной температуре
Точно следовать инструкции по применению
Отрегулировать температуру в помещении для
постановки ИФА
Провести оценку чувствительности тестсистемы с помощью аттестованных контрольных
образцов
132
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Результат ошибки
Причины
Способ устранения ошибки
1.
Сбой в работе промывающего устройства
1.
Проверьте все действия по работе промывающего
устройства согласно инструкции по эксплуатации
или вызвать инженера
2.
Ошибки при внесении исследуемых образцов и
реагентов;
Внимательно прочитайте инструкцию к тестсистеме
4.
Недостаточное
перемешивание
образцов, 2.
реагентов или содержимого лунок планшета;
Повреждение
поверхности
лунки 3.
наконечником;
4.
Изучить технику пипетирования
5.
Пузырьки воздуха в лунках
5.
Проверить температуру в разных частях
термошейкера или термостата. Инкубировать с
субстратным раствором в темном месте.
3.
Низкая
6.
воспроизводимость
результатов
измерений
7.
Увеличение ОП по краю планшета вследствие
неравномерного нагревания или инкубации с
субстратным раствором на свету
6.
Использование
калибровку;
дозаторов,
не
прошедших 7.
8.
Неправильная техника пипетирования
8.
9.
Длительное нахождение планшета на воздухе
между этапами реакции, излишнее высыхание 9.
лунок
10. Компоненты набора и/или исследуемые
образцы перед использованием не прогреты до
комнатной температуры
1.
Не внесен конъюгат или раствор субстрата.
2.
В раствор субстратного буфера не внесен ТМБ.
4.
Пропуск одной из стадий постановки анализа.
5.
Использование реагентов из других наборов.
Полное отсутствие
3.
окраски после
реакции
Проверить работу термошейкера
Проводить метрологический контроль дозаторов
Заранее готовить компоненты для следующего
этапа реакции.
Внесение растворов производить быстро. Для
этого использовать 8-канальный дозатор.
Перед использованием набор необходимо
выдержать при комнатной температуре в течение
30 минут
1.
Перечитать инструкцию к набору и точно
следовать всем пунктам постановки анализа.
Перепутаны реагенты, вносимые на разных 2.
этапах реакции.
Использовать только реагенты, относящиеся к
набору.
РАЗДЕЛ 03
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммуноферментный анализ
133
СОП № 03-04
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА УХОДА ЗА АВТОМАТИЧЕСКИМИ ДОЗАТОРАМИ «HOSPITEX
DIAGNOSTIK»
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ФИО – фамилия, имя, отчество
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
НАЗНАЧЕНИЕ
В процессе работы с автоматическими дозаторами происходит загрязнение внутреннего
пространства канала, что впоследствии приводит к контаминации исследуемого материала и ведёт к
ошибочным результатам. Периодическое проведение очистки автоматических дозаторов поможет
снизить влияние данного фактора к минимуму.
1.
2.
3.
4.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Проведение очистки дозаторов необходимо проводить по мере загрязнения, но не реже, чем 1 раз в
6 месяцев.
Процедуру проводят обученные специалисты.
Процедуру очистки проводят в спецодежде и перчатках.
При проведении процедуры придерживайтесь требований технической инструкции по уходу к
данному типу дозаторов.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Врач-лаборант
2. Лаборант
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
МАТЕРИАЛЫ
Халат
Перчатки одноразовые латексные
Шомпол для очистки пипеток (представляет собой металлический стержень диаметром 0,5 мм)
Спирт 96%
Салфетка на стол, размером 50.0 х 50.0 см.
Салфетки марлевые или хлопчатобумажные
Смазка для автоматических дозаторов
134
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
8. Штатив для термоустойчивых пластиковых мешков.
9. Термоустойчивый одноразовый мешок для автоклава.
1.
2.
3.
4.
5.
ИНСТРУКЦИИ
Оденьте спец. одежду и перчатки.
Освободите стол, за которым Вы будете работать, от ненужных предметов.
Постелите салфетку на стол.
Возьмите дозатор и нажмите до упора кнопку сброса наконечников.
Отсоедините кожух пипетки с помощью специального ключа (фото 1).
6. С помощью специального ключа открутите в средней части пипетку путём поворота его против
часовой стрелки (фото.2).
7. При помощи шомпола (спицы) прочистите внутренний канал узкой части пипетки от скопившихся
частиц исследуемого материала.
8. Удалите с поршня старую смазку салфеткой, смоченной в спирте (фото.3).
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
9. Нанесите на поршень с помощью шомпола равномерно новую силиконовую смазку (фото.4).
10. Вытрете шомпол салфеткой
11. Соберите пипетку (фото.5).
12.
13.
14.
15.
Все скопившиеся частицы, отработанные салфетки сбросьте в термоустойчивый пакет.
Обработайте поверхность стола 96º спиртом.
Снимите перчатки и сбросьте их в термоустойчивый пакет.
Выполните гигиену рук.
Важно!
135
136
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Если нет других утверждений в технической инструкции, все части дозатора могут быть почищены
в мыльном растворе или изопропаноле.
16. После этого части дозатора в обязательном порядке следует прополоскать в дистиллированной воде
2-3 раза.
17. Не собирайте дозатор до тех пор, пока все его части полностью не высохнут.
18. После чистки дозаторов необходимо провести процедуру его калибровки (см. СОП №03-06
«Правила внутрилабораторной калибровки дозаторов»)
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Инструкция по эксплуатации автоматического дозатора «HOSPITEX DIAGNOSTIK»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 03
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммуноферментный анализ
СОП № 03-05
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ЭКСПЛУАТАЦИИ ВОРТЕКСА
«VORTEX MIXERS МОДЕЛЬ M37600»
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
СОП – стандартная операционная процедура
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ФИО – фамилия, имя, отчество
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение ускоренного многократного перемешивания сыворотки.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Пробирки с образцами должны герметично закрываться крышками.
2. Работать в защитной одежде, очках и перчатках.
3. Максимально допустимый объём сыворотки в ёмкости 125 мл.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Врач-лаборант
2. Лаборант
1.
2.
3.
4.
5.
МАТЕРИАЛЫ
Халат медицинский
Защитные очки
Перчатки резиновые/латексные одноразовые
Ватные тампоны
Полипропиленовые термоустойчивые одноразовые пакеты
РЕАКТИВЫ
1. Спирт 70°
ИНСТРУКЦИЯ
1. Подключите прибор к электропитанию.
2. Включите прибор с помощью двухпозиционного включателя на передней панели.
a. При поднятии включателя вверх смешивающий диск будет крутиться постоянно.
137
138
3.
4.
5.
6.
7.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
b. При опускании включателя вниз смешивающий диск будет крутиться только при небольшом
нажатии на него
Выберите необходимую скорость вращения.
Слегка опритесь в диск вортекса дном пробирки с сывороткой и, не выпуская её из рук, держите 3-6
секунд до полного перемешивания содержимого.
По окончании процедуры отключите прибор от электропитания.
Обработайте диск вортекса смоченным в 70º спирте ватным тампоном.
Тампон сбросьте в полипропиленовые пакеты для автоклавирования
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. 1. Инструкция по эксплуатации «Maxi Mix II Vortex Mixer Operation Manual and Parts List
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 03
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммуноферментный анализ
139
СОП № 03-06
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ВНУТРИЛАБОРАТОРНОЙ КАЛИБРОВКИ ДОЗАТОРОВ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ФИО – фамилия, имя, отчество
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
мкл. – микролитр
мг. – миллиграмм
мл. – миллилитр
мм. - миллиметр
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение стандартных условий внутренней поверки дозирующих устройств для гарантии
правильности их работы.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Комната для проведения поверки должна иметь постоянную температуру в пределах 15-30 °C (± 0,5
°C) и относительную влажность свыше 50 %.
Измерения следует проводить в помещении без сквозняков, со стабильными условиями окружающей
среды, в стороне от прямых солнечных лучей.
До проведения исследования сосуд для взвешивания, дистиллированную воду, дозатор и наконечники
следует выдержать при комнатной температуре не менее 2 часов для достижения ими равновесия с
комнатной температурой.
Для поверки используйте аналитические или электронные весы с точностью измерения для объёмов
1-10 мкл. – 0,001 мг.; для объёмов 10 – 100 мкл. – 0,01 мг.; для 100 – 1000 мкл. – 0,01 мг.; для 1 – 10
мл. – 0,1 мг.; для 10 – 200 мл. – 1,0 мг.
Весы должны иметь сертификат с результатами калибровки метрологической службы республики –
Кыргызского центра стандартизации и метрологии.
Дозаторы с фиксированным объёмом измеряются по заданному объёму.
Дозаторы с регулируемым объёмом измеряются по трём точкам: минимальному, среднему и
максимальному объёмам пипетки.
Измерения многоканальных дозаторов проводят для каждого канала отдельно по трём точкам:
минимальному, среднему и максимальному объёмам.
Проводить измерения при постоянной температуре воды.
140
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
10. Внутреннюю поверку проводит обученный процедуре и имеющий навыки работы с дозаторами
специалист.
11. Внутреннюю поверку дозаторов для районных лабораторий ИФА и диагностики ВИЧ проводят
специалисты лабораторий областных центров профилактики и борьбы со СПИД по утверждённому
графику.
1.
2.
3.
4.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Ответственный по качеству
Врач-лаборант
Фельдшер-лаборант
Лаборант
1.
2.
3.
4.
МАТЕРИАЛ
Наконечники одноразовые для дозатора – (по 1 для измерения каждого объёма)
Сосуд для воды (стакан на 15-20 мл; пенициллиновый флакон и так далее)
Бланки протоколов калибровки
Ручка шариковая для ведения записей
РЕАКТИВЫ
1. Вода дистиллированная или вода деионизированная
ИНСТРУМЕНТЫ
1. Весы аналитические или электронные
2. Термометр с диапазоном измерения 15 – 30 º С и градиентом (делением) не более 0.5С.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
ИНСТРУКЦИИ
Измерьте температуру воды, определите по таблице коэффициент Wt (см. Приложение 2).
Занесите данные по температуре и коэффициенту в формуляр (см. Приложение 1).
Отметьте в формуляре номинальный объем (Cn) и номер пипетки.
Уравновесьте весы (см. СОП № «Эксплуатация весов электронных/ аналитических).
Поставьте сосуд для воды на весы. Сбросьте её вес в память весов.
Если пипетка с регулируемым объёмом, то установите минимальное значение объёма.
Наденьте плотно наконечник на носик дозатора и наберите установленный объем воды, выполняя
следующие действия:
–– держите дозатор вертикально.
–– погружайте наконечник на 2-3 мм в воду.
–– набирайте измеряемый объем медленно и одинаково нажатием поршня до первого упора.
Важно! Для правильного заполнения наконечника необходимо выдерживать период
ожидания. Время ожидания зависит от размера наконечника: для наконечников объёмом до 50 мкл
– 1-2 секунды, для наконечников 50 – 199 мкл. – 2-3 секунды., для наконечников 200 – 499 мкл. – 3-4
секунды, для исследований 500 – 5,000 мл. – 5 сек.
Внесите измеряемую воду внутрь взвешиваемого сосуда следующим образом:
–– прикосновение наконечника с измеряемой жидкостью и внутренней стенкой сосуда должно быть
под углом 30° - 45°.
–– вносите исследуемый объем медленно и одинаково до первого упора (измеряемый).
Остатки воды в наконечнике сбросьте в отдельно стоящий сосуд нажатием поршня до второго упора.
Позвольте поршню вернуться в верхнюю позицию.
Определите вес и отметьте его в формуляре, затем сбросьте вес в память весов.
РАЗДЕЛ 03
12.
13.
14.
15.
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
141
Повторите пункты 7 – 11 до 10 раз.
Далее установите среднее значение объёма и повторите процедуру измерения с п. 7 по п.11.
Далее установите максимальное значение объёма и повторите процедуру измерения с п. 7 по п.11.
Отдельно рассчитайте средний вес каждого измеряемого объёма: минимального, среднего и
максимального:
mср = (m1 + m2 + m3 + m4 + m5 + m6 + m7+ m8 +m9 +m10) / 10
16. Внесите полученные значения в формуляр для калибровки пипеток.
17. Определите средний дозируемый объем, используя поправочный коэффициент Wt:
Сm = mср × Wt
18. Внесите полученные значения в формуляр для калибровки пипеток.
19. Определите процент систематической ошибки – Е, которую делает пипетка относительно
номинального объёма Сn:
E = (Cm-Cn) × 100 / Cn
20. Внесите полученные значения в формуляр для калибровки пипеток.
21. Сравните полученные данные с указанными в инструкции по применению.
22. Если ошибка превышает указанные пределы, то:
• Проверьте, все ли разделы СОП учтены.
• Следуйте указаниям инструкции по устранению неполадок в руководстве по эксплуатации
пипетки.
• Откалибруйте пипетку в соответствии с инструкцией по эксплуатации и повторите процедуру
калибровки.
• Если, несмотря на предпринятые действия, пипетку невозможно откалибровать, то выведите её
из обращения и передайте её на ремонт или списание.
23. Допустимая погрешность:
± 5 % для пипеток объёмом 1 - 50 мкл
± 3 % для пипеток объёмом > 50 мкл
24. Пример расчётов приведён в Приложении 3.
25. Для многоканального дозатора измеряемые объёмы на все каналы суммируются, и далее проводится
вычисление аналогично вычислению одноканального дозатора
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Eppendorf SOP/ Standard Operating Procedure for pipettes.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
142
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 1.
ФОРМУЛЯР ДЛЯ КАЛИБРОВКИ
ПИПЕТОК С РЕГУЛИРУЕМЫМ ОБЪЕМОМ
ДОПУСТИМАЯ ПОГРЕШНОСТЬ: ± 5 % (V < 50 мкл)
± 3 % (V > 50 мкл)
Дата:.......................................................................................................................
Температура воды.................................................................................................°С
соответствующий коэффициент Wt....................................................................
Фирма изготовитель..............................................................................................
№ пипетки:.............................................................................................................
Минимальный объём
Средний объём
Максимальный объём
пипетки: Cn ………………………мкл
пипетки: Cn ……..…………………мкл
пипетки Cn……:…………………мкл
ИЗМЕРЕНИЯ
ИЗМЕРЕНИЯ
ИЗМЕРЕНИЯ
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
СРЕДНИЙ ВЕС:
СРЕДНИЙ ВЕС:
СРЕДНИЙ ВЕС:
mср =…………………………………
mср =…………………………………
mср =…………………………………
ОБЪЁМ (Cm = mср × Wt):
ОБЪЁМ (Cm = mср × Wt):
ОБЪЁМ (Cm = mср × Wt):
……………………………………
……………………………………
……………………………………
Погрешность: E = (Cm-Cn) × 100
Погрешность: E = (Cm-Cn) × 100
Погрешность: E = (Cm-Cn) × 100
Cn
Cn
Cn
…………………………………………….. …………………………………………… ……………………………………………
Пригодность: Да Нет
Пригодность: Да Нет
Пригодность: Да Нет
Произведённые коррекции:
Произведённые коррекции:
Произведённые коррекции:
……………………………………………
……………………………………………
……………………………………………
……………………………………………
……………………………..
……………………………………………
……………………………………………
……………………………………………
……………………………………………
…………………
……………………………………………
……………………………………………
……………………………………………
……………………………………………
…………………
Подпись: ……………………………
Подпись: …………………………
Подпись: …………………………
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
143
ФОРМУЛЯР ДЛЯ КАЛИБРОВКИ
ПИПЕТОК С ФИКСИРУЕМЫМ ОБЪЕМОМ
ДОПУСТИМАЯ ПОГРЕШНОСТЬ:
± 5 % (V < 50 мкл)
± 3 % (V > 50 мкл)
Дата: ………………………………………………………… Температура воды…………………………………………°С
соответствующий коэффициент Wt …………………………………………………………………………………………
Фирма изготовитель…………………………………………………………………………………………………………
№ пипетки:……………………………………………………………………………………………………………………
Номинальный объем пипетки Cn:…………………………мкл
ИЗМЕРЕНИЯ
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
……………… ………………
СРЕДНИЙ ВЕС: mср =……………………………………………………………
ОБЪЁМ (Cm = mср × Wt): ………………………………………………………..
Погрешность: E = (Cm-Cn) × 100
Cn
……………………………………..
Пригодность:
Да Нет
Произведённые коррекции:
……………………………………………………………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………………………………………………………
Подпись: ……………………………
144
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 2.
Определение поправочного коэффициента Wt.⃰
Температура °С
Wt
(мкл/мг)
15
1.0019
15.5
1.0020
16
1.0021
16.5
1.0021
17
1.0022
17.5
1.0023
18
1,0024
18,5
1,0025
19
1,0026
19,5
1,0027
20
1,0028
20,5
1,0029
21
1,0030
21,5
1,0031
22
1,0032
22,5
1,0033
23
1,0035
23,5
1,0036
24
1,0037
24.5
1,0038
25
1,0039
25.5
1,0041
26
1,0042
26.5
1,0043
27
1.0045
27.5
1.0046
28
1.0047
28.5
1.0049
29
1.0050
29.5
1.0052
30
1.0053
⃰ Поправочный коэффициент Wt сочетает в себе плотность воды, температуру и атмосферное
давление при проведении теста.
Приложение 3
Пример расчёта.
Значения, полученные гравиметрическим методом при температуре воды 21,5º С (Wt= 1,00316)
Тестируемый объем (мкл.) 200,00
Измеренные значения веса (мг) 199,3620
1. m1 200,2000
2. m2 199,6000
3. m3 199,4900
РАЗДЕЛ 03
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
145
m4 199,7000
m5 199,7000
m6 199,2900
m7 199,3500
m8 199,4100
m9 199,2000
m10 199,1900
Расчёт среднего веса:
mср = (m1 + m2 + m3 + m4 + m5 + m6 + m7+ m8 +m9 +m10) / 10
mср = (200,2+ 199,6 + 199,49 +…+199,19/ 10 = 199,513
Расчёт среднего дозируемого объёма с учётом поправочного коэффициента Wt:
Сm = mср × Wt
Сm = 199,513 х 1,0032 = 200,1514
Расчёт ошибки измерения пипетки:
E = (Cm-Cn) × 100 / Cn
E = 200,1514 – 200/200 х 100% = 0,076%
Результаты:
Тестируемый объем (мкл): 200,0000
Средний объем (мкл): 200,1514
Е (%) 0,076
Е (%) установленный* 0, 600
*Предел погрешности, установленные производителем прибора. Обратитесь к спецификации в инструкции
по эксплуатации.
Заключение о пригодности: Данный дозатор соответствует техническим требованиям.
Если расчётное значение погрешности Е (%) меньше или равно значению, установленному в
спецификации заводом-изготовителем, прибор откалиброван для работы в пределах допустимых
спецификацией.
Примечание:
В случае отсутствия спецификаций берутся рассчитанные значения допустимой погрешности
для: пипеток объёмом 1 - 50 мкл: ± 5 %
пипеток объёмом > 50 мкл: ± 3 %
Важно! При проведении расчётов не допустите ошибки пересчёта объёма в вес. Если измерение
объёма идёт в микролитрах (мкл.), то пересчитывается на микрограммы (мг), если в миллилитрах, то
пересчёт на граммы:
Объем
Вес
1 мкл
1 мг
10 мкл
10 мг
100 мкл
100 мг
1000 мкл (или 1 мл.)
1000 мг (или 1 гр.)
146
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммуноферментный анализ
СОП № 03-07
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ЭКСПЛУАТАЦИИ ВОШЕРА WELL WASH AC
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ФИО – фамилия, имя, отчество
т.д. – так далее
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение качественного промывания стандартных 96-луночных планшетов при проведении
иммуноферментного анализа.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Промывку и дезинфекцию промывающей системы прибора следует проводить после каждого его
использования.
2. Ежемесячно проводите деконтаминацию силиконовых трубок и гребёнки от кристаллов солей
путём замачивания и промывания в 6% растворе перекиси водорода или 50% спирта этилового, а
затем дистиллированной воды.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборант
МАТЕРИАЛ
1. Три бутыли для буфера (1 - на 1 литр и 2 - на 2 литра) и распределительный поворотный клапан с
четырьмя входными каналами.
2. Бутыль для отработанной жидкости ёмкостью 4,5 литра.
ИНСТРУКЦИИ
1. Приготовьте промывочные растворы в бутыли для буферного раствора – BUFFER A, BUFFER B, в
бутыль с RINSE – дистиллированную или деионизированную воду (не менее 1 литра).
2. Включите прибор с помощью двухпозиционного выключателя, расположенного на задней панели
вошера в положение (–).
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
147
3. На экране демонстрируется список программ под номерами и названиями.
4. Стрелками ◄(вверх) и ►(вниз) переместите курсор на необходимую программу.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
Список программ:
№ 9 – 1х 8WASH1 – промывание Буфером А 1 раз
№10 – 1х 8WASH2 – промывание Буфером А 2 раз
№11 – 1х 8WASH3 – промывание Буфером А 3 раз
№12 – 1х 8WASH4 – промывание Буфером А 4 раз
№13 – 1х 8WASH5 – промывание Буфером А 5 раз
№14 – 1х 8WASH6 – промывание Буфером А 6 раз
№15 – 1х 8WASH1 – промывание Буфером В 1 раз
№16 – 1х 8WASH2 – промывание Буфером В 2 раз
№17 – 1х 8WASH3 – промывание Буфером В 3 раз
№18 – 1х 8WASH4 – промывание Буфером В 4 раз
№19 – 1х 8WASH5 – промывание Буфером В 5 раз
№20 – 1х 8WASH6 – промывание Буфером В 6 раз
№ 21 – 1 х 8 LINK – промывание Буфером А (промывочный раствор) 6 раз + промывание RINES
(дистиллированная вода) 1 раз
№ 22 – 1 х 8 LINK – промывание Буфером В 6 раз + промывание RINES 1 раз
№ 23 – PROMIT – промывание вошера промывочным раствором (RINES) 3 раза.
После выбора программы нажмите кнопку для подтверждения выбранной программы.
На экране демонстрируются параметры выбранной программы:
№ Номер программы.
Наименование – 1х 8WASH_
Используемые буферные раствора (Буфер) – А, В, RINES
Объем промывающей жидкости в лунке – 350 мкл
Число циклов промывок – от 1 до 6
Далее на кнопках, пронумерованных от 1 до 12 выберите двойным нажатием необходимое число
рядов (стрипов) планшета, требующих промывки. Рядом загорится светодиодный индикатор.
Нажмите кнопку START для запуска программы промывки.
Внимание! Если после запуска прозвучит звуковой сигнал и на экране демонстрируется «BUFF
LOW» (БУФЕР ПУСТ), это означает – в бутыли недостаточно промывочного раствора и необходимо
его долить.
После этого повторите нажатие кнопки START.
В конце рабочего дня промойте вошер 50% этиловым спиртом, а затем дистиллированной водой,
выбрав программу № 23 и используя плашку для промывания вошера.
Далее нажмите кнопку RINES для очистки магистралей от жидкостей.
Выключите вошер.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по эксплуатации промывающего устройства «Well wash AC»
148
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 03
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммуноферментный анализ
149
СОП № 03-08
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ЭКСПЛУАТАЦИИ РИДЕРА «MULTISKAN FC»
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ФИО – фамилия, имя, отчество
т.д. – так далее
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
НАЗНАЧЕНИЕ
Прибор Ридер «Multiskan FC» SN (серия) 357 Z00030T предназначен для измерения оптической
плотности в 96-луночных микропланшетах.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Ридер и принтер должны подключаться к электросети через стабилизатор напряжения.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Врач-лаборант
2. Лаборант
МАТЕРИАЛ
1. Ридер
2. Принтер
3. Бумага писчая для принтера
1.
2.
3.
4.
ИНСТРУКЦИИ
Включите Ридер в работу (кнопка сзади) в позицию (-) за 20 минут до начала учета результатов
анализа. Включите принтер.
Подождите, пока ридер не произведет самодиагностику прибора.
Готовность Ридера к работе отмечается появлением на экране Главного меню. При этом сверху
на панели появляются строки: «Главное», «Обработка», «Результаты», «Настройки». (Для
передвижения по строкам меню используйте кнопки ◄ (влево), ► (вправо) ▼ (вниз) ▲(вверх).
Перед проведением учета результатов установить текущую дату и время на приборе. Для этого:
a. С помощью кнопки ► (вправо) перейдите в меню «Настройки».
b. Синим цветом выделена строка «Текущее время и дата»
150
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
c. Нажмите кнопку [OK] для изменения параметров.
d. С помощью клавиатуры, расположенной на приборе введите дату: дд.мм.гггг и время:
чч.мм.сс.
e. Нажмите кнопку [OK] для сохранения внесенных изменений.
f. Нажмите F2 «Закрыть» для возвращения в меню «Настройки».
С помощью кнопки ◄ (влево) вернитесь в меню «Главное» и выберите программу, при которой
следует проводить учет результатов, для этого выберите соответствующую кнопку на панели
инструмента:
a. Кнопка F1 соответствует программе Demo1 – учет результатов проводится на одной длине
волны – 450 ннм.
b. Кнопка F2 соответствует программе Demo 2 – учет результатов проводится на двух длинах
волн – 450/620 ннм.
c. Кнопка F3 соответствует программе Demo 3 – учет результатов проводится на одной длине
волны – 450 ннм, с вычетом значений бланка из всех последующих значений.
После того как программа выбрана, нажмите кнопку «Start» на панели прибора. Выедет каретка для
планшета, а на экране появится дополнительное окно, которое не требует изменений.
Поместите планшет в каретку и нажмите повторно кнопку «Start». Каретка с планшетом
автоматически заезжает, и прибор начнёт проводить измерения.
После окончания измерения каретка с планшетом автоматически выезжает, а на экране отображаются
результаты.
Нажмите кнопку «File», расположенную на приборе, на экране появится дополнительное окно с
параметрами «Экспортировать результаты» и «Печать». С помощью кнопки ▼ (вниз) выберите
«Печать», и нажмите [OK].
Результаты распечатаются в течение 5 минут.
После того как результаты будут напечатаны, нажмите кнопку F2 «Закрыть».
Для проведения оценки следующего планшета поменяйте планшет в каретке, при необходимости
измените Demo, и повторите пункты с 8-го по 10-ый.
После окончания работы нажмите кнопку «In/Out» для того, чтобы каретка заехала внутрь.
Выключите Ридер с помощью кнопки сзади в позицию (0). Выключите принтер.
Обработайте приборы в конце рабочего дня ветошью, смоченной 700 спиртом.
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ:
1. Thermo Scientii c Multiskan FC. Микропланшетный Фотометр. Руководство по эксплуатации.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 03
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммуноферментный пнплиз
151
СОП № 03-09
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ЭКСПЛУАТАЦИИ ВЕСОВ ЭЛЕКТРОННЫХ/АНАЛИТИЧЕСКИХ «DENVER
INSTRUMENT COMPANY»
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ФИО – фамилия, имя, отчество
т.д. – так далее
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение стандартных условий для взвешивания веществ с массой не более 210 грамм.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Весы должны быть откалиброваны в метрологической службе республики, иметь сертификат с
результатами калибровки сроком давности не более 1 года.
Для придания устойчивости весы должны быть установлены на специальном столе с вмонтированной
гранитной плитой или плитой из искусственного материала.
Весы устанавливают на ровной горизонтальной поверхности стола с углом в 180о.
Для исключения воздействия окружающей среды на результаты взвешивания в комнате не должно
быть сквозняков.
Стол с весами не должен находиться рядом с системой отопления и прямыми солнечными лучами.
Специалист, работающий с весами, должен иметь навыки работы на приборе.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Специалист по контролю качества
2. Врач-лаборант
3. Лаборант
МАТЕРИАЛ
1. Вода дистиллированная
2. Наконечники одноразовые для дозатора
3. Ёмкость для воды (стакан на 15-20 мл; пенициллиновый флакон и т.д.)
152
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИНСТРУМЕНТЫ
1. Автоматическая пипетка (дозатор) фиксированного или переменного объёма
ИНСТРУКЦИИ
1. Снимите чехол с весов.
2. Убедитесь, что прибор подключён к электропитанию, на дисплее, в левом верхнем углу отображён
знак включения (фото 1)
ф. 1. Знак «Включен» на дисплее прибора.
3. С помощью ножек прибора, расположенных по обе стороны от дисплея, выровняйте уровень
баланса (ф. 2,3).
Ф.2. Выравнивание с помощью ножек прибора
Ф 3.Уровень баланса
4. Нажмите кнопку ON/OFF для включения прибора. Подождите 1 минуту чтобы прибор сам себя
откалибровал – на дисплее отображается: 0.00000, после этого можно приступать к взвешиванию.
5. Для взвешивания жидкостей сделайте следующее:
a. Откройте боковую дверцу весов
b. Поставьте на весы ту ёмкость, в которой предполагаете произвести взвешивание, закройте
дверцу. На дисплее будет отображаться вес посуды (ф.4).
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
153
ф. 4. Вес посуды на дисплее
c. Нажмите кнопку TARE на рабочей панели весов. После чего на дисплее будут вновь
отображаться 0.00000.
d. Откройте дверцу, выньте ёмкость из весов. После чего на дисплее будет отображаться вес
посуды со знаком минус (ф.5).
ф. 5 Отображение веса посуды на дисплее весов
e. Взвешенную ёмкость вновь поставьте на весы.
f. Внесите установленный объем жидкости – на дисплее будет показан чистый вес содержимого
жидкости (фото 6).
Ф. 6. Показание веса дистиллированной воды на дисплее прибора.
g. После окончания работы выключите прибор с помощью кнопок ON/OFF.
154
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
h. Наденьте чехол во избежание запылённости прибора.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по эксплуатации весов электронных/автоматических «DENVER INSTRUMENT
COMPANY»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 03
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммуноферментный анализ
155
СОП № 03-10
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: ПРАВИЛА ЭКСПЛУАТАЦИИ ТЕМПЕРАТУРНОГО ШКАФА VENTICEL 111
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение сухой стерилизации и сушки различных материалов с помощью горячего воздуха.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Перед использованием температурного шкафа Venticell 111 необходимо внимательно ознакомиться
с инструкцией по эксплуатации прибора.
2. К эксплуатации допускаются сотрудники, обученные работе на данном оборудовании.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Врач-лаборант
2. Лаборант
1.
2.
3.
4.
МАТЕРИАЛ
Металлические полки
Металлические сита для посуды
Индикатор температуры на 180º С
Журнал учёта работы температурного шкафа
ИНСТРУКЦИИ
Ознакомьтесь с панелью управления температурного шкафа (см. Приложение 1).
1. Нажмите кнопку ON/OF на панели управления (дисплей загорается и высвечивается контрольный
индикатор 6).
2. Выполните предварительный набор программы 1, 2 или 3 в зависимости от назначения на дисплее
при помощи кнопок ▲▼ с интервалом 5 сек (прозвучит звуковой сигнал):
3. Программа Р1
t=+37°С
i. Программа Р2
t=+150°С
j. Программа Р3
t=+180°С
156
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
4. Нажмите кнопку X/W: начинают мигать контрольные индикаторы на панели управления 15 и 16.
Установите на дисплее с помощью кнопок ▲▼ заданную температуру в градусах (°С).
5. Нажимая кнопку X/W перейдите к фазе установки выключения с выдержкой времени. Установите
на дисплее с помощью кнопок ▲▼ требуемое значение времени в часах и минутах от 1ч. до 99 ч 59;
индикаторы 16, 17 мигают, (символы ---- соответствуют неограниченной во времени экспозиции).
6. Нажимая кнопку X/W перейдите к фазе установки числа циклов с помощью кнопок ▲▼
установите число циклов от 1 до 255 (если это необходимо, эта функция возможна при выключении
с выдержкой времени ≠ 0). В ходе установки горят все индикаторы.
7. Нажимая кнопку X/W перейдите к фазе установки включения с выдержкой времени. Установите
на дисплее с помощью кнопок ▲▼ требуемое значение в часах и минута от 0 до 99 часов 59 минут.
При этом контрольный индикатор 14 будет мигать.
8. Двойным одновременным нажатием кнопки ON/OF запустите программу (при запуске программы
включается звуковой сигнал).
9. После завершения работы выключите прибор кнопкой ON/OF. (После звукового сигнала дисплей
погаснет).
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по эксплуатации температурного шкафа Venticel 111
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
157
Приложение 1.
1. Дисплей
2. Десятичная точка – высвечивается: аппарат подключен к сети.
3. Контрольные индикаторы предварительно выбранных программ: высвечивается – активное
состояние программы; мигает – выбранная программа будет активизирована через 5 секунд.
4. Контрольный индикатор обогрева.
5. Контрольный индикатор включения – высвечивается при включении аппарата нажатием кнопки
ON/OFF
6. Контрольный индикатор системы защиты: мигает – температура превысила выбранный предел,
установленный на защитном термостате – обогрев выключен.
7. Кнопка активизации режима установки
8. Установка величины в сторону «МЕНЬШЕ»
9. Установка величины в сторону «БОЛЬШЕ»
10. Выключатель (ON – включено, OFF – выключено)
11. Контрольный индикатор: мигает – режим установки; высвечивается – активна часть программы –
включение с выдержкой времени.
12. Контрольный индикатор: мигает – режим установки; высвечивается – активна часть программы –
разогрев до заданной температуры.
13. Контрольный индикатор: мигает – режим установки; высвечивается – активна часть программы –
выключение с выдержкой времени.
14. Контрольный индикатор: мигает – режим установки; высвечивается – падение температуры после
выключение.
15. Контрольный индикатор: мигает – режим установки; высвечивается – активна часть программы –
бесконечная выдержка при заданной температуре.
16. Контрольные индикаторы 14 – 18 мигают – режим установки числа циклов.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
158
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммуноферментный анализ
СОП № 03-11
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ПРОГРАММИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
АВТОКЛАВА МОДЕЛИ 3150 EL BH
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
ФИО – фамилия, имя, отчество
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение обеззараживания горячим паром под давлением медицинских отходов, жидкостей и
прочих материалов, образующихся в процессе работы в лаборатории.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Процедуру автоклавирования может выполнять только специалист, прошедший обучение и
имеющий разрешение на работу с приборами под давлением.
Автоклав следует расположить на ровной горизонтальной поверхности, способной выдержать 120
кг. Вокруг автоклава необходимо создать свободное пространство, чтобы обеспечить вентиляцию
прибора и доступ для обслуживания.
Перед началом использования автоклава необходимо ознакомиться с инструкцией производителя по
эксплуатации прибора.
Соблюдение правил безопасности при работе с прибором (Приложение 1).
Необходимо регулярно проводить профилактическое и техническое обслуживание автоклава
(Приложение 2).
Перед каждым запуском прибора необходимо проверять безопасность его работы: проверку
уплотнения и проверку дверных петель, плавного функционирования закрывающего механизма,
чистоту и сухость камеры, а также выбор программы автоклавирования.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Врач-лаборант
2. Лаборант
3. Санитарка
РАЗДЕЛ 03
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
159
МАТЕРИАЛ
Стальные нержавеющие контейнеры для жидких отходов и нержавеющие сеточные контейнеры для
инструментов и твёрдых отходов.
Полипропиленовые термоустойчивые мешки для автоклавирования.
Термостойкие перчатки.
Индикаторы температуры на 121º и/или 132º С.
Журнал учёта работы автоклава.
Ведро на 7-10 литров.
ИНСТРУКЦИИ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
Снимите крышку с резервуара воды.
Через отверстие в верхней части автоклава залейте дистиллированную воду до тех пор, пока уровень
не поднимется до основания держателя предохранительного клапана.
Закройте крышку резервуара.
Вставьте штепсель в розетку электросети.
Поместите в контейнер полипропиленовый пакет с отходами.
Перед загрузкой материала, подлежащего обеззараживанию, на полипропиленовый пакет наклейте
индикатор для контроля температуры автоклавирования.
Закройте дверь, и плотно закрутите дверной винт.
Нажмите кнопку SELECT (ВЫБОР) для выбора нужной программы.
На дисплее (поочерёдно) появятся номера и название выбранной программы:
–– Программа 1 – Instruments ST.BY – обработка инструментов
–– Программа 2 – Instruments ST.BY– обработка инструментов
–– Программа 3 – WASTE – обработка отходов
–– Программа 4 – Liquids – обработка жидких отходов
–– Программа 5 – Liquids – обработка жидких отходов
–– Программа 6 – Liq+ Cool – обработка жидких отходов+ холод
Для установки параметров в программе нажмите PARAMETERS – на экране высветиться время и
заданная температура.
Для установки на автоклаве текущей даты и времени нажмите кнопку PROGRAM. На дисплее
появляется текущая дата и курсор, расположенный под параметром «день». Повторное нажатие
этой кнопки переводит курсор под параметр «месяц», а затем – под параметр «год».
При следующем нажатии кнопки PROGRAM на дисплее демонстрируется текущее время дня с
курсором, расположенным под параметром «час». Повторное нажатие этой кнопки переводит
курсор под параметр «минуты».
Следующее нажатие кнопки PROGRAM вызывает на дисплее сообщение «CODE:000» измените
его на «CODE:001» с помощью кнопок ▲ (вверх) ▼(вниз).
Со следующим нажатием кнопки PROGRAM на дисплее демонстрируется «STER.T.» (температура
обеззараживания), с помощью кнопок ▲▼ установите необходимую температуру.
Со следующим нажатием кнопки PROGRAM на дисплее демонстрируется «STER. TIME» (время
обеззараживания), с помощью кнопок ▲▼ установите время обеззараживания (максимальное
время 59 минут).
Со следующим нажатием кнопки PROGRAM на дисплее демонстрируется «DRY TIME»
(время сушки после обеззараживания) с помощью кнопок ▲▼ установите время сушки после
автоклавирования.
160
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
16. Со следующим нажатием кнопки PROGRAM на дисплее демонстрируется «END T» (окончательная
температура) с помощью кнопок ▲▼ установите температуру в камере после обеззараживания при
которой будет возможно открывание двери.
17. Со следующим нажатием кнопки PROGRAM через 3 секунды прозвучит звуковой сигнал, после
чего программирование параметров заканчивается.
18. Еще раз проверьте и убедитесь, что программа обеззараживания выбрана правильно и заданы
требуемые время и температура.
19. Нажмите кнопку START / STOP (ПУСК/СТОП), чтобы начать цикл. Если выбраны программы
1 или 2, то на дисплее в нижнем ряду появиться предупреждающее сообщение «No Liquids!»
(Никаких Жидкостей!). после проверки загрузки на отсутствие жидкостей снова нажмите кнопку
START / STOP (ПУСК/СТОП), чтобы начать цикл.
20. В средней части нижнего ряда дисплея появиться сообщение – время задержки начала
обеззараживания.
21. Автоклав начинает выполнять последовательность операций. На дисплее непрерывно
демонстрируются текущие значения давления (в килопаскалях – К) и температуры (в градусах
Цельсия 0С), которые распечатываются на стадии STE – через каждую минуту, а на всех остальных
стадиях цикла – через каждые 5 минут. В правой части верхнего ряда дисплея демонстрируется код
выполняемой стадии цикла: WATHER (подача воды), HEAT (нагревание), STER (стерилизация),
EXH (стадия выброса) и DRY (сушка).
22. После успешного завершения цикла индикатор START гаснет, выводится сообщение END (конец
цикла), и в течение 7 секунд непрерывно звучит зуммер.
23. Убедитесь, что в камере нет давления согласно показаниям на дисплее. Только после этого можно
приоткрыть дверцу на 2- 3 см. на несколько секунд чтобы выпустить остаточный пар и конденсат,
а затем открыть дверцу полностью.
24. Наденьте термостойкие перчатки и осторожно выньте обеззараженный материал из камеры.
25. Убедитесь, что индикаторы автоклавирования сменили цвет на необходимый. Снимите индикаторы
с пакета и вклейте их в соответствующую графу журнала учёта работы автоклава. Произведите
необходимые записи (Приложение 3).
26. Дождитесь полного остывания автоклава и протрите его ветошью от избытка влаги.
27. Дверь автоклава оставьте приоткрытой.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по эксплуатации автоклава МОДЕЛИ 3150 EL BH
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
161
Приложение 1.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
ИНСТРУКЦИЯ ПО БЕЗОПАСНОЙ РАБОТЕ НА АВТОКЛАВЕ
Все пользователи автоклава должны пройти обучение его надлежащему использованию и получить
разрешение на работу с оборудованием, работающим под давлением, в Кыргызском центре
медицинской техники.
Жидкости можно автоклавировать только с использованием программы «жидкости». Контейнер с
жидкостью должен быть закрыт, но не запечатан.
Бутылки с жидкостью можно автоклавировать только с помощью специальной программы. Бутылка
должна быть из термостойкого стекла.
Отдельные стеклянные бутылки необходимо поместить в соответствующий контей­нер, который
будет помещен на лоток. Никогда не ставьте стеклянные бутылки на дно автоклава. Никогда не
наполняйте бутылку более чем на 2/3 объёма
При автоклавировании пластиковых материалов убедитесь, что этот предмет может выдержать
температуру автоклавирования. Пластик, расплавленный в камере, может вызвать значительные
повреждения прибора.
Никогда не используйте автоклав для стерилизации коррозионных продуктов: кислот, оснований и
фенолов, летучих соединений или растворов, таких как этиловый, метиловый спирт или хлороформ,
а также радиоактивных веществ.
Закрывая дверцу автоклава, убедитесь, что она надлежащим образом заперта, прежде чем
активировать оборудование.
Во избежание ожогов перед выниманием лотков надевайте термостойкие перчатки.
Перед открытием дверцы убедитесь, что в камере нет давления (датчик давления в камере
расположен на передней панели автоклава).
Медленно приоткройте дверцу, чтобы выпустить пар, и подождите 5 минут, прежде чем вынимать
загруженные предметы. При автоклавировании жидкостей подождите 10 минут.
Необходимо проводить техническое обслуживание автоклава в соответствии с инструкцией по
эксплуатации прибора.
Один раз в месяц проверяйте функционирование предохранительных клапанов, а один раз в год
сертифицированный инженер должен проводить проверку безопасности компрессионной камеры.
Регулярно проверяйте состояние узлов. Убедитесь в отсутствии протечек, трещин, засоров, свиста
или странных звуков.
Немедленно уведомляйте ответственное лицо о любых отклонениях или рисках для надлежащего
функционирования устройства.
Осуществлять ремонт или обслуживание автоклава имеет право только сертифицированный
инженер, обладающий соответствующей квалификацией, имеющий техническую документацию и
необходимые инструменты для тестирования.
Перед выполнением любых операций по профилактическому техни­ческому обслуживанию
убедитесь, что электрический кабель отключён, а в автоклаве нет давления.
Во избежание серьёзных травм от горячего пара при открывании дверцы строго запрещено
облокачиваться на автоклав. Строго запрещено класть руку или прислонять любую часть тела к
дверце.
Приложение 2.
ИНСТРУКЦИИ ПО УХОДУ И ТЕХНИЧЕСКОМУ ОБСЛУЖИВАНИЮ АВТОКЛАВА
Чтобы поддерживать хорошее состояние прибора, оператору необходимо периодически выполнять
операции по обслуживанию:
162
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
1. После процедуры автоклавирования необходимо очистить прокладку дверцы мягкой тканью.
Прокладка должна быть чистой и гладкой. Можно использовать мягкий мыльный раствор.
2. Еженедельно проверяют внутреннюю поверхность автоклава. Если автоклав грязный, его очищают
следующим образом:
–– Выньте держатель для лотков и лотки.
–– Очистите держатель для лотков, лотки и внутреннюю поверхность камеры (особенно её нижнюю
часть) с помощью моющего средства и тёплой дистиллированной воды.
–– Сотрите осадок с дна камеры губкой.
–– Немедленно после очищения промойте держатель лотков, лотки и внутреннюю поверхность
камеры дистиллированной водой, чтобы предотвратить появление пятен на металле.
–– Не используйте стальную мочалку или щетку, поскольку это может привести к повреждению
камеры!
–– Очистите внешние поверхности автоклава мягкой тканью
Ежегодно квалифицированный инженер должен:
–– Проверить непрерывность заземления.
–– Провести калибровку температуры и давления.
–– Выполнить проверки функциональности автоклава.
–– Проверить элементы обеспечения безопасности; предохранительный клапан, механизм
блокировки дверцы.
–– Проверить последовательность операций, пара­метры стерилизации и т. п.
–– Проверить резервуар для воды, труб, пласти­ковые детали и электрические провода.
–– Проверить и затянуть соединения труб во избе­жание утечек.
–– Проверить и затянуть все винтовые соединения в блоке управления, нагревательных элементов,
клапанах и измерительных системах.
–– Проверить устройства дверцы на излишний износ.
Оператор должен менять дистиллированную воду в резервуаре не реже 1 раза в неделю при
ежедневной загрузке и не реже 1 раза в месяц при периодической загрузке автоклава:
Наполнение резервуара дистиллированной водой
1. Снимите крышку резервуара для воды.
2. Налейте дистиллированную воду в резервуар через отверстие вверху автоклава, пока она не
достигнет специальной линии, расположенной на выступе крышки резервуара. Для этого закройте
крышку резервуара, и сразу же снимите. По отметке определите количество воды - примерно 5
литров.
3. Закройте крышку резервуара воды.
Внимание! Водопроводная вода может привести к засорению системы. Засорение системы
вызывает повышение давления, что препятствует подъёму температуры.
Слив резервуара воды
Внимание! Прежде чем приступать к сливу, убедитесь, что электрический кабель отключён, а в
автоклаве нет давления.
1. Подсоедините силиконовый шланг к сливному клапану, расположенному на передней левой стороне
автоклава, после открытия дверцы, другой конец шланга опустите в ведро.
2. Поверните сливной клапан против часовой стрелки в открытое положение.
3. Полностью слейте воду из резервуара.
4. Водопроводной водой промойте резервуар.
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
163
5. Поверните сливной клапан по часовой стрелке в закрытое положение.
6. Подсоедините электрический шнур к источнику питания.
7. Наполните резервуар дистиллированной водой, как это описано в разделе «Наполнение резервуара
дистиллированной водой».
8. Автоклав готов к использованию.
Приложение 3.
Журнал учета работы электронного настольного автоклава
№
п/п
Дата
Время и t экспозиции
Наименование материала
Результаты контроля
Роспись исполнителя
1
2
3
4
5
6
164
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммуноферментный анализ
СОП № 03-12
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ЭКСПЛУАТАЦИИ ОЧИСТИТЕЛЯ ВОДЫ «TERMO SCIENTIRIC»
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
СОП – стандартная операционная процедура
НАЗНАЧЕНИЕ
Предназначен для обеспечения правильной эксплуатации прибора и деионизации воды.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. В регионах с повышенной жёсткостью и загрязнением воды проводить очистку и деионизацию
только дистиллированной воды.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Врач-лаборант
2. Лаборант
МАТЕРИАЛЫ
1. Ёмкость для слива очищенной воды, объёмом 5- 10 литров.
РЕАКТИВ
1. Вода холодная водопроводная или вода дистиллированная.
ИНСТРУКЦИЯ
I. Очистка водопроводной воды
1. Подключите прибор к электропитанию.
2. Включите прибор с помощью двухпозиционного выключателя, расположенного на задней панели
прибора справа в позицию (-).
3. Дождитесь, пока прибор проведёт самопроверку, до появления на дисплее – IdL.
4. Нажмите кнопку START/STOP, после чего прибор начнёт работать.
5. На дисплее постоянно отображены цифровые показатели электропроводности воды. В норме этот
показатель равняется 18, допустимый минимум (min) – 14.
РАЗДЕЛ 03
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ
165
6. Для того, чтобы набрать очищенную воду подставьте чистую ёмкость под кран и нажмите рычаг
вниз до щелчка. Вода будет в ёмкость будет поступать из После того, как ёмкость заполнится,
поднимите рычаг в исходное положение.
7. После окончания работы нажмите кнопку START/STOP.
8. После появления на дисплее надписи – IdL выключить прибор с помощью двухпозиционного
выключателя, расположенного на задней панели прибора в позицию (0).
Важно! Допускается очистка водопроводной воды только в случае очень низких показателей
жёсткости поступающей водопроводной воды (dH° = 0 – 5). Замер жёсткости водопроводной воды
проводит лаборатория территориальной санитарно-эпидемиологической службы.
II. Дополнительная очистка дистиллированной воды
1. Выполните пункты 1,2,3 согласно I. Очистка водопроводной воды.
2. Открутите крышку на верхней поверхности прибора с резервуара и получите доступ к резервуару
для воды.
3. Залейте дистиллированную воду в резервуар в количестве не более 4 литров.
4. Шланг, соединяющий прибор с водопроводом, перекройте с помощью зажима.
5. Нажмите кнопку START/STOP, после чего прибор начнёт работать.
6. Далее выполните все действия, описанные в пп. 5 – 8 I. Очистка водопроводной воды.
Важно! Работу прибора необходимо контролировать по индикаторам (см. Приложение 1 «Контроль
за работой системы очистки воды»)
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по эксплуатации «Barnstead EASYpure RoDi. Operation manual and parts list. Series 1332»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Контроль за работой системы очистки воды:
На дисплее прибора, с правой стороны располагается 3 сигнальных индикатора, которые отображают
реальную информацию о качестве воды и других характеристиках. В зависимости от работы прибора и
качества воды сигнальные индикаторы могут быть зелёного, жёлтого и красного цвета:
Зелёной цвет указывает на нормальную работу системы
Жёлтый – рекомендуется планово-предупредитель­ный ремонт
Красный – отклонение в системе, требующее срочного ремонта или замены фильтров.
166
1.
2.
3.
4.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Действия при несоответствиях
Верхний индикатор указывает на работу системы. Если система включена и работает стабильно, то
рядом с записью «RO System Operating» будет светиться зелёный индикатор.
Средний индикатор «Low RO Purity» сигнализирует о несоответствии, которое можно устранить
самостоятельно:
в насос попал воздух, который затрудняет работу прибора, в этом случае следует слегка покачать
прибор из стороны в сторону для ускорения работы насоса.
a. вода, поступающая в прибор, загрязнена.
Нижний индикатор «Replace PO Prefilter» загорается красным цветом – один или оба фильтра
пришли в негодное состояние, требуется их замена.
РАЗДЕЛ 04
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Экспресс тестирование.
167
СОП № 04-01
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ЖУРНАЛ РЕГИСТРАЦИИ ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЯ.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОЦПБС – областной центр борьбы со СПИД.
НАЗНАЧЕНИЕ
Для правильной и качественной регистрации данных пациента, результатов исследования и
контроля качества.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Записи должны вестись во всех колонках и строках журнала регистрации.
2. Контроль над исполнением настоящей СОП осуществляет заведующим лабораторией или
ответственный по качеству
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА:
1. Врач-лаборант
2. Лаборанты
3. Процедурные медсестры.
МАТЕРИАЛЫ:
1. Журнал регистрации (Приложение 1)
2. Ручка
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ИНСТРУКЦИИ
Перед постановкой анализа внесите в журнал следующую информацию:
Порядковый номер образца
Фамилия, имя, отчество (колонка ФИО) пациента,
Год рождения пациента (колонка Год рождения),
Пол пациента (колонка Пол)
День, месяц и год постановки анализа (колонка Дата дд/мм/гг)
Вашу фамилию (колонка Постановщик)
168
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
8. Результаты теста должны учитываться в течение 5-15 минут и немедленно регистрироваться в
данном журнале
9. В колонке Результаты тестирования пациентов:
10. Если результат теста положительный, обведите кружком знак +
11. Если результат теста отрицательный, обведите кружком знак 12. Если результат теста недействителен, обведите кружком Нед
13. В колонке Положительный ВЛК укажите результат положительного контроля в данной постановке:
–– Если результат теста положительный, обведите кружком знак +
–– Если результат теста отрицательный, обведите кружком знак –– Если результат теста недействителен, обведите кружком Нед
14. В колонке Отрицательный ВЛК укажите результат отрицательного контроля в данной постановке:
–– Если результат теста положительный, обведите кружком знак +
–– Если результат теста отрицательный, обведите кружком знак –– Если результат теста недействителен, обведите кружком Нед
15. После того, как страница оказывается полностью заполненной, составьте промежуточный отчет.
16. Необходимо просуммировать все положительные, отрицательные и недействительные результаты
тестов.
17. Полученные цифры необходимо внести в не заштрихованные поля в таблице внизу каждой странице
Всего положительных
Всего отрицательных
Всего недействительных
Всего
18. Дайте на подпись руководителю лаборатории полностью заполненную страницу.
1.
2.
3.
4.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
Руководство по экспресс-тестированию.
Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
№
ФИО
//
//
//
МЖ
МЖ
Дата Постановки
теста
МЖ
Год
Код конрожде- Пол
тингента
ния
Наимен-ие
теста 1
Срок годности.
Наимен-ие
теста 2
Срок годности
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
Отриц-й
ВЛК
(обвести)
Всего отрицательных
Всего положительных
+ -Нед
+ - Нед
+ - Нед
Положит-й
ВЛК
(обвести)
Всего
Всего недействительных
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
Наимен-ие
Результат
теста 3
(обвести
Срок год- кружком)
ности
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования
Подпись
оператора
Примечание
Приложение 1
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
169
170
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Экспресс тестирование.
СОП № 04-02
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ХРАНЕНИЕ ЭКСПРЕСС-ТЕСТОВ И РАСХОДНЫХ МАТЕРИАЛОВ.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОЦПБС – областной центр борьбы со СПИД.
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение качественного хранения и управление запасами экспресс-тестов и расходных
материалов.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. В лаборатории используются только тест-системы, зарегистрированные в КР.
2. Не принимать тест-системы со сроком годности менее 80 % от срока указанного на упаковке.
3. Ежедневно проверяйте и отмечайте показания температуры на складе и в холодильнике в
температурном листе.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией.
2. Ответственный специалист по качеству.
3. Материально ответственное лицо.
МАТЕРИАЛ
1. Журнал для регистрации ДТС.
2. Ручка/маркер.
3. Калькулятор.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Холодильник +4+ 10°С.
ИНСТРУКЦИИ
1. При получении экспресс-тестов и расходных материалов к ним в лабораторию пересчитайте их.
2. Сверьте перечень экспресс-тестов в накладной с фактическим наличием.
3. Проверьте целостность упаковки.
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
171
4. Проверьте срок годности на упаковке.
5. При температуре в помещении выше 25°С поместите экспресс-тесты в холодильник на хранение
при температуре +2+ 10 °С.
6. Внесите запись в температурный лист. (Приложение 1а, 1б)
7. В первую очередь используйте экспресс тесты и расходные материалы со сроком годности, наиболее
приближенным к истечению.
8. Наклейте на дверцу шкафа или холодильника лист с информацией (название экспресс теста и
расходного материала, количество и срок годности).
9. В случае нарушении температурного режима составьте дефектный акт с описанием причины и
доложите заведующему лаборатории.
10. Заполните журнал учета движения тест-систем согласно форме (Приложение №2)
1.
2.
3.
4.
5.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
Приказ «О проведении лабораторной диагностики,
противоэпидемических мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской
Республики»
Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции.
Инструкция к наборам экспресс-тестов.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
-2
-1
0
+1
+2
+3
+4
+5
+6
+7
+8
+9
+ 10
+11
+12
Температура
°С
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
Дни месяца
18
19
20
а. Форма температурного листа для холодильника
Название учреждения_______________________________________________________________
Название лаборатории_______________________________________________________________
Месяц_ ____________________________________год_____________________________________
21
22
23
25
25
26
27
28
29
30
31
Приложение 1
172
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
+10
+11
+12
+13
+14
+15
+16
+17
+18
+19
+20
+21
+22
+23
+24
+25
+26
+27
+28
+29
+30
Температура
°С
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
Дни месяца
18
19
20
б. Форма температурного листа для помещений
Название учреждения_______________________________________________________________
Название лаборатории_______________________________________________________________
Месяц_ ____________________________________год_____________________________________
21
22
23
25
25
26
27
28
29
30
31
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
173
1
2
3
Источник получения
Подпись материально
ответственного лица
ДАТА выдачи
Кому, наименование учреждения
количество
Цена за ед.
Сумма
Подпись получателя
Количество
Сумма
Примечание
4
Сумма
ПРИХОД
Цена за ед.
Количество
наборов
Серия срок
годности ДТС
Количество тестов в наборе
Дата получения
174
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 2
Форма
учета движения диагностических тест-систем
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
РАСХОД
остаток
РАЗДЕЛ 04
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Экспресс тестирование
175
СОП № 04-03
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ ПО КАПИЛЯРНОЙ КРОВИ С ПРИМЕНЕНИЕМ
ТЕСТОВ FIRSTRESPONSE.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОЦПБС – областной центр борьбы со СПИД.
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение качества экспресс-тестирования с применением теста FIRSTRESPONSE®HIV 1-2.
OCARDTEST для определения наличия антител к ВИЧ ½
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ:
1.
2.
3.
4.
Температура в помещении, где проводится тест, должна быть +18°С - 30°С.
При хранении экспресс-тестов в холодильнике, наборы должны быть извлечены за 30 минут до
проведения теста.
Выполняйте все требования по технике безопасности при работе с биоматериалом;
Используйте средства индивидуальной защиты (СИЗ): халат, маска, очки, перчатки.
При получении первично положительного результата в экспресс-тесте необходимо произвести
забор венозной крови (см. СОП № 02-01 или № 02-03) и доставить в лабораторию диагностики ВИЧ
для подтверждения методом ИФА.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий отделением
2. Медсестра.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
МАТЕРИАЛЫ
Медицинский халат.
Одноразовые перчатки.
Скарификатор.
Одноразовая спиртовая салфетка.
Сухая одноразовая салфетка или стерильные ватные шарики.
Журнал регистрации экспресс-тестирования.
176
7.
8.
9.
10.
11.
12.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Направление в лабораторию
Емкости для дезинфицирующих средств.
Емкости для твердых и жидких отходов.
Маркер перманентный с тонким стержнем.
Марля.
Стол, стул.
РЕАКТИВЫ
1. Наборы экспресс-тестов.
2. 70° спирт.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Таймер.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ИНСТРУКЦИИ
До начала процедуры теста наденьте перчатки.
Освободите рабочее место от всех ненужных предметов.
Продезинфицируйте рабочую поверхность стола.
Подготовить необходимое количество экспресс-тестов, скарификаторов, спиртовых салфеток.
Проверьте срок годности экспресс-тестов.
Занесите данные пациента в журнале регистрации экспресс-тестирования (СОП № 04-01).
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
Постановка
Выньте экспресс-тесты из упаковки.
Промаркируйте тесты, поставьте идентификационный номер пациента.
Расположите тесты по порядку.
Поставьте два теста, предназначенных для контрольных образцов
На корпусе предпоследнего теста пометьте маркером КНа последнем тесте пометьте маркером К+
Заполните Журнал регистрации экспресс-тестирования (см. Приложение1).
Поместите руку пациента ладонью кверху.
Протрите спиртовой салфеткой безымянный палец левой руки (для левши – правой руки).
Установите скарификатор на подушечке пальца сбоку.
Нажатием проколите подушечку пальца.
Сбросьте скарификатор в контейнер для отходов.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
ВЫПОЛНЯТЬ БЕЗ ПРОМЕДЛЕНИЯ
Снимите первую каплю крови сухой салфеткой или стерильным ватным шариком.
Нажмите на основание пальца для получения капли крови.
Наберите пипеткой до метки.
Опустите каплю крови в лунку.
Сбросьте пипетку в контейнер для отходов.
Капните одну каплю реагента в ту же лунку.
Включите таймер на время, указанное в инструкции.
Инкубируйте при комнатной температуре.
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
177
9. После окончания инкубации определите результат анализа (см. Приложение 1) и занесите
полученные данные в журнал.
10. Сбросьте все отходы в контейнеры.
11. Обработайте рабочую поверхность стола.
12. Перенесите емкости с отходами в комнату автоклавирования для дальнейшей утилизации.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Результат анализа ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенного
“C”), а в окне, обозначенном “Т”, полоса отсутствует
Результат анализа ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенного
“C”) и видна красная или серовато-красная полоса в окне, обозначенном “Т”. Внимание! Результат
считается позитивным при появлении в окне, обозначенном “Т”, полосы любой степени окраски при
наличии контрольной полосы “C”.
ВИЧ-1/2
ВИЧ-2
ВИЧ-1
Результат анализа НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ
Если на тест-полоске отсутствует красная полоса в окне контроля (обозначенного “C”) или она
очень бледная, то вне зависимости от полос в окнах, обозначенных “Т”, необходимо провести повторный
анализ.
178
1.
2.
3.
4.
5.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики,
противоэпидемических мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской
Республики»
Руководство по экспресс-тестированию.
Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
ФИО
Год
рождения
//
//
//
МЖ
Дата
Постановки
теста
МЖ
Код контингента
МЖ
Пол
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ -Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
Наименование Результат ВЛК поло- ВЛК отриПодпись
теста/срок годно- (обвести жительный цательный
оператора
сти.
кружком) (обвести)
(обвести)
Примечание
Подпись Руководителя______________________
Всего
Всего недействительных
Всего отрицательных
Всего положительных
* - Недействительный результат теста. Результат считается недействительным, если не окрашивается контрольная полоска на тесте. Вне зависимости
от того, окрасилась ли полоска пациента или нет. Если результат недействителен, зарегистрируйте его в журнале и повторите тест.
№
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования.
Приложение 1
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
179
180
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Экспресс тестирование
СОП № 04-04
Издание
№1
Статус документа
оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ ПО СЫВОРОТКЕ КРОВИ С ПРИМЕНЕНИЕМ ТЕСТОВ
FIRSTRESPONSE.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОЦПБС – областной центр борьбы со СПИД.
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение качества экспресс-тестирования и получения надежных результатов.
FIRSTRESPONSE®HIV 1-2.OCARDTEST используется в качестве первичного теста, для определения
ВИЧ 1-го и 2-го типов.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
При каждой постановке анализа необходимо тестировать один положительный и один отрицательный
внутрилабораторный контрольный образец.
За одну постановку тестировать не более 12 образцов сыворотки пациентов (включая контрольные
образцы)
Температура в помещении, где проводится тест, должна быть в пределах +18°- +30 °С.
При хранении экспресс-тестов в холодильнике, наборы должны быть извлечены за 30 минут до
проведения теста.
Выполняйте все требования по технике безопасности при работе с биоматериалом.
Используйте средства индивидуальной защиты (СИЗ- халат, маска, очки, перчатки).
При получении первично позитивного результата при экспресс-тестировании, необходимо пробу
сыворотки доставить в референс-лабораторию РЦ СПИД или лабораторию Ошской ОЦПБС для
подтверждения.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборанты
РАЗДЕЛ 04
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
181
МАТЕРИАЛЫ
Медицинский халат, маска, очки.
Одноразовые перчатки,
Одноразовые наконечники до 200 мкл
Пробирки одноразовые крышкой 1,5-2,5 мл.
Штативы для пробирок
Журнал для регистрации забранного материала
Направление в лабораторию
Емкости для дезинфицирующих средств.
Емкости для сброса отходов.
Маркер перманентный с тонким стержнем.
Марля.
Стол, стул.
РЕАКТИВЫ
1. Наборы экспресс-тестов
2. 70° спирт
3. Отрицательные и положительные контрольные образцы.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Дозатор полуавтоматический с переменным объемом.
2. Таймер.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
ИНСТРУКЦИИ
Убедитесь в том, что пробирки с исследуемыми образцами сывороток промаркированы в
соответствии с данными в направлении (приложение 1).
Наденьте перчатки.
Освободите рабочее место от всех ненужных предметов.
Продезинфицируйте рабочую поверхность стола.
Подготовьте штатив с образцами и все необходимые расходные материалы (наконечники,
контрольные материалы, набор экспресс-тестов).
Занесите данные пациента в журнале регистрации экспресс-тестирования (см. Приложение 2).
Выньте тесты FIRSTRESPONSE из упаковки.
Расположите тесты бок о бок, как показано на Рис. 1
В соответствии с Журналом регистрации на пластиковом корпусе каждого теста маркером напишите
его порядковый номер (первая колонка в Журнале регистрации)
Последние два теста предназначены для контрольных образцов
На корпусе предпоследнего теста пометьте маркером КНа последнем тесте пометьте маркером К+
182
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Рисунок 1. Подготовка тестов к постановке анализа
13. Откройте пробирки с образцами сывороток пациентов.
14. В соответствии с номером в Журнале регистрации и номером, указанным на корпусе теста,
перенесите 10 мкл сыворотки в лунку для внесения образца S (рис. 1).
15. Сбросьте наконечник в емкость для отходов.
16. В ту же лунку внесите 1 каплю жидкости из флакона с разбавителем “Assay Diluent”
17. Установите время и включите таймер на время инкубации, указанное в инструкции.
18. По истечении времени инкубации произведите интерпретацию результатов (см. Приложение 1) и
зарегистрируйте в журнале экспресс-тестирования.
19. Первично позитивный результат выдайте в эпидемиологический отдел. Негативные результаты
выдайте как результат отрицательный.
20. Сбросьте отходы в контейнер для отходов.
21. Обработайте рабочую поверхность стола.
22. Перенесите емкости с отходами в комнату автоклавирования для дальнейшей утилизации.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Результат анализа ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенном
“C”), а в окне, обозначенном “Т”, полоса отсутствуют
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
183
.
Результат анализа ПОЗИТИВНЫЙ или первично положительный.
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенном
“C”) и видна красная или серовато-красная полоса в окне, обозначенном “Т”
Внимание! Результат считается позитивным при появлении в окне, обозначенном “Т”,полосы
любой степени окраски при наличии контрольной полосы “C”.
ВИЧ-1/2
ВИЧ-2
ВИЧ-1
Результат анализа НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ
Если на тест-полоске отсутствует красная полоса в окне контроля (обозначенном “C”) или она очень
бледная, то вне зависимости от полос в окнах, обозначенных “Т”, необходимо провести повторный
анализ.
184
1.
2.
3.
4.
5.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики,
противоэпидемических мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской
Республики»
Руководство по экспресс-тестированию.
Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Форма направления
Учреждение-отправитель_________________________________________________________
Направление №_ ________________________________________________________________
на исследование крови на наличие антител к ВИЧ.
п/п
№
Регистра
ционный
номер лаборатории
Ф. И. О. пациента
Пол
Год
рождения
Домашний адрес
Кодконтингента
Дата
забора
крови
Результат исследования
Особые пометки_________________________________________________________________
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
Дата забора_______________________________Время забора___________________________
Ф.И.О. врача, направившего на исследование_ _______________________________________
Дата доставки в лабораторию______________________________________________ 20______ г.
Ф.И.О. лица, принявшего материал_________________________________________________
185
ФИО
//
//
//
МЖ
МЖ
Дата постановки теста
МЖ
Пол
Код контингента
Наимен-ие
теста 1/
Срок годности.
Наимен-ие
теста 2/
Срок годности
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ -Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
Результат Положит-й Отриц-й
(обвести ВЛК (обве- ВЛК (обкружком)
сти)
вести)
Подпись
оператора
Примечание
Подпись Руководителя______________________
Всего
Всего недействительных
Всего отрицательных
Всего положительных
* - Недействительный результат теста. Результат считается недействительным, если не окрашивается контрольная полоска на тесте. Вне зависимости
от того, окрасилась ли полоска пациента или нет. Если результат недействителен, зарегистрируйте его в журнале и повторите тест.
№
Год
рожде
ния
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования.
Приложение 2
186
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗДЕЛ 04
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Экспресс тестирование.
187
СОП № 04-05
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ ПО КАПИЛЯРНОЙ КРОВИ С ПРИМЕНЕНИЕМ
ТЕСТОВ «ДETERMIN HIV½ AG».
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОЦПБС – областной центр борьбы со СПИД.
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение качества экспресс-тестирования тестами ДETERMINHIV½ Ag.и получение надёжных
результатов.
1.
2.
3.
4.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Температура в помещении, где проводится тест, должна быть +18°С - 30°С.
При хранении экспресс-тестов в холодильнике, наборы должны быть извлечены за 30 минут до
проведения теста.
Выполняйте все требования по технике безопасности при работе с биоматериалом; используйте
средства индивидуальной защиты (СИЗ - халат, маска, очки, перчатки).
При получении повторно реактивных результатов при экспресс-тестировании необходимо
произвести забор крови (см. СОП№ 02-01 или 02-03) и доставить в лабораторию диагностики ВИЧ
для подтверждения методом ИФА.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Врач
2. Процедурная медсестра/медбрат.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
МАТЕРИАЛЫ
Медицинский халат.
Одноразовые перчатки.
Одноразовый скарификатор.
Одноразовая спиртовая салфетка.
Сухая одноразовая салфетка или стерильные ватные шарики.
Журнал регистрации экспресс-тестирования.
188
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Направление в лабораторию
Емкости для дезинфицирующих средств
Емкости для твердых и жидких отходов
Маркер перманентный с тонким стержнем.
Марля.
Стол, стул.
Дезинфектант для рук
Мыло
РЕАКТИВЫ
1. Наборы экспресс-тестов
2. 70° спирт
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Таймер.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
1.
2.
3.
4.
5.
ИНСТРУКЦИЯ
Подготовить необходимые для проведения исследования расходные материалы: одну тест-полоску,
одну большую и одну маленькую спиртовую салфетку, контейнер с капиллярами, один скарификатор,
флакон с раствором для анализа (Буфер).
Вымойте руки с мылом и протрите руки большой спиртовой салфеткой или жидкостью для
дезинфекции рук.
Снимите защитную фольгу с тест-полоски, потянув за свободный конец.
Найдите на тест-полоске зону внесения крови.
Откройте крышку флакона с раствором для анализа.
Сбросьте первую каплю раствора из флакона в контейнер для сброса отходов.
Извлеките из контейнера с капиллярами новый капилляр и положите его на чистую сухую
поверхность.
Возьмите скарификатор.
Внимание! Если руки холодные, то Вам может быть трудно получить необходимую для анализа
каплю крови. Рекомендуется согреть руки в горячей воде или любым другим способом, например
физической разминкой или массажем.
Поместите руку ладонью кверху.
Обработайте спиртовой салфеткой подушечку безымянного пальца левой руки (для левши – правой
руки).
Установите ланцет на подушечке пальца сбоку.
Сильным нажатием проколите подушечку пальца.
ВЫПОЛНЯТЬ БЕЗ ПРОМЕДЛЕНИЙ!
Нажмите несколько раз пальцами на основание пальца для получения капли крови.
Дотроньтесь до капли крови кончиком капилляра. Кровь начнет заполнять капилляр. Старайтесь
держать капилляр горизонтальнее.
Заполните трубочку кровью между двумя метками, продолжая нажимать на кончик пальца.
Незамедлительно прикоснитесь концом капилляра, заполненного кровью, к зоне внесения крови на
тес- полоске.
Держите капилляр вертикально, дождитесь, пока кровь из капилляра не перетечет на тест-полоску.
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
189
6. После того, как кровь впитается в тест-полоску (но не позже 1 минуты), добавьте на зону внесения
крови 1 каплю раствора для анализа.
7. Включите таймер.
8. Инкубация проводится при комнатной температуре согласно времени, указанному в инструкции
9. Определите результат анализа после завершения инкубации по приведенной ниже расшифровке.
10. Зарегистрируйте результат в журнале регистрации (Приложение 1).
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Недействительный
Если на тест-полоске отсутствует красная полоса в окне контроля (обозначенном “C”) или она
очень бледная, то вне зависимости от полос в окнах, обозначенных “Ag” и “Ab”, результат анализа
НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ, необходимо провести повторный анализ.
Отрицательный
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенном
“Control”), а в окнах, обозначенных “Ag” и “Ab”,полосы отсутствуют
Результат анализа ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ – признаки ВИЧ инфекции не выявлены.
Положительный или позитивный
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенном
“C”) и видна красная или серовато-красная полоса в любом из окон, обозначенных “Ag” или “Ab”, или
видна в обоих окнах сразу
Результат анализа ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ.
ВНИМАНИЕ результат считается положительным при появлении в окне, обозначенном “Ag” или
“Ab”, полосы любой степени окраски при наличии контрольной полосы “C”.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Национальное руководство по экспресс-тестированию на ВИЧ в Кыргызской Республике. Бишкек,
2012. 63 С.
2. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
3. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
190
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
ФИО
Год рождения
//
//
МЖ
МЖ
Дата
Постановки теста
//
Код контингента
МЖ
Пол
Наимен-ие теста/
срок годности.
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ -Нед
+ - Нед
+ - Нед
Тест 1 Результат
Тест 2 (обве(обвести кружсти)
ком)
Подпись
оператора
Примечание
Подпись Руководителя______________________
Всего
Всего недействительных
Всего отрицательных
Всего положительных
* - Недействительный результат теста. Результат считается недействительным, если не окрашивается контрольная полоска на тесте. Вне
зависимости от того, окрасилась ли полоска пациента или нет. Если результат недействителен, зарегистрируйте его в журнале и повторите тест.
№
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования.
Приложение 1
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
191
192
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Экспресс тестирование.
СОП № 04-06
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ ТЕСТОВ «ДETERMIN HIV½ AG»
ПО СЫВОРОТКЕ КРОВИ.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОЦПБС – областной центр борьбы со СПИД.
СИЗ – средства индивидуальной защиты.
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение качества экспресс-тестирования и получения достоверных результатов при
одновременном выявлении антител 1-го и 2-го типов и антигена Р24 к ВИЧ 1.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ:
При каждой постановке анализа необходимо тестировать один положительный и один отрицательный
внутрилабораторный контрольный образец.
За одну постановку анализа тестировать не более 12 биообразцов пациентов (включая контрольные
образцы)
Температура в помещении, где проводится тест, должна быть не ниже +18°С и не выше 25 °С.
Выполняйте требования по технике биобезопасности; используйте средства индивидуальной
защиты (СИЗ).
Положительные результаты экспресс-тестов должны быть подтверждены методом ИФА.
Храните экспресс-тесты при комнатной температуре +18°С и не выше 25 °С.
При температуре в помещении свыше 25°С храните экспресс-тесты в холодильнике при температуре
4-8°С.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией.
2. Врач-лаборант
3. Лаборанты
МАТЕРИАЛЫ
1. Медицинский халат.
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Одноразовые медицинские перчатки.
Маска и очки/ защитный щиток.
Штативы для пробирок.
Журнал для регистрации забранного материала.
Одноразовые наконечники до 200 мкл
Направление в лабораторию.
Емкости для дезинфицирующих средств.
Маркер перманентный с тонким стержнем.
Мебель: стол, стул.
1.
2.
3.
4.
РЕАКТИВЫ
Наборы экспресс тестов
Перекись водорода 6%
70° спирт
Положительный и отрицательные контрольные образцы.
193
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Дозатор полуавтоматический с переменным объемом
2. Таймер
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
ИНСТРУКЦИИ
Наденьте халат и перчатки.
Освободите рабочее место от всех ненужных предметов.
Продезинфицируйте рабочую поверхность стола 70° спирта.
Подготовьте штатив с образцами.
Занесите данные пациента в журнал регистрации
Подготовить необходимое количество экспресс-тестов и проверьте срок годности экспресс-тестов.
Выньте экспресс-тесты из упаковки.
Промаркируйте: поставьте идентификационный номер пациента.
Последние два теста предназначены для внутрилабораторных контрольных образцов
На корпусе предпоследнего теста пометьте маркером КНа последнем тесте пометьте маркером К +
Снимите защитную фольгу с тест-полоски, потянув за свободный конец
(Рис.1)
Найдите на тест-полоске зону внесения крови.
Откройте пробирку с образцом.
Наберите образец пипеткой и внести в зону внесения образца на тесте 1
каплю сыворотки (Рис2).
После того, как образец впитается в тест-полоску (но не позже 1 минуты
после шага 14), добавьте на зону внесения крови 1 каплю раствора
буфера.
194
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Рис. 2.
17. Положите тест-полоску на стол перед собой - слева должен находиться красный конец тест-полоски,
справа – синий конец.
18. Инкубируйте при комнатной температуре согласно времени, указанному в инструкции (20 минут).
19. Определите результат анализа по окончанию времени инкубации по приведённой ниже расшифровке.
20. Зарегистрируйте полученные результаты в журнале регистрации экспресс-тестирования.
21. Выпишите отрицательный результат ЭТ на бланке направления.
22. Проведите послетестовое консультирование и выдайте результат.
Внимание!: При получении первично положительного результата дальнейшее исследование
проводят согласно утверждённому в стране алгоритму.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Результат анализа ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенном
“Control”), а в окнах, обозначенных “Ag” и “Ab”, полосы отсутствуют
Результат анализа ПОЗИТИВНЫЙ
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенном
“C”) и видна красная или серовато-красная полоса в любом из окон, обозначенных “Ag” или “Ab”, или
видна в обоих окнах сразу.
ВНИМАНИЕ результат считается позитивным при появлении в окне, обозначенном “Ag” или “Ab”,
полосы любой степени окраски при наличии контрольной полосы “C”.
Результат анализа НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ
Если на тест-полоске отсутствует красная полоса в окне контроля (обозначенном “C”) или она
очень бледная, то вне зависимости от полос в окнах, обозначенных “Ag” и “Ab”, результат анализа
НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ, необходимо провести повторный анализ.
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
195
Рис. 3 Интерпретация результатов
1.
2.
3.
4.
5.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики,
противоэпидемических мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской
Республики»
Руководство по экспресс-тестированию.
Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
ФИО
Год
рождения
//
//
//
МЖ
МЖ
Код кон- Дата Постатингента новки теста
МЖ
Пол
Наимен-ие
теста/
Срок годности.
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
Результат
(обвести
кружком)
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
ВЛК поло- ВЛК отрижительный цательный
(обвести)
(обвести)
Подпись
оператора
Примечание
Подпись Руководителя______________________
Всего
Всего недействительных
Всего отрицательных
Всего положительных
* - Недействительный результат теста. Результат считается недействительным, если не окрашивается контрольная полоска на тесте. Вне зависимости
от того, окрасилась ли полоска пациента или нет. Если результат недействителен, зарегистрируйте его в журнале и повторите тест.
№
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования.
Приложение 1
196
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗДЕЛ 04
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Экспресс тестирование.
197
СОП № 04-07
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ ПО СЛЮНЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЭКСПРЕСС-ТЕСТОВ
«ОRA QUICK HIV RAPID TEST».
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОЦПБС – областной центр борьбы со СПИД.
ИФА - иммуноферментный анализ
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение стандартных условий проведения экспресс-тестирования на анти-ВИЧ для получения
надежных результатов.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ:
Экспресс-тестирование проводить сотрудник, обученный данному методу и имеющий сертификат.
Допустимая температура в помещении, где проводится тест, от +18°С до + 30°С.
Наборы должны быть извлечены из холодильника за 30 минут до проведения теста.
Выполняйте все требования по технике безопасности при работе с биоматериалом; используйте
средства индивидуальной защиты (халат, маска, перчатки).
Все биологические и расходные материалы, которые соприкасались с биоматериалом (слюнным
транссудатом) должны быть собраны в емкости для биоотходов и утилизированы.
Информация о результате теста по слюне выдаётся устно.
Положительный результат теста должен быть подтверждён методом ИФА и иммунного блотинга.
Проведите послетестовое консультирование и при получении согласия пациента сопроводите в
службу «СПИД».
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Сотрудник, обученный данному методу и имеющий сертификат.
МАТЕРИАЛЫ
1. Медицинский халат
2. Одноразовые медицинские перчатки.
3. Журнал регистрации экспресс-тестирования.
198
4.
5.
6.
7.
8.
9.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Направление в лабораторию
Емкости для дезинфицирующих средств
Емкости для сброса твердых и жидких отходов
Маркер перманентный с тонким стержнем.
Марля.
Стол, стул.
РЕАКТИВЫ
1. Наборы экспресс-тестов
2. 70° спирт
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Таймер.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
ИНСТРУКЦИИ
До начала процедуры теста наденьте перчатки.
Продезинфицируйте и освободите рабочее место от всех ненужных предметов.
Подготовьте необходимое количество экспресс тестов.
Проверьте срок годности экспресс-тестов.
Занесите данные пациента в журнал регистрации экспресс-тестирования (см. Приложение 1)
Установите штатив для многократного использования на ровную поверхность.
Раскройте упаковку из фольги, содержащую тестовое устройство и пробирку.
Проверьте наличие в упаковке влагопоглотителя. В случае его отсутствия утилизируйте данное
тестовое устройство и возьмите новое.
Выньте пробирку c реагентом.
Выньте тестовое устройство из упаковки, не касаясь пластинки теста.
Промаркируйте пробирку с растворителем и тестовое устройство порядковым номером клиента.
Осторожно откройте промаркированную пробирку с растворителем и поместите в штатив.
Попросите пациента взять промаркированное тестовое устройство за боковые стороны и пластинкой
теста провести по наружной поверхности дёсен верхней и нижней челюсти.
Тестовое устройство с забранным материалом поместите в пробирку с буфером так, чтобы оно
касалось дна.
Проверьте, чтобы окно учёта результатов смотрело на Вас.
Включите таймер.
После завершения инкубации (20 минут) определите результат анализа и занесите полученные
данные в журнал регистрации экспресс-тестирования.
Поместите использованное тестовое устройство в емкость для отходов.
Обработайте рабочую поверхность стола дезинфицирующим раствором.
Перенесите ёмкость с медицинскими отходами в комнату автоклавирования для дальнейшей
утилизации.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Результат анализа НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ
Если на тест-полоске отсутствует красная полоса в окне контроля (обозначенного “Cl”) или
она очень бледная, то вне зависимости от полос в окнах, обозначенных “Т ” результат анализа
НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЙ необходимо провести повторный анализ.
РАЗДЕЛ 04
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ
199
Результат анализа ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенном
“С”), а в окне, обозначенном “Т”, полоса отсутствуют
Результат анализа ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ.
Если на тест-полоске видна яркая и хорошо заметная красная полоса в окне контроля (обозначенном
“C”) и видна красная или серовато-красная полоса в окне, обозначенном “Т”.
ВНИМАНИЕ результат считается положительным при появлении в окне, обозначенном “Т”, полосы
любой степени окраски при наличии контрольной полосы “C”.
Положительный Отрицательный Недействительный
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Национальное руководство по экспресс-тестированию на ВИЧ в Кыргызской Республике. Бишкек,
2012. 63 С.
2. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
3. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
№
ФИО
Год
рождения
//
//
//
МЖ
МЖ
МЖ
Пол
Дата
Код
контин- Постановки
гента
теста
Наимен-ие
теста 1
Срок годности.
Наимен-ие
теста 2
Срок годности
Наимен-ие
теста 3
Срок годности
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ -Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
Результат Положит-й Отриц-й
Подпись
(обвести
ВЛК
ВЛК
оператора
кружком) (обвести) (обвести)
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования.
Примечание
Приложение 1
200
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ПОДРАЗДЕЛ 04-1
ИНСТРУКЦИИ ПО ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЮ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Экспресс тестирование.
201
Инструкция к СОП № 04/1 - 01
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
ИНСТРУКЦИЯ
ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ ТЕСТОВ ДETERMINHIV ½ AG/AB
1. Оторвите полоску теста с правой стороны и снимите защитную фольгу с тест-полоски, потянув за
свободный конец (р. 1).
Рис.1
2. Внесите образец на полоску как показано на рисунке 2. Подождите 1 минуту и внесите каплю
буфера “Chasebuffer”
Рис.2
3. Результат теста учитывайте через 20 минут (р.3).
202
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Рис 3.
4. Интерпретируйте результаты экспресс-тестирования в соответствии с рисунком 4:
Контрольная
Антиген
Антитела
Рис 4.
ПОДРАЗДЕЛ 04-1
ИНСТРУКЦИИ ПО ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЮ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Экспресс тестирование
203
Инструкция к СОП № 04/1-02
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
ИНСТРУКЦИЯ
НАЗВАНИЕ ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЕ ПО СЛЮНЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЭКСПРЕСС-ТЕСТОВ
ОRA QUICK HIV RAPID TEST.
1. Установите штатив
2. Раскройте упаковку из фольги, содержащую
тестовое устройство и пробирку.
3. Выньте тестовое устройство из упаковки, не
касаясь пластинки теста.
4. Промаркируйте пробирку с растворителем и
тестовое устройство порядковым номером клиента.
5. Осторожно откройте промаркированную пробирку
с растворителем и поместите в штатив.
6. Попросите
пациента/клиента
взять
промаркированное тестовое устройство за боковые
стороны и пластинкой теста провести по наружной
поверхности десен верхней и нижней челюсти.
204
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
7. Внесение тестового устройства в пробирку с
буфером
8. Установите таймер
9. Интерпретация и учет результатов теста
10. Зарегистрируйте результат в журнале регистрации
(см. приложение 1)
11. Поместите отходы в контейнер для биологически
опасного материала и отправьте на утилизацию.
№
ФИО
Год
рождения
//
//
//
МЖ
МЖ
МЖ
Пол
Дата
Код конПостановки
тингента
теста
Наимен-ие Наимен-ие Наимен-ие
теста 1
теста 2
теста 3
Срок год- Срок год- Срок годности.
ности
ности
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
+ - Нед
Результат Положит-й Отриц-й
(обвести
ВЛК
ВЛК
кружком) (обвести) (обвести)
Форма журнала регистрации экспресс-тестирования.
Подпсь
Оператора
Примечание
Приложение 1
ПОДРАЗДЕЛ 04-1
ИНСТРУКЦИИ ПО ЭКСПРЕСС-ТЕСТИРОВАНИЮ
205
206
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗДЕЛ 05
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ИММУННЫЙ БЛОТИНГ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммунный блотинг.
207
СОП № 05-01
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ АВТОМАТИЧЕСКАЯ ПРОМЫВКА КАНАЛОВ ПРИБОРА
ИММУННОГО БЛОТА “ТЕСAN”.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОЦПБС – областной центр борьбы со СПИД.
НАЗНАЧЕНИЕ
Стандартизация условий очистки каналов прибора «Тесаn» для получения достоверных результатов.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Температура в помещении, где находится прибор должна быть не ниже 18°С и не выше 25°С.
2. К прибору должно быть подведено электропитание и заземление.
3. Автоматическую промывку проводите:
–– после каждого завершения исследования
–– если прибор остался включённым более 1 часа
–– если исследования проводятся не чаще 1 раза в неделю.
МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ
1. Соблюдать меры биологической безопасности.
2. Соблюдать технику безопасности при работе с электроприборами, химическими веществами.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборант
1.
2.
3.
4.
МАТЕРИАЛЫ
Медицинский халат.
Одноразовые перчатки.
Бумага фильтровальная.
Мерный стакан или цилиндр.
208
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
5. Емкости прибора для приготовления реагентов.
6. Емкости для сбора отходов.
РЕАГЕНТЫ
1. 70° спирт
2. Дистиллированная вода.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Аппарат иммунного блота ТЕСАN.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
1.
2.
3.
4.
5.
ИНСТРУКЦИЯ
Автоматическая промывка прибора.
Сообщение в окне “Cover was open” - (крышка прибора открыта) “Press okey” нажмите “YES”
Сообщение в окне “Your channel clean” “Press okey” нажмите “YES”
Сообщение в окне “Run Program”/ нажмите Знак больше >
Сообщение в окне “Liquid Prep”/ “Press okey” нажмите “YES”
Сообщение в окне “Clean”Знак больше >
Сообщение в окне “Ramp Back”/ “Press okey” нажмите “YES”
Сообщение в окне “All Pumps”/ “Press okey”нажмите “YES”
Освободите подводящие трубки и поместите все трубки для реагентов в емкость с очищающим
раствором (250 мл 70° спирта)
Сообщение в окне “Ramp Back” нажмите Знак больше >
Сообщение в окне “Auto Clean” нажмите “YES”
Сообщение в окне “Clean liquid” нажмите “YES ”
После завершения промывки в промывочном растворе выньте подводящие трубки и поместите все
трубки для реагентов в емкость с дистиллированной водой.
Сообщение в окне “Distillet Water” нажмите “YES ”
Сообщение в окне “Auto Clean” нажмите “YES”
Сообщение в окне “Tub Cleaning” нажмите “YES”
Сообщение в окне “Remove Water” нажмите “YES ”
Сообщение в окне “Auto Clean exeit ” нажмите “YES
Выньте трубки из емкости с дистиллированной водой и просушите
Закройте крышку прибора.
Выключите прибор, нажав на задней стенке выключатель вниз.
Поместите использованные расходные материалы в емкости для отходов.
Обработайте рабочую поверхность стола дезинфицирующими средствами.
Перенесите емкости с отходами в комнату автоклавирования для дальнейшей утилизации.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики,
противоэпидемических мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской
Республики»
Руководство оператора по эксплуатации аппарата иммунного блота «Teсan».
Национальное руководство по лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции.
РАЗДЕЛ 05
ИММУННЫЙ БЛОТИНГ
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
209
210
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммунный блотинг.
СОП № 05-02
Издание
01
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра СОП
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МЕТОДОМ ИММУННОГО БЛОТА (ИБ)
НА ПРИБОРЕ «ТЕСАN».
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОЦПБС – областной центр борьбы со СПИД
ИБ – иммунный блотинг.
НАЗНАЧЕНИЕ
1. Обеспечение качества результатов исследования при подтверждении позитивных на ВИЧ в ИФА
образцов методом ИБ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Наличие знаний методики и сертификата у ответственных за постановку исследования ИБ.
Соблюдать меры безопасности при работе с биоматериалом.
Соблюдать технику безопасности при работе с электроприборами, химическими веществами.
Температура в помещении, где проводится тест, должна быть 18°С - 25°С.
Не использовать наборы с истекшим сроком годности
Использовать реагенты только одной серии набора.
Не использовать стрипы повторно.
Не использовать одну емкость для конъюгата и хромогена, не допускать контакта конъюгата и
хромогена с металлическими предметами.
Не проводить исследование в присутствии паров кислот, щелочей альдегидов и пыли, которые
могут менять ферментативную активность конъюгата.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборант
МАТЕРИАЛЫ
1. Сменный халат
РАЗДЕЛ 05
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
ИММУННЫЙ БЛОТИНГ
211
Защитный экран/ очки и маска
Одноразовые перчатки
Бумага фильтровальная
Мерный стакан или цилиндр на 500 мл
Емкости для сбора отходов
Одноразовые наконечники до 1000 мкл
Наконечники одноразовые на 200 мкл
Маркер водостойкий с тонким стержнем.
Бумага формы А4.
Форма бланка (см Приложение 2).
РЕАГЕНТЫ
1. Тест-система
2. 70° спирт
3. Дистиллированная вода.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Аппарат иммунного блота «ТЕСАN»
2. Дозатор 100-1000 мкл
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
ИНСТРУКЦИЯ
До начала исследования проверьте срок годности наборов, все компоненты набора и исследуемые
образцы выдержите при 18°С- 25°С 30 минут.
Освободите рабочее место от всех ненужных предметов.
Продезинфицируйте рабочие поверхности 70 ° спиртом
Занесите данные пациента в журнал регистрации (см. Приложение 1 Форма журнала регистрации)
Приготовьте рабочие растворы согласно требованию инструкции к набору реагентов из расчёта:
a. на 1 стрип- 1,6 мл буфера + 6,6 дистиллированной воды.
b. на 18 стрипов - 30 мл буфера + 120 дистиллированной воды
c. Конъюгат
d. Промывочный раствор
e. Красящий раствор
f. Вода дистиллированная
Откройте крышку прибора.
Поставьте емкости с приготовленными растворами на места соответственно цветной маркировке:
Конъюгат – емкость 250 мл № 1 (коричневое кольцо) Вода дистиллированная– емкость 250 мл № 2
(красное кольцо) Промывочный раствор-емкость 500 мл № 3 (оранжевое кольцо) Красящий раствор
–емкость250 мл № 4 (желтое кольцо)
Вставьте и закрепите подводящие трубки в емкости согласно цветной маркировке.
Подготовьте стрипы соответственно количеству исследуемых образцов включая для одного
положительного и одного отрицательного контрольного образца.
Положите стрипы в кювету прибора.
Включите прибор, нажав на задней панели выключатель в положение вверх.
В окне “RUN PROGRAM” выберите “YES”
Далее в новом окне“WASTEBOTTLE “ выберите “YES”
212
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
14. Далее в новом окне выбора программы кнопками плюс (+) или (-) выберите необходимую программу
Формата Westernblot- №1.
15. Нажмите кнопку “RUN” выберите “YES”
16. В окне появится сообщение: Insert TRAY- Press key Нажмите “YES”
17. В окне появится сообщение: Prime All auto - нажмите “YES”
18. В окне выбора программы кнопками плюс (+) или (-) нажмите с первого (1) стрипа “YES”
19. Выберите количество обрабатываемых стрипов кнопками плюс (+) или (-) Уменьшить или увеличить
в зависимости от стрипов и далее подтвердить “YES”
20. В окне Last аspiration подтвердите финальную аспирацию в конце работы -нажмите “YES”
21. В окне Proc. 1 Disp. - подтвердите начало методики с шага № 1-нажмите “YES”
22. Аппарат автоматически заполнит требуемые каналы, и происходит автоматическое смачивание
стрипов.
23. Подождите звукового сигнала.
24. После остановки процесса откройте крышку прибора.
25. Внесите контрольные и исследуемые сыворотки по 20 мкл в дальнее углубление кювета со стрипами
согласно маркировке образцов.
26. Закройте крышку прибора.
27. Нажмите кнопку “Cont”.
Внимание: Дальнейшее продолжение автоматического процесса будет происходить до сигнала
окончания исследования в приборе и не требует вмешательства оператора (3-3,5 часа)
28. После окончания процесса и остановки прибора откройте крышку и осторожно извлеките стрипы
на сухой чистый лист бумаги и расположите по очередности.
29. Высушите стрипы фильтровальной бумагой. Внимание: избегайте прямого попадания солнечных
лучей на стрипы.
30. Высушенные стрипы закрепите прозрачным скотчем на листе бумаге А4 и промаркируйте
соответственно номеру образца.
31. Определите результат анализа согласно вложенной инструкции в наборе и занесите полученные
результаты исследования в журнал.
32. Интерпретируйте результат иммунного блота:
–– Положительными (позитивными) считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела к 2
env+gag+pol
–– Отрицательными (негативными) считаются сыворотки, в которых не обнаруживается антител
ни к одному из антигенов (белков) ВИЧ или полосы на стрипе, не соответствующие белкам
ВИЧ.
–– Сомнительными (неопределёнными) считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела к
одному гликопротеину ВИЧ и/или каким-либо протеинам ВИЧ. При получении неопределённого
результата с белковым профилем, включающим белки сердцевины (1 env +gag+ pol)
При получении положительного результата иммунного блота выдайте заключениео наличии в
исследуемом материале антител к ВИЧ.
При получении отрицательного результата анализа в ИБ выдайте заключение об отсутствии антител
к ВИЧ.
При получении сомнительного результата с антителами к белкам сердцевины (gag) в иммунном
блоте с антигенами ВИЧ-1 проведите исследование образца на наличие антигенов ВИЧ-2.
33. Выпишите результат и выдайте полученные результаты в эпидемиологический отдел (см.
Приложение 2). ПРИМЕЧАНИЕ: при получении неопределенного результата исследования
необходимо отправить в эпидемиологический отдел 2 образца, через 3-4 недели и после поступления
РАЗДЕЛ 05
ИММУННЫЙ БЛОТИНГ
213
в лабораторию 2 образца провести повторное исследование согласно утвержденному в стране
алгоритму.
34. После проведенных исследований провести автоматическую промывку прибора (см. СОП №
05-01«Автоматическая промывка каналов прибора Иммунного блота Teсan»)
1.
2.
3.
4.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики,
противоэпидемических мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской
Республики».
Руководство оператора аппарата иммунного блота «Тесаn».
Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
№
п/п
Фамилия
Имя
Отчество, адрес, пол, год
рождения.
Оболочечные
ENV
Сердцевин-ные
GAG
Ферменты
POL
Белки ВИЧ
ВИЧ 1/2
Сооб. в эпид отд. ДСП
исход. №
Наименование ДТС Серия,
срок годности
Дата проведения ИБ
Гражданство
Код контингента
Регистрационный номер
образца реф лаборатории
Дата поступления биообразца
Регистрационный номер
отправителя
Форма журнала регистрации и результаты исследования сывороток положительных на ВИЧ, присланных на подтверждение методом
иммунного блотинга.
Начат______________________________________Окончен_____________________________
Наименование лаборатории_ ______________________________________________________
Приложение 1.
Примечание
214
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗДЕЛ 05
ИММУННЫЙ БЛОТИНГ
215
Приложение 2.
Результаты исследования на ВИЧ методом иммуноблотинга
Учреждение отправитель
Регистрационный номер лаборатории отправителя:
1 забор _____________ от ________20 г. 2 забор _____________ от ________20 г.
Регистрационный номер образца в референс-лаборатории:
1 забор _____________ от ________20 г. 2 забор _____________ от ________20 г.
Ф.И.О._________________________________________________________________________
Пол ______ Год рождения: ___________________
Код контингента_________________________________________________________________
Гражданство____________________________________________________________________
Домашний адрес:________________________________________________________________
№
био-пробы
Дата исследования
Название тест-системы,
№ серии, срок годности
Выявленные белки
Результат
Результаты ИФА
Результаты ИБ
Заключение_____________________________________________________________________
Подпись врача-лаборанта_________________________________________________________
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
216
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Иммунный блот.
СОП № 05-03
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРИЕМ УЧЕТ И ХРАНЕНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ ИММУННОГО БЛОТА НА ВИЧ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
ОЦПБС – областной центр борьбы со СПИД.
ДТС – диагностические тест-системы.
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение условий приема, учета и хранения тестов для иммунного блота на ВИЧ, поступающих
в лабораторию.
1.
2.
3.
4.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Тест-системы для иммунного блота на ВИЧ принимаются комиссионно.
Состав комиссии назначается руководителем учреждения и утверждается внутренним приказом
учреждения.
В состав комиссии должны входить представители отдела закупок и бухгалтерии.
Не принимать тест-системы со сроком годности менее 80% от срока, указанного в паспорте.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией.
2. Ответственное материальное лицо.
МАТЕРИАЛ
1. Журнал для регистрации ДТС
2. Ручка/маркер.
3. Калькулятор.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Холодильник
2. Морозильная камера
ИНСТРУКЦИИ
1. Сверьте перечень тест-систем в накладной с фактическим наличием.
2. Проверьте наличие сертификата качества, паспорта, наличие инструкции на русском языке.
3. Проверьте соблюдение условий транспортировки
РАЗДЕЛ 05
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
ИММУННЫЙ БЛОТИНГ
217
Проверьте целостность упаковки
Проверьте наличие хладэлементов в коробке с тест-системами.
Проверьте срок годности на упаковке (не менее 80% от срока годности)
Проверьте серию поступившей партии тест-системам.
Проверьте комплектацию тест-системы согласно вложенной инструкции.
Проверьте выборочно (10%) целостность упаковки планшетов, наличие в упаковке влагопоглотителя.
Проверьте отсутствие в лунках планшета конденсата влаги, целостность укупорки флаконов и
состояние их содержимого (цвет, прозрачность, наличие посторонних примесей в растворах,
руководствуясь описанием компонентов, данных в инструкции по применению тест-системы).
Поместите тест-системы в холодильник на хранение при температуре +2-+8°С.
Внесите запись в журнал учета движения тест-систем (Приложение 1).
В первую очередь используйте тест-системы со сроком годности, наиболее приближенным к
истечению.
Наклейте на дверцу холодильника лист с информацией (название тест-системы, количество и срок
годности).
При нарушении какого-либо из пунктов составить дефектный акт (претензию) с описанием причины
и отправьте поставщику.
Заполните журнал учёта движения тест-систем согласно форме (Приложение №1).
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики,
2. противоэпидемических мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской
Республики».
3. Инструкции к тест-системам.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
Количество наборов
2
Дата получения
1
3
Серия срок годности
ДТС
4
ПРИХОД
Количество тестов в
наборе
5
Цена за ед.
6
7
8
9
10
11
12
РАСХОД
13
14
15
16
ОСТАТОК
Форма журнала учёта движения диагностических тест-систем
Сумма
Источник получения
Подпись материально ответственного лица
ДАТА выдачи
Кому, наименование
учреждения
Количество
Цена за ед.
Сумма
Подпись получателя
Количество
Сумма
17
ПРИМЕЧАНИЕ
Приложение 1.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
218
РАЗДЕЛ 06
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Проточная цитометрия.
219
СОП № 06-01
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ЭКСПЛУАТАЦИИ ЦИТОФЛЮОРИМЕТРА «CYTOMICS FC 500» BECKMAN
COULTER»
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТАХ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД– синдром приобретенного иммунного дефицита
СИЗ – средства индивидуальной защиты
См. – смотри
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение условий работы измерения цитофлюориметра «Cytomics FC 500» Beckman Coulter».
1.
2.
3.
4.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Должны соблюдаться меры по технике безопасности при работе с электроприборами. Внимание!
Оборудование должно быть заземлено.
Цитофлюориметр должен быть подключен к отдельной линии электросети, запрещается
подключение прибора к электросети через переходники и удлинители;
В помещении, где установлен цитофлюориметр, не допускается подключение бытового оборудования
с большой мощностью, создающего помехи в электросети;
В помещении должен быть установлен кондиционер для избежания перегрева прибора.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Зав. лабораторий
2. Врач-лаборант
3. Лаборант.
МАТЕРИАЛЫ
Средства индивидуальной защиты (халат, перчатки медицинские, маска)
ОБОРУДОВАНИЕ
Проточный цитометр «Cytomics FC 500» Beckman Coulter, включающий:
• Карусельный загрузчик образцов
• Карусель
• Рабочая станция
• Клавиатура
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
220
•
•
•
•
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
Мышь
Компьютер с программным обеспечением
Источник питания
Блок USB
ИНСТРУКЦИИ
Включение прибора:
Наденьте средства индивидуальной защиты (СИЗ).
Убедитесь, что контейнер для отходов пуст, и проверьте правильность подсоединения трубок к его
крышке (контейнер находится на боковой стороне источника питания)
Перед включением прибора проверьте состояние фильтров и ловушек в блоке питания (см. рисунок
1)
Откройте крышку корпуса цитометра, потянув ее на себя, затем вверх.
Вытяните на себя подставку с контейнером для обжимающей жидкости, проверьте уровень «Isoton»
(обжимающая жидкость) в контейнере, если требуется, долейте в контейнер обжимающей жидкости
до уровня 2,5 см от верха контейнера. (см. рисунок 1)
Проверьте уровень «Cleans» (чистящий раствор – синего цвета) в контейнере, если требуется,
долейте контейнер раствором «Cleans» (см. рисунок 1).
Внимание! Если вы пролили какой-либо реагент, немедленно осушите место пролития
ветошью, во избежание выпадения кристаллов солей.
Включите блок питания
Включите источник питания, проверьте заряженность источника бесперебойного питания, проверьте
светодиод (на задней панели должна гореть лампочка зеленым цветом).
Нажмите кнопку ON (включить) на системном блоке компьютера.
После загрузки компьютера вы увидите на экране окно входа в программу «Windows». Убедитесь,
что в поле «User Name» (имя пользователя) написано «Administration» (администратор), а поле
«Password» (пароль) остается чистым. Затем нажмите «START» для запуска программного
обеспечения.
После того как на экране появится рабочий стол «Windows», найдите иконку «CXP Cytomics» и
двойным щелчком левой мыши активируйте его.
После этого включается цитометр и начинается инициализация.
Перед выполнением исследований прогрейте систему в течение 40 минут.
На экране появится «RXP Cytometer Startup Wizard» (программа запуска программного обеспечения).
Подсветите Вашу папку, в которой написано Ваше имя, нажмите «Next» (следующий).
Появится список протоколов из вашей папки.
Затем нажмите «Finish» (завершение).
Откройте дверцу блока питания и проверьте «WATER TRAP» (состояние водоотделителя), «AIR
FILTER» (воздушный фильтр) и «Vacuum FILTER» (вакуумный фильтр) (см. рисунок 2).
Удостоверитесь, что в «WATER TRAP» (водоотделителе), и в «Vacuum FILTER» (вакуумном фильтре)
нет жидкости. Если водоотделитель заполнен жидкостью более чем на треть или если фильтры
содержат жидкости, свяжитесь с представителем фирмы «Beckman Coulter» (см. рисунок 2).
Проверьте величину «SYStem VACuum» (системный вакуум). Если его значение меньше 17 дюймов
ртутного столба, свяжитесь с представителем фирмы Beckman Coulter (см. рисунок 2).
Проверьте в «SYStem PRESSure» (давление в системе). Если оно не попадает в диапазон 30 + 2 PSIфунт на квадратный дюйм, выполните следующий действие:
–– потяните ручку «PRESSure ADJuser» (регулятор давления) на себя;
РАЗДЕЛ 06
22.
23.
24.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
221
–– установите давление на отметке 30 + 2 PSI-фунт на квадратный дюйм.
–– для уменьшения давления поверните ручку влево, для увеличения - вправо.
–– надавите на ручку, чтобы вставить ее на место (см. рисунок 2).
Закройте дверцу источника питания.
Проверьте:
–– состояние принтера
–– достаточность бумаги
–– чернильные картриджи (если у Вас цветной принтер).
Проведите промывку аппарата (см. СОП № 06-02 «Промывка цитофлюориметра «Cytomics FC
500»).
Выключение прибора:
Внимание! Если прибор эксплуатируется круглосуточно, выключайте его один раз в сутки.
Закройте рабочее окно в компьютере.
Выделите значок на рабочем столе «FC OFF» (выключить FC).
Сделайте двойной щелчок по значку «FC OFF» (выключить FC).
Нажмите на «Start». На экране появляется «Shut Down Windows» (выключение Windows).
Нажмите «Shut Down Windows» (выключение Windows).
Нажмите «ОК».
Выключите монитор и принтер.
Выключите блок питания (включить прибор снова можно не менее, чем через 30 мин после
выключения).
По окончании работы проведите дезинфекцию поверхностей 700 спиртом аппарата и рабочего стола.
Рисунок 1.
1. Ящик с контейнерами обжимающей жидкости (3) и промывочного раствора (2). Шланги (1) и
штекеры (на задней стенке ящика) должны быть подсоединены.
2. Включить переключатель питания ON/OFF на блоке питания цитометра.
3. Включить компьютер.
222
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
2
4
6
7
3
5
Рисунок 2.
Блок питания с открытой передней панелью:
1 – вакуумная ловушка
2 – водная ловушка
3 – вакуумный фильтр
4 – воздушный фильтр
5 – уровень вакуума
6 – давление в системе подачи жидкостей
7 – регулятор давления
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ
1. Руководство оператора «Cytomics FC 500» Beckman Coulter
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 06
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Проточная цитометрии
223
СОП № 06-02
Издание
№ 01
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРОМЫВКА ЦИТОФЛЮОРОМЕТРА «CYTOMICS FC 500»
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТАХ
ВИЧ – Вирус иммунодефицита человека
СПИД - синдром приобретенного иммунного дефицита
СИЗ – средства индивидуальной защиты
См. – смотри
НАЗНАЧЕНИЕ
Очистка системы подачи образца и вакуумных линий прибора проводится для предотвращения
закупорки трубок прибора и кросс-контаминации проб.
1.
2.
3.
4.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Соблюдение мер техники безопасности при работе с электроприборами
Цитофлюориметр подключен к отдельной линии электросети, запрещается подключение прибора к
электросети через переходники и удлинители;
В помещении, где установлен цитофлюориметр, не допускается подключение бытового оборудования
с большой мощностью, создающего помехи в электросети;
В помещении установлен кондиционер для избежания перегрева прибора.
Все медицинские работники, работающие с кровью, обязаны знать, что нужно делать в аварийной
ситуации (см. «Постконтактная профилактика ВИЧ-инфекции (ПКП)» последней редакции).
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Зав. лабораторий
2. Врач-лаборант
3. Лаборант.
1.
2.
3.
4.
5.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
1. СИЗ
2. Растворы производителя «Beckman Coulter»:
• «Isoton» (обжимающая жидкость – белого цвета)
• «Cleans» (чистящий раствор - синего цвета)
3. Одноразовые пластиковые, нестерильные пробирки производителя «Beckman Coulter».
Перманентный маркер
Лабораторный рабочий стол
224
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
6. Емкость для обеззараживания использованных расходных материалов
7. Дистиллированная вода.
8. Лизоформин 3000
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Система проточной цитометрии: «Cytomics FC 500» «Beckman Coulter» (карусельный загрузчик
образцов, карусель, рабочая станция, клавиатура, мышь, компьютер, источник питания, блок USB).
2. Бактерицидная лампа.
ПОСУДА
Мерный стакан на 1 л для приготовления чистящего раствора «Cleans».
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
ИНСТРУКЦИИ
Промывка прибора до проведения исследований
Проведение автоматической промывки аппарата проводится перед калибровкой.
Наденьте специальную одежду (сменный халат, перчатки, маски).
Включите прибор (см. СОП № 06-01 «Правила эксплуатации цитофлюориметра «Cytomics FC 500»
Beckman Coulter»).
Убедитесь, что контейнер для отходов, находящийся на боковой стороне источника питания, пустой
и проверьте правильность подсоединения трубок к крышке контейнера.
Обратите внимание! В комплект проточного цитометра «Cytomics FC 500» входят две карусели.
Каждая состоит из 32 позиций для пробирок:
• карусель – № 1 для промывки аппарата,
• карусель – № 2 для исследуемых образцов.
Налейте в пластмассовую пробирку 1/3 объёма дистиллированной воды и поставьте в карусель №
1, позиция № 1.
Откройте крышку «MCL» - (пробирочный карусельный загрузчик)
Вставить карусель в «MCL»
Выровняет ее в соответствии с поворотной платформой и установите в MCL Карусель находится в
исходной позиции, когда ручка указывает назад.
Важно! Нельзя поворачивать карусель вручную по часовой или против часовой стрелки.
Выберите протокол для промывки «cleans water pro», не отпуская мышь, перенести список в окне
протокола вниз на панель диспетчера считывания данных)
«Acquisition Manager».
10. В окне сбора данных введите в поле карусель № 1 «Carousel №»
11. В окне сбора данных введите в поле положение пробирки в карусели № 1) «Location».
12. Щелкните левой кнопкой мышки по иконке начать «Start»
13. Начинается автоматическая промывка трубок.
.
14. Через несколько секунд нажимайте на иконку промывка)
, «Prime». Прибор начнет промывку
линии тока образца и проточную ячейку обжимающей жидкостью, для удаления засорения и
пузырьков.
15. Дождитесь сообщения в панели статуса ожидание образца - «Awaiting Sample»..
16. Когда в панель статуса цитометра появится (в нижней части экрана) ожидание образца - «Awaiting
Sample», нажимайте на иконку новый рабочий список -«Newworclist», чтобы очистит панель
«Acquisition Manager» (диспетчера считывание данных)
РАЗДЕЛ 06
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
225
17. Если очистка проведена не полная (много событий), то промывку повторите несколько раз, для этого
заново выберите протокол «cleans water pro» (протокол для промывки), дальше повторите действия
по пунктам 9-16.
18. Дождитесь сообщения в панели статуса ожидание образца- «Awaiting Sample».
19. После завершения промывки уберите пробирки из карусели.
20. Прибор готов к проведению анализа.
21.
22.
23.
24.
25.
Промывка прибора после проведения анализа.
Проведение автоматической промывки аппарата проводится перед выключением прибора.
Возьмите 4 шт. пластмассовых пробирки.
Добавьте в одну пробирку 1/3 объема чистящего раствора – раствор синего цвета - «Cleans»
Во 2, 3, 4 пробирки добавьте 1/3 объема дистиллированной воды.
Выберите панель промывка панели- «Cleans pnl» и перетащите значок вниз на панель диспетчера
считывание данных)
«Acquisition Manager».
26. В окне сбора данных введите в поле карусель №1 «Carousel №»
27. В окне сбора данных введите в поле положение пробирки в карусели -«Location» номер позиции
пробирок № 1,2,3,4)
28. Щелкните левой кнопкой мышки по иконке «Start» (начать)
.
29. Начинается автоматическая промывка проточной ячейки.
30. Запустите цикл промывки промывочным раствором «Cleans» -чистящий раствор синего цвета, для
31.
32.
33.
34.
35.
36.
этого нажмите на иконку
на линейке инструментов цитометра, начинается промывка линии
тока образца и проточной ячейки чистящим раствором.
Дождитесь сообщения в панели статуса ожидание образца - «Awaiting Sample».
Уберите пробирки из карусели.
Затем заполните адаптеры (2 шт.) дистиллированной водой, поставьте в карусель в позиции № 1 и 2
Откройте крышку MCL -пробирочного карусельного загрузчика.
Вставить карусель в MCL.
Выровняйте карусель в соответствии с поворотной платформой и установите на MCL. Карусель
находится в исходной позиции, когда ручка указывает назад.
37. Нажмите на иконку
– «Idle mode» -режим бездействия. В этом режиме происходит сброс
давления в жидкостной системе. В режиме бездействия невозможны измерения, но только в нем
можно провести промывку вакуумных линий прибора (Нажмите только 1 раз).
38. Нажмите иконку с изображением адаптера, для запуска процесса промывки «Auto Cleanse»
(автоматическая чистка)
вакуумных линий.
на панели управления цитометром, выполняется процедура промывки
39. Когда процесс закончится, снова 1 раз нажмите иконку
– «Idle mode»-режим бездействия.
40. Надпись Cleanse cycle in progress в строке состояния цитометра показывает проведение цикла
очистки.
41. Как только появилась надпись ожидание образца - «Awaiting Sample») процесс завершен.
42. После завершения процесса промывки уберите адаптеры из карусели.
ВНИМАНИЕ: Если на аппарате не проводятся исследования долгое время, цикл промывки
необходимо выполнять ежедневно.
226
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
43. Выключить прибор (см. СОП № 06-01 Правила эксплуатации цитофлюориметра «Cytomics FC 500»
Beckman Coulter)
44. В конце рабочего дня обработайте рабочие поверхности стола и цитометра 700 спиртом.
45. Слив отходов в контейнере обеззараживается 3% лизоформином. (Контейнер находится на боковой
стороне источника питания).
Помните о необходимости:
1. Один раз в неделю:
• Чистить «AIR FILTER» (воздушные фильтры).
• Промывать пробоотборник и головку пробоотборника MCL 50% р-ром этилового спирта.
2. Один раз в месяц:
• Промывать контейнер для обжимающей жидкости «Isoton» дезинфицирующим средством.
• Промывать контейнер для «чистящего раствора Cleans» дезинфицирующим средством.
3. Ежедневно после исследования:
• Сливать отходы из контейнера, а контейнер обеззараживать 3% раствором лизоформина.
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ
1. Руководство оператора Cytomics FC 500 «Beckman Coulter»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 06
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко 8
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Проточная цитометрии
227
СОП № 06-03
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК СД4/СД8 НА ПРОТОЧНОМ
ЦИТОФЛЮОРИМЕТРЕ «CYTOMICS FC 500» BECKMAN COULTER.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД- синдром приобретенного иммунного дефицита
СД – кластер дифференцировки
СИЗ – средства индивидуальной защиты
мкл - микролитр
НАЗНАЧЕНИЕ
Определение иммунного статуса ВИЧ инфицированных лиц для назначения и оценки эффективности
антиретровирусной терапии методом проточной цитофлюориметрии. Проточная цитометрия позволяет
измерять интенсивность флуоресценции и рассеяния света от частиц, проходящих по одной в потоке
жидкости через измерительную ячейку. Поскольку частицы (чаще всего клетки) анализируются по
одной, в результате измерения имеется не только среднее значение параметра, но и его распределение в
популяции.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Должны соблюдаться меры по технике безопасности при работе с электроприборами. Внимание!
Оборудование должно быть заземлено.
Цитофлюориметр должен быть подключен к отдельной линии электросети, запрещается
подключение прибора к электросети через переходники и удлинители;
В помещении, где установлен цитофлюориметр, не допускается подключение бытового оборудования
с большой мощностью, создающего помехи в электросети;
В помещении должен быть установлен кондиционер для избежания перегрева прибора.
Соблюдайте правила личной и коллективной безопасности на рабочем месте при работе с
инфицированным биоматериалом.
Все медицинские работники, работающие с кровью, обязаны знать, что нужно делать в аварийной
ситуации (см. «Постконтактная профилактика ВИЧ-инфекции (ПКП)» последней редакции).
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Зав. лабораторий
2. Врач-лаборант
3. Фельдшер-лаборант
228
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
1.
2.
3.
4.
5.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
МАТЕРИАЛЫ
СИЗ
Биоматериал пациентов
Штативы для пробирки.
Одноразовые пластиковые пробирки «Cytomics FC 500».
Одноразовые наконечники
Перманентный маркер
Рабочий стол
Емкость для обеззараживания расходных материалов
ОБОРУДОВАНИЕ
Система проточной цитометрии «Cytomics FC 500» (карусельный загрузчик образцов, карусель,
рабочая станция, клавиатура, мышь, компьютер, источник питания, блок USB)
Одноканальный дозатор
Прибор «Q PREP» - для подготовки проб на исследование.
Холодильник бытовой.
Бактерицидная лампа.
ИНСТРУМЕНТЫ
Таймер или настольные часы.
ПОСУДА
Мерный стакан на 1 литр для приготовления «Cleans» -чистящий раствор – синего цвета.
1.
2.
3.
4.
5.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
РЕАКТИВЫ
Набор моноклональных антител СД3/СД4, СД3/СД8
«Isoton» -обжимающая жидкость – белого цвета
«Cleans» -чистящий раствор - синего цвета
«ImmunoPrep Reagents System» - лизирующий раствор - 3 флакона
Дистиллированная вода
ИНСТРУКЦИИ
Включите прибор на панели (см. СОП № 06-01 Правила эксплуатации цитофлюориметра «Cytomics
FC 500» Beckman Coulter)
Убедитесь в том, что процедура включения прибора выполнена
Удостоверитесь в том, что перед проведением исследований промывка аппарата выполнена
Убедитесь в том, что процедура контроль качества выполнена
Достаньте из холодильника реагенты и образцы крови, оставьте при комнатной температуре +180С,
+250С на 30 минут.
Проверьте кровь на гемолиз, однородность и отсутствие сгустков, инородных частиц.
Перемешайте кровь, осторожно переворачивая каждую пробирку 6-8 раз.
Выставьте чистые пробирки от прибора в карусель в 2 ряда для СД4 и СД8.
Промаркируйте пробирки с указанием номера образца и вида исследуемого маркера Например: 1
пробирка -1/СД4, вторая пробирка -1/СД8 дальше 2/СД4, 2/СД8 и т.д.
В первую пробирку внесите 100 мкл исследуемой крови, и другим наконечником добавьте 20 мкл
моноклональных антител (краситель) СД3/CD4;
Быстро перемешайте пробирку с окрашенной кровью 3-5 секунд в аппарате «Q PREP».
РАЗДЕЛ 06
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
229
12. Во вторую пробирку внесите 100 мкл исследуемой крови и другим наконечником добавьте 20 мкл
моноклональных антител (краситель) СД3/CD8;
13. Поставьте пробирки в темное место на 20 минут при комнатной температуре для окрашивания
клеток СД4/СД8 флюорохромными красителями.
14. Проведите лизис окрашенных образцов крови в режиме 35 сек. на аппарате «Q PREP».
15. Затем через 30 минут добавьте 100 мкл. реагента «Flow Count» - флюоросферы определенной
концентрации для подсчета клеток в каждую пробирку.
16. В комплект проточного цитометра «Cytomics FC 500» входят две карусели, каждая с 32 позициями
для пробирок (карусель – идентификационный № 1 для промывки аппарата, карусель –
идентификационный № 2 для исследуемого образца).
17. Откройте крышку MCL (многопробирочный карусельный загрузчик)
18. Поставьте пробирки с готовыми образцами в карусель (карусель для образца).
19. Вставьте карусель в MCL (многопробирочный карусельный загрузчик образцов)
20. Выровняйте ее в соответствии с поворотной платформой и установите на MCL (многопробирочный
карусельный загрузчик). Карусель находится в исходной позиции, когда ручка указывает назад.
Внимание! Нельзя поворачивать карусель вручную по часовой или против часовой стрелке.
21. Закройте крышку «MCL» (многопробирочный карусельный загрузчик).
22. Выберите панель диспетчера сбора данных или функцию «DRAG AND DROP» (перетащить и
оставить - это ускоренный метод открывания) и перетащите вниз, чтобы выбрать требующийся
«Worklist» (рабочий список), «Panel» (панель), «Protocol» (протокол).
23. В окне диспетчера сбора данных введите в поле «Carousel №» (№ карусели), например:
идентификационный номер карусель 2.
24. В окне сбора диспетчера данных введите в поле «Location» (положение пробирки в карусели)
25. В окне диспетчера сбора данных в поле «Sample ID» (идентификаторы образцов) введите
идентификационный номер образца. Карусель может вместить максимум 32 образца.
26. Выберите панель «Report generator» (доносить в генератор), заполните данные пациента: ID образца
должен совпадать с ID образца в панели задач, дату и время забора, ФИО.
27. Затем нажимайте на кнопку «Save» (сохранить), чтобы сохранить данные пациента.
28. В панели управления (вверху экрана) нажмите на иконку «Start» (начать)
.
29. Происходит регистрация оптических характеристик клеток в проточной кювете (см. рисунок 1)
30. Поставьте галочку в поле «Setup Mode» (режим настройки) на вкладке Acg. Setup (настройка
считывания данных) окна Cytometer control (средства управления цитометром).
31. Для слежения за процессом считывания данных обратите внимание на счетчик в панели состояния,
показывающий количество событий в секунду (внизу экрана).
32. Просмотрите все гистограммы, в проточной кювете с помощью обжимающей жидкости построятся
клетки и происходит выделение зон (гейты), проверьте правильность сбора лимфоцитов на
гистограмме, анализ распределения маркеров (см. рисунки 1,2)
33. Убрать галочку из поля «Setup Mode» (режим настройки).
34. Автоматически происходит счет и выдача результатов (через принтер).
35. По окончания процесса дождитесь сообщения «Awaiting Sample» (ожидание образца).
Внимание! Риск получения травмы. Не отрывайте крышку MCL (многопробирочного
карусельного загрузчика) во время движения карусели. Дождитесь, пока карусель остановится.
36. Уберите все пробирки из карусели.
37. Очистить рабочий лист в окне «Acquisition Manager»
(диспетчера сбора данных).
230
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
38. После тестирования производите полную промывку аппарата и выключите аппарат. (см. СОП №
06-01 Правила эксплуатации цитофлюориметра «Cytomics FC 500» Beckman Coulter, СОП № 06-02
Промывка цитофлюориметра «Cytomics FC 500»).
Рисунок 1. Регистрация оптических характеристик клеток в проточной кювете
SSC
CD4
CD3
FSC
Рисунок 2. Анализ и отображение данных
1. Выделение зоны (гейта) для лимфоцитов (R1-лимфоциты, R2-моноциты, R3 гранулоциты)
2. Анализ распределения маркеров
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ
Руководство оператора «Cytomics FC 500» Beckman Coulter
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 06
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Проточная цитометрия
231
СОП № 06-04
Издание
№ 01
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра СОП
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ЭКСПЛУАТАЦИИ, РЕМОНТ И ТРАНСПОРТИРОВКА
ЦИТОФЛЮОРИМЕТРА «CYFLOW® COUNTER» PARTEC
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТАХ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД - синдром приобретенного иммунного дефицита
СИЗ - средства индивидуальной защиты
См. – смотри
1.
2.
3.
4.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Должны соблюдаться меры по технике безопасности при работе с электроприборами. Внимание!
Оборудование должно быть заземлено.
Цитофлюориметр должен быть подключен к отдельной линии электросети. Запрещается
подключение прибора к электросети через переходники и удлинители;
В помещении, где установлен цитофлюориметр, не допускается подключение бытового оборудования
с большой мощностью, создающего помехи в электросети;
В помещении должен быть установлен кондиционер во избежание перегрева прибора.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Зав. лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборант.
МАТЕРИАЛЫ
1. СИЗ
2. Лабораторный рабочий стол
ОБОРУДОВАНИЕ
Цитофлюориметр «CyFlow® Counter» Partec.
ИНСТРУКЦИИ
Включение аппарата:
1. Наденьте специальную одежду (сменный халат, перчатки)
2. Присоедините кабель основной линии к источнику беспрерывного питания (UPS- порт).
3. Соедините UPS с аппаратом «CyFlow® Counter» Partec.
232
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
4. Соедините отходную трубку к воздушной трубке соответствующего соединителя (смотрите
маркировку) на задней панели аппарата.
5. Закройте красную завинчивающуюся крышку емкости для слива – Waste.
6. Соедините трубку промывочной жидкости с соединителем (смотрите маркировку) на задней панели
аппарата.
7. Заполните емкость для промывочной жидкости промывочной жидкостью до 900 мкл.
8. Закройте синюю завинчивающуюся крышку и удалите воздушные шарики в фильтре осторожным
наклоном емкости.
9. Включить кнопку на задней нижней части аппарата;
10. Затем нажмите на зеленую кнопку на передней панели у экрана Р;
11. Аппарат готов к проведению анализа.
Выключение аппарата:
1. Нажимайте кнопку на передней панели аппарата с логотипом Р;
2. После того, как исчезнет изображение на экране, выключите кнопку (сзади внизу слева);
3. Выключите UPS.
Ремонт аппарата «CyFlow® Counter».
Все ремонтные работы должны производиться местным сервисным инженером или представителем
компании «Partec»
1.
2.
3.
4.
Транспортировка аппарата «CyFlow® Counter»
Перед транспортировкой аппарат подлежит обеззараживанию, (см. стандартную процедуру
обеззараживания).
Для транспортировки аппарата отсоедините от него все внешние трубки
соединения и шнуры энергоснабжения.
Аппарат перевозится в вертикальном положении
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ
Руководство оператора «CyFlow® Counter» Partec
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 06
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко 8
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Проточная цитометрия.
233
СОП № 06-05
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ПРОМЫВКИ ПРОТОЧНОГО ЦИТОМЕТРА «CYFLOW® COUNTER»
PARTEC
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТАХ
СПИД - синдром приобретенного дефицита
ВИЧ - вирус иммунодефицита человека
СИЗ – средства индивидуальной защиты
НАЗНАЧЕНИЕ
Очистка системы производится для того, чтобы удалить остатки проб из системы подачи образца,
чтобы смыть сорбировавшиеся красители и белки со стенок системы (в целях предотвращения закупорки
трубок и кросс-контаминации проб).
1.
2.
3.
4.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Соблюдать меры техники безопасности при работе с электроприборами: не допускается подключение
прибора и его компонентов к электросети через переходники и удлинители; подключение бытового
оборудования (холодильник, кондиционер и др.) большой мощности, создающие помехи в
электросети; необходимо подключение аппарата к отдельной линии электросети.
Температура в помещении должна быть +180С +250С.
В помещении рекомендуется установить кондиционер во избежание перегрева прибора.
Соблюдать меры безопасности при работе с аппаратом «CyFlow® Counter»
Partec.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Зав. лабораторий
2. Врач-лаборант
3. Лаборант.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
МАТЕРИАЛЫ
СИЗ
Одноразовые пробирки (пластмассовые) от прибора «CyFlow® Counter» Partec.
Перманентный маркер
Емкость для обеззараживания использованных расходных материалов
Ватные тампоны, смоченные в 700 спирте
Дистиллированная вода.
234
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
7.
8.
9.
10.
11.
12.
Лабораторный рабочий стол
«Cleaning Solution» (моющий раствор - зеленого цвета) (Partec код № 04-4007).
«Decontamination Solution» (обеззараживающее средство - синего цвета) (Patec код № 04-4010).
«Sheath Fluid for Flow» (промывочный раствор) (Partec код № 04-4007).
«Hypochlonte Solution» (дезинфицирующее средство) (Partec код № 04-4012).
Одноразовые наконечники на 1000 мкл.
1.
2.
3.
4.
5.
ОБОРУДОВАНИЕ
Цитофлюрометр «CyFlow® Counter» Partec.
Автоматический одноканальный дозатор
UPS-стабилизатор электрического напряжения в сети
Холодильник бытовой
Бактерицидная лампа.
ИНСТРУКЦИИ
Включите аппарат (см. СОП № 06-04 Правила эксплуатации, ремонт и транспортировка
цитофлюориметра «CyFlow® Counter» Partec).
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Помывка аппарата до проведения исследований:
Удостоверьтесь, что емкость для промывочной жидкости наполнена, навинчивающаяся крышка
промывочной емкости плотно закрыта.
Наклоните емкость с промывочной жидкостью для удаления воздушных пузырьков, оставшихся
под желтым блоком встроенного фильтра.
Емкость для отходов должна быть пустой, и красная крышка должна быть плотно закрыта.
Наливайте в пробирку 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл) «Cleaning Solution»
(моющий раствор - зеленого цвета) и ставьте в порт аппарат до щелчка.
Нажмите на кнопку «Start» (начать);
Дождитесь завершения измерения и автоматической остановки процедуры самоочистки.
Налейте в пробирку 1600 мкл (по 800 мкл 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл) «Sheath Fluid for
Flow» (промывочный раствор) и ставьте пробирку в порт аппарата до щелчка.
Нажмите кнопку «Start» (начать);
Подождите, пока процедуры измерения и последующей очистки закончатся автоматически.
Промывка аппарата после проведения исследований:
Налейте в пробирку 1600 мкл. (по 800 мкл 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл) «Decontamination
Solution» (обеззараживающее средство - синего цвета) и поставьте пробирку в порт аппарата до
щелчка.
Нажмите кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
процедуры самоочистки.
Налейте в пробирку 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Cleaning Solution»
(моющий раствор - зеленого цвета) и ставьте пробирку в порт аппарата до щелчка.
Нажмите на кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
процедуры самоочистки;
Затем налейте в пробирку 1600 мкл (по 800 мкл 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Sheath Fluid
for Flow» (промывочный раствор) и ставьте пробирку в порт аппарата до щелчка.
Нажмите кнопку «Start» - начнется промывка аппарата, дождитесь завершения измерения и
автоматической остановки процедуры самоочистки;
РАЗДЕЛ 06
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
235
7. Потом еще раз в пробирку налейте 1600 мкл (по 800 мкл 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.)
«Sheath Fluid for Flow» (промывочный раствор) и поставьте в порт аппарата до щелчка.
8. Нажмите кнопку «Start».
9. Через 10 секунд нажимаем «Cancel» (приостановка) и оставляем пробирку с промывочным
раствором в порте аппарата до следующего дня работы.
10. Во избежание высыхания электродов в пробирке должен быть промывочный раствор.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Еженедельная промывка аппарата:
Наливайте в пробирку 1600 мкл. (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Decontamination
Solution» (обеззараживающее средство - синего цвета) и ставьте в порт аппарата до щелчка.
Нажмите кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
последующей процедуры самоочистки.
Наливайте в пробирку 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Cleaning
Solution» (моющий раствор - зеленого цвета) и ставьте в порт аппарата до щелчка.
Нажмите на кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
последующей процедуры самоочистки;
Наливайте в пробирку 1600 мкл. (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Sheath Fluid for
Flow» (промывочный раствор) и ставим в порт аппарата до щелчка
Нажмите кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
последующей процедуры самоочистки.
Еще раз в пробирку наливаем 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Sheath
Fluid for Flow» (промывочный раствор) и ставим в порт аппарата до щелчка.
Нажмите кнопку «Start» (начать) и считаем до 10.
Через 10 секунд нажимаем «Cancel» (приостановка) и оставляем пробирку с промывочным
раствором в прикреплённом виде к порту аппарата до следующего дня работы.
Проследите, чтобы в пробирке осталась жидкость - во избежание высыхания электродов.
Ежемесячная промывка аппарата:
В пробирку наливаем 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Hypochlonte
Solution» (дезинфицирующее средство) и ставьте в порт аппарата до щелчка.
Нажмите кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
последующей процедуры самоочистки.
Наливайте в пробирку 1600 мкл. (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Decontamination
Solution» (обеззараживающее средство - синего цвета) и ставьте в порт аппарата до щелчка.
Нажмите кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
последующей процедуры самоочистки.
Наливайте в пробирку 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Cleaning
Solution» (моющий раствор - зеленого цвета) и ставьте в порт аппарата до щелчка.
Нажмите на кнопку «Start» (начать), дождитесь завершения измерения и автоматической остановки
последующей процедуры самоочистки;
Затем наливайте в пробирку 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Sheath
Fluid for Flow» (промывочный раствор) и ставьте в порт аппарата до щелчка, для того что бы удалить
остатков моющего раствора.
Нажмите кнопку «Start» (начать), подождите пока процедуры измерения и последующей чистки
закончатся автоматически.
Еще раз в пробирку наливаем 1600 мкл (по 800 мкл в 2 раза, так как дозатор на 1000 мкл.) «Sheath
Fluid for Flow» (промывочный раствор) и ставим в порт аппарата до щелчка.
Нажмите кнопку «Start» и считаем до 10 секунд.
236
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
11. Через 10 секунд нажимаем «Cancel» (приостановка) и оставляем пробирку с промывочным
раствором прикреплённым к порту аппарата до следующего дня работы.
12. Проследите, чтобы в пробирке осталась жидкость - во избежание высыхания электродов.
Обработка:
1. Все использованные расходные материалы (пробирки, наконечники) - подлежат дезинфекции и
утилизации;
2. Обрабатывайте прибор, штативы, дозаторы и стол 700 спиртом;
3. В сливную бутыль WASTE наливайте «Decontamination Solution» (обеззараживающее средство синего цвета) и оставляйте на 15 минут, затем выливайте отходы из бутыли;
1.
2.
3.
4.
5.
Техническое обслуживание:
Осторожно очищайте обшивку CyFlow Counter регулярно мягким материалом. Вода не должна
попадать в аппарат и на UPS и контактировать с электрическими соединениями и выключателями.
Во время очищения экрана всегда пользуйтесь специальной жидкостью для чистки экрана
и мягким материалом. Не используйте органические растворители, бензол, алкоголь,
высококонцентрированный отбеливатель и т.п.!!!
Регулярно освобождайте емкость для отходов, очищайте жидкостью для мытья и щеткой.
Очищайте емкость для промывочной жидкости бутилированной питьевой водой и чистой щеткой.
Промывайте питьевой водой несколько раз.
Если аппарат не будет использоваться в течение долгого времени, удостоверьтесь, что вы оставляете
пробирку для образца с промывочной жидкостью прикрепленной к порту образца после проведения
ежедневной процедуры выключения.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Руководство оператора «CyFlow® Counter» Partec
2. Постановление Правительства № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 06
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Проточная цитометрия
237
СОП № 06-06
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК СД4 НА ПРОТОЧНОМ
ЦИТОФЛЮОРИМЕТРЕ «CYFLOW® COUNTER»PARTEC
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТАХ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД- синдром приобретенного иммунного дефицита
СД – кластер дифференцировки
ЭДТА – этилендамететраокседат
СИЗ – средства индивидуальной защиты
Кл/мкл – клетки в микролитрах
НАЗНАЧЕНИЕ
Определение иммунного статуса ВИЧ-инфицированных лиц для назначения и оценки эффективности
антиретровирусной терапии методом проточной цитофлюориметрии. Принцип метода: в проточном
цитометре клетки крови разделяются по их размеру (объему); добавленные меченые красители моноклональные антитела, соединяясь с комплементарными им CD4 рецепторами лимфоцитов/
моноцитов, вызывают изменение окраски рабочего раствора, что определяется флюориметрически.
1.
2.
3.
4.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Должны соблюдаться меры по технике безопасности при работе с электроприборами. Внимание!
Оборудование должно быть заземлено.
Цитофлюориметр должен быть подключен к отдельной линии электросети, запрещается
подключение прибора к электросети через переходники и удлинители;
В помещении, где установлен цитофлюориметр, не допускается подключение бытового оборудования
с большой мощностью, создающего помехи в электросети;
В помещении должен быть установлен кондиционер для избежания перегрева прибора.
Все медицинские работники, работающие с кровью, обязаны знать, что нужно делать в аварийной
ситуации (см. «Постконтактная профилактика ВИЧ-инфекции (ПКП)» последней редакции).
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующая лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборант
238
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
МАТЕРИАЛЫ
СИЗ
Биоматериал (цельная кровь) пациента с ЭДТА
Штатив для пробирок
Одноразовые пластмассовые, нестерильные пробирки от прибора «CyFlow® Counter» Partec
Одноразовые наконечники для автоматических дозаторов объемом на 20-200 мкл, 1000 мкл.
Перманентный маркер
Лабораторный рабочий стол
Емкость для обеззараживания расходных материалов
Спирт 700.
1.
2.
3.
4.
ОБОРУДОВАНИЕ
Проточный цитофлюрометр «Cytlow Counter», Partec.
Автоматические одноканальные дозаторы на 200 мкл и 1000 мкл.
Холодильник бытовой.
Бактерицидная лампа.
ИНСТРУМЕНТЫ
1. Одноканальные дозаторы 20-200 мкл, 1000 мкл.
2. Настольные часы или таймер
ПОСУДА
Мерный цилиндр на 1 л для приготовления «Sheath Fluid for Flow» (промывочный раствор)
обволакивающей жидкости
РЕАКТИВЫ
Набор реактивов «PARTEC».
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ИНСТРУКЦИИ
Каждый раз перед работой наполните бутыль SHEATH с «Sheath Fluid for Flow» (промывочный/
обволакивающей жидкостью) до 900 мл.
Трубку с жёлтым фильтром встряхните, чтобы высвободить пузырьки воздуха под фильтром и
плотно закрывайте крышку.
Бутыль WASTE (для слива) должна быть пустой и крышка плотно закрыта, слив не должен
превышать объем больше половины бутыли. Включите аппарата «Cytlow Counter» (cм. СОП № 0604 Правила эксплуатации, ремонт и транспортировка цитофлюориметра «CyFlow® Counter» Partec).
Перед проведением анализа промойте аппарата (cм. СОП № 06-05 Правила промывки проточного
цитометра «CyFlow® Counter» Partec).
Убедитесь в том, что процедура включения прибора выполнена.
Убедитесь в том, что процедура промывка перед исследованием прибора выполнена.
Удостоверьтесь в том, что процедура ежедневного контроля качества выполнена
Определение абсолютного подсчета СД4 клеток (кл/мкл) у взрослых.
Подготовка проб и проведение исследования:
1. В пробирку от прибора внесите 20 мкл. цельной крови и 20 мкл моноклональных антител-. СД4
mAb PE, аккуратно перемешайте.
2. Инкубируйте образцы 15 минут при комнатной температуре в отсутствие солнечного света.
3. Через каждые 5 мин. в течение 15 мин. встряхиваем пробирку.
РАЗДЕЛ 06
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
239
4. Через 15 минут добавьте 800 мкл. «Lyses buffer» (лизирующего буфера), встряхните или аккуратно
перемешайте на вортексе.
5. Вставьте пробирку с образцом в порт аппарата.
6. Выберите программу для проведения исследования: нажмите последовательно Setting (настройки)
→ Load Script (загрузить программу) → CD4 → Select (выбрать) и нажимаем на “START” (начать)
измерение образца крови.
7. Аппарат выполняет процесс измерения, ход которого отображается в нижней части экрана.
8. Для сохранения данных образца нажимайте на желтую папку, которая находится в левом углу
экрана;
9. На экране появляется клавиатура, где можно написать фамилию пациента или регистрационный
лабораторный номер образца.
10. После введения данных образца пациента нажимаем на Еnter (ввести) → Save (сохранить), данные
сохраняются.
11. Для получения результата в распечатанном виде нажимайте на черную папку, которая находится в
левом углу экрана.
12. Извлекаем пробирку с образцом и вставляем следующий подготовленный образец.
Определение процентного соотношения СД4, абсолютного подсчета СД4 клеток (кл/мкл) и
количества лимфоцитов у детей.
Подготовка проб и проведение исследования:
1. В пробирку (от прибора) внесите 20 мкл. цельной крови, 20 мкл. моноклинальных антител СД4
mAb PE, и 20 мкл. моноклональных антител СД45 mAb PE.
2. Затем пробирку слегка перемешайте;
3. Инкубируйте образцы 15 минут при комнатной температуре в отсутствие солнечного света
4. В течение 15 мин. встряхивайте пробирку с интервалом в 5 мин.
5. Через 15 минут добавьте 400 мкл. «Lyses buffer» Buffer № 1 (лизирующий буфера № 1) и 400
мкл. Lyses buffer» Buffer № 2 (лизирующий буфера № 2) и встряхните пробирку или аккуратно
перемешайте на вортексе.
6. Вставьте пробирку с образцом в порт аппарата.
7. Выберите программу для проведения исследования, для чего нажимаем последовательно Setting
(настройки) →Load Script (загрузка программы) →CD4 percent (%) → Select (выбрать) и нажимаем
на “START” (начать) для измерения образца.
8. Аппарат выполняет процесс измерения, ход которого отображается в нижней части экрана;
9. Для сохранения данных образца нажимаем на желтую папку, которая находится в левом углу экрана;
10. На экране появляется клавиатура, где можно написать фамилию пациента или регистрационный
лабораторный номер образца;
11. После введения данных образца нажимаем на Еnter (ввести) → Save (сохранить), данные
сохраняются;
12. Для получения результата в распечатанном виде нажимаем на черную папку, которая находится в
левом углу экрана.
13. Извлеките пробирку с отработанным образцом и вставьте следующий подготовленный к
исследованию образец;
14. После завершения исследований проводите промывку прибора (см. СОП № 06-05 Правила промывки
проточного цитометра «CyFlow® Counter» Partec).
15. Выключите аппарат (см. СОП № 06-04 Правила эксплуатации, ремонт и транспортировка
цитофлюориметра «CyFlow® Counter» Partec).
240
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ
1. Руководство оператора «CyFlow® Counter» Partec
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 06
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко 8
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Проточная цитометрия
241
СОП № 06-07
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ РЕГИСТРАЦИЯ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ В ЖУРНАЛ, ПЕРЕДАЧА
ИНФОРМАЦИИ В ДИСПАНСЕРНЫЙ ОТДЕЛ.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТАХ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД - синдром приобретенного иммунного дефицита
СД – кластер дифференцировки
АЧЛ – абсолютное число лимфоцитов
ИРИ – иммунорегуляторный индекс
Кл/мкл – клеток в микролитрах
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Своевременно выдать достоверные результаты.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Зав. лабораторий
Врач-лаборант
Лаборант
МАТЕРИАЛЫ
1. Регистрационный журнал
2. Бланк выдачи результата
3. Ручка
ИНСТРУКЦИИ
Результат исследования вносится:
1. Результаты вносятся в регистрационный журнал сразу же после получение результатов анализа.
(cм. таблица 1).
2. Бланк результатов подписывается врачом лаборатории и передается в диспансерный отдел под
роспись получателя (cм. таблица 2)
3. Выдача результатов в диспансерный отдел после проведения анализов - на следующий день.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
242
Таблица 1.
Журнал регистрации поступающего биоматериала на ПЦ и результатов определения маркеров
СД4/СД8
№
п/п
Учреждение
отправитель
биоматериала
Регистрационный лаб.
№ образца
Дата доставФ.И.О.Дата
Пол ки биоматерождения.
риала
Дата Постановки
анализа
Результаты исследования
СД 4
СД 8
ИРИ
АЧЛ
Примечание
Таблица 2
Направление и результаты определения процентного и абсолютного числа Т лимфоцитов
(хелперов CD4 (+) и киллеров / Цитотоксические Т - клетки CD8 (+)) методом проточной
цитометрии.
Учреждение-отправитель_________________________________________________________
Ф.И.О. пациента_________________________________________________________________
Дата рождения_________ пол_______________ Домашний адрес_________________________
_______________________________________________________________________________
Дата и время забора биоматериала_ ________________________________________________
Дата и время доставки в лаборатории_______________________________________________
Особые пометки_________________________________________________________________
Ф.И.О. врача, направившего на исследование_ _______________________________________
Ф.И.О. лица, принявшего материал_________________________________________________
Регистрационный лабораторный номер образца_ _____________________________________
№
п/п
1
CD-маркеры
лимфоцитов
CD 4(+)
Т-хелперы
Результаты исследованной
крови
%
клеток в мкл
Дети
1 год - 6 лет
7 -17 лет
Взрослые
%
клеток в
мкл
%
клеток в
мкл
%
клеток в
мкл
30-40
1000-1840
39-47
830-2110
33-50
600-1700
25-32
810-1520
23-29
490-1300
16-39
300-1000
CD 8(+)
2
Цитотоксические
Т - клетки
3
Абс. число
лимфоцитов
1300-7200
4
Имуннорегулятор.
индекс (Th/Tc)
1000-1600
720-3150
1400-2000
1500-2000
Дата и подпись лабораторного специалиста__________________________________________
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Руководство оператора «CyFlow® Counter» Partec
2. Клинический протокол для 1-3 уровней организации здравоохранения у детей и у взрослых
РАЗДЕЛ 06
ПРОТОЧНАЯ ЦИТОМЕТРИЯ
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
243
244
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РАЗДЕЛ 07
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Полимеразная цепная реакция
245
СОП № 07-01
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ТРЕБОВАНИЯ К ЛАБОРАТОРНОМУ ОБОРУДОВАНИЮ ПЦР ЛАБОРАТОРИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ПЦР - полимеразная цепная реакция
НК - нуклеиновая кислота
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
СОП – стандартная операционная процедура
НАЗНАЧЕНИЕ
Определяет требования к лабораторному оборудованию ПЦР лаборатории
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лаборатории
2. Врач-лаборант
3. Метролог (в случае отсутствия метролога назначается ответственное лицо)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
ИНСТРУКЦИИ
Комплект лабораторного оборудования определяется с учетом используемых наборов реагентов
для выделения НК, амплификации и детекции результатов исследований.
Помещение для каждого этапа проведения ПЦР обеспечивается набором лабораторного
оборудования (см. Приложение 1).
Обеспечьте техническую исправность приборов, оборудования и средств измерения, используемых
в работе лаборатории, а также наличие технических паспортов и рабочих инструкций по
эксплуатации.
Проводится регулярный метрологический контроль средств измерения согласно утвержденному
графику.
Используемые приборы должны соответствовать нормам безопасности и электромагнитной
совместимости.
Для проведения исследования установите приборы в рабочих помещениях в соответствии с
поточностью движения материала, исключающей возможность перекрестной контаминации
исходного материала, выделенных НК и продуктов ПЦР.
Дозаторы, рабочая поверхность и наружная поверхность корпуса приборов должны быть
устойчивы к действию дезинфицирующих средств и ультрафиолетового излучения.
Для каждого этапа проведения ПЦР-исследований предусмотрите наличие холодильников:
–– в комнате приема материала от +4°С до +8°С и -20°С для хранения исследуемых проб;
246
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
–– в комнате выделения НК холодильник от +4 до +8°С и -20°С для хранения набора выделения НК;
–– в комнате ПЦР-амплификации от +4 до +8°С и -20 °С – для хранения наборов обратной
транскрипции и амплификации НК;
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Приказ МЗ КР №104 от 15.03.2011 г. Методические рекомендации по организации работы
лабораторий, использующих метод ПЦР с детекцией в режиме реального времени.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Перечень оборудования ПЦР-лаборатории по этапам исследования
Для обработки материала и выделения ДНК
Бокс биологической безопасности 2 класса
Центрифуга
Центрифуга-вортекс
Микроцентрифуга
Твердотельный термостат с диапазоном рабочих температур от +25°С до +100°С;
Холодильник с камерами, поддерживающими температуру
от +2°С до +8° С и морозильник - 20°С
Вакуумный отсасыватель
Перечень расходного материала ПЦР-лаборатории по этапам исследования
Для обработки материала и выделения ДНК
Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл;
Отдельный набор дозаторов переменного объема (объёмом 10-200 мкл, 20-50 мкл, 100-200 мкл,1001000 мкл).
Одноразовые полипропиленовые микроцентрифужные пробирки с завинчивающимися или плотно
закрывающимися крышками объемом 1,5 мл;
Одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с аэрозольным барьером до 200 и до
1 000 мкл.
Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл;
Штативы для наконечников, микропробирок объемом 1,5 мл;
Емкость с дезинфицирующим раствором.
РАЗДЕЛ 07
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
247
5.
Перечень оборудования ПЦР-лаборатории по этапам исследования
Для приготовления ПЦР-смеси и проведения амплификации
Настольный бокс с бактерицидной лампой;
Амплификатор;
Если ПЦР проводится в формате FEP (флуоресцентная детекция по «конечной точке»), используется
программируемый амплификатор;
ПЦР в формате FRT (флуоресцентная детекция в режиме «реального времени») - используется
программируемый амплификатор роторного или планшетного типа;
Холодильник с камерами, поддерживающими температуру от 2 до 8 °С, морозильник - 20°С;
1.
2.
3.
4.
5.
Перечень расходного материала ПЦР-лаборатории по этапам исследования
Для приготовления ПЦР-смеси и проведения амплификации
Отдельный набор дозаторов переменного объема;
Одноразовые полипропиленовые пробирки для амплификации объёмом 0,5 (0,2) мл;
Одноразовые наконечники для дозаторов с аэрозольным барьером до 100 мкл;
Штативы для наконечников, микропробирок на 0,5 (0,2) мл;
Емкость для сброса отработанных расходных материалов.
1.
2.
3.
4.
248
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Полимеразная цепная реакция
СОП № 07-02
Издание
01
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНЫЕ ОПЕРАЦИОННЫЕ ПРОЦЕДУРЫ
НАЗВАНИЕ ПРИЕМ И ХРАНЕНИЕ ПЦР ТЕСТ-СИСТЕМ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил
Проверил
Утвердил
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СОП - стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека типа 1
СПИД – синдром приобретенного иммунодефицита
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ФИО – фамилия, имя, отчество
НАЗНАЧЕНИЕ
Определение правил приема и хранения ПЦР тест-систем для обеспечения их качества.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Реагенты, которые хранятся от -200С до -700С, должны транспортироваться в сухом льду.
2. При получении тестов их необходимо разукомплектовать в соответствии с указанными
температурами хранения.
3. Прием тест-систем должен проводиться в отдельном помещении.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
2. Врачи-лаборанты
МАТЕРИАЛ
1. Халат и одноразовые резиновые перчатки без талька
2. Перманентный маркер.
ИНСТРУКЦИЯ
1. Оденьте халат и перчатки.
2. Проверьте внешний вид наборов и целостность упаковки.
3. Проверьте соответствие всех документов, прилагаемых к тест-системе. Тест-система должна быть
зарегистрирована в стране. Какие документы должны прилагаться к тест-системе:
–– Паспорт качества
–– Инструкция по применению
–– Срок годности набора и/или каждого из реагентов
РАЗДЕЛ 07
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
249
Важно! Обязательно сравните каталожный номер с тем, который заказывали, т.к. у производителя
по другому каталожному номеру даже при таком же названии теста прибор может быть другой, с
каналами детекции, которых нет в Вашем приборе.
4. Что необходимо предпринимать в случае выявленных нарушений:
–– Информируйте руководство лаборатории о выявленных нарушениях поставки
–– Тест-система в работе не используется до выяснения причин нарушения стандартных условий
поставок и/или ее замены
5. Тест-система не принимается в случае:
–– Расхождения паспортных данных с содержанием этикеток на коробке
–– Неполной комплектации, отличной от указанной в паспорте
–– Нарушения целостности реагентов или их внешнего вида (видимый бактериальный пророст)
–– Нарушения условий транспортировки (в некоторых тест-системах есть индикаторы, которые при
нарушении температуры меняют цвет).
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
250
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Полимеразная цепная реакция
СОП № 07-03
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ВЫЯВЛЕНИЕ ПРОВИРУСНОЙ ДНК ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА
(ВИЧ-1) В КЛИНИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
(ПЦР) С ГИБРИДИЗАЦИОННО-ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ».
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП - стандартная операционная процедура
ВИЧ - вирус иммунодефицита человека
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ФИО - фамилия, имя, отчество
НАЗНАЧЕНИЕ
Определяет порядок работы при выявлении провирусной ДНК вируса иммунодефицита человека
(ВИЧ-1) путем амплификации специфического фрагмента провирусной ДНК методом полимеразной
цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени»
набором «Ампли Сенс ДНК-ВИЧ-FRT».
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
ПЦР исследования проводит обученный персонал
Соблюдение требований стерильности при выполнении работ в ПЦР-зоне.
Внимание! При работе с ДНК необходимо использовать только одноразовые, стерильные,
пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку «РНК/ДНК-free». В ходе
проведения исследования используют одноразовые наконечники для автоматических пипеток с
аэрозольным барьером.
Все лабораторное оборудование, в том числе и автоматические дозаторы, штативы, лабораторная
посуда, а также все рабочие растворы должны быть строго стационарными. Запрещается переносить
их из одного помещения в другое.
Одноразовые пластиковые расходные материалы (пробирки, наконечники) должны сбрасываться в
специальный контейнер и автоклавироваться
Строго соблюдать правила работы с биоматериалом I-II групп патогенности по международной
классификации
Анализ проводится в трех отдельных помещениях (зонах), согласно МУ 1.3.1888-04 «Организация
работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими
агентами III–IV групп патогенности».
РАЗДЕЛ 07
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
251
7. Поверхности столов, а также помещения, в которых проводится постановка ПЦР, до начала и после
завершения работ необходимо облучать ультрафиолетовым светом.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборанты
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ЭТАП ЭКСТРАКЦИИ РНК (ПЦР ЗОНА 1)
Халат и одноразовые резиновые перчатки, предназначенные только для комнаты «ПЦР
пробоподготовки»
Емкость для сброса наконечников с пакетом для автоклавирования
Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки объемом
на 1,5 мл (Эппендорф)
Штатив для пробирок 1,5 мл
Одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с фильтром от 10 до 1000 мкл.
Перманентный маркер.
5.
6.
ЭТАП ПЦР АМПЛИФИКАЦИИ (ПЦР ЗОНА 2)
Халат и одноразовые резиновые перчатки, предназначенные только для комнаты «ПЦР МастерМикс»
Емкость для сброса наконечников с пакетом для автоклавирования
Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки на 0,2 мл
и 1,5 мл (типа Эппендорф).
Одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с аэрозольным барьером от 10 до 1000
мкл.
Штатив для пробирок от 0,2 до 1,5 мл.
Маркер перманентный.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
ОБОРУДОВАНИЕ
Этап экстракции ДНК (ПЦР 1 ЗОНА):
Ламинарный шкаф
Микроцентрифуга до 16 тыс. оборотов в минуту
Вортекс
Набор автоматических пипеток переменного объема на 10 мкл, 50 мкл, 200 мкл, 1000 мкл
Холодильник +2 ОС +8ОС
Морозильник на -20 ОС или -70ОС
Термоблок
Отсасыватель медицинский или хирургический
1.
2.
3.
4.
5.
Этап ПЦР амплификации (ПЦР 2 ЗОНА)
ПЦР настольный бокс с бактерицидной лампой
«Микроцентрифуга» до 16 тыс. оборотов в минуту
Вортекс
Набор автоматических дозаторов переменным объемом на 10 мкл, 50 мкл, 200 мкл
Морозильник на -70ОС
1.
2.
3.
4.
252
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
6. Программируемый амплификатор с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме
«реального времени» Rotor – Gene 3000/6000/
7. Персональный компьютер для Rotor – Gene 3000/6000.
1.
2.
3.
4.
1.
2.
3.
4.
1.
2.
3.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
РЕАКТИВЫ
Комплект реагентов «ДНК сорб - В» вариант-100 для выделения ДНК из клинического материала
из 100 проб, включая контроли
Комплект «АмплиСенс ДНК-ВИЧ- -FRT»
Спирт 70 ОС
0,2 % раствор ДП-2Т или аналог
ИНСТРУКЦИИ
Безопасность
При работе в лаборатории всегда носите специальную одежду или халаты.
Важно! Носить защитную одежду вне лабораторных ПЦР-помещений запрещается.
Вы должны одевать перчатки при:
–– контакте с любым биоматериалом
–– работе в серологических боксах
–– при контакте с любым потенциально контаминированным предметом или материалом.
Вы должны снимать перчатки:
–– вне пределов комнат боксовых помещений
–– при контакте с дверными ручками
–– при контакте с любыми не контаминированными предметами, которыми сотрудники пользуются
без перчаток.
Не допускайте пребывания детей и посторонних людей в рабочих зонах лаборатории.
Двери лаборатории держите закрытыми.
Контроль качества
При каждой постановке ПЦР анализа обязательно тестируйте внутрилабораторные контрольные
образцы (ВЛК)
Результаты тестирования ВЛК заносите в протокол исследований.
При каждой постановке ПЦР анализа на любую инфекцию включайте контрольные образцы на
этапах выделения РНК/ДНК и амплификации (собственно ПЦР).
Выделение ДНК из исследуемого материала в зоне экстракции ДНК (ПЦР 1 зоне)
Планируйте работу заранее, все необходимое разместите в ламинарном шкафу заранее до включения,
ничего не вносите или выносите через воздушный барьер до окончания работы.
Не перегружайте ламинарный шкаф лишними предметами.
Не размещайте ничего в передней части рабочей поверхности ламинарного шкафа, закрывая таким
образцом прорези для воздуха.
Перед работой за 30 мин включите в ламинарном шкафу и в боксе ультрафиолетовую лампу
Через 30 мин выключите ультрафиолетовую лампу в боксе и ламинарном шкафу.
Наденьте халат, чепчик, перчатки.
Включите вентиляцию в шкафах, подождите 15 минут, прежде чем начать работу. НЕРА-фильтр
должен электростатически зарядиться отрицательно для улавливания мельчайших частиц.
Обработайте внутри ламинарного шкафа 70% спиртом.
Прогрейте лизирующий раствор и раствор для отмывки 1 при температуре 65°С до полного
растворения кристаллов.
РАЗДЕЛ 07
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
253
10. Если для проведения анализа используется цельная кровь, то подготовьте клинический материал
при экстракции ДНК из крови.
11. Возьмите пробирки на 1,5 мл. с завинчивающейся крышкой для обработки необходимого количества
проб и контролей, промаркируйте. В пробирки, предназначенные для клинических проб, внесите
отдельными наконечниками по 1,0 мл (1000 мкл.) гемолитика и по 0,25 мл. (250 мкл.) исследуемой
цельной крови соответственно маркировке.
12. Закройте пробирки и аккуратно перемешайте содержимое пробирки на вортексе. Если исследуется
кровь новорожденных детей, то к 1,0 мл. гемолитика добавьте 0,1 мл. (100 мкл.) крови.
13. Оставьте пробирки при комнатной температуре на 3 мин, затем еще раз аккуратно перемешайте
содержимое пробирок на вортексе и оставьте на 3 мин.
14. Отцентрифугируйте пробирки на микроцентрифуге при 8 тыс. об/мин в течение 2 мин. Надосадочную
жидкость уберите с помощью вакуумного отсасывателя, не задевая осадка.
15. К осадку добавьте 0,5 мл. гемолитика, перемешайте на вортексе и оставьте на 3 мин.
Отцентрифугируйте пробирки на микроцентрифуге при 8 тыс. об/мин в течение 2 мин. Надосадочную
жидкость уберите с помощью вакуумного отсасывателя, не задевая осадка.
16. Повторите отмывку лейкоцитов гемолитиком. После последней отмывки осадок клеток должен
быть белым, допускается наличие только небольшого налета розового цвета над осадком (остатки
разрушенных эритроцитов).
Полученный осадок лейкоцитов немедленно лизируйте или замораживайте при температуре
не выше -16 0С на две недели, а при температуре не выше -70 0 С на длительное время.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
Лизис клинического материала
В каждую пробирку к осадку лейкоцитов добавьте по 300 мкл лизирующего раствора, перемешайте
на вортексе до полного суспендирования клеток.
В отдельную пробирку, предназначенную для положительного контроля, добавьте 300 мкл
лизирующего раствора, 95 мкл ОКО и 5 мкл ПКО ДНК ВИЧ-1 и ДНК человека.
В отдельную пробирку, предназначенную для отрицательного контроля, добавьте 300 мкл
лизирующего раствора и 5 мкл ТЕ буфера для элюции ДНК.
Ресуспендируйте сорбент на вортексе и добавьте в каждую пробирку отдельным наконечником по
25 мкл. сорбента.
Перемешайте на вортексе и оставьте пробирки на 10 мин. при комнатной температуре, тщательно
перемешивая содержимое пробирок на вортексе каждые 2 мин.
Осадите сорбент в пробирках центрифугированием при 5 тыс. об/мин на микроцентрифуге в течение
30 сек.
Удалите над осадочную жидкость используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для
каждой пробы.
Добавьте в пробирки по 300 мкл раствора для отмывки 1. Перемешайте на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента. Повторите пункты 6 и 7.
Добавьте в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 2. Перемешайте на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента. Повторите пункты 6 и 7.
Повторите пункт 9.
Поместите пробирки в термостат на 10 мин при температуре 65° С с открытыми крышками для
подсушивания сорбента.
Добавьте 50 мкл ТЕ – буфера для элюции ДНК. Перемешайте на вортексе.
Прогрейте в термостате при температуре +65°С 5 мин.
Перемешайте на вортексе и осадите сорбент на центрифуге при максимальных оборотах в течение
1 мин.
Обработайте ламинарный шкаф
254
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
16. Включите УФ-лампу в шкафу
17. Снимите халат и перейдите в комнату ПЦР 2.
Очищенную ДНК можно хранить в течение недели при температуре от +2°С до 8°С и в течение
года при температуре не выше -20°С.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ
Проводится в зоне 2 - помещении для проведения ПЦР амплификации.
Наденьте халат и перчатки, предназначенные для этой комнаты
Подготовьте ПЦР настольный бокс к работе
Включите УФ-лампу в боксе
Примечание: При работе с ДНК необходимо использовать только одноразовые стерильные
пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку «RNase-free» и/ или
«DNase-free».
Общий объем реакционной смеси – 50 мкл, объем пробы ДНК – 25 мкл. реакционная смесь 25 мкл.
До начала работы разморозьте, тщательно перемешайте на вортексе все реагенты набора и осадите
капли с крышек пробирок.
Приготовьте реакционную смесь на 15 реакций. Для этого в пробирку с ПЦР – смесью -1-FRT ВИЧ
добавьте 160 мкл. ОТ-ПЦР-смеси-2 FEP/FRT и 16 мкл. полимеразы (TagF).
Тщательно перемешайте на вортексе и осадите капли с крышки пробирки.
Внимание! Приготовленная смесь не хранится.
В случае необходимости анализа образцов, количество которых, включая контроли, меньше 15,
рекомендуется приготовить реакционную смесь в отдельной пробирке на 1,5 мл из расчета 15 мкл
ПЦР – смеси-1-FRT ВИЧ, 10 мкл ОТ-ПЦР-смеси-2 FEP/FRT и 1 мкл полимеразы (TagF).
Отберите необходимое количество микропробирок объемом 0,2 мл.
Подпишите пробирки согласно составленному протоколу.
Внесите в пробирки по 25 мкл готовой реакционной смеси. Неиспользованные остатки реакционной
смеси выбросьте.
Используя наконечник с аэрозольным барьером, добавьте 25 мкл. смесей ДНК-пробы, полученных
в результате экстракции из клинических образцов, в пробирку с реакционной смесью.
Внимание! При добавлении ДНК-проб необходимо избегать попадания сорбента в реакционную
смесь для ПЦР.
Для каждой постановки поставьте 2 контрольных образца:
a. отрицательный контроль ПЦР (К-) внести в пробирку 25 мкл ТЕ-буфера.
b. положительный контроль ПЦР (К+) внести в пробирку 25 мкл ПКО ДНК ВИЧ-1 и ДНК
человека.
Обработайте ПЦР бокс
Включите УФ-лампу в ПЦР боксе.
Помещаем пробирки в амплификатор «Rotor-Gene» 3000/6000 («Corbett Research»).
Программирование амплификатора.
Анализ результатов.
Анализируем результаты амплификации участка РНК ВИЧ и ВКО. Накопление продукта
амплификации участка ДНК ВИЧ детектируется по каналу JOE/Yellow, а накопление продукта
амплификации ВКО по каналу для детекции флуорофора FAM/Green.
1. В меню основного окна для каждого канала (количественный анализ) нажмите кнопки
«Динамический фон» и «Коррекция уклона».
2. В меню «СТ Calculation/Вычисление СТ (в правой части окна) выставьте порог – 0,03.
РАЗДЕЛ 07
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
255
3. В меню «Устранение выбросов «Устранение выбросов» установите значение порог/фона – 10% для
канала FAM/Green и 5% для канала JOE/Yellow.
Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой
флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, что определяет наличие
(или отсутствие) для данной пробы ДНК.
Интерпретация результатов
ДНК ВИЧ-1 обнаружена, если для данной пробы в таблице результатов (см.табл.1) по каналу
для флуорофора JOE/Yellow (ДНК ВИЧ-1) определено значение порового цикла СТ, не превышающее
указанное значение, и в таблице результатов по каналу для флуорофора FAM/Green (ВКО) определено
значение порового цикла СТ, не превышающее указанное граничное значение (граничное значение
указывается во вкладыше к набору реагентов).
ДНК ВИЧ-1 не обнаружена, если для данной пробы в таблице результатов по каналу для
флуорофора JOE/Yellow (ДНК ВИЧ-1) значение порового цикла СТ не определено или превышает
указанное граничное значение, а в таблице результатов по каналу для флуорофора FAM/Green (ВКО)
определено значение порового цикла СТ, не превышающее указанное граничное значение.
Результат анализа невалидный, если для данной пробы в таблице результатов по каналу для
флуорофора FAM/Green (ВКО) значение порового цикла СТ не определено или превышает указанное
граничное значение.
1.
2.
3.
4.
Результаты не подлежат учету:
Если в пробе с положительным контролем экстракции ДНК (ПК) отсутствует положительный
сигнал по какому-либо из каналов детекции. Возможная причина: ошибка при экстракции ДНК.
Необходимо провести экстракцию еще раз.
Если в пробе с положительным контролем ПЦР (К+) отсутствует положительный сигнал по какомулибо из каналов детекции. Необходимо провести ПЦР еще раз для всех образцов. Значение Сt в
таблице по каналу ВКО более 28, требуется перестановка данной пробы, начиная с первого этапа
анализа.
Если для данного образца не определено значение порового цикла СТ по каналу для канала ВКО
или получено значение СТ, превышающее указанное значение. Требуется повторное проведение
анализа для данного образца, начиная с этапа экстракции.
Появление любого значения Сt в таблице результатов для отрицательного контроля выделения и
ПЦР свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты
анализа по всем пробам считаются недействительными. Требуется предпринять меры по выявлению
и ликвидации источника контаминации и повторить анализ всех проб.
После интерпретации выписываем результаты.
Таблица1.
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследования
Контроль
Контролируемый этап
ПЦР- исследования
ОК
Значение порового цикла, Сt
По каналу для флуорофора JOE/
Yellow
По каналу для флуорофора FAM/
Green
Экстракция ДНК
Значение отсутствует
Значение отсутствует или определено
значение меньше граничного
ПК
Экстракция ДНК
Определено значение меньше
граничного
Определено значение меньше
граничного
К-
ПЦР
Значение отсутствует
Значение отсутствует
К+
ПЦР
Определено значение меньше
граничного
Определено значение меньше
граничного
256
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Инструкция по применению набора реагентов для выявления провирусной ДНК вируса
иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) в клиническом материале методом ПЦР в режиме
реального времени «Амплисенс ДНК-ВИЧ -FRT»
2. “ПЦР в реальном времени” под редакцией Ребрикова Д.В., Москва. 2009 г.
3. Приказ МЗ КР №104 от 15.03.2011 г. «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп
патогенности».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 07
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Полимеразная цепная реакция
257
СОП № 07-04
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РНК ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА
ЧЕЛОВЕКА (ВИЧ-1) В КЛИНИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ
РЕАКЦИИ (ПЦР) В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ».
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП - стандартная операционная процедура
ПЦР – полимеразная цепная реакция
ТБ – техника безопасности
ВИЧ-1 - вирус иммунодефицита человека -1
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
РНК - рибонуклеиновая кислота
ВЛС – внутрилабораторный стандарт
НАЗНАЧЕНИЕ
Определяет порядок работы при количественном определении РНК ВИЧ-1 методом полимеразной
цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени»
набором «АмплиСенс - ВИЧ-Монитор -FRT».
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Персонал, работающий в ПЦР лаборатории, где используется метод ПЦР, должен пройти
соответствующее обучение.
Работа должна проводиться в лаборатории, имеющей разрешение на работу с патогенными
микроорганизмами 3-4 группы патогенности.
Анализ проводится в двух отдельных помещениях (зонах), согласно МУ 1.3.1888-04 «Организация
работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими
агентами III-IV групп патогенности».
Строгое соблюдение «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими
отходами» СанПин 2.1.7.2790-10 и методических указаний МУ 1,3,2569-09
Работать только в одноразовых перчатках, использовать и менять при каждой операции одноразовые
наконечники с аэрозольным барьером.
Одноразовая пластиковая посуда (пробирки, наконечники) должны сбрасываться в специальный
контейнер, содержащий дезинфицирующий 0,2 % раствор ДП-2Т или аналог.
Все лабораторное оборудование, в том числе и автоматические дозаторы, штативы, лабораторная
посуда, а также все рабочие растворы должны быть строго стационарными. Запрещается переносить
их из одного помещения в другое.
258
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
8. Ламинарные шкафы, а также помещения, в которых проводится постановка ПЦР, до начала и после
завершения работ необходимо облучать ультрафиолетовым светом.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборант
4.
5.
6.
7.
МАТЕРИАЛ
Экстракция РНК (ПЦР 1)
Халат и одноразовые перчатки, предназначенные только для комнаты «ПЦР проб подготовки»
Емкость для сброса наконечников с пакетом для автоклавирования
Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки объемом
на 1,5 мл (типа Эппендорф)
Штатив для пробирок 1,5 мл
Пробирки конические, центрифужные объемом 1,5 мл, стерильные
Одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с фильтром от 10 до 1000 мкл.
Маркер пергаментный.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ОБОРУДОВАНИЕ
Экстракция РНК (ПЦР 1):
Ламинарный шкаф
Микроцентрифуга до 16 тыс. оборотов в минуту
Вортекс
Набор дозаторов переменного объема на 10 мкл, 50 мкл, 200 мкл, 1000 мкл
Холодильник +2 ОС +8ОС
Морозильник на - 20ОС или -70ОС
Термоблок
1.
2.
3.
1.
2.
3.
4.
РЕАКТИВЫ
Комплект реагентов «РИБО-преп» вариант-50 для выделения РНК/ДНК из клинического материала
из 50 проб, включая контроли.
Комплект реагентов «РИБО-сорб-12» для выделения РНК/ДНК из клинического материала.
Спирт 70% (для обработки, сброски материала при работе)
0,2% раствор ДП-2Т или аналог
ТРЕБОВАНИЕ К ПРОЦЕДУРЕ
Безопасность
1. При работе в лаборатории всегда носите специальную одежду или халаты.
Важно! Носить защитную одежду вне лабораторных ПЦР-помещений запрещается.
Вы должны одевать перчатки:
–– при контакте с любым биоматериалом
–– при работе в серологических боксах
–– при контакте с любым потенциально контаминированным предметом или материалом.
2. Вы должны снимать перчатки:
–– вне пределов комнат боксовых помещений
–– при контакте с дверными ручками
РАЗДЕЛ 07
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
259
–– при контакте с любыми не контаминированными предметами, которыми сотрудники пользуются
без перчаток.
3. В рабочих зонах лаборатории недопустимо пребывание детей и посторонних людей.
4. Двери лаборатории следует держать закрытыми.
Контроль качества
1. При каждой постановке ПЦР анализа Вы должны тестировать внутрилабораторный стандартный
образец (ВЛС)
2. Результаты тестирования ВЛС должны быть занесены в протокол исследований.
3. При каждой постановке ПЦР анализа на любую инфекцию Вы должны включать контрольные
образцы на этапах выделения РНК и амплификации (собственно ПЦР).
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
ИНСТРУКЦИИ
Инструкция: Выделение РНК из исследуемого материала проводится в зоне №1
Планируйте работу заранее, все необходимое должно быть размещено в кабинете заранее до
включения, ничего не вносится или выносится через воздушный барьер до окончания работы.
Нежелательна перегрузка кабинета.
Не размещайте ничего в передней части рабочей поверхности, закрывая таким образом прорези для
воздуха.
Перед работой за 30 мин выключить в ламинарном шкафу и в боксе ультрафиолет;
Надеть халат, чепчик, перчатки
Включите вентиляцию, рекомендуется подождать 15 минут, прежде чем начать работу. НЕРАфильтр должен электростатически зарядиться отрицательно для улавливания мельчайших частиц.
Обработать ламинарный шкаф 70% спиртом;
Прогреть раствор для лизиса при температуре +65°С до полного растворения кристаллов.
Экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «РИБО-преп»
Отобрать необходимые количество одноразовых пробирок на 1,5 мл. (Включая отрицательный и
положительный контроли экстракции).
На дно каждой пробирки внести по 10 мкл. ВКО ВИЧ-М- FRT.
В каждую пробирку добавить по 300 мкл раствора для лизиса, перемешать на вортексе.
В пробирки внести по 100 мкл. исследуемых образцов, используя наконечники с фильтром. Закрыть
крышки и перемещать на вортексе.
В отдельную пробирку, в предназначенные для положительных контролей (ПКО1, ПКО2), добавить
300 мкл лизирующего раствора, 90 мкл ОКО и 10 мкл ПКО ДНК ВИЧ-1, 90 мкл ОКО и 10 мкл ПКО
ДНК ВИЧ-2, перемешать содержимое пробирок на вортексе.
В отдельную пробирку, предназначенную для отрицательного контроля, добавить 300 мкл
лизирующего раствора и 100 мкл ОКО. Перемешать на вортексе.
Содержимое пробирок прогреть 5 мин при 65°С в термостате, перемешать на вортексе и осадить
капли жидкость с крышки.
Добавить в пробирки по 400 мкл раствор для преципитации, перемешать на вортексе.
Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 5 мин. при 12 000 g (например, 13400
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
Аккуратно отобрать надосадочную жидкость, не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель
и отдельный наконечник (без барьера) для каждой пробы.
Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 3, плотно закрыть крышки, осторожно
промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
260
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
19. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 1-2 мин. при 12 000 g (например, 13400
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
20. Осторожно отобрать надосадочную жидкость, не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель
и отдельный наконечник (без барьера) для каждой пробы.
21. Добавить в пробирки по 200 мкл раствора для отмывки 4, плотно закрыть крышки, осторожно
промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
22. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 1-2 мин. при 12 000 g (например, 13400
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
23. Осторожно отобрать надосадочную жидкость, не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель
и отдельный наконечник для каждой пробы.
24. Поместить пробирки в термостат при температуре 65°С на 5 мин с открытыми крышками для
подсушивания сорбента.
25. Добавить в пробирки по 50 мкл буфера. Перемешать на вортексе.
26. Поместить в термостат при температуре 65°С на 5 мин, периодически встряхивая на вортексе.
27. Центрифугировать пробирки в течение 1 мин. при 12 000 g (например, 13400 об/мин центрифуги
MiniSpin, Eppendorf).
28. Надосадочная жидкость содержит очищенные РНК.
29. Обработать внутри ламинарного шкафа
30. Включить УФ-лампу в шкафу
ДНК-пробы не рекомендуется хранить дольше 30 мин при температуре от +2°С до +8°С. Для
длительного хранения препарат необходимо хранить при температуре не выше - 16°С в течение
1 месяца или выше -70°С в течение года.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
Экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «РИБО-сорб-12»
Отобрать необходимые количество одноразовых пробирок на 1,5 мл. (Включая отрицательный и
положительный контроли экстракции).
На дно каждой пробирки внести по 10 мкл. ВКО ВИЧ-М- FRT.
В каждую пробирку добавить по 450 мкл. раствора для лизиса, перемешать на вортексе.
(В большом объеме образцов для облегчения процедуры экстракции допускается смешивание в
отдельном одноразовом пробирке лизирующего и ВКО, из расчетов на один образец по 450 мкл.
лизирующего раствора и 10 мкл. ВКО).
В пробирки внести по 100 мкл. исследуемых образцов, используя наконечники с фильтром. Закрыть
крышки и перемешать на вортексе. Осадить на центрифуге для сбора капель жидкости с крышки.
В отдельную пробирку, предназначенную для положительного контроля (ПКО1, ПКО2), добавить
450 мкл. лизирующего раствора, 90 мкл. ОКО и 10 мкл. ПКО ДНК ВИЧ-1, 95 мкл. ОКО и 10 мкл.
ПКО ДНК ВИЧ-2, перемешать содержимое пробирок на вортексе.
В отдельную пробирку, предназначенную для отрицательного контроля, добавить 450 мкл.
лизирующего раствора и 100 мкл. ОКО. Перемещать на вортексе.
Ресуспендировать сорбент, интенсивно перемешивая на вортексе. Добавить в каждую пробирку
отдельным наконечником по 25 мкл. ресуспендированного сорбента.
Перемешать на вортексе и оставить на 10 мин. при комнатной температуре, тщательно перемешивать
каждые 2 минуты.
Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 1 мин. при 7 000 g (например, 10 000
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
Аккуратно отобрать надосадочную жидкость, не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель
и отдельный наконечник (без барьера) для каждой пробы.
РАЗДЕЛ 07
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
261
12. Добавить в пробирки по 500 мкл. раствор для отмывки ВИЧ. Перемешать на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента.
13. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 1 мин. при 7 000 g (например, 10 000
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
14. Отобрать надосадочную жидкость, не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель и
отдельный наконечник (без барьера) для каждой пробы.
15. Добавить в пробирки по 500 мкл. раствора для отмывки 3. Перемешать на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента.
16. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 1 мин. при 7 000 g (например, 10 000
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
17. Отобрать раствор не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник
(без барьера) для каждой пробы.
18. Повторить отмывку 3.
19. Добавить в пробирки по 700 мкл. раствора для отмывки 7. Перемешать на вортексе до полного
ресуспендирования сорбента.
20. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 1 мин. при 7 000 g (например, 10 000
об/мин центрифуги MiniSpin, Eppendorf).
21. Отобрать надосадочную жидкость, не задавая осадок, используя вакуумный отсасыватель и
отдельный наконечник (без барьера) для каждой пробы.
22. Поместить пробирки в термостат при температуре 60°С на 10 мин с открытыми крышками для
подсушивания сорбента.
23. Добавить в каждую пробирку по 50 мкл. буфера для элюции и ресуспендировать сорбент на вортексе.
24. Поместить в термостат при температуре 60°С на 5 мин, перемешать на вортексе и оодить (?) сорбент
на центрифуге в течение 1 мин. при 12 000 g (например, 13 400 об/мин центрифуги MiniSpin,
Eppendorf).
25. Надосадочная жидкость содержит очищенные РНК.
26. Обработать внутри ламинарного шкафа
27. Включить УФ-лампу в шкафу
РНК-пробы готовы к постановке реакции ОТ-ПЦР. РНК-пробы не рекомендуется хранить
дольше 30 мин при температуре от +2°С до +8°С. Для длительного хранения препарат
необходимо хранить при температуре не выше - 16°С в течение 1 месяца или выше -70°С в
течение года.
ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ, ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ И
ДЕТЕКЦИИ ПРОДУКТОВ ПЦР АМПЛИФИКАЦИИ
(Проводится в зоне 2- помещении для проведения ПЦР амплификации).
1. Наденьте халат и перчатки, предназначенные для этой зоны
2. Подготовьте ПЦР бокс к работе
3. До начала работы разморозьте реагенты, тщательно перемешайте на вортексе все и осадите капли с
крышек пробирок путем центрифугирования на микроцентрифуге в течение 5-10 сек.
4. Приготовьте реакционную смесь: для этого в пробирку с лиофилизированным DТТ последовательно
добавьте 300 мкл ОТ-ПЦР-смеси-1FRT/ ВИЧ, 200 мкл ОТ-ПЦР- смеси-2 FEP/FRT ВИЧ, 20 мкл
полимеразы (TagF) и 10 мкл ТМ-Ревертазы (MMlv);
5. Тщательно перемешайте на вортексе содержимое пробирки с реакционной смесью и осадите капли
с крышки пробирки путем центрифугирования на микроцентрифуге.
Внимание! Приготовленная смесь не хранится.
6. Отберите необходимое количество микропробирок объемом 0,2 мл.
262
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
7. Подпишите пробирки согласно составленному протоколу. Общий объем реакционной смеси будет
составлять 50 мкл, объем пробы РНК – 25 мкл. смесей 25 мкл.
8. Внесите в пробирки по 25 мкл готовой реакционной смеси. Неиспользованные остатки реакционной
смеси выбросьте в емкость для сброса.
9. Добавьте с помощью наконечника с аэрозольным барьером в пробирку с реакционной смесью 25 мкл
РНК-пробы, полученной в результате экстракции из клинических образцов. Избегайте попадания
сорбента в реакционную смесь для ОТ-ПЦР!
10. Для каждой постановки используйте 6 контрольных образцов - калибраторов. Для этого в 3 пробирки
с реакционной смесью внесите 3 ДНК-калибратора ПКО ВИЧ (К1, К2, К3) по 25 мкл каждого, в
3 пробирки с реакционной смесью внесите 3 ДНК-калибратора ВКО ВИЧ (В1,В2,В3) по 25 мкл
каждого.
11. Поставьте отрицательный контроль ПЦР - для этого в одну пробирку с реакционной смесью внесите
25 мкл РНК-элюента.
12. Поместить пробирки в амплификатор
13. Запрограммировать прибор для выполнения соответствующей программы амплификации и
детекции флуоресцентного сигнала согласно описанию для данного прибора
14. По окончании выполнения программы приступить к учету результатов
15. Обработайте ПЦР бокс
16. Включите УФ-лампу в ПЦР боксе.
АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Анализ результатов проводят с помощью программного обеспечения используемого прибора для
проведения ПЦР c детекцией в режиме «реального времени». Анализируют кривые накопления
флуоресцентного сигнала по двум каналам:
–– по каналу для флуорофора FAM регистрируется сигнал, свидетельствующий о накоплении
продукта амплификации кДНК ВКО.
–– по каналу для флуорофора JOE регистрируется сигнал, свидетельствующий о накоплении
продукта амплификации фрагмента к ДНК ВИЧ.
–– Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой
флуоресценции с пороговой линией (устанавливается в середине линейного участка прироста
флуоресценции положительного контроля в логарифмической шкале), что соответствует
наличию (или отсутствию) значения порогового цикла Ct в соответствующей графе в таблице
результатов.
2. На основании значений порогового цикла Ct (пересечение кривой флуоресценции с установленной
на соответствующем уровне пороговой линией) и исходя из заданных значений калибраторов КВ1 и
КВ2 происходит автоматическое построение калибровочного графика и расчет значений копий кДНК
ПКО (по каналу JOE/HEX) и ВКО (по каналу FAM) в пробе ПЦР. Полученные значения используют
для расчета концентрации РНК ВИЧ в исследуемых и контрольных образцах по формуле:
Число копий кДНК ВИЧ в пробе ПЦР
Число копий кДНК ВКО в пробе ПЦР
x
коэффициент
= копий РНК ВИЧ/мл
плазмы крови
3. Число копий ВКО/мл плазмы указывается во вкладыше к данной серии набора реагентов и не может
быть использован для расчета результатов, полученных при анализе с использованием реагентов
других серий.
РАЗДЕЛ 07
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
263
ВНИМАНИЕ! Если результат больше, чем 10.000.000 копий/мл, то он выдается как результат более
10.000.000 копий РНК ВИЧ/мл. При получении значения выше линейного диапазона, образец может
быть повторно протестирован после 10-кратного разведения; полученный результат умножают на
10. Если результат меньше, чем 500 копий/мл при экстракции из 100 мкл образца, 250 копий/мл при
экстракции из 200 мкл образца и 50 копий/мл при экстракции из 1 мл образца, то он выдается как
результат менее 500/250/50 копий РНК ВИЧ/мл, соответственно.
Примечание – В случае необходимости получения результатов измерения в Международных
Единицах (МЕ/мл) результаты, измеренные в единицах копий/мл, необходимо умножить на 1,75
(т.е. 1 копия=1,75 МЕ, 1 МЕ=0,57 копий).
ВНИМАНИЕ! Граничные значения концентрации ВКО указаны во вкладыше, прилагаемом к набору
реагентов. См. также инструкции к соответствующим приборам для ПЦР в реальном времени и
методические рекомендации по применению набора реагентов «АмплиСенс®ВИЧ-Монитор-FRT».
Интерпретация результатов в контрольных образцах. Результат ПЦР-исследования считается
достоверным, если получены правильные результаты для контрольных образцов в соответствии с
таблицей оценки результатов контрольных реакций (см. табл. 1).
1. Если для отрицательного контроля экстракции РНК (ОК) по каналу JOE/Yellow/HEX и/или
отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам FAM/Green и JOE/Yellow/HEX получено значение
порогового цикла Ct, необходимо повторить исследование для всех образцов, в которых обнаружена
РНК ВИЧ, начиная с этапа экстракции РНК.
2. Если концентрация ВКО в таблице результатов по соответствующему каналу ниже граничного
значения, указанного во вкладыше, требуется перестановка данной пробы, начиная с первого этапа
анализа.
3. Если коэффициент корреляции R2 при построении калибровочной прямой менее 0,98, требуется
перестановка ПЦР для всех проб.
4. Результат анализа невалидный, если для данной пробы в таблице результатов по каналу для
флуорофора FAM/Green (ВКО) значение порового цикла СТ не определено или превышает указанное
граничное значение.
После интерпретации выписываем результаты и передаем в диспансерный отдел.
Таблица1.
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-исследолвания
Контроль
Контролируемый этап
ПЦР- исследования
ОК
Значение порового цикла, Сt
По каналу для флуорофора
FAM/Green
По каналу для флуорофора JOE/Yellow
Экстракция РНК, ПЦР
Положительный (концентрация
ВКО больше граничного)
Значение отсутствует Отрицательный
ПК1
Экстракция РНК, ПЦР
Положительный (концентрация
ВКО больше граничного)
Положительный. Должен уложиться в дипазон
во вкладыше по результатам расчетов через
ВКО копий/мл
ПК2
Экстракция РНК, ПЦР
Положительный (концентрация
ВКО больше граничного)
Положительный. Должен уложиться в дипазон
во вкладыше по результатам расчетов через
ВКО копий/мл
КК+
ПЦР
Отрицательный
Отрицательный
Значение Ct отсутствует
Значение Ct отсутсвует
Положительный
Положительный
264
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по применению набора реагентов для количественного определения РНК вируса
иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) в клиническом материале методом ПЦР в режиме
реального времени «Амплисенс ВИЧ Монитор-FRT»
2. ПЦР в реальном времени под редакцией Ребрикова Д.В., Москва, 2009 г.
3. № 104 приказ МЗ КР от 15.03.2011 г. «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп
патогенности».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 07
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Полимеразная цепная реакция
265
СОП № 07-05
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА (СОП)
НАЗВАНИЕ ПРОГРАММИРОВАНИЕ, УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ, ПРАВИЛА ЭКСПЛУАТАЦИИ
АМПЛИФИКАТОРА «ROTOR-GENE» 3000/6000
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ИБП - источник бесперебойного питания
ПЦР – полимеразная цепная реакция
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота́
СОП – стандартная операционная процедура
НАЗНАЧЕНИЕ
Программирование, учет результатов, правила эксплуатации амплификатора «Rotor-Gene»
3000/6000.
1.
2.
3.
4.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Напряжение в сети должно быть – 220 V (50 Гц).
Амплификатор «Rotor-Gene» 3000/6000 должен эксплуатироваться при температуре от +15°С до
+35°С.
Требования к компьютеру для амплификатора «Rotor-Gene» 3000/6000:
–– Pentium iV, 2 ГГц,512 Mб RAM, HDD 10 Гб,
–– свободный ИБП порт или COM порт,
–– 15» монитор.
Для обеспечения стабильности работы системы, состоящей из термоциклера и компьютера,
рекомендуется использование источника бесперебойного питания (ИБП) с максимальной
мощностью не менее 1 кВт и временем поддержания напряжения питания, в случае перебоев в
электропитании, не менее 20 минут.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Врачи и лаборанты, работающие в ПЦР лаборатории
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Амплификатор «Rotor-Gene» 3000/6000
2. Компьютер с процессором
ИНСТРУКЦИЯ
Программирование амплификатора
1. Откройте в компьютере на рабочем столе ярлык программы «Rotor-Gene»
266
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
2. Нажмите кнопку «New»/«Новый» в основном меню программы.
3. В открывшемся окне выберите шаблон запуска эксперимента «Advanced»/«Детальный мастер»
и выделите «Dual Labeled Probes»/«Флуоресцентные зонды (TagMan)». Нажмите кнопку «New»/
«Новый».
4. Выбрать тип ротора:
–– «36-Well Rotor»/«36 –луночный ротор»
–– или на 72 лунки -Well Rotor»/ «72 –луночный ротор»
5. Для прибора Rotor-Gene 6000 должно быть отмечено галочкой (если галочка не стоит в окне по
умолчанию, поставить ее с помощью мышки).
6. Нажмите кнопку «Next»/«Далее»
7. В открывшемся окне задайте оператора и выберите объём реакционной смеси:
8. Reaction volume/ Обьем реакции –50 мкл (25 мкл)
9. Нажмите кнопку «Next»/«Далее». В открывшемся окне задайте температурный профиль
эксперимента «Edit profile»/ «Редактор профиля»
РАЗДЕЛ 07
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
267
10. Запрограммировать прибор:
20. Hold/удерж.темп-ры 95оС - 15 мин
21. Cycling/циклирование 95 оС – 20 сек
52 оС – 30 сек
72 оС – 30 сек
Cycle repeats – 5 times/раз
22. Cycling/циклирование 2 95 оС – 20 сек
52 оС – 30 сек*
72 оС – 30 сек
Cycle repeats – 40 times/раз
о
*Флюоресценцию измеряют при 55 С (во втором блоке циклирования) на каналах FAM/Green, JOE/
Yellow.
11. Нажмите дважды кнопку «ОК» / «Да»
268
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
12. В окне «New Run Wizard» нажать кнопку «Calibrate» («Gain Optimisation ….»для «Rotor-Gene»
600). В открывшемся окне в строке «Channel Setting» выбрать каналы YOE/Yellow и FAM/Green.
Установить «Tube Position» 1, «Min Reading» 5. «Max Reading» 10.
13. Нажмите кнопку «ОК/ДА».
14. В нижней части окна отметить галочкой «Perform Calibration (Optimisation) Before 1st Acquisition/
Выполнить оптимизации при 1-м шаге детекции». Нажать кнопку «Cloose».
15. Нажмите кнопку «Далее» запустите амплификацию кнопкой «Старт»
16. Дайте название эксперимента и сохраните его.
17. Внесите данные в таблицу образцов (она открывается автоматически после запуска амплификации).
Типы Образцов:
Укажите тип образца в графе Type. Существует несколько типов образцов, которые перечислены
ниже:
Unknown (Неизвестный образец): Для неизвестных образцов, которые подлежат количественному
анализу или анализу с помощью кривых плавления
Standard (Стандарт): Образцы с известной концентрацией, значения концентраций стандартов
используются для построения кривой стандартов и расчета концентраций неизвестных образцов
None (Никакой): Нет образца в этой позиции
NTC (No Template Control): Негативный контроль без матрицы ДНК
18. Включение / выключение образцов
РАЗДЕЛ 07
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
269
Используйте данное средство управления, чтобы скрыть или показать различные образцы на экране.
Высветленные образцы выключены (не выбраны). Панель Развёртки (Прокручивания) используется
для вывода на экран следующих групп образцов. Вы можете просматривать образцы по отдельности,
щёлкая по ним курсором мыши, или Вы можете скрыть/показать все образцы, входящие в часть
таблицы образцов, которая видна на экране (их количество зависит от пространства экрана),
щёлкнув по кнопке Bank on / Bank off (включить/выключить группу). Чтобы выбрать ряд образцов,
щёлкните курсором мыши на первом образце и протащите мышь до последнего выбираемого.
Когда Вы отпустите кнопку мыши, то выбранные образцы будут либо выделены, либо выключены.
Щёлкнув по кнопке Named On (Включить именованные), Вы сможете увидеть только те образцы,
которым Вы присвоили имя; это быстрый способ показать только отдельные необходимые образцы.
Щёлкая по кнопке All On / All Off (Все включены/Все выключены), Вы можете увидеть / выключить
все 36 или 72 образца. Нажатие на кнопку Edit Samples (Редактировать образцы) открывает окно
редактирования таблицы образцов.
ВНИМАНИЕ: при установке типа «None/Пусто» данные образца анализироваться не будут!
19. Обслуживание системы
• Поддерживайте линзы в относительной чистоте и освобождайте их от пыли, которая может
накапливаться со временем.
• Держите крышку прибора закрытой, если он не используется, чтобы минимизировать попадание
пыли в камеру.
• Заглядывая в термоциклирующую камеру можно заметить в дне камеры округлую линзу, за
которой располагаются светоизлучающие светодиоды. Если эта линза покрывается пылью или
другими загрязнениями, очищайте ее, используя хлопковый тампон и этиловый спирт.
• На боковой стенке нагревательной камеры также имеется круглая линза. На ней обычно не
накапливается пыль, однако, если помещать в камеру влажные или пыльные пробирки, то
частицы с них могут попадать при вращении ротора на линзу. Если требуется очистить эту линзу,
ротор снимите, нажав фиксатор. Линзы чистите, используя хлопковый тампон и этиловый спирт.
270
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция пользователя по применению оборудования «Rotor-Gene» 3000/6000
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 07
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Полимеразная цепная реакция
271
СОП № 07-06
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ СККК ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ КОМПЛЕКТА РЕАГЕНТОВ
«РИБО-ПРЕП»
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП - стандартная операционная процедура
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ДНК - дезоксирибонуклеи́новая кислота́
РНК – рибонуклеиновая кислота
СККК - сухая капля капиллярной крови
ОКО - отрицательный контроль
ПКО - положительный контроль
ВИЧ-1- вирус иммунодефицита человека типа 1
УФО – ультрафиолетовое облучение
НАЗНАЧЕНИЕ
Экстракция ДНК из СККК при использовании комплекта реагентов «РИБО-преп»
1.
2.
3.
4.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
ПЦР исследования проводит обученный персонал
Соблюдение требований стерильности при выполнении работ в ПЦР-зоне.
Внимание! При работе с ДНК необходимо использовать только одноразовые, стерильные
пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку «РНК/ДНК-free». В ходе
проведения исследования используют одноразовые наконечники для автоматических пипеток с
аэрозольным барьером.
Одноразовые пластиковые расходные материалы (пробирки, наконечники) должны сбрасываться в
специальный контейнер и автоклавироваться.
Требования к процедуре: выделение ДНК проводится в зоне для 1 этапа ПЦР.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
2. Врачи и лаборанты
3. Лаборанты
МАТЕРИАЛ
1. Халат и одноразовые перчатки без талька.
272
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
2. Пакеты для автоклавирования
3. Стерильные одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся
пробирки объемом на 1,5 мл (типа Эппендорф).
4. Штатив для пробирок 1,5 мл.
5. Стерильные пробирки с коническим дном объемом 1,5 мл.
6. Одноразовые наконечники для автоматических дозаторов переменным объемом с фильтром от 10 до
1000 мкл свободные от «РНК/ДНК-free» и объема 200 без фильтра
7. Компостер диаметром 6 мм (для каждой пробы должен быть отдельный компостер)
8. Маркер перманентный.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ОБОРУДОВАНИЕ
Ламинарный шкаф
Микроцентрифуга на 16 тыс. оборотов в минуту
Вортекс
Набор автоматических дозаторов переменным объемом на 10 мкл, 50 мкл, 200 мкл, 1000 мкл
Холодильник +2 ОС +8ОС
Морозильник на - 20ОС или -70ОС
Термоблок для пробирок от +25ОС до +100ОС
РЕАГЕНТЫ
1. Набор «РИБО преп»
2. Спирт 70 %
3. Дезинфектант, разрешённый к использованию в КР
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
ИНСТРУКЦИЯ
Надеть халат и перчатки.
Подготовить ламинарный шкаф к работе.
Подготовить пакет для сброса отработанных расходных материалов.
В постановку обязательно включить положительный (ПКО) и отрицательный контроли (ОКО).
Объем клинического материала для экстракции ДНК – 1 сухое пятно крови.
Раствор для лизиса (если он хранился при температуре от +2°С до +8°С) прогреть при температуре
+65°С до полного растворения кристаллов.
Взять пробирки на 1,5 мл для обработки необходимого количества проб и контролей, промаркировать.
Взять необходимое количество заранее простерилизованных компостеров (с диаметром 6 мм).
Используя для каждого образца отдельный компостер вырежьте в соответствующие пробирки круги
с сухими пятнами крови. Для получения достаточного количества материала необходимо одним
компостером вырезать одно целое пятно крови, последовательно совершая 4 вырезания.
Промаркировать одну дополнительную пробирку положительного контроля (ПК) и внести в нее 5
мкл ПКО ДНК ВИЧ-1 и ДНК человека.
Промаркировать одну дополнительную пробирку отрицательного контроля (ОК) и внести в нее 5
мкл буфера.
В пробирки, содержащие бумагу с сухими пятнами крови и с контрольными образцами, добавить
по 700 мкл раствора для лизиса. Закрыть пробирки и аккуратно перемешать содержимое пробирки
на вортексе.
Переставить пробирки в термостат и прогреть при +65°С в течение 30 мин. Во время инкубации
пробирки необходимо встряхивать на вортексе каждые 8­-10 мин.
РАЗДЕЛ 07
ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
273
14. Во время инкубации необходимо приготовить и промаркировать необходимое количество свежих
пробирок на 1,5 мл. для клинических образцов.
15. Вынуть из термостата пробирки и процентрифугировать их на микроцентрифуге в течение 1 мин
при 10 тыс об/мин.
16. Для клинических образцов перенести надосадочную жидкость в соответствующие промаркированные
чистые пробирки.
ВНИМАНИЕ! Необходимо перенести максимальное количество жидкости. Для этого во время
отбора жидкости наконечником необходимо отжимать бумагу, находящуюся в осадке. Допустимо
попадание небольшого количества бумаги вместе с отобранной жидкостью в чистые пробирки.
17. Добавить в пробирки по 600 мкл раствора для преципитации, перемешать на вортексе.
18. Процентрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 5 мин при 13 тыс об/мин.
19. Аккуратно отобрать надосадочную жидкость, не задевая осадок, используя вакуумный отсасыватель
и отдельный наконечник без фильтра для каждой пробы.
20. Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 3, плотно закрыть крышки, осторожно
промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
21. Процентрифугироватьпри 13 тыс об/мин в течение 1-2 мин на микроцентрифуге.
22. Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную жидкость, используя вакуумный
отсасыватель и отдельный наконечник без фильтра для каждой пробы.
23. Добавитьв пробирки по 200 мкл раствора для отмывки 4, плотно закрыть крышки и осторожно
промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз.
24. Процентрифугироватьпри 13 тыс. об/мин в течение 1-2 мин на микроцентрифуге.
25. Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную жидкость, используя вакуумный
отсасыватель и отдельный наконечник без фильтра для каждой пробы.
26. Поместить пробирки в термостат при температуре 65°С на 5 мин для подсушивания осадка (при
этом крышки пробирок должны быть открыты).
27. Добавить в пробирки по 50 мкл буфера. Перемешать на вортексе. Поместить в термостат при
температуре 65°С на 5 мин, периодически встряхивая на вортексе.
28. Процентрифугировать пробирки при 13тыс об/мин в течение 1 мин на микроцентрифуге.
Надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК.
29. Пробы готовы к постановке ПЦР.
30. Обработать ламинарный шкаф
31. Включить УФ-лампу в ламинарном шкафу
32. Снять халат и перчатки, вымыть руки, перейти в комнату ПЦР 2.
Очищенную ДНК можно хранить в течение недели при температуре от +2°С до +8°С и в
течение 1 года при температуре не выше -16°С.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по применению набора реагентов комплекта реагентов «РИБО-преп»
2. №104 приказ МЗ КР от 15.03.2011 г. «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп
патогенности».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
274
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 08
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Контроль качества
СОП № 08-01
Издание
Статус документа
275
№1
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ПРОВЕДЕНИЯ ВНУТРИЛАБОРАТОРНОГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ПРИ
ТЕСТИРОВАНИИ НА ВИЧ И ВИРУСНЫЕ ГЕПАТИТЫ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО
АНАЛИЗА (ИФА).
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
ВЛС – внутрилабораторный стандарт
ИФА – иммуноферментный анализ
СОП – стандартная операционная процедура
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОП – оптическая плотность
КП – коэффициент позитивности
Крит. – критический уровень
НАЗНАЧЕНИЕ
Для систематического оперативного слежения за качеством проведения исследований и
своевременного выявления лабораторных погрешностей.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Проводить внутрилабораторный контроль качества (ВКК) при каждой постановке ИФА.
Иметь в наличии внутрилабораторный стандарт (ВЛС) не менее, чем на 100 постановок.
Исходным материалом для ВЛС должна быть сыворотка крови человека.
20 измерений установочной серии ВЛС для построения доверительных интервалов провести в
течение 20 последовательных постановок. Важно, чтобы все причины, обусловливающие разброс
показателей ВЛС присутствовали: различные операторы, постановки в различные дни.
На каждую новую серию ВЛС строить новую контрольную карту.
1.
2.
3.
4.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ
Заведующий лабораторией
Ответственный по качеству
Врач-лаборант
Лаборант
1.
2.
3.
4.
276
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИНСТРУМЕНТЫ
1. Калькулятор.
1.
2.
3.
4.
1.
2.
3.
4.
МАТЕРИАЛЫ
Ручка.
Линейка.
Миллиметровая бумага.
Разноцветные фломастеры
ИНСТРУКЦИИ
Проведите измерение двадцати первых постановок ВЛС (установочная серия ВКО).
Заносите результаты измерений в форму регистрации 20-ти измерений ВЛС установочных серии
(Приложение 2).
Для унификации расчётов используйте коэффициент позитивности (КП), полученный от каждого
значения оптической плотности ВЛС (ОПвлс), делёного на значение оптической плотности
критического уровня (ОПкрит) данной постановки: КП = ОПвлс/ОПкрит.
Вычислите среднее значение 20 измерений ВЛС по формуле:
где Х1, Х2 Х3 …- значения отдельных измерений ВЛС n – число измерений
5. Вычислите среднеквадратическое отклонение: S (показатель разброса отдельных измерений) по
формуле:
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
где S - сумма измерений
(Хi-X)2 – разница отдельного измерения и Хср., возведённая в квадрат
n-1 – число измерений минус 1.
Если в ряду результатов установочной серии оказалось значение ВЛС, выходящие за пределы ± 2S,
то его не учитывают, а выполняют ещё одно измерение ВЛС, после чего снова подсчитывают Хср. и
S. Общее число таких отклонений не должно превышать двух показаний ВЛС.
Вычислите контрольные пределы: +1S, +2S, +3S и -1S, -2S, -3S.
Постройте на миллиметровой бумаге контрольную карту, где на оси абсцисс (горизонтальная линия)
отложите дни исследования или номер аналитической серии, а на оси ординат (вертикальная линия)
– значение ВЛС.
Через середину оси ординат с помощью чёрного фломастера проведите прямую линию - среднее
значение (Х ср.).
Далее, в соответствии с масштабом 1 маленькая клеточка равна значению 0,01. По обе стороны от
линии Х отмерьте границы ± 1S (выше Х будет находиться значение +1S, ниже Х – значение -1S).
По отмеренным значениям ± 1S зелёным фломастером прочертите линии, параллельные Х.
Таким же образом по обе стороны от линии Х отмерить границы ± 2S (выше Х будет находиться
значение +2S, ниже Х – значение -2S).
По отмеренным значениям ± 2S оранжевым фломастером прочертите линии, параллельные Х.
Затем по обе стороны от линии Х отмерьте границы ±3S (выше Х будет находиться значение +3S,
ниже Х – значение -3S).
По отмеренным значениям ±3S красным фломастером прочертите линии, параллельные Х.
РАЗДЕЛ 08
16.
17.
18.
19.
20.
21.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
277
Внимание! Значение контрольных пределов – 2S и/или -3S не должно быть меньше 1.0, то есть
ниже ОП крит. Поскольку в этом случае позитивный ВЛС будет интерпретирован как негативный,
что уже является ошибкой. Как правило, подобные значения получают при неудовлетворительной
воспроизводимости результатов измерения ВЛС, когда коэффициент вариации (CV) превышает 20%.
Если контрольные пределы – 2S и/или -3S были ниже 1,0, то все 20 измерений установочной серии
аннулируются и после выяснения и устранения причин ошибок заново проводят 20 измерений ВЛС.
Пример расчёта и построения контрольной карты представлен в Приложении 1.
Начиная с 21 постановки, результат каждого значения ВЛС (ОПВЛС//ОПКРИТ) внесите в график (в
виде точек) в соответствии с его местом по отношению к контрольным пределам. Точки соедините
между собой линией.
Для оценки показаний ВЛС используйте контрольные правила Westgard (СОП № 08-03 «Применение
контрольных правил Westgard и порядок выявления лабораторных ошибок»).
Результаты постановки считать удовлетворительными, если значение отношения ОПВЛС к ОПкрит.
находится в интервале ±2S.
Если при этом другие правила не нарушены, то серия анализов пригодна.
Отчёты о выполнении ВКК оформляются в виде контрольной карты Леви-Дженингса, листы
подшиваются в папку «Контрольные карты», а также хранятся в компьютерной версии и
архивируются сроком не менее 3-х лет.
Порядок смены контрольного материала:
Для непрерывного проведения ВКК в период, когда используемого ВЛС остаётся только на 20
аналитических серий, необходим переход на новый контрольный материал путём «перекрывания». Для
этого:
1. В течение 20 постановок лаборатория параллельно с ВЛС, по которому проводится текущий
контроль, исследует новую серию ВЛС.
2. После накопления 20 измерений в новой серии ВЛС проводится расчёт контрольных пределов,
строится новая контрольная карта и проводится последующий оперативный контроль.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Методическое руководство «Обеспечение и внутрилабораторный контроль качества в
иммуноферментном анализе», Бишкек, 2005 г.
2. Приказ МЗ РФ № 220 от 26 05 2003 г. «Об утверждении отраслевого стандарта «Правила проведения
внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных
исследований с использованием контрольных материалов»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
278
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 1.
Примеры расчётов и построения контрольной карты Леви-Дженингса
III. Отношение 20 измерений ОП ВЛС к ОП крит. каждого измерения
№ постановки ВЛС
ОП крит.
ОП ВКО
КП
1
0,570
0,273
2,088
2
0,511
0,259
1,973
3
0,565
0,295
1,915
4
0,618
0,340
1,818
5
0,540
0,300
1,8
6
0,489
0,355
1,377
7
0,590
0,360
1,639
8
0,563
0,287
1,962
9
0,622
0,346
1,797
10
0,578
0,248
2,331
11
0,550
0,295
1,864
12
0,514
0,308
1,668
13
0,487
0,300
1,623
14
0,570
0,274
2,080
15
0,599
0,293
2,044
16
0,536
0,336
1,595
17
0,608
0,260
2,338
18
0,551
0,360
1,530
19
0,577
0,346
1,667
20
0,618
0,334
1,850
IV. Расчёт среднего значения Х:
Х= 2,088+1,973+1,915+1,818+1,8+1,377+1,639+1,962+1,797+2,331+1,864+1,668+1,623+2,080+2,044+1,595+
20
+2,338+ +1,530+1,667+1,850
Х ср. = 1,848
V. Вычисление среднеквадратического отклонения S:
VI. Вычисление значения пределов:
+1S=X+1S= 1,848 + 0,252 = 2,100
+2S=X+2S= 1,848 + 0,504 = 2,352
+3S=X+3S= 1,848 + 0,756 = 2,604
1S=X-1S = 1,848 – 0,252 = 1,596
-2S=X-2S = 1,848 - 0,504 = 1,344
-3S=X-3S = 1,848 – 0,756 = 1,092
РАЗДЕЛ 08
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
279
VII.Построение контрольной карты Леви-Дженингс:
Приложение 2
Форма регистрации 20 измерений ВКО установочной серии
Лаборатория:
Наименование
ВКО
Показатель:
Срок годности
Изготовитель
№ серии
Дата, месяц, год проведения измерений:
с…………………..по……………………….
Исполнители:…………………………………
Тест-система: ……………………………..
Серия…………….срок годности…………
Серия исследований
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Результат измерения
ОП вко
ОП крит.
КП (Хi)
(Хi – Xср)
(Хi – Xср)2
280
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Лаборатория:
Наименование
ВКО
Показатель:
Срок годности
Изготовитель
№ серии
Дата, месяц, год проведения измерений:
с…………………..по……………………….
Исполнители:…………………………………
Тест-система: ……………………………..
Серия…………….срок годности…………
Серия исследований
Результат измерения
ОП вко
ОП крит.
КП (Хi)
(Хi – Xср)
(Хi – Xср)2
12
13
14
15
16
17
18
19
20
n = 20
Х ср =
∑ (Хi – Xср)2 =
Заведующий лабораторией:…………………………………………………………(подпись)
РАЗДЕЛ 08
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Контроль качества
СОП № 08-02
Издание
Статус документа
281
№1
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ПРОВЕДЕНИЯ ВНУТРИЛАБОРАТОРНОГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА
ПРИ ТЕСТИРОВАНИИ НА ВИЧ И ВИРУСНЫЕ ГЕПАТИТЫ C ПОМОЩЬЮ КОМПЬЮТЕРНОЙ
ПРОГРАММЫ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
ВЛС – внутрилабораторный стандарт
ИФА – иммуноферментный анализ
СОП – стандартная операционная процедура
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОП – оптическая плотность
КП – коэффициент позитивности
Крит. – критический уровень
НАЗНАЧЕНИЕ
Для систематического оперативного слежения за качеством проведения исследований и
своевременного выявления лабораторных погрешностей.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Проводить внутрилабораторный контроль качества (ВКК) при каждой постановке ИФА.
Иметь в наличии внутрилабораторный контрольный образец (ВЛС) не менее, чем на 100 постановок.
ВКО должен соответствовать по своей природе исследуемым образцам.
20 измерений установочной серии ВЛС для построения доверительных интервалов провести в
течение 20 последовательных постановок. Важно, чтобы все причины, обусловливающие разброс
показателей ВЛС присутствовали: различные операторы, постановка в различные дни.
На каждую новую серию ВЛС строить новую контрольную карту.
Вводить значения оптической плотности (ОП) ВЛС и ОП критического уровня в ячейки
компьютерной программы необходимо через запятую. Например: 0,354
Ответственный сотрудник должен быть обучен правилам проведения ВКК и работе в компьютерной
программе «Контрольная Карта», уметь интерпретировать результаты ВКК.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ
1. Заведующий лабораторией
282
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
2. Ответственный по качеству
3. Врач-лаборант
4. Лаборант
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Компьютер
2. Программное обеспечение
МАТЕРИАЛЫ
1. Распечатка результатов измерений
1.
2.
3.
4.
5.
ИНСТРУКЦИИ
Проведите измерение двадцати первых постановок ВЛС (установочная серия ВЛС).
Включите компьютер.
Зайдите в папку «Контрольные карты», откройте файл, соответствующий проведённому виду
исследования. Например: «Контрольная карта анти-ВИЧ».
Откройте вкладку «Ввод данных и их анализ».
Внесите в соответствующие столбцы с левой стороны экрана монитора 20 измерений ОПВЛС и
ОПкрит. Компьютерная программа проведёт вычисление коэффициента позитивности (КП) путём
деления ОПвлс на ОПкрит. для унификации результатов измерений (таблица 1):
ОП
ОПкрит
ОП/ОП крит
0,57
0,273
2,087912088
0,511
0,259
1,972972973
0,565
0,295
1,915254237
0,618
0,34
1,817647059
0,54
0,3
1,8
0,489
0,355
1,377464789
0,59
0,36
1,638888889
0,563
0,287
1,961672474
0,622
0,346
1,797687861
0,578
0,248
2,330645161
0,55
0,295
1,86440678
0,514
0,308
1,668831169
0,487
0,3
1,623333333
0,57
0,274
2,080291971
0,599
0,293
2,044368601
0,536
0,336
1,595238095
0,608
0,26
2,338461538
0,551
0,36
1,530555556
0,577
0,346
1,667630058
0,618
0,334
1,850299401
Таблица 1. Результаты 20 измерений установочной серии ОПвлс (ОП) и ОПкрит для расчёта КП
(ОП/ОПкрит).
6. В правой части экрана будут отображены рассчитанные показатели среднего значения 20 измерений
ВЛС – Х ср. (средняя); среднеквадратичного отклонения – S (SD); и значений контрольных пределов:
-1S; +1S; -2S; +2S; -3SD; +3SD (табл. 2).
РАЗДЕЛ 08
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Средняя
SD
-1SD
+1SD
-2SD
+2SD
-3SD
+3SD
1,848178
0,252104
1,596074
2,100282
1,34397
2,352386
1,091867
2,60449
283
Таблица 2. Результаты вычислений установочной серии ВКО для построения контрольной карты
Леви-Дженнингс.
7. Если в ряду результатов установочной серии оказалось значение ВЛС, выходящие за пределы ±
2S, то его следует исключить из расчёта Хср. и среднеквадратичного отклонения S и выполнить
недостающее измерение ВЛС, после чего внести его в соответствующие столбцы программы.
Общее число таких отклонений не должно превышать двух показаний ВЛС.
Внимание! Поскольку компьютерная программа «Контрольная карта» обеспечена защитой, то
можно вносить изменения только в графы «ОП» - для показаний ВЛС и «ОПкрит» - для показаний ОП
критического уровня. Чтобы удалить несоответствующие показания ВЛС в установочной серии, следует
в нужной строке выделить левой кнопкой мышки 2 клетки («ОП» и «ОПкрит») и нажать «delete». Затем
на пустые клетки переместить нижестоящие показания ВЛС и ОП крит.
л
Контрольная карта Леви-Дженингс анти-ВИЧ
+3S=2,6
+2S=2,35
+1S=2,1
ОП/Опкрит
Х ср.
-1S=1,59
-2S=1,34
-3S=1,09
1
11 21 31 41 51 61 71 81 91 101 111 121 131 141 151 161 171 181 191 201
1-сүрөт. Леви-Дженнингс контролдук
картасын
Постановка
ИФА түзүү
Рисунок 1. Построение контрольной карты Леви-Дженнингс
Внимание! Значение контрольных пределов –2S и/или -3S не должно быть меньше 1.0, то есть
ниже ОП крит. Поскольку в этом случае позитивный ВЛС будет интерпретирован как отрицательная,
что уже является ошибкой. Как правило, подобные значения получают при неудовлетворительной
воспроизводимости результатов измерения ВЛС, когда коэффициент вариации (CV) превышает 20%.
Если контрольные пределы –2S и/или -3S оказались ниже 1.0, то все 20 измерений установочной серии
аннулируются и после выяснения и устранения причин ошибок заново проводят 20 измерений ВЛС,
рассчитывают контрольные пределы и строят контрольную карту.
8. Начиная с 21 постановки, учитывайте результат каждого значения ВЛС (ОП ВКО/ ОПКРИТ) по графику
в соответствии с его местом по отношению к контрольным пределам.
9. Результаты постановки считаются удовлетворительными, если значение отношения ВЛС к ОПкрит.
находится в интервале ±2S.
10. Если при этом другие правила не нарушены, то серия анализов пригодна.
284
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
11. Интерпретация приемлемости результатов ВЛС и поиск причин ошибок, представлены в СОП №
08-03 «Правила применения контрольных правил WESTGARD и порядок выявления лабораторных
ошибок».
12. Отчёты о выполнении ВКК оформляются в виде контрольной карты Леви-Дженнингса, выполненной
в компьютерной версии (рис.1), распечатки законченных контрольных карт подшиваются в папку
«Контрольные карты» и архивируются сроком не менее 3-х лет.
Порядок смены контрольного материала:
Для непрерывного проведения ВКК в период, когда используемого ВЛС остаётся только на 20
аналитических серий, необходим переход на новый контрольный материал путём «перекрывания». Для
этого:
1. В течение 20-ти постановок лаборатория параллельно с ВЛС, по которому проводится текущий
контроль, исследует новую серию ВЛС.
2. После накопления 20 измерений в новой серии ВКО проводится расчёт контрольных пределов,
строится новая контрольная карта и проводится последующий оперативный контроль.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Приказ МЗ РФ № 220 от 26 05 2003 г. «Об утверждении отраслевого стандарта «Правила проведения
внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных
исследований с использованием контрольных материалов»
2. Методическое руководство «Обеспечение и внутрилабораторный контроль качества в
иммуноферментном анализе», Бишкек, 2005 г.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 08
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Контроль качества
СОП № 08-03
Издание
Статус документа
285
№1
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЕ КОНТРОЛЬНЫХ ПРАВИЛ WESTGARD И ПОРЯДОК ВЫЯВЛЕНИЯ
ЛАБОРАТОРНЫХ ОШИБОК
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
ВЛС – внутрилабораторный стандарт
ИФА – иммуноферментный анализ
СОП – стандартная операционная процедура
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ОП – оптическая плотность
КП – коэффициент позитивности
Крит. – критический уровень
НАЗНАЧЕНИЕ
Для выявления лабораторных погрешностей, систематизации поиска причин ошибок и
своевременного их устранения.
1.
2.
3.
4.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Применяйте правила каждый раз при получении результата постановки внутрилабораторного
контрольного образца (ВКО).
О каждой ошибке доложите ответственному по качеству или заведующему лабораторией.
Поиск причин ошибок выполняет ответственный по качеству совместно с сотрудниками
лаборатории.
Причины ошибок должны устраняться своевременно, то есть сразу после её обнаружения.
План корректирующих мероприятий разрабатывает и контролирует его выполнение заведующий
лабораторией.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА:
1. Заведующий лабораторией
2. Ответственный по качеству
3. Врач-лаборант
286
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИНСТРУКЦИИ
1. После внесения показаний ВЛС в контрольную карту проверьте соответствие полученного
результата правильности измерения ВЛС.
2. Для этого проведите оценку правильности измерения ВЛС согласно контрольным правилам в
последовательности, как это представлено на рисунке 1.
Логическая диаграмма применения серии контрольных
правил
Результат
измерения ВКО
12S
Не нарушено
Серия анализов пригодна.
Дальнейшую проверку не проводят
нарушено
не нарушено не нарушено не нарушено
13S
R4S
22S
нарушено
нарушено
не нарушено
41S
нарушено
10Х
нарушено
Результаты серии анализов не учитываются
После выявления и устранения ошибки анализы повторяют
3. Проверьте присутствие на контрольной карте Леви-Дженингс предупредительного контрольного
правила 12S. Если результат измерения ВКО не выходит за пределы ±2S, то правило 12S не нарушено
и аналитическая серия признается удовлетворительной, а результаты учитывается.
4. Если значение ВКО выходит за пределы ±2S, то правило 12S считается нарушенным. В этом случае
последовательно проверьте наличие нарушений остальных правил (Приложение 1. «Контрольные
правила WESTGARD»).
5. Если при этом нарушено правило 41S или одно из правил 13S, R4S, 22S или 10x, все результаты данной
аналитической серии считайте непригодными.
6. Приостановите проведение анализов, определите характер ошибки и зарегистрируйте её в «Журнале
регистрации несоответствующих результатов ВКК» (Приложение 2).
7. Если ошибка случайная, то:
a. Детально опросите оператора анализа о всех этапах постановки анализа.
b. Проверьте правильность постановки теста в соответствии с прилагаемой к тест-системе
инструкцией.
c. Проверьте температурный режим в термостате.
d. Проверьте работу вошера (все ли каналы в рабочем состоянии).
e. Проверьте правильность учёта результатов на ридере (длину волны).
8. Если ошибка повторяющегося (систематического) характера, то:
a. Проверьте оператора на наличие знаний выполнения процедуры постановки в соответствии
с инструкцией, прилагаемой к тест-системе.
РАЗДЕЛ 08
9.
10.
11.
12.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
287
b. Проведите оценку воспроизводимости действий оператора по значению CV (CV не должно
превышать 10% внутри одной постановочной серии)
c. Проверьте температурный режим холодильников, термостата, в комнате постановки (см.
СОП № 03-02 «Правила термометрии помещений, холодильников, морозильных камер»).
d. Проведите внутреннюю калибровку дозаторов (см. СОП № 03-06 «Внутренняя калибровка
дозаторов»)
e. Проверьте работу вошера:
–– для этого сравните программу промывки с требованиями инструкции.
–– проверьте каналы гребенки
–– при необходимости проведите обеззараживание прибора 50% раствором этилового
спирта.
f. Проверьте работу ридера:
–– Сравните длину волны при учете результатов с требованиями инструкции.
–– С помощью контрольной плашки проверьте воспроизводимость ридера (CV не должна
превышать 1%)
g. Проверьте качество дистиллированной воды (рН должно быть 7.0-7.4)
Для поиска возможной причины ошибки обратитесь к таблице «Ошибки в иммуноферментном
анализе» (Приложение 3).
Устраните предполагаемую причину ошибки.
При выявлении причины систематической ошибки разработайте план корректирующих мер,
занесите его в журнал со сроками выполнения. Проконтролируйте выполнение корректирующих
мер.
После устранения причины ошибки повторите постановку аналитической серии.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. «Westgard Правила» http://www.westgard.com/westgard-rules-and-multirules.htm#westgard».
2. Методическое руководство «Обеспечение и внутрилабораторный контроль качества
иммуноферментном анализе», Бишкек, 2005 г.
в
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Контрольные правила WESTGARD
Правило 12S. Показатель случайной ошибки. Используется как предупреждение, если один
показатель стандарта превышает контрольные пределы ±2S. Не требует подтверждения результатов
теста или исключения серии, но необходимо искать ошибки в предыдущей постановке.
Правило 12S
288
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Правило 13S: показатель случайной ошибки, если один показатель стандарта превышает
контрольные пределы ±3S; результаты не учитываются, требуется перестановка анализа.
Правило 13S
Правило 22S: показатель систематической ошибки, если два последовательных результата стандарта
превышают контрольные пределы Х±2S на одной стороне от средней; результаты не учитываются,
требуется перестановка теста.
РАЗДЕЛ 08
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
289
Правило 22S
Правило R4S: показатель случайной ошибки, если два контрольных измерения расположены по
разные стороны от коридора Х±2S (разница между минимальным и максимальным значением стандарта
превышает 4S), является основанием для повторения теста.
Правило R4S
Правило 41S: показатель систематической ошибки, если четыре результата стандарта располагаются
на одной стороне от средней и превышают Х±1S; не всегда требуется перестановка теста, так как
смещение чаще не является клинически значимым, однако, необходимо искать ошибки в текущей или
предыдущей постановках.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
290
Правило 41S
Правило 10х: показатель систематической ошибки, если 10 результатов измерений стандарта
располагаются по одну сторону от средней, не всегда требуется перестановка теста, так как смещение
чаще не является клинически значимым.
Правило 10 Х
Приложение 2.
Форма «Журнала регистрации несоответствующих результатов ВКК»
Учреждение_ ___________________________________________________________________
Лаборатория____________________________________________________________________
Дата
Нарушенное
правило:
Серия
ВКО
Тест-система (наименование, серия, срок
годности
Запись о причине ошибки и корректирующих действиях
Подпись
РАЗДЕЛ 08
Дата
Нарушенное
правило:
Дата
Серия
ВКО
Тест-система (наименование, серия, срок
годности
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Запись о причине ошибки и корректирующих действиях
Обзор результатов за месяц: комментарии, действия, решения
291
Подпись
Подпись зав. лабораторией
Приложение 3.
Ошибки в иммуноферментном анализе
Результат ошибки
Причины
Способ устранения ошибки
1.
Уменьшенное время инкубации с конъюгатом 1.
и/или субстратной смесью
Точно выдерживать время, инкубации,
указанное в инструкции к набору.
2.
Компоненты набора и/или исследуемые образ- 2.
цы перед использованием не прогреты до комнатной температуры
Перед использованием набор необходимо
выдержать при комнатной температуре в
течение 30 минут
3.
Несоблюдение температурного режима при 3.
хранении набора
4.
Заниженный температурный режим при инкубациях в термостате/шейкере
5.
Хранить наборы в холодильнике при 2-8oС
4.
5.
Занижение сигнала
ОП исследуемых
образцов или
6.
калибровочных проб
Недостаточно полная аспирация после отмывки: на дне лунок имеются остатки промываю- 6.
щего раствора
Длительное нахождение планшета на воздухе 7.
между этапами реакции, излишнее высыхание
8.
лунок
Регулярно проверять температуру в термостате и шейкере
Следить за работой промывочного устройства
Заранее готовить компоненты для следующего этапа реакции.
Внесение растворов производить быстро.
Не использовать для анализа реагенты из
других наборов или другой серии, а также
с истекшим сроком годности
7.
Использование реагентов из других наборов
или другой серии;
8.
Истечение срока годности компонентов;
9.
Низкая температура в лаборатории (ниже 18 С) 10. Контролировать работу спекторофотометра (ридера)
9.
Отрегулировать температуру в помещении
для постановки ИФА
10. Ошибки в работе спектрофотометра
11. Низкая чувствительность тест-системы
11. Провести
оценку
чувствительности
тест-системы с помощью аттестованных
контрольных образцов
292
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Результат ошибки
Увеличение
сигнала ОП во всех
лунках планшета
(повышенный фон)
или увеличение
ОП исследуемых
образцов или
Причины
1.
Количество промывающего раствора, вноси- 1.
мого в лунки, меньше нормы, из-за чего верхняя часть лунок не промывается
2.
Недостаточно полная аспирация после отмывки: на дне лунок имеются остатки промываю- 2.
щего раствора
3.
Загрязнение субстратной смеси вследствие 4.
использования многоразовой емкости или воздействия прямых солнечных лучей
3.
4.
калибровочных проб 5.
6.
Недостаточное время отстаивания сыворотки
перед анализом.
5.
Увеличение времени инкубации с субстратной
смесью или конъюгатом
6.
7.
Температура в помещении лаборатории выше
250 С
7.
Низкая специфичность тест-системы
1.
Сбой в работе промывающего устройства
2.
Ошибки при внесении исследуемых образцов
и реагентов;
Отладить правильную аспирацию
Использовать только одноразовые емкости
Сыворотку следует отбирать после отстаивания крови в термостате (37oС) через 30
минут или до 2 часов при комнатной температуре
Точно следовать инструкции по применению
Отрегулировать температуру в помещении
для постановки ИФА
Провести
оценку
чувствительности
тест-системы с помощью аттестованных
контрольных образцов
Проверьте все действия по работе промывающего устройства согласно инструкции
по эксплуатации или вызвать инженера
Внимательно прочитайте инструкцию к
тест-системе
4.
Недостаточное перемешивание образцов, реа- 2.
гентов или содержимого лунок планшета;
Повреждение поверхности лунки наконечни- 3.
ком;
4.
Изучить технику пипетирования
5.
Пузырьки воздуха в лунках
5.
6.
Увеличение ОП по краю планшета вследствие
неравномерного нагревания или инкубации с
субстратным раствором на свету
Проверить температуру в разных частях
термошейкера или термостата. Инкубировать с субстратным раствором в темном
месте.
Использование дозаторов, не прошедших ка- 6.
либровку;
7.
Неправильная техника пипетирования
Проводить метрологический контроль дозаторов
7.
8.
9.
Длительное нахождение планшета на воздухе
между этапами реакции, излишнее высыхание 8.
лунок
10. Компоненты набора и/или исследуемые образцы перед использованием не прогреты до ком- 9.
натной температуры
Полное отсутствие
окраски после
реакции
Установить в программе промывочного
устройства указанное в инструкции значение для количества, вносимого в лунки
промывающего раствора
1.
3.
Низкая
воспроизводимость
результатов
измерений
Способ устранения ошибки
1.
Не внесен конъюгат или раствор субстрата.
2.
В раствор субстратного буфера не внесен ТМБ.
1.
3.
Перепутаны реагенты, вносимые на разных
2.
этапах реакции.
4.
Пропуск одной из стадий постановки анализа.
5.
Использование реагентов из других наборов.
Проверить работу термошейкера
Заранее готовить компоненты для следующего этапа реакции.
Внесение растворов производить быстро.
Для этого использовать 8-канальный дозатор.
Перед использованием набор необходимо
выдержать при комнатной температуре в
течение 30 минут
Перечитать инструкцию к набору и точно
следовать всем пунктам постановки анализа.
Использовать только реагенты, относящиеся к набору.
РАЗДЕЛ 08
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко 8
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Контроль качества.
293
СОП № 08-04
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРОВЕРКА НАСТРОЙКИ ПРОТОЧНОГО ЦИТОФЛЮОРИМЕТРА «CYTOMICS
FC500» BECKMAN-COULTER.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТАХ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД- синдром приобретенного иммунного дефицита
СИЗ – средства индивидуальной защиты
мкл – микролитр
НАЗНАЧЕНИЕ
Описывается последовательность действий для обеспечения оценки точности и правильности при
проведении анализа на аппарате проточного цитофлюориметра «Cytomics FC500» Beckman-Coulter.
1.
2.
3.
4.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Данная процедура является обязательной для исполнения.
В случае получения не соответствующих установленным значениям контролей и калибраторов
исследования не проводятся до выяснения причины ошибки и её устранения.
Соблюдать меры техники безопасности при работе с электроприборами: не допускается подключение
прибора и его компонентов к электросети через переходники и удлинители; подключение бытового
оборудования (холодильник, кондиционер и др.) большой мощности, создающие помехи в
электросети; необходимо подключение аппарата к отдельной линии электросети.
Температура в помещении должна быть +180С +250С.
В помещении должен быть установлен кондиционер для избежания перегрева прибора
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Зав. лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборанты.
1.
2.
3.
4.
МАТЕРИАЛЫ
СИЗ
Одноразовые пластмассовые, нестерильные пробирки от прибора «Cytomics FC 500» BeckmanCoulter.
Перманентный маркер
Аптечка анти-ВИЧ/СПИД
294
5.
6.
7.
8.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Лабораторный рабочий стол
Холодильник бытовой для хранения реагентов «Flow-Check™».
Емкость для обеззараживания использованных материалов.
Одноразовые наконечники для автоматических дозаторов на 1000 мкл.
РЕАГЕНТЫ
1. Флюоросферы «Flow-Check™» (известного диаметра, окрашенные известными красителями).
Содержатся во флаконе в готовом виде и не требуют разбавления.
2. «Isoton» Beckman Coulter (обжимающая жидкость – белого цвета)
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Система проточной цитометрии «Cytomics FC 500» Beckman-Coulter (карусельный загрузчик
образцов, карусель, рабочая станция, клавиатура, мышь, компьютер, источник питания, блок USB)
2. Автоматический одноканальный дозатор на 1000 мкл.
3. Бактерицидная лампа.
Внимание! Перед работой убедитесь, что оборудование в лаборатории заземлено.
ИНСТРУКЦИИ
Всесторонний контроль качества включает контроль состояния проточного цитометра, процесса
подготовки и исследования образца. (см. схему 1)
Схема №1
Параметры состояния, такие как линейность, чувствительность и динамический диапазон прибора,
можно определить по калибровочному графику и использовать для контроля состояния прибора.
Для этого используются стандарты калибровки.
Стандарты калибровки: содержат популяции частиц с разной интенсивностью флуоресценции,
окрашенные разными флуорохромами.
Линейность: способность прибора давать результат, прямо пропорциональный количеству
исследуемого параметра в образце.
Чувствительность: минимальная флуоресценция, которую способен определять прибор.
Динамический диапазон: спектр интенсивности флуоресценции, который может быть измерен
прибором.
РАЗДЕЛ 08
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
295
Проверка стабильности оптической системы и струйных элементов проточного цитометра.
1. Убедитесь в том, что процедура включения прибора выполнена, погрейте систему в течение 40
минут (см. СОП № 06-01 «Правила эксплуатации цитофлюориметра, «Cytomics FC 500» BeckmanCoulter).
2. Удостоверитесь в том, что перед постановкой анализа промывка аппарата выполнена.
3. Стабильность состояния аппарата проверяется раз в день или перед каждым проведением анализа
(если измерения проводятся не каждый день).
4. Для этого проводите тестирование флюоросфер «Flow-Check™» для проверки стабильности
оптической системы и струйной автоматики прибора.
5. Достаньте из холодильника флюоросферы «Flow-Check™» (окрашенные известными красителями),
оставьте при комнатной температуре +180С, +250С на 30 минут.
6. Перед употреблением флюоросферы Flow-Check™ необходимо тщательно взболтать до растворения
осадка на дне флакона.
7. Приготовьте образец для калибровки: набирайте в пластмассовую пробирку от прибора 1,0 мл
«Isoton» (обжимающая жидкость – белого цвета) добавить 5-6 капель флюоросферы Flow-Check™.
8. Поставьте пробирку с приготовленным образцом флюоросферы Flow-Check в карусель.
9. Откройте крышку «MCL» (пробирочный карусельный загрузчик).
10. Вставить карусель в «MCL».
11. Выровняйте ее в соответствии с поворотной платформой и установите на MCL, карусель находится
в исходной позиции, когда ручка указывает назад.
Важно! Нельзя поворачивать карусель вручную по часовой или против часовой стрелки.
12. Выберите «File» (файл), затем «Open protocol» (открыть протокол) и выберите протокол Flow-Check.
Выбранный протокол, не отпуская мышь, перенести в окно протокола вниз на панель «Acquisition
Manager» (диспетчера считывание данных)
13. В окне сбора данных введите в поле «Carousel - карусель № 1)
14. В окне сбора данных введите в поле «Location» (положение пробирки в карусели): позиция № 1.
15. Щелкните левой кнопкой мышки по иконке «Start» (начать) .
16. Запускается измерение. Откроются окна гистограмм с отображенными на них «gates» (целевой
регион).
17. Поставьте галочку в поле «SetupMode» (режим настройки) на вкладке Acg.Setup (настройка
считывания данных) окна Cytometer control (средства управления цитометром).
18. Проверьте результат калибровки (попадает ли он в установленные параметры), для этого:
просмотрите все гистограммы, убедитесь в том, что все пики находятся в установленных регионах,
убедитесь в том, что среднее значение и коэффициенты вариации на полувысоте пика (HPCV) для
всех параметров находятся в допустимых пределах.
19. Уберите галочку в поле «Setup Mode» (режим настройки).
20. По окончании считывания проверьте данные (результаты калибровки) по карте контроля качества
Леви-Дженнингса (см. рисунок 1), которые наглядно показывают: сдвиги, тенденции, резкие
отклонения, случайные и систематические ошибки.
21. Для этого зайдите в окне Report Generator (доносить в генератор) и нажмите на «Quality Control
Report» (данные о контроле качества)
.
22. Тест считается успешно пройденным, если полученные значения «Mean» (среднее положение пика)
и «HPCV» (коэффициенты вариации на полувысоте пика) каждого (из измеренных) параметра
попадают в область среднего значения ± 2S стандартного отклонения (как отображается на графиках
296
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Леви-Дженнингса). Если результат не попадает в диапазон среднего значения ± 2S, следует
повторить калибровку.
23. Промойте аппарат после исследования. (см. СОП № 06-05 Правила промывки проточного
цитофлюориметра «CyFlow® Counter» Partec).
24. Выключите аппарат (см. СОП № 06-04 Правила эксплуатации, ремонт и транспортировка
цитофлюориметра «CyFlow® Counter» Partec).
Рисунок № 1.
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ
1. Руководство оператора «Cytomics FC 500» Beckman Coulter
2. Приказ № 111 от 07.03.2012 г. «О мерах по совершенствованию качества лабораторных исследований
социально значимых инфекционных заболеваний»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 08
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Контроль качества.
297
СОП № 08-05
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРОВЕРКА НАСТРОЙКИ ПРОТОЧНОГО ЦИТОФЛЮОРИМЕТРА «CYFLOW®
COUNTER»PARTEC.
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Дата
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТАХ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД- синдром приобретенного иммунного дефицита
СД – кластер дифференцировки
СИЗ – средства индивидуальной защиты
НАЗНАЧЕНИЕ
Для оценки точности и правильности исследования и предупреждения ошибок на всех этапах
подготовки и проведения анализа образца.
1.
2.
3.
4.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Данная процедура является обязательной для исполнения.
В случае получения не соответствующих установленным значениям контролей и калибраторов
исследования не проводятся до выяснения причины ошибки и её устранения.
Соблюдать меры техники безопасности при работе с электроприборами: не допускается подключение
прибора и его компонентов к электросети через переходники и удлинители; подключение бытового
оборудования (холодильник, кондиционер и др.) большой мощности, создающего помехи в
электросети; необходимо подключение аппарата к отдельной линии электросети.
Температура в помещении должна быть +180С +250С.
В помещении должен быть установлен кондиционер для избежания перегрева прибора
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Зав. лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборанты.
1.
2.
3.
4.
5.
МАТЕРИАЛЫ
СИЗ
Одноразовые пластмассовые, нестерильные пробирки от прибора «CyFlow® Counter» Partec
Перманентный маркер
Аптечка анти-ВИЧ/СПИД
Лабораторный рабочий стол
298
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
6. Контрольный раствор «Count Check Beads green», который содержит гистограмму СД4 или точечную
диаграмму СД4 %.
7. Холодильник бытовой для хранения стандартных контрольных образцов «Count Check»
8. Емкость для обеззараживания.
9. Спиртовые салфетки
10. Одноразовые наконечники для автоматических дозаторов объемом на 1000 мкл.
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Проточный цитофлюрометр «CyFlow® Counter» Partec
2. Бактерицидная лампа.
ИНСТРУКЦИИ
Включите аппарат (см. СОП № 06-04 «Правила эксплуатации, ремонт и транспортировка
цитофлюориметра «CyFlow® Counter» Partec).
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
Проверка стабильности состояния аппарата:
Стабильность состояния аппарата проверяется раз в день или перед каждым проведением анализа
(если исследования проводятся не каждый день).
Проверка проводится со стандартным контрольным образцом «Count Check»
Достаньте флакон с реагентом из холодильника, выдержите его 30 минут при комнатной температуре.
Тщательно перемешивайте флакон со стандартным контрольным образцом в течение 2-3 минут
(чтобы разбить частицы, которые сгруппировались), избегайте пенообразования;
В чистую прозрачную пробирку (из набора) набирайте 850 мкл стандартного контрольного образца
из середины флакона.
Извлеките пробирку из порта аппарата с «Sheath Fluid for Flow» (промывочный раствор)
Пробирку со стандартным контрольным образцом вставьте в порт аппарата
Выберите программу для проведения контроля: нажимайте последовательно
Setting (настройки) → Load Script (загрузить программу) → Count Check Beads Green. scr (подсчитать
калибровочные частицы) → Select (выбрать)
Нажимайте кнопку «Start» (начать), ожидайте завершения измерения и остановки последующей
процедуры самоочистки;
Результат измерения контроля отображается на экране в области «Result» (результат).
Сравните полученный результат с указанной на этикетке флакона концентрацией Если результат
отличается меньше чем на 10% от указанного на этикетке флакона, то аппарат готов к следующему
измерению (см. рисунок 1);
Если результат измерения отличается больше, чем на 10% от указанной на этикетке флакона
концентрации, то осторожно и тщательно перемешайте флакон со стандартным контрольным
образцом и повторите измерение (повторить с пунктов 3-8).
Если полученный результат еще раз не соответствует с указанной на этикетке, то аппарат промойте
несколько раз и повторите процедуры.
При необходимости вызвать технического специалиста.
При необходимости данные могут быть сохранены и распечатаны;
Извлекаем пробирку со стандартным контрольным образцом из порта аппарата «CyFlow® Counter»
Partec
Аппарат готов к проведению измерений.
РАЗДЕЛ 08
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
299
Рисунок 1.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ
1. Руководство оператора «CyFlow® Counter» Partec
2. Постановление Правительство № 32 от 12.01.2013 г. «Об утверждении Инструкции по
инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР»
3. Приказ № 111 от 07.03.2012 г. «О мерах по совершенствованию качества лабораторных исследований
социально значимых инфекционных заболеваний»
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
300
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Контроль качества
СОП № 08-06
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА (СОП)
НАЗВАНИЕ: ПРИГОТОВЛЕНИЕ ВНУТРИЛАБОРАТОРНОГО СТАНДАРТА ДЛЯ
КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ РНК ВИЧ-1 МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ
РЕАКЦИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП- стандартная операционная процедура
ВИЧ- вирус иммунодефицита человека
ВЛС- внутрилабораторный стандарт
ПЦР- полимеразно-цепная реакция
РРК – Республиканская режимная комиссия Министерства здравоохранения Кыргызской Республики
НК – нуклеиновая кислота
НАЗНАЧЕНИЕ
Порядок действий по приготовлению ВЛС для проведения внутреннего контроля качества при
количественном определении РНК ВИЧ-1 методом ПЦР.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
ВЛС должен соответствовать исследуемым образцам, т.е. если исследуется образец плазмы крови,
то ВЛС должен быть приготовлен из плазмы крови.
Количество ВЛС должно хватить не менее чем на год работы лаборатории.
ПЦР исследования должны проводиться в лаборатории, имеющей разрешение РРК на работу с
патогенными микроорганизмами 3-4 группы патогенности.
Одноразовая пластиковая посуда (пробирки, наконечники) должны сбрасываться в пакеты для
автоклавирования
Все лабораторное оборудование, штативы, лабораторная посуда, а также все рабочие растворы
должны быть строго стационарными. Запрещается переносить их из одного помещения в другое.
Поверхности столов, а также помещения, в которых проводится постановка ПЦР, до начала и после
завершения работ необходимо облучать бактерицидными лампами
Обеспечьте строгий контроль температуры в морозильных камерах, чтобы избежать потери НК в
ВЛС
Перед началом работы обязательно надеть одноразовые перчатки, одноразовый медицинский халат,
чепчик.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Заведующий лабораторией
РАЗДЕЛ 08
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
301
2. Ответственный по качеству
3. Врач-лаборант
4. Лаборант
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
МАТЕРИАЛ
Плазма человеческой крови, не содержащая РНК ВИЧ-1 – 27 мл.
Плазма человеческой крови, содержащая РНК ВИЧ-1 – 1,5 мл.
Одноразовые аэрозольные наконечники объемом (20,100,200,1000мкл) с маркировкой « DNaseRNase free»
Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся микропробирки объемом 1,5 мл.
Стерильный флакон объемом 30 мл
Штативы для микропробирок на 1,5 мл
Вспомогательный штатив для пробирок
Контейнер для сброса отходов
Емкость с 70% спиртовым раствором
Перманентный маркер
Одноразовые халат, чепчик, перчатки без талька
ОБОРУДОВАНИЕ
Ламинарный бокс
Термостат
Вортекс
Вакуумный отсасыватель
Микроцентрифуга
Морозильная камера на -70оС
Программируемый амплификатор с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме
«реального времени»
Персональный компьютер для амплификатора.
ИНСТРУМЕНТЫ
Дозаторы с переменным объемом на 20 мкл, 200 мкл, 1000 мкл
РЕАКТИВЫ
1. ПЦР тест-система для количественного определения РНК ВИЧ-1.
2. Раствор дезинфектанта 0,1% ДП-2Т (или аналог).
3. 70% спирт.
1.
2.
3.
4.
ИНСТРУКЦИИ
После постановки ПЦР выберите среди проставленных образцов положительные пробы на ВИЧ с
высокой концентрацией вируса для приготовления ВЛС.
Так как объем одной положительной/отрицательной пробы недостаточен для приготовления ВЛС,
то пробы следует пулировать.
До накопления достаточного количества материал следует заморозить при -70оС, пока не наберёте
необходимый объем.
Для определения нужного количества аликвот ВЛС проведите расчёт, исходя из количества
постановок анализа за 12 месяцев. Например: если ПЦР ставится ежедневно, то на год требуется
252 аликвоты готового ВЛС (поскольку в году 252 рабочих дня).
302
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
5. Для определения необходимого объёма ВЛС следует умножить расчётное количество аликвот на
объем аликвоты + 15% + объем доз, необходимый для построения контрольной карты, т.е. не менее
20 доз ВЛС.
Например, нам требуется 252 аликвоты, для анализа берётся 100 мкл. плазмы. Следовательно,
общий объем ВЛС = 252 х 100 мкл. х 1,15 (15% дополнительного объёма) + (20 доз для расчёта CV
и построения карты по 115 мкл) = 28 980 мкл. + 2300 мкл = 31 280 мкл. = 31 мл. 280 мкл.
6. Отбираемые для пула положительные пробы должны содержать РНК ВИЧ-1 в концентрации: от 100
000 до 10 000 000 копий/мл.
7. Пулированную положительную сыворотку тщательно перемешайте на вортексе.
8. После накопления необходимого количества положительной плазмы разведите её отрицательной
плазмой в соотношении 1 часть положительной плазмы к 9 частям отрицательной плазмы, т.е. в 10
раз.
9. После разведения готовый ВЛС тщательно перемешайте на вортексе.
10. Промаркируйте микропробирки ВЛС.
11. Разаликвотируйте готовый ВЛС по дозам в микропробирки (в нашем примере по 115 мкл.).
12. Заложите микропробирки с ВЛС на хранение при -70°С в криоштативах.
13. После приготовления ВЛС определите интервал допустимых значений для построения контрольной
карты. Для этого извлеките из морозильника 10 образцов ВЛС, разморозьте и поставьте в опыте
вместе с клиническими образцами.
14. Определите внутрисерийную воспроизводимость результатов ВЛС, используя следующие действия:
a. Вычислите среднее значение 10 измерений ВЛС по формуле:
где Х1, Х2 Х3 …- значения отдельных измерений ВЛС, n – число измерений
b. Вычислите среднеквадратическое
измерений):
отклонение:
S
(показатель
разброса
отдельных
где S - сумма измерений
(Хi-X)2 – разница отдельного измерения и Х средней, возведённая в квадрат
n-1 – число измерений минус 1.
c. Вычислите коэффициент вариации внутри постановочной серии (внутрисерийную
воспроизводимость):
CV =
S
× 100%
Xc
где CV – коэффициент вариации
S – среднеквадратическое отклонение
Х с – среднее значение Х
15. В последующие 10 постановок включайте по 1 образцу ВЛС для определения контрольных пределов
(cм. СОП № 08-01) и оценки межсерийной воспроизводимости (CV) по выше представленной
формуле.
РАЗДЕЛ 08
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
303
16. При получении значений CV менее 5% (п. 14 и 15) можете переходить к использованию ВЛС в
каждой постановке реакции ПЦР для количественного определения РНК ВИЧ-1.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. ПЦР в реальном времени под редакцией Ребрикова Д.В., Москва, 2009 г.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
304
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Полимеразная цепная реакция
СОП № 08-07
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: КОНТРОЛЬ КОНТАМИНАЦИИ ПОМЕЩЕНИЙ ПЦР
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП- стандартная операционная процедура
ПЦР - полимеразная-цепная реакция
НК - нуклеиновая кислота
УФ- ультрафиолетовые лучи
ББЗ – бокс биологической защиты
НАЗНАЧЕНИЕ
Настоящий СОП определяет требования к контролю контаминации помещений продуктами
амплификации.
1.
2.
3.
4.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Процедура является обязательной к исполнению.
Контроль контаминации осуществляется во всех помещениях ПЦР зоны, мест общего пользования
сотрудников (туалет, душ, сан. пропускник, комната для приема пищи, помещения для работы с
документами и т. п.)
Периодичность контроля контаминации определяется распоряжением заведующего лабораторией в
зависимости от интенсивности рабочей нагрузки.
Исследования методом ПЦР должны проводиться в лаборатории, имеющей разрешение режимной
комиссии.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Зав. лабораторией
2. Врач-лаборант
3. Лаборант
1.
2.
3.
4.
МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
Тест-системы для ПЦР
Чистый ТЕ-буфер и тампон (должен быть из искусственного шелка или из волокна полиэстера, для
взятия смывов с поверхностей).
Оборудование для ПЦР-исследований
Чистый, отдельно хранящийся набор расходных пластиковых материалов (наконечники,
микропробирки и. т.п.) с маркировкой «DNA/RNA free».
РАЗДЕЛ 08
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
305
5. Одноразовая спецодежда (халат, шапочка, бахилы, перчатки)
6. Дезинфицирующее средство (700 спирт, ДП-2Т или аналог).
7. Моющий раствор, дистиллированная вода
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
ИНСТРУКЦИИ
Заготовьте микроцентрифужные пробирки объемом 1.5 мл с 300-400 мкл ТЕ-буфера (готовятся
заранее в необходимом количестве.)
Возьмите смывы в течение рабочего дня с контрольных точек. Контрольные точки, с поверхности
которых производятся смывы:
a. поверхности ББЗ
b. амплификатор
c. внутренняя поверхность дозаторов (общая проба по зонам ПЦР)
d. холодильники
e. ручки двери
f. клавиатура компьютеров
g. рабочие поверхности лабораторных столов
Промаркируйте пробирки с ТЕ-буфером соответственно контрольным точкам.
Тампон смочить в ТЕ-буфере, вращательными движениями протереть поверхности контрольной
точки, опустите тампон в ТЕ-буфер, повращайте тампон несколько раз в буфере и извлеките тампон,
отжав о стенки пробирки.
Выделите НК из смывов с контрольных точек так же, как и из клинического материала.
Поставьте ПЦР в соответствии с требованиями инструкции к тест-системе.
Точки, где выявлены положительные результаты ПЦР-анализа смывов, считаются
контаминированными.
Контаминированные поверхности обработайте моющим раствором для удаления жировых
загрязнений, после чего остатки моющего средства удалите ветошью, смоченной дистиллированной
водой.
На очищенную поверхность нанесите 0.2% раствор ДП-2Т на 30 минут.
Удалите дезинфицирующее средство после инкубации ветошью, смоченной водой.
После завершения обработки контаминированных поверхностей проведите обеззараживание
влажных поверхностей ультрафиолетовым не менее 1 часа.
Повторите анализ контрольных точек на контаминацию.
В случае получения в повторных смывах положительных результатов обработку повторить.
Проведение ПЦР исследований до завершения деконтаминационных мероприятий не допускается.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. №104 приказ МЗ КР от 15.03.2011 г. «Организация лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV
патогенности».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
306
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
РАЗДЕЛ 09
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Безопасность в лаборатории
307
СОП № 09-01
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: ТРЕБОВАНИЯ К ОБРАБОТКЕ ПОМЕЩЕНИЙ ПЦР
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП - стандартная операционная процедура
ПЦР – полимеразная цепная реакция
НК - нуклеиновая кислота
УФ - ультрафиолетовые лучи
МЗ КР-Министерство Здравоохранения Кыргызской Республики
СИЗ – средства индивидуальной защиты
НАЗНАЧЕНИЕ
Определяет требования к обработке помещений ПЦР лаборатории.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
1.
2.
3.
4.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Работа ПЦР должна проводиться в лаборатории, имеющей разрешение режимной комиссии на
работу с патогенными микроорганизмами.
Строгое соблюдение правил работы с биоматериалом согласно Постановления Правительства КР от
12 января 2012 г. № 32 « Об утверждении Инструкции по инфекционному контролю в организациях
здравоохранения КР».
Проводите ежедневную влажную уборку во всех помещениях ПЦР лаборатории.
В комнатах, где проводят выделение НК, рабочие поверхности, штативы, оборудование ежедневно
обеззараживайте УФ в течение 45 минут.
Полы в ПЦР зоне ежедневно подвергают влажной уборке с применением дезинфицирующих
средств, регламентированных санитарными правилами, утверждённых в МЗ КР.
Для каждой зоны ПЦР должна быть отдельная одноразовая или многоразовая спецодежда и
отдельный промаркированный уборочный инвентарь: одноразовый халат, шапочка, бахилы и
перчатки, одноразовая безворсовая ветошь и безворсовые салфетки, ёмкости для приготовления
необходимых количеств моющих и дезинфицирующих растворов.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Зав. лабораторией
Врач-лаборант
Лаборант
Младший медицинский персонал
308
1.
2.
3.
4.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
МАТЕРИАЛЫ
Промаркированный уборочный инвентарь (ведро, швабра, тряпка)
Моющие средства
Дезинфицирующее средство: 700 спирт, ДП-2Т или аналог.
Одноразовая или многоразовая спецодежда (халат, шапочка, бахилы, перчатки)
ИНСТРУКЦИИ
Разбейте каждую ПЦР зону на участки. Например:
–– участок 1 – бокс биологической безопасности и оборудование внутри него;
–– участок 2 – внешние поверхности бокса биологической безопасности;
–– участок 3 – шкафы для расходного материала;
–– участок 4 – холодильники для хранения реактивов, образцов проб;
–– участок 5 – оборудование, которое используют в работе, но стоит вне бокса биологической
безопасности;
–– участок 6 – поверхности помещения (стены, окна, батареи, потолок, двери и т.д.);
–– участок 7 – пол.
Перед обработкой ПЦР зоны наденьте СИЗ (халаты, бахилы, шапочки, перчатки) и приготовьте
моющие и дезинфицирующие растворы.
Проводите обработку от участка к участку последовательно. Внимание! Каждый участок
обрабатывайте отдельной безволоконной салфеткой.
Поверхности каждого участка (кроме внутренней поверхности бокса биологической защиты и
оборудования) вначале моются моющим раствором.
Внутренняя поверхность бокса биологической защиты и оборудование протираются влажной
ветошью с моющим раствором для удаления жировых загрязнений, после чего остатки моющего
средства удаляются ветошью, смоченной водой.
Затем на поверхность наносят на 30 минут 0,1% раствор ДП-2Т или его аналог. Остатки
дезинфицирующего средства тщательно удаляют ветошью, смоченной водой.
Участки № 1,2,5 протирают 70° спиртом.
После завершения указанной обработки проводят обеззараживание ультрафиолетовым излучением
в течение 45 минут.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Приказ МЗ КР. № 104 от 15.03.2011 г «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп
патогенности».
2. приказ МЗ КР №104 от 15.03.2011 г. «Организация лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV
патогенности».
3. МУ по применению дезинфицирующего средства «ДП-2Т».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
РАЗДЕЛ 09
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
309
310
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Безопасность в лаборатории
СОП № 09-02
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: МЕРОПРИЯТИЯ ПРИ АВАРИЙНОЙ СИТУАЦИИ В ЛАБОРАТОРИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП - стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
ГВ – гепатит В
ГС – гепатит С
НАЗНАЧЕНИЕ
Защита сотрудников лаборатории от инфицирования при аварийной ситуации при работе с ВИЧ
инфицированным материалом
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Неукоснительное соблюдение требований биобезопасности проведения исследований
2. В лаборатории должен вестись Журнал регистрации случаев аварий, где отмечается дата, время,
место, характер аварии, ФИО пострадавшего лица и проведённые мероприятия (приложение 1).
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Все сотрудники лаборатории
1.
2.
3.
4.
5.
6.
МАТЕРИАЛЫ
70% спирт
Перчатки, напальчники, лейкопластырь
6% раствор перекиси водорода
Пипетки, перевязочный материал
Дезинфицирующие средства
Журнал регистрации случаев аварий
ИНСТРУКЦИИ
1. При попадании заразного материала на халат и др. одежду место загрязнения немедленно
обработайте одним из растворов дезинфицирующих средств.
2. Снимите перчатки, халат или другую одежду и замочите в одном из дезинфицирующих растворов
(кроме 6% перекиси водорода и нейтрального гипохлорита кальция, которые разрушают ткань) или
сложите в стерилизационные коробки для автоклавирования.
3. Обувь обработайте, протирая два раза ветошью, смоченной в растворе одного из дезинфицирующих
средств.
РАЗДЕЛ 09
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
311
4. Кожу рук и других участков тела под загрязнённой одеждой промойте под проточной водой с мылом.
5. При попадании заразного материала на кожу рук, отдельные участки тела следует немедленно
промыть поврежденную область мылом и водой.
6. При попадании заразного материала на лицо тщательно промойте зону контакта с материалом водой
и с мылом.
7. При попадании инфицированного материала в глаза промойте глаза осторожно, но тщательно
водопроводной или соленой водой не менее 15 минут. При этом глаза должны быть открытыми,
веки должны быть слегка вывернуты.
8. При попадании заразного материала в нос или в рот сразу выплюньте кровь или жидкость
прополощите рот водой несколько раз. Сделайте выдох через нос и промойте нос водой или соленой
водой.
НЕЛЬЗЯ использовать дезинфицирующий раствор.
При получении травмы от укола иглой или другим острым предметом сразу промойте поврежденное
место мылом и водой.
НЕЛЬЗЯ наносить на кожу дезинфицирующий раствор
НЕЛЬЗЯ тереть или трогать место травмы.
9. При попадании инфицированного материала на пол, стены, мебель, оборудование загрязненное
место следует накрыть тканевыми или бумажными
полотенцами, затем через них пролить дезинфицирующее средство и оставить на определенное
время.
10. Затем поврежденный материал вместе с полотенцами следует удалить; стеклянные осколки следует
брать пинцетом. После этого контаминированную зону следует протереть дезинфицирующим
средством. Если для сбора разбившихся предметов использовались совки, их также следует
автоклавировать или поместить в эффективное дезинфицирующее средство. Одежду, бумажные
полотенца и швабры, которые использовались для чистки, следует поместить в контейнер,
предназначенный для контаминированных отходов. Все эти процедуры следует выполнять в
перчатках.
11. Поверхность протрите ещё раз дезинфицирующим раствором. Доложите о случившемся
заведующему лабораторией и зарегистрируйте случай аварии в журнале.
12. Заведующий лабораторией докладывает о факте аварии учреждения администрации учреждения.
13. Персонал, подвергшийся угрозе заражения ВИЧ-инфекцией должен находиться под наблюдением
врача-инфекциониста с обязательным обследованием на маркеры ВИЧ-инфекции в следующие
сроки: сразу после аварии, через 1, 3, 6 и 12 месяцев.
14. Врач-инфекционист принимает решение о целесообразности назначения профилактической
антиретровирусной терапии (АРВТ).
15. При потенциальном риске заражения гепатитом В у невакцинированных против ГВ вводится
вакцина по схеме 0-1-2 месяцев, с последующим контролем за маркерами вирусного гепатита В
(HBsAg, анти-HBs).
16. У ранее вакцинированного персонала определяется уровень анти-HBs. При концентрации антител
менее 10 МЕ/Л вводится бустерная доза вакцины.
17. После аварии обследуйте в самые короткие сроки пациента, от которого получен инфицированный
материал на маркеры ВИЧ, ГВ и гепатита С (ГС).
18. Перед работой все повреждения кожи на руках закройте лейкопластырем или напальчниками.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Приказ № 202 от 12.05.08 г. «О проведении лабораторной диагностики, противоэпидемических
мероприятий и наблюдения при ВИЧ-инфекции в ЛПО Кыргызской Республики»
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
312
2. Комплект методических материалов по безопасности инъекций и сопутствующим процедурам.
ВОЗ. 2011 г
3. Профилактика ВИЧ-инфекции в государственных судебно-медицинских экспертных учреждениях
от 22.03.2013 г. № 14-1/10/2-2018.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
ИЗЪЯТО (у кого)
Дата
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Форма журнала регистрации аварий - (Наименование организации, фамилия, имя, отчество
заведующего- физического лица, его регистрационные данные)
№
п/н
Дата и
время
аварии
ФИО пострадавшего, год рождения, общий стаж
работы
Профессия
(должность)
пострадавшего
Вид происшествия,
приведшего
к аварийной
ситуации
1
2
3
4
5
Описание
Принятые
Ответобстоя­тельств,
меры по устра- ственное
при которых
нению причин
лицо и
произошла
аварии
роспись
авария
6
7
8
РАЗДЕЛ 09
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Безопасность в лаборатории
313
СОП № 09-03
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНЫЕ ОПЕРАЦИОННЫЕ ПРОЦЕДУРЫ
НАЗВАНИЕ: ПРАВИЛА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ, ОБРАБОТКИ СРЕДСТВ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ
ЗАЩИТЫ (СИЗ) ПРИ РАБОТЕ В ЛАБОРАТОРИИ С ИНФИЦИРОВАННЫМ МАТЕРИАЛОМ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП- стандартная операционная процедура
СИЗ- средства индивидуальный защиты
ПЦР- полимеразная цепная реакция
ФИО – фамилия, имя, отчество
НАЗНАЧЕНИЕ
Правильное использование СИЗ для обеспечения защиты сотрудников лаборатории от
инфицирования.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Следует неукоснительно соблюдать требования биобезопасности при работе с потенциальноинфицированным биологическим материалом.
В лаборатории всегда должен быть 1-недельный запас необходимых СИЗ.
Лаборатория должна комплектоваться СИЗ в соответствии с размерами одежды, обуви и кистей рук
сотрудников.
В лаборатории применяются только неопудренные перчатки.
Проведите обучение сотрудников лаборатории правилам надевания и снятия перчаток до и после
использования.
Никогда не используйте перчатки повторно. Нельзя стирать или обеззараживать перчатки – в них
образуются микротрещины, они станут более пористыми и потеряют свои защитные свойства.
НЕ НОСИТЕ СРЕДСТВА ИНДИВИДУАЛЬНОЙ ЗАЩИТЫ ВНЕ ЛАБОРАТОРНЫХ ПОМЕЩЕНИЙ,
А ИМЕННО В СТОЛОВОЙ, ОФИСНЫХ ПОМЕЩЕНИЯХ, КОМНАТАХ ПЕРСОНАЛА И
ТУАЛЕТЕ!!!
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Все сотрудники лаборатории
МАТЕРИАЛЫ
1. Одноразовые средства индивидуальной защиты: перчатки неопудренные, маски, защитный экран /
очки, чепчики, бахилы, халаты.
2. Пакеты или емкости для удаления отработанных СИЗ.
314
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ИНСТРУКЦИИ
Обеспечьте достаточное количество комплектов одноразовой защитной одежды в лаборатории для
персонала и посетителей лаборатории.
Проверьте, чтобы защитная одежда была удобной, по размеру и отвечала предъявляемым
требованиям.
Надевайте СИЗ в соответствии с требованиями инструкций по применению СИЗ.
После использования поместите загрязненные СИЗ в емкость или пакет для удаления твердых
отходов.
По окончании рабочего дня пакет плотно перевяжите в зоне проведения исследования и отправьте
на автоклавирование.
В случае загрязнения одежды опасными материалами немедленно поменяйте защитную одежду на
чистую.
Носите только неопудренные перчатки при ПЦР исследования.
Перед применением перчаток убедитесь в их соответствии следующим требованиям :
a. непромокаемость
b. полное закрытие рук и запястья при надевании, охвата рукава куртки или халата
c. легкость удаления при порезе, повреждении и внутреннем загрязнении
d. соответствие выполняемым процедурам, снятие и удаление согласно правилам безопасности
после выполнения исследования
Одевайте перчатки при:
–– работе, когда возможен прямой контакт с любым потенциально контаминированным предметом
или материалом, кровью, инфекционными материалами
–– работе с особо чистыми химическими реактивами, а также с кислотами, щелочами и прочими
агрессивными веществами
–– при уборке «заразной» зоны, ламинарных шкафов, обработке оборудования
Снимайте и сбрасывайте в пакет или емкость перчатки:
–– вне пределов комнат боксовых помещений
–– при контакте с дверными ручками
–– при контакте с любыми не контаминированными предметами, которыми сотрудники пользуются
без перчаток.
Снимайте использованные перчатки, вывернув их наизнанку, до выхода из рабочей зоны, поместите
их в специальный контейнер (Приложение 1)
Удаляйте использованные перчатки вместе с инфицированными отходами.
Загрязненные инфицированным материалом перчатки немедленно меняйте!
Выберете удобную сменную обувь, с нескользящей подошвой и закрытым носом, желательно чтобы
это была кожаная или синтетическая непромокаемая обувь.
При работе в ПЦР боксе на сменную обувь оденьте одноразовые непромокаемые бахилы.
Снимайте халаты при выходе из ПЦР зоны
РАЗДЕЛ 09
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
315
Приложение 1.
Техника снятия перчаток
1
Ухватить перчатку около манжеты и стянуть ее частично, вывернув наизнанку. Не
снимайте ее до конца, пока не снимите ею вторую перчатку, чтобы не прикасаться
голой рукой к внешней стороне перчатки
2
Удерживая первую перчатку на пальцах, ухватить вторую перчатку около манжеты и
также стянуть ее частично. Не снимайте ее до конца.
3
Снимите обе перчатки одновременно, ни коем случае не прикасаясь к внешней
стороне голыми руками, и избегая брызг вокруг.
4
Использованные перчатки нужно сразу же убрать в предназначенный для этого
контейнер. Необходимо сразу же после снятия перчаток обработать руки
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ:
1. WHO/CDS/CSR/EDC/2001.16. Guidelines for using HIV technologies in Surveillance: Selection,
Evaluation, and Implementation - 2009 update
2. Практическое руководство по биологический безопасности в лабораторных условиях ВОЗ-2004.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
316
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Безопасность в лаборатории
СОП № 09-04
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: ОБРАБОТКА И ЭКСПЛУАТАЦИИ ЛАМИНАРНОГО БОКСА
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ФИО - фамилия, имя, отчество
НАЗНАЧЕНИЕ
Для обеспечения безопасности и стерильности работ в ламинарном боксе. Используется при
проведении работ с высокими требованиями к чистоте воздуха и защите персонала.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Соблюдение правил работы безопасности с электроприборами. Электропроводка должна быть с
заземлением
Соблюдение правил работы безопасности с инфекционным материалом
Обработка ламинарного бокса должна проводиться по принципу от чистого к грязному для
исключения контаминации.
Инструкции, СОПы и другие бумажные носители в файлах помещаются с помощью магнита на
переднюю металлическую часть панели ламинарного шкафа снаружи, но не внутри ламинарного
бокса!
Не используйте хлорсодержащие дезсредства в ламинарном шкафу.
Размещайте ламинарный бокс на расстоянии от двери, окон и прохода, так чтобы не нарушался
поток воздуха в ламинарном шкафу.
Ламинарный шкаф должны отвечать характеристикам, указанным в паспорте.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. 1. Врач-лаборант
2. 2.Лаборант
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Ламинарный бокс
МАТЕРИАЛЫ
1. Халат одноразовый медицинский
2. Перчатки одноразовые без талька
3. Контейнер для удаления биологических отходов
РАЗДЕЛ 09
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
317
4. Салфетки косметические вискозные, сухие
РЕАКТИВЫ
1. 70% спирт
2. 0,2% раствор дезинфицирующего средства ДП-2Т
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
ИНСТРУКЦИИ
Еженедельная генеральная уборка ламинарного бокса
Наденьте лабораторный халат, предназначенный для работы в данной комнате.
Вымойте руки.
Наденьте перчатки. Перчатки следует натягивать на манжеты рукавов лабораторного халата так,
чтобы не было открытых участков кожных покровов на руках.
Откройте переднюю панель, достаньте все оборудование и предметы (дозаторы, термостат, миницентрифугу, вортекс, штатив коробки с наконечниками, контейнер для удаления биологических
отходов), которые находятся в ламинарном боксе и положите все на рабочий стол до завершения
обработки ламинарного бокса.
Продезинфицируйте рабочую поверхность, стенки и внутреннюю поверхность стекла, оборудования,
предметы, с использованием салфеток, смоченных 0,2% раствором дезинфицирующего средства
ДП-2Т, с экспозицией на час.
По истечении часа протрите все поверхности салфеткой, смоченной водой, затем обработайте все
поверхности ламинарного бокса и оборудование 70% раствором спирта.
Поместите все оборудование и предметы в центр ламинарного бокса, НЕ УСТАНАВЛИВАЙТЕ
ПРЕДМЕТЫ РЯДОМ С РЕШЕТКОЙ ЗАБОРА ВОЗДУХА И НЕ БЛОКИРУЙТЕ ЗАДНЮЮ
ВЫТЯЖНУЮ РЕШЕТКУ. Закройте переднюю панель ламинарного бокса и включите
ультрафиолетовую лампу на 45 минут.
Расположите предметы так, чтобы минимизировать передвижение контаминированных образцов
через чистые образцы, т.е. следует работать в направлении от чистой зоны к контаминированной.
Все манипуляции при проведении ПЦР исследований должны проводиться на средней или задней
части рабочей поверхности ламинарного бокса.
Зафиксируйте время работы лампы, дату и фамилию оператора в специальном формуляре
Правила подготовки ламинарного бокса к работе
a. Включите ультрафиолетовые лампы на 15 минут для обработки воздуха, содержащегося в
боксе.
b. Отключите ультрафиолетовые лампы
c. Проверьте:
–– установилась ли полная скорость потока, путем проверки заданных параметров согласно
паспорту оборудования
–– начал ли вентилятор гнать воздух
–– зажегся ли свет
d. Выключите звуковую сигнализацию путем нажатия кнопки на контрольной панели
e. Подождите 15 минут после выключения сигнализации, прежде чем начать работу. НЕРА фильтр должен электростатически зарядиться отрицательно для улавливания мельчайших
частиц.
Правила эффективной эксплуатации ламинарного бокса
a. Планируйте работу заранее, все необходимое оборудование и расходный материал
разместите в боксе до включения бокса.
318
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
b. Не вносите и не выносите через воздушный барьер ламинарного бокса никакие предметы
до окончания работы.
c. Не допускайте перегрузки бокса лишними предметами.
d. Не размещайте предметы и материалы на передней части рабочей поверхности, так как при
этом закрываются прорези для воздуха и нарушается поток воздуха.
По окончании работы в ламинарном боксе закройте все флаконы и пробирки.
Удалите заразный материал в контейнер с отходами для переноса в помещение для автоклавирования.
Продезинфицируйте рабочую поверхность ламинарного бокса, стенки и внутреннюю поверхность
стекла, с использованием 70% раствора этилового спирта.
Оставьте вентилятор включенным на 15 минут для очистки воздуха в рабочем пространстве
ламинарного бокса.
Освободите ламинарный бокс, не оставляйте там НИЧЕГО лишнего.
Нажмите выключатель ON/OFF на контрольной панели для выключения
Снимите лабораторный халат и перчатки.
Тщательно вымойте руки, перед тем как покинуть бокс.
Периодически проводите контроль работы ламинарного бокса согласно следующим правилам:
a. проводите микробиологический контроль заражённости воздушной среды ламинарного
шкафа путем седиментационного метода бактериологического посева чашек Петри с
питательными средами.
b. используйте контроль скорости движения воздуха в ламинарном шкафу с помощью
анемометров. Сопоставьте полученные показатели с указанными в паспорте ламинарного
шкафа.
Ежедневные уборка ламинарного бокса и правила подготовки ламинарного бокса к работе
Наденьте лабораторный халат, предназначенный для работы в данной комнате.
Вымойте руки.
Наденьте перчатки. Перчатки следует натягивать на манжеты рукавов лабораторного халата так,
чтобы не было открытых участков кожных покровов на руках.
Откройте переднюю панель, обработаете 70% спиртом рабочую поверхность, стенки, внутреннюю
поверхность стекла и все оборудование и предметы (дозаторы, термостат, мини-центрифугу,
вортекс, штатив коробки с наконечниками, контейнер для удаления биологических отходов),
которые находятся в ламинарном боксе.
НЕ УСТАНАВЛИВАЙТЕ ПРЕДМЕТЫ РЯДОМ С РЕШЕТКОЙ ЗАБОРА ВОЗДУХА И НЕ
БЛОКИРУЙТЕ ЗАДНЮЮ ВЫТЯЖНУЮ РЕШЕТКУ.
Закройте переднюю панель ламинарного бокса и включите ультрафиолетовую лампу на 45 минут.
Расположите предметы так, чтобы минимизировать передвижение контаминированных образцов
через чистые образцы, т.е. следует работать в направлении от чистой зоны к контаминированной.
Все манипуляции при проведении ПЦР исследований должны проводиться на средней или задней
части рабочей поверхности ламинарного бокса.
Зафиксируйте время работы лампы, дату и фамилию оператора в специальном формуляре
Правила подготовки ламинарного бокса к работе
31. Включите ультрафиолетовые лампы на 15 минут для обработки воздуха, содержащегося в боксе.
32. Отключите ультрафиолетовые лампы
33. Проверьте:
–– установилась ли полная скорость потока путем проверки заданных параметров согласно паспорта
оборудования.
РАЗДЕЛ 09
34.
35.
36.
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43.
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
319
–– начал ли вентилятор гнать воздух
–– зажегся ли свет
Выключите звуковую сигнализацию путем нажатия кнопки на контрольной панели
Подождите 15 минут после выключения сигнализации, прежде чем начать работу. НЕРА - фильтр
должен электростатически зарядиться отрицательно для улавливания мельчайших частиц.
По окончании работы в ламинарном боксе закройте все флаконы и пробирки.
Удалите заразный материал в контейнер с отходами для переноса в помещение для автоклавирования.
Продезинфицируйте рабочую поверхность ламинарного бокса, стенки и внутреннюю поверхность
стекла, с использованием 70% раствора этилового спирта.
Оставьте вентилятор включенным на 15 минут для очистки воздуха в рабочем пространстве
ламинарного бокса.
Освободите ламинарный бокс, не оставляйте там НИЧЕГО лишнего.
Нажмите выключатель ON/OFF на контрольной панели для выключения
Снимите лабораторный халат и перчатки.
Тщательно вымойте руки, перед тем как покинуть бокс.
РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ
1. Инструкция по эксплуатации бокса биобезопасности и ламинарного бокса
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
320
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Безопасность в лаборатории
СОП № 09-05
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ТЕКУЩЕЙ И ЗАКЛЮЧИТЕЛЬНОЙ УБОРКИ ПОМЕЩЕНИЙ ПЦР
ЛАБОРАТОРИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП- стандартная операционная процедура
ФИО- фамилия, имя, отчество
НАЗНАЧЕНИЕ
Описание порядка уборки помещений ПЦР-зоны для обеспечения чистоты и безопасных условий
работы сотрудников и окружающей среды.
1.
2.
3.
4.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Строгое соблюдение правил работы с биоматериалом согласно Постановлению Правительства КР от
12 января 2012 г. № 32 « Об утверждении Инструкции по инфекционному контролю в организациях
здравоохранения КР».
Проводите ежедневную текущую уборку во всех помещениях ПЦР лаборатории.
В комнатах, где проводят выделение НК, рабочие поверхности, штативы, оборудование ежедневно
обеззараживайте УФ в течение 45 минут.
Полы в ПЦР зоне ежедневно подвергают влажной уборке с применением дезинфицирующих
средств, регламентированных санитарными правилами, утверждённых в МЗ КР.
Для каждой зоны ПЦР должна быть отдельная одноразовая или многоразовая спецодежда и
отдельный промаркированный уборочный инвентарь: одноразовый халат, шапочка, бахилы и
перчатки, одноразовая безворсовая ветошь и безворсовые салфетки, ёмкости для приготовления
необходимых количеств моющих и дезинфицирующих растворов.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Все сотрудники лаборатории
ИНСТРУКЦИИ
1. Проводите текущую и генеральную уборку помещений лаборатории приемлемыми и разрешенными
методами.
2. Проводите текущую уборку помещений ежедневно влажным способом с применением моющих
средств, а затем с применени­ем дезинфектанта.
3. В боксовых помещениях проводите еженедельную генеральную уборку с применением
дезинфицирующих средств путем протирания поверхно­сти мебели, приборов, аппаратов, стен.
РАЗДЕЛ 09
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
321
4. В зависимости от лабораторных условий для остальных зон лаборатории составьте график
еженедельной или ежемесячной уборки. Например, мойка потолков и стен может проводиться
каждую неделю, тогда как мойку холодильников и зон для хранения можно проводить раз в месяц.
5. Ведите запись уборки и дезинфекции зон лаборатории с указанием даты и фамилии исполнителя.
6. При поступлении и периодически (1 раз в квартал) проверяйте активность используемых
дезинфицирующих средств.
7. Назначьте ответственное лицо за приготовление рабочих растворов дезинфицирующих средств,
которое будет регистрировать дату, концентрацию, количество приготовленного дез. средства.
8. Не допускайте хранение в лаборатории большого запаса дезинфицирующих средств.
9. Недельный запас дезинфицирующих средств храните в хорошо проветриваемом, сухом месте.
10. Отведите в лаборатории специальное место для приготовления растворов дезинфицирующих
средств.
11. Готовые растворы дезинфектантов используйте однократно.
12. Ежедневно проводите замену дезраствора в рабочих емкостях
13. Емкости для дезрастворов четко промаркируйте и закройте крышкой. В маркировке емкости
укажите: название дезраствора, его концентрацию, назначение и дату приготовления.
14. Промаркируйте уборочный инвентарь, храните его в специально отведенном месте и используйте
его по назначению.
15. После влажной уборки включите бактерицидные лампы.
16. Перед началом работы рабочие поверхности столов, ламинарных шкафов дополнительно
обработайте 70% этиловым спиртом.
17. По окончании работы все пробирки с образцами, уберите в холодильники (морозильники), в
обязательном порядке проведите дезинфекцию рабочих поверхностей столов.
18. При наличии видимых пятен крови их сначала залейте дезинфицирующим раствором на
рекомендуемое время обеззараживания (не менее 30 минут), затем удалите смесь крови и
дезинфицирующего средства, сбросьте салфетку в дезинфицирующий раствор. После этого
поверхность протрите дезинфицирующим раствором. При отсутствии других средств применяется
70% этиловый спирт, при этом поверхность протрите 3-5 раз, поскольку спирт быстро испаряется.
Все манипуляции проводит работающий врач или лаборант, санитарка допускается уборке только
после дезинфекции участка пролития
19. Соберите использованную посуду, твердые отходы из «заразной» зоны лаборатории в закрывающиеся
емкости и передайте в авто­клавную или дезинфицируйте на месте.
Внимание! Слив необеззараженных жидко­стей в канализацию запрещается.
20. Не допускайте хранение бака до автоклавирования более 1 рабочей смены.
21. Перенос использованной посуды для обеззараживания осуществляйте в закрывающихся емкостях,
исключающих инфицирование во время транспортирования.
22. В случае неисправности автоклава или невозможности автоклавирования дезинфекцию производите
методом погружения в дезинфектант (см. пп.23-25).
23. Пробирки и флаконы со сгустками крови обеззараживайте только с использованием
дезинфицирующих средств (6% раствор перекиси водоро­да, 3% раствор хлорсодержащих
препаратов).
24. При погружении в дезинфицирующий раствор емкостей со сгустками крови соблюдайте
осторожность. Емкость с помощью анатомического пинцета и погрузите в наклонном положении до
полного заполнения раствором. При правильном погружении воздушных пузырей не образуется, и
емкость опускается на дно. После погружения всех емкостей пинцет продезинфицируйте.
25. Наконечники обрабатывайте 6% раствором перекиси водорода.
322
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
26. Вынос из лаборатории оборудования, лабораторной или хозяйственной посуды, реактивов,
инструментов производите только после их дезинфекции и с разрешения ее руководителя.
27. Все виды уборки регистрируйте в специальном журнале с указанием метода дезинфекции.
28. Ежемесячно проводите контроль эффективности проведения дезинфекции.
29. При необходимости проводите корректирующие мероприятия.
30. Использованную ветошь сбрасывайте в специально выделенную емкость с дезинфицирующим
раствором, маркированную «Для дезинфекции использованной ветоши».
31. Пришедшую в негодность ветошь утилизируйте после соответствующей обработки, как твердый не
опасный отход.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. №104 приказ МЗ КР от 15.03.2011 г. «Организация лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV
патогенности».
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
РАЗДЕЛ 09
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Безопасность в лаборатории
323
СОП № 09-06
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ПРОТИВОПОЖАРНОЙ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ
ПРИ РАБОТЕ В ЛАБОРАТОРИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП- стандартная операционная процедура
ФИО- фамилия, имя, отчество
НАЗНАЧЕНИЕ
Обеспечение выполнения правил противопожарной безопасности при работе в лаборатории.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
1. Персонал лаборатории должен быть детально инструктирован по правилам противопожарной
безопасности.
2. Персонал лаборатории должен быть детально инструктирован по правилам соблюдения общей
техники безопасности и предотвращения несчастных случаев на рабочем месте.
3. Все инструкции по технике безопасности должны соблюдаться неукоснительно.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Все сотрудники лаборатории
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ИНСТРУКЦИИ
Пожарные выходы из лаборатории должны вести в защищенную от огня зону.
В каждой лабораторной зоне, где используются или хранятся горючие газы или жидкости, должны
быть установлены системы автоматического обнаружения дыма или жара и тревожного оповещения.
Горючие газы и жидкости следует применять только в помещениях с хорошей вентиляцией. Работу,
связанную с выделением воспламеняющихся паров, следует проводить только под лабораторной
вытяжкой или в вытяжном шкафу.
Горючие газы и жидкости необходимо содержать вдали от источников тепла и огня, в том числе от
электромоторов и прямого солнечного света.
Трубопроводные устройства для газа должны быть оснащены автоматическими запорными
клапанами, и их работа должна соответствовать национальным, региональным или местным
правилам.
Наборы для удаления протечек должны быть доступны для экстренного прекращения протекания
небольших количеств воспламеняющейся жидкости. В случае протечки следует немедленно
известить противопожарную службу.
324
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
7. Контейнеры с горючими жидкостями и газами следует содержать в наименьшем количестве,
сопоставимом с потребностями лаборатории.
8. Контейнеры с горючими жидкостями следует содержать в закрытом виде, за исключением момента
их использования.
9. Горючие жидкости и газы следует хранить только в опробованных кабинах или складах.
10. Металлические контейнеры для хранения больших объемов воспламеняющихся жидкостей должны
быть закреплены и заземлены для предотвращения накопления статического заряда.
11. Для хранения, транспортировки и распределения воспламеняющихся жидкостей должны быть
применены портативные безопасные контейнеры.
12. Декантирование и переливание горючих жидкостей из больших в малые контейнеры необходимо
проводить либо в специально отведенном месте хранилища, либо под вытяжкой.
13. Эти процедуры должны содержать достаточно подробное описание процесса, обеспечивающего
безопасное и законное выведение материалов из-под контроля лаборатории.
14. Все сотрудники лаборатории и находящийся в здании персонал должны пройти инструктаж
и обучение, включающие в себя: a) способы распознавания и оценки опасностей; b) меры по
уменьшению риска возгорания; c) действия при возникновении пожара (приложение 1).
15. Должно быть в наличии соответствующее оборудование для тушения поддающегося подавлению
огня и для содействия эвакуации персонала из зоны поражения пожаром.
16. Лабораторный персонал ответствен за безопасность людей путем их организованной эвакуации, а
не за попытки тушения огня.
17. Выбор, размещение и содержание в порядке огнетушителей и противопожарных полотнищ должны
соответствовать типу возгорания, возможному в лаборатории, и быть согласованными с местными
противопожарными властями.
18. Должны быть схемы эвакуации, журналы инструктажа персонала в случае возникновения пожара.
Приложение 1
Пожарная Безопасность
Персонал лаборатории должен быть внимателен к условиям, при которых есть опасность
возникновения пожара. Следует помнить, что жидкости с низкими точками возгорания могут
воспламениться, находясь рядом с источниками тепла, такими как нагревательные плиты, трубы с
паром, или рядом с оборудованием, которое может дать искру или нагреться.
Небольшим пожаром в лаборатории считается пожар, который можно погасить за 1-2 мин.
Адекватным действием в таких случаях будет – накрыть пламя перевернутым лабораторным стаканом
или влажными бумажными полотенцами. Если это не поможет, используйте огнетушитель. При
значительном пожаре звоните соответствующим местным службам, как правило, в пожарное отделение
и полицию.
В лабораториях должны находиться огнетушители соответствующего класса, подходящего для
пожаров в условиях лаборатории. Как правило, подходящими являются огнетушители класса BC или
ABC. Огнетушители подлежат ежегодной проверке и замене по необходимости. Персонал лаборатории
должен проходить обучение методам тушения пожаров разных видов и использованию огнетушителей
посредством ежегодной проводимой тренировки «Техника безопасности и сбор и удаление опасных
отходов в лабораториях».
Все сотрудники лаборатории должны уметь пользоваться переносными огнетушителями,
должны быть маркировки пожарной опасности в местах хранения пожароопасных материалов
(фото 1).
РАЗДЕЛ 09
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
325
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Практическое руководство по биологической безопасности в лабораторных условиях (третье
издание, Женева, 2004 г).
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
326
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Безопасность в лаборатории
СОП № 09-07
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: ПРАВИЛА БИОБЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ В ЛАБОРАТОРИИ
ДИАГНОСТИКИ ВИЧ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
ФИО - фамилия, имя, отчество
ВИЧ -вирус иммунодефицита человека
СОП – Стандартная операционная процедура
НАЗНАЧЕНИЕ
Защита сотрудников лаборатории от инфицирования
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Неукоснительное соблюдение всех нормативных документов, регламентирующих деятельность
лабораторий по биологической безопасности, обязательных к выполнению на территории Кыргызской
Республики.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Все сотрудники лаборатории
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ИНСТРУКЦИИ
Проводите исследования в лаборатории только при наличии соответствующего разрешения
Республиканской режимной комиссии Минздрава Кыргызской Республики.
Назначьте лицо, ответственное за биобезопасность, которое будет проводить соответствующий
инструктаж медицинского персонала при приеме на работу, а в последующем — не реже двух раз в
год.
Делайте отметку о прохождении инструктажа в специальном журнале. Для облегчения обучения
персонала в лабораториях составьте памятки по мерам безопасности, которые используйте при
периодическом инструктаже, а также разместите их непосредственно на рабочих местах.
Для работы в лаборатории всегда носите специальную одежду или халаты, очки (маску при работе
с аэрозолями).
Не носите спецодежду вне лабораторных помещений, а именно в столовой, комнате персонала,
туалете и служебных офисных помещениях.
Одевайте перчатки при:
–– работе, когда возможен прямой контакт с кровью или инфекционными материалами
–– работе в боксовых помещениях
–– при контакте с любым потенциально контаминированным предметом или материалом.
РАЗДЕЛ 09
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
327
7. Снимайте перчатки:
–– вне пределов комнат боксовых помещений
–– при контакте с дверными ручками
–– при контакте с любыми не контаминированными предметами, которыми сотрудники пользуются
без перчаток.
8. В лаборатории нельзя носить обувь с открытыми носками.
9. Упаковку и транспортировку образцов проводите согласно существующим национальным и/или
международным нормам и правилам.
10. Перед работой все повреждения кожи на руках закройте лейкопластырем или напальчниками.
11. Руки мойте в процессе работы (в промежутках между отдельными ее этапами) и перед уходом из
лаборатории
12. Не допускайте:
–– Пипетирование ртом
–– Контакт инфекционных материалов с кожей и глазами
–– Проглатывание инфекционных материалов
13. Для защиты от возможного попадания вируссодержащего материала во время работы используйте
защитные очки, экраны или другие защитные средства, подвергающиеся дезинфекции.
14. Защитная лабораторная одежда не должна храниться в тех же шкафчиках или ящиках, что и личная
одежда.
15. Используйте помещения только по их прямому назначению, проведение в них каких-либо других
работ не разрешается.
16. В лаборатории запрещается прием пищи, питье напитков и курение
17. Не допускайте пребывание детей и посторонних людей в рабочих зонах лаборатории
18. Двери лаборатории держите закрытыми, на дверях лаборатории необходимо повесить международный
знак биологической безопасности, где указана Ф.И.О. ответственного за биобезопасность и его
контактные данные (приложение 1).
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Практическое руководство по биологической безопасности в лабораторных условиях (третье
издание, Женева, 2004 г).
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Дата
328
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Приложение 1
РАЗДЕЛ 09
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики
СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
Сборник тандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Безопасность в лаборатории
329
СОП № 09-07
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ: УТИЛИЗАЦИЯ МЕДИЦИНСКИХ ОТХОДОВ КЛАСС Б
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП- стандартная операционная процедура
ФИО- фамилия, имя, отчество
НАЗНАЧЕНИЕ
СОП устанавливает обязательные санитарно-эпидемиологические требования к обращению (сбору,
временному хранению, обеззараживанию, обезвреживанию) с медицинскими отходами.
ТРЕБОВАНИЯ
1. При приеме на работу и затем ежегодно персонал проходит обязательный инструктаж по правилам
безопасного обращения с отходами.
2. Персонал должен быть привит в соответствии с национальным и региональным календарем
профилактических прививок.
3. Персонал должен работать в спецодежде и сменной обуви.
1.
2.
3.
4.
5.
1.
2.
3.
4.
5.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
Заведующий лабораторией
Врач-лаборант
Лаборант
Младший мед. персонал
Сотрудник, ответственный за сбор отходов
МАТЕРИАЛЫ
пакеты для автоклавирования
желтые контейнеры с крышками из материалов, устойчивых к механическому воздействию,
воздействию высоких и низких температур, моющих и дезинфицирующих средств
непрокалываемые влагостойкие емкости с крышкой (контейнеры)
перманентный маркер
технологический журнал учета отходов
ИНСТРУКЦИИ
Утилизация мед. отходов включает следующие этапы:
–– сбор отходов;
330
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
–– временное хранение отходов;
–– обеззараживание/обезвреживание;
–– учет движения
Соберите отходы в пакеты для автоклавирования или твердую (непрокалываемую) упаковку
(контейнеры) желтого цвета или имеющие желтую маркировку.
Используйте для сбора острых отходов одноразовые непрокалываемые влагостойкие емкости
(контейнеры), с плотно прилегающей крышкой, исключающую возможность самопроизвольного
вскрытия.
Используйте для сбора органических, жидких отходов одноразовые непрокалываемые влагостойкие
емкости с крышкой (контейнеры), обеспечивающие их герметизацию и исключающие возможность
самопроизвольного вскрытия.
Заполняйте пакет не более чем на ¾ емкости для отходов
Сотрудник, ответственный за сбор отходов завязывает пакет или закрывает его с использованием
бирок-стяжек или других приспособлений, исключающих высыпание отходов. Твердые
(непрокалываемые) емкости закрываются крышками.
Не допускается перемещать медотходы за пределами подразделения в открытых емкостях.
При окончательной упаковке промаркируйте емкость надписью «Отходы. Класс Б» с указанием
названия организации, подразделения, даты и фамилии лица, ответственного за сбор отходов.
Ежедневно производите дезинфекцию многоразовых емкостей для сбора отходов внутри
организации.
Запрещается:
–– вручную разрушать, разрезать отходы, в том числе использованные системы для внутривенных
инфузий в целях их обеззараживания;
–– снимать вручную иглу со шприца после его использования, надевать колпачок на иглу после
инъекции;
–– пересыпать (перегружать) неупакованные отходы из одной емкости в другую;
–– утрамбовывать отходы;
–– осуществлять любые операции с отходами без перчаток или необходимых средств индивидуальной
защиты и спецодежды;
–– использовать мягкую одноразовую упаковку для сбора острого медицинского инструментария и
иных острых предметов;
–– устанавливать емкости для сбора отходов на расстоянии менее 1 м от нагревательных приборов.
–– смешивать отходы различных классов в общей емкости.
При необходимости временного хранения медицинских отходов строго соблюдайте следующие
требования:
–– Медицинские отходы из подразделений в закрытых одноразовых емкостях поместите в контейнеры
и затем перенесите их в следующее помещение для временного хранения медицинских отходов.
–– Не разрешается доступ посторонних лиц в помещения временного хранения медицинских
отходов.
–– Осуществляйте сбор отходов в местах их образования в течение рабочей смены. При использовании
одноразовых контейнеров для острого инструментария допускается их заполнение в течение 3-х
суток.
–– Одноразовые пакеты, используемые для сбора отходов должны обеспечивать возможность
безопасного сбора в них не более 10 кг отходов.
Для обеззараживания медотходов выберите возможный метод (физический, химический).
РАЗДЕЛ 09
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
331
11. Для обеззараживания медицинских отходов используйте зарегистрированные в Кыргызской
Республике дезинфекционные средства и оборудование в соответствии с инструкциями по их
применению.
12. Проводите строгий учет утилизации медицинских отходов:
–– технологический журнал учета отходов в структурном подразделении; с указанием количества
единиц упаковки каждого вида отходов, по обращению (Приложение 1).
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Постановление Правительства Кыргызской Республики от 23 сентября 2011 года №583 «Об
утверждении Руководства по учёту инфекционных заболеваний в Кыргызской Республике».
2. №104 приказ МЗ КР от 15.03.2011 г. «Организация лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV
патогенности».
3. Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами СанПиН
2.1.7.2790-10.
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
ИЗЪЯТО (у кого)
Дата
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Места образова- Вид отхония отходов
дов
Бокс ПЦР
комната для
проведения ИФА
и др.
производственные
помещения
В день
В неделю
В месяц
В год
ед.
измер
Многоразовый
инвентарь, используемый для сбора
отходов
Одноразовые расходные материалы для сбора отходов
пакеты (кг)
контейнер (л)
Ответственный
(должность)
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
332
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Безопасность в лаборатории
СОП № 09-09
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДЕЗИНФЕЦИРУЮЩИХ РАСТВОРОВ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ИФА – иммуноферментный анализ
ИБ – иммунный блотинг
ЭТ – экспресс тестирование
НАЗНАЧЕНИЕ
Определяет порядок приготовления растворов, необходимых для обеззараживания инструментов,
посуды, жидких отходов, контаминированных материалов, уборки помещений и поверхностей при
проведении исследований методом ИФА, ИБ, ЭТ в референс-лаборатории РЦ СПИД.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Раствор перекиси водорода готовятся непосредственно перед применением и не хранится.
Рабочие растворы лизоформина – 3000 можно применять в тече­ние 14 дней, с указанием даты и
времени с момента приготовления.
Приготовление рабочих растворов проводят при соблюдении следующих мер личной безопасности:
надевают резиновые перчатки, защитные очки, 4-слойную марлевую маску.
При попадании дезинфектанта на открытые участки кожи или слизистые следует немедленно
обильно промыть поражённый участок холодной водой.
Вода для приготовления рабочего раствора дезинфицирующего средства должна быть не выше
+25°С.
Тара с пергидролем (бутыли) должна храниться в кожухе в тёмном прохладном месте, не доступном
для общего пользования.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Лаборант
2. Санитарка
МАТЕРИАЛ
1. Халат, перчатки резиновые
РАЗДЕЛ 09
2.
3.
4.
5.
6.
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
333
Защитные очки
Четырёхслойная марлевая маска
Мерный стакан или цилиндр объёмом до 200 мл
Мерный стакан или цилиндр объёмом до 1 литра
Ёмкость, устойчивая к коррозии (стеклянная, эмалированная, пластиковая) на 3-5 литров.
РЕАКТИВЫ
1. Лизоформин 3000
2. 33% раствор перекиси водорода
3. Дистиллированная вода
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
ИНСТРУКЦИЯ
А. Инструкция по приготовлению 6% раствора перекиси водорода
Наденьте халат, защитные очки, резиновые перчатки и марлевую маску.
Подготовьте все необходимые материалы и реактивы.
Откройте последнюю страницу СОП, Приложение А, «Приготовление 6% раствора перекиси
водорода».
Определите для себя, какой объем 6% перекиси водорода вам потребуется для работы на сегодня и
найдите его в колонке «Объем 6% H2O2».
По таблице определите, какой объем 33% перекиси водорода Вам будет необходимо для
приготовления 6% перекиси водорода.
Отмерьте необходимое количество 33% перекиси водорода с помощью мерного стакана или
цилиндра объёмом до 200 мл.
Аккуратно перелейте отмеренное количество 33% перекиси водорода в 1 литровый мерный стакан
или цилиндр.
Аккуратно долейте в мерный стакан или цилиндр дистиллированной воды до нужного объёма
Б. Инструкция по приготовлению растворов Лизоформина 3000
1. Наденьте халат и резиновые перчатки.
2. Подготовьте все необходимые материалы и реактивы.
3. Для приготовления рабочего разведения раствора Лизоформина 3000 откройте последнюю страницу
СОП, Приложение Б. «Приготовление рабочего раствора средства Лизоформин 3000»
4. Определите для себя, какой объем раствора Лизоформина 3000 потребуется для проведения
дезинфекции.
5. По таблице определите, какой объем Лизоформина 3000 Вам потребуется для приготовления
нужного рабочего раствора.
6. Отмерьте необходимое количество концентрата Лизоформина-3000 с помощью мерного стакана
или цилиндра объёмом до 200 мл
7. В рабочую ёмкость налейте необходимый объем воды, а после добавьте необходимый объем
дезинфицирующего средства Лизоформин 3000.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР, утверждена
постановлением Правительства КР № 32 от 112.01.2012г.
2. Инструкция по применению средства «Лизоформин 3000» Разработано НИИД МЗ РФ (Москва),
ИЛЦ РНИИТО им. Р.Р. Вредена МЗ РФ (Санкт-Петербург).
334
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
ИЗЪЯТО (у кого)
Дата
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение А.
Приготовление 6% раствора перекиси водорода.
Объем 6% H2O2
Объем 33% H2O2
100 мл
18 мл
200 мл
36 мл
300 мл
55 мл
400 мл
73 мл
500 мл
91 мл
600 мл
109 мл
700 мл
127 мл
800 мл
145 мл
900 мл
164 мл
1 литр
180 мл
Приложение Б.
Приготовление рабочего раствора средства «Лизоформин 3000»
Концентрация рабочего раствора
лизоформина -3000
количество концентрата лизоформина в мл
вода дистиллированная в мл
0,25 %
2,5
997,5
0,5 %
5
995
0,75 %
7,5
992,5
1%
10
990
1,5 %
15
985
2%
20
980
2,5 %
25
975
3%
30
970
4%
40
960
РАЗДЕЛ 09
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Безопасность в лаборатории
335
СОП № 09-10
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА УБОРКИ ПОМЕЩЕНИЙ ИФА-ЛАБОРАТОРИИ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
РЦ СПИД – республиканский центр СПИД
ИФА-иммуноферментный анализ
НАЗНАЧЕНИЕ
Описание правил уборки помещений ИФА-лаборатории для обеспечения чистоты и безопасных
условий работы сотрудников и окружающей среды.
1.
2.
3.
4.
5.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
Соблюдать меры предосторожности в соответствии с требованиями работ с микроорганизмами IIIIV групп патогенности
В помещениях ИФА-лаборатории проводятся следующие виды уборки:
–– Текущая - ежедневно, до начала и после окончания работы
–– Генеральная - 1 раз в месяц
Для уборки «чистой» и «грязной» зон лаборатории предусматривается отдельный уборочный
инвентарь.
Уборочный инвентарь должен быть промаркирован, с указанием отделения или комнаты, где он
используется (Приложение 1)
Уборочный инвентарь хранится в специально отведенных местах: для ИФА-лаборатории, коридора
заразной зоны - в моечной, для уборки кабинетов чистой зоны – в подсобном помещении (например,
туалет).
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Лаборант
2. Санитарка
МАТЕРИАЛ
1. Халат, хозяйственные перчатки, закрытая обувь.
2. Ведра для «заразной» и «чистой» зон и рабочих кабинетов
3. Емкость для мытья стен
336
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
4. Щетки
5. Тряпки для поверхностей и пола в «заразной», «чистой» зонах и рабочих кабинетах
6. Швабры
РЕАКТИВЫ
1. Лизоформин - 3000
2. Нашатырный спирт
3. Моющие и чистящие средства
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
ИНСТРУКЦИИ
Текущая уборка кабинетов
Уборка кабинетов проводится ежедневно, до начала рабочего дня.
Наденьте халат, перчатки.
Подготовьте уборочный инвентарь (промаркированный), предназначенный для проведения уборки
в кабинетах (Приложение 1).
Горизонтальные поверхности – столы, стулья - протрите ветошью без ворса, смоченной в чистой
воде.
Мытье полов проводите водой с добавлением моющего средства (5 г на 1 литр воды), одно ведро на
1 кабинет.
По окончании уборки помещение проветрите в течение 10-15 минут.
По окончании уборки уборочный инвентарь (ведра, швабры, щетки) промойте с использованием
моющего средства и прополощите в чистой воде, высушите перед их повторным использованием.
По окончании уборки снимите аккуратно перчатки и вымойте руки с мылом.
Категорически запрещается во время уборки использовать веник, а также вытирание полов и пыли
всухую.
Уборку следует проводить с менее загрязненных мест, постепенно переходя к наиболее загрязненным
местам, а также сверху вниз.
Мусор в кабинетах собирают в полиэтиленовые мешки и утилизируют как бытовые отходы по мере
накопления.
Текущая уборка лабораторных помещений «чистой зоны»
Уборка рабочих комнат лаборатории, расположенных в «чистой зоне» проводится ежедневно до
начала рабочего дня.
Наденьте халат, перчатки, закрытую обувь.
Подготовьте уборочный инвентарь (промаркированный), предназначенный для проведения уборки
лабораторных комнат «чистой зоны».
Протрите поверхности ветошью без ворса, смоченной в чистой воде, начиная от подоконника,
горизонтальные поверхности столов, стулья, оборудование, аппараты, как менее загрязнённые
места.
Стены мойте сверху вниз теплой водой с добавлением моющего средства (5 г на 1 литр воды) по
принципу одно ведро на 1 лабораторную комнату.
Полы вымойте теплой водой с добавлением моющего средства (5 г на 1 литр воды), одно ведро на 1
лабораторную комнату.
В конце рабочего дня проведите влажную уборку пола с использованием 0,3% лизоформина -3000
(Приложение 2 А, В).
По окончании уборки помещение проветрите в течение 10-15 минут.
После окончания уборки помещения включается бактерицидный облучатель.
РАЗДЕЛ 09
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
337
10. Сделать соответствующие отметки в листах учета работы бактерицидной лампы и проведенной
уборке (Приложение 3 В).
11. По окончании уборки уборочный инвентарь (ведра, швабры, щетки) промойте с использованием
дезинфицирующего средства, прополоскайте в чистой воде, высушите перед их повторным
использованием.
12. По окончании уборки снимите аккуратно перчатки и вымойте руки с мылом.
13. Категорически запрещается во время уборки использовать веник, а также вытирать полы и пыль
всухую.
14. Мусор и чистые отходы собираются в полиэтиленовые мешки и утилизируются как бытовые отходы.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
1.
2.
3.
4.
Текущая уборка лабораторных помещений «грязной зоны»
Уборка лабораторных комнат и боксов «грязной зоны» проводится ежедневно до начала рабочего
дня и в конце рабочего дня
Наденьте халат, чепчик, перчатки, закрытую обувь
Подготовьте уборочный инвентарь (промаркированный), предназначенный для проведения уборки
лабораторных комнат и боксов «грязной зоны»
Протрите подоконники, горизонтальные поверхности рабочих столов, стулья, оборудование и
аппараты ветошью без ворса, смоченной в дезинфицирующем средстве, разрешенном для этой цели
Стены мойте сверху вниз теплой водой с добавлением дезинфицирующего средства 0,3%
Лизоформина-3000 по принципу одно ведро на 1 лабораторную комнату.
Полы вымойте водой с добавлением дезинфицирующего средства 0,3% Лизоформина-3000, 1 ведро
на лабораторную комнату, начиная с менее загрязненных мест, и постепенно переходят к наиболее
загрязненным местам.
После завершения работы, персонал проводит уборку и дезинфекцию своего рабочего стола, бокса
в конце рабочего дня
В конце рабочего дня проведите влажную уборку пола с использованием дезинфицирующего
средства – 0,3% лизоформина-3000.
Отходы, образовавшиеся после работы, обеззаразьте и утилизируйте в соответствие с СОП № 09-11
«Правила обеззараживания жидких и твёрдых отходов»
После окончания уборки помещения включите бактерицидный облучатель на 30 минут и по
окончании сделайте соответствующие отметки в листах учета проведённой уборки и работы
бактерицидной лампы (Приложение 3. А, В).
По окончанию уборки, уборочный инвентарь (ведра, швабры, щетки) промойте с использованием
дезинфицирующего средства, прополощите в чистой воде, высушите перед их повторным
использованием
Категорически запрещается во время уборки использовать веник, а также вытирать полы и пыль
всухую
Уборку проводите с менее загрязненных мест, начиная от подоконника, горизонтальные поверхности
столов, стулья, оборудование, аппараты.
Генеральная уборка
Проводиться в конце месяца
Наденьте халат, чепчик, перчатки закрытую обувь.
Подготовьте уборочный инвентарь (промаркированный), предназначенный для проведения уборки
лабораторных комнат и боксов соответствующих зон.
Протирайте поверхности тряпкой (ветошью без ворсинок) смоченной в дезинфицирующем средстве
или моющим средством, разрешенном для этой цели.
338
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
5. Окна мойте водой с добавлением нашатырного спирта (1 ст. ложка на 1 л воды) или разрешенного
специального моющего средства.
6. Раковины вымойте с использованием щетки и дезинфицирующего средства или дезинфицирующего
чистящего средства.
7. Для обеспечения свободного доступа к обрабатываемым поверхностям помещения максимально
освободите от мебели или отодвиньте в центр помещения.
8. На потолках и стенах влажной ветошью снимите пыль и паутину.
9. Протрите влажной тряпкой, смоченной в 0,3 % растворе лизоформина стены, двери, дверные ручки,
стулья, стойки, раковины.
10. Вымойте пространство за отопительными батареями и между звеньями водой с добавлением
моющего средства (5г на 1 литр воды), одно ведро на 1 лабораторную комнату и промойте чистой
водой.
11. Полы вымойте с добавлением 0,3% лизоформина.
12. По окончанию уборки, уборочный инвентарь (ведра, швабры, щетки) промойте с использованием
дезинфицирующего средства, прополоскайте в чистой воде, высушите перед их повторным
использованием
13. По окончанию уборки снимите перчатки и вымойте руки с мылом.
14. Внести запись в формуляр контроля работы бактерицидной лампы.
15. Данные о проведенной уборке занести в формуляр уборки помещений.
16. Категорически запрещается во время уборки использовать веник, а также вытирать полы и пыль
всухую.
17. Уборку проводите с менее загрязненных мест, начиная от подоконника, горизонтальные поверхности
столов, стулья, оборудование, аппараты.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР, утверждена
постановлением Правительства КР № 32 от 112.01.2012г.
2. Методические рекомендации по обеспечению безопасной работы с микроорганизмами IIIIV патогенности (опасности) и возбудителей паразитарных болезней, приказ МЗ КР № 104 от
15.03.2011г.
РАЗДЕЛ 09
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
339
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
Дата
ИЗЪЯТО (у кого)
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1
Маркировка уборочного инвентаря
1. Уборочный материал маркируется не смываемой краской на видном месте следующим образом:
–– «Бокс № …., грязная зона»
–– «Бокс № ….., для пола, грязная зона»
–– «Бокс № ….., для стен и поверхностей»
–– «Комната, чистая зона»
–– «Коридор, грязная зона»
–– «Коридор, чистая зона»
Приложение 2.
А. Приготовление рабочего раствора средства «Лизоформин – 3000»
Концентрация рабочего раствора
лизоформина -3000
Кол-во концентрата, в мл
Кол-во воды в мл
0,3 %
3.0
997
0,5 %
5
995
0,75 %
7,5
992,5
1%
10
990
1,5 %
15
985
2%
20
980
2,5 %
25
975
3%
30
970
4%
40
960
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
340
В. Режимы обеззараживания различных объектов, потенциально инфицированные вирусами и
не спорообразующими бактериями
Дезинфицирующее Концент-ра- Экспозиция,
средство
ция
мин
Объекты дезинфекции
Способ дезинфекции
Поверхности в помещениях
(пол, стены, двери,
мебель, медицинское
оборудование, рабочий
стол, индивидуальные
шкафы, и т.д.)
Орошение или
протирание с
последующей влажной
уборкой
Лизоформин-3000
Протирание или
орошение
Лизоформин-3000
0,3%
60 мин
1%
15мин
0,5%
60 мин
1%
15мин
Нормы
расхода
200мл/м2
200мл/м2
Приложение 3
А. Форма учета проведения уборки помещений
Проведение уборки помещения
Комната №
Формуляр № _______
Текущая уборка
В рабочие дни
Генеральная уборка
1 раз в месяц
Ответственность
Дата проведения
Роспись лица,
текущей уборки проводившего уборку
Дата проведения
текущей уборки
Роспись лица,
проводившего
уборку
Дата проведения
генеральной
уборки
Роспись лица,
проводившего уборку
В. Форма учёта работы бактерицидной лампы
Контроль работы бактерицидной лампы
Комната №
Формуляр №
Дата ввода лампы в работу
Срок службы бактерицидной лампы
Ответственный
Дата
Время работы
Учет ресурса
лампы
Роспись
ответственного лица
Дата
Время работы
Учет
ресурса
лампы
Роспись
ответственного
лица
РАЗДЕЛ 09
Республиканский центр СПИД
Референс-лаборатория диагностики СПИД
г. Бишкек, ул. Логвиненко, 8
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
Сборник стандартных операционных
процедур по лабораторной диагностике
ВИЧ-инфекции
Раздел: Безопасность в лаборатории
341
СОП № 09-11
Издание
№1
Статус документа
Оригинал
Дата выпуска
Дата пересмотра
СТАНДАРТНАЯ ОПЕРАЦИОННАЯ ПРОЦЕДУРА
НАЗВАНИЕ ПРАВИЛА ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ ЖИДКИХ И ТВЕРДЫХ ОТХОДОВ
РАЗРАБОТЧИКИ
ФИО
Должность
Роспись
Подготовил:
Проверил:
Утвердил:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДОКУМЕНТЕ
СОП – стандартная операционная процедура
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
СПИД – синдром приобретённого иммунного дефицита
МЗ КР – министерство здравоохранения Кыргызской Республики
НАЗНАЧЕНИЕ
Порядок обеззараживания твёрдых и жидких отходов, остающихся после проведения лабораторных
исследований в референс-лаборатории РЦ СПИД с целью обеспечения биологической безопасности
сотрудников и окружающей среды.
1.
2.
3.
4.
ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЦЕДУРЕ
При работе соблюдать меры безопасности, соответствующие работе с микроорганизмами I –II групп
патогенности по международной классификации [1].
Утилизации подвергается жидкий отработанный биоматериал, (кровь, сыворотка, плазма крови
и смывные воды) и использованный твёрдый расходный материал (наконечники, планшеты,
пластиковые пробирки, ветошь, перчатки, клейкая бумага после инкубации, вата, салфетки и др.).
К работе с автоклавом допускается сотрудник, имеющий непросроченное разрешение на работу с
оборудованием под давлением.
Одноразовые полипропиленовые термоустойчивые пакеты должны быть заполнены не более чем на
¾ объема.
ОТВЕТСТВЕННЫЕ ЛИЦА
1. Врач-лаборант
2. Лаборант
3. Санитарка
1.
2.
3.
4.
5.
РЕАКТИВЫ
Раствор Лизоформина 3000
6% раствор перекиси водорода
Хлорапин
Гипохлорита кальция (ДТС ГК или ДСГК)
Нейтральный гипохлорид кальция (НГК)
342
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
6. Гипохлорид кальция технический (ГКТ)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
МАТЕРИАЛЫ
Медицинский халат, чепчик, резиновые перчатки, маска одноразовая, защитные очки
Штатив/подставка для пластиковых мешков
Полипропиленовые термоустойчивые одноразовые пакеты
Контейнер для отходов (бикс для автоклава)
Емкость для сбора жидких отходов
Пинцет или корцанг до 30 см. длиной
ОБОРУДОВАНИЕ
1. Автоклав
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
ИНСТРУКЦИИ
Обеззараживание жидких отходов методом автоклавирования
Наденьте защитную одежду, защитные очки и резиновые перчатки
Отработанную сыворотку/плазму крови собирайте в специальные одноразовые полиэтиленовые
мешки (пластиковые пакеты), заполнив их не более, чем на 3/4 объема.
Аккуратно перевяжите мешок, предварительно осторожно удалив воздух из мешка.
Поместите мешок с жидкими отходами в специальный контейнер для автоклавирования.
Перенесите контейнер к месту проведения автоклавирования.
Загрузите контейнер в автоклав и разместите химические /термохимические тесты на контрольных
точках (Приложение 1)
Проведите автоклавирование при 1,5 атмосферах (1210 ±10С) 60 минут согласно СОП № 03-11
«Правила программирования и эксплуатации автоклава»
Обработайте руки в перчатках 700 спиртом.
Снимите аккуратно перчатки, защитную одежду, очки, вымойте руки с мылом.
После окончания автоклавирования внесите соответствующие записи в Журнал учета работы
автоклава (Приложение 2).
Обеззараженную кровь, сыворотку, плазму или промывные воды утилизируйте путём спуска в
канализацию.
Обеззараживание жидких отходов с помощью дезинфицирующих средств.
Наденьте защитную одежду и резиновые перчатки.
Отработанную кровь, сыворотку, плазму, промывные воды соберите в специальные не
коррозирующие ёмкости.
Емкость для сбора жидких биологических отходов должна быть промаркирована – «Жидкие
биоотходы» и иметь отметки о количестве объема.
Определите объем собранных отработанной крови, сыворотки, плазмы крови или промывных вод.
Добавьте в данный объем жидких отходов соответствующее количество дезинфицирующего
средства и оставьте для экспозиции на определённое время (Приложением3).
Утилизируйте обеззараженную кровь, сыворотку, плазму крови или промывные воды путем спуска
в канализацию.
Обработайте руки в перчатках 700 спиртом.
Снимите аккуратно перчатки, защитную одежду и очки, вымойте руки с мылом.
Обеззараживание твердых отходов методом автоклавирования
1. Наденьте защитную одежду, защитные очки и маску, резиновые перчатки
РАЗДЕЛ 09
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
343
2. Соберите наконечники от дозаторов, пластиковые микропланшеты, перчатки, наклейки для
микропланшетов, пластиковые пробирки и другие твердые медицинские отходы в одноразовые
полипропиленовые термоустойчивый пакет, заполнив его на 3/4 объема.
3. Аккуратно извлеките пакет из штатива/подставки для пакетов.
4. Плотно завяжите пакет, предварительно осторожно удалив из него воздух.
5. Поместите пакет в контейнер
6. Перенесите контейнер к месту автоклавирования.
7. Прикрепите химический /термохимический тест к пакету внутри контейнера
8. Загрузите контейнер в автоклав и дополнительно разместите химические /термохимические тесты
на контрольных точках (приложение 1)
9. Проведите автоклавирование при 1,5 атмосферах (1210 ±10С) 60 мин.
10. Обработайте руки в перчатках 700 спиртом.
11. Снимите аккуратно защитную одежду и перчатки, вымойте руки с мылом.
12. После окончания автоклавирования внесите соответствующие записи в Журнал учета работы
автоклава.
13. Утилизируйте обеззараженные отходы и мусор как бытовые отходы.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
Обеззараживание твердых отходов с помощью дезинфицирующих средств
Наденьте защитную одежду и резиновые перчатки
Приготовьте дезинфицирующий раствор 1,5% Лизоформина-3000 или 6% раствор перекиси
водорода (СОП № 09-09 «Приготовление дезинфицирующих растворов»).
Налейте дезинфицирующее средство в специальную не коррозирующую емкость для твердых
отходов с закрывающейся крышкой, на 1/3 общего объема.
Твёрдые отходы, образовавшиеся в процессе лабораторных исследований - наконечники от дозаторов,
пластиковые пробирки, планшеты, перчатки, наклейки для микропланшетов, пластиковые пробирки
и другие, погружайте в дезинфицирующее средство, аккуратно, используя пинцет или корнцанг, и
так, чтобы дезинфицирующее средство заполнило весь внутренний объем объекта.
Долейте необходимое количество дезинфицирующего раствора, чтобы объем жидкости полностью
покрыл отходы в емкости.
Емкость для сбора твердых биологических отходов должна быть промаркирована – «Твердые
биоотходы».
Закройте емкость плотно крышкой и оставьте для контакта на 30 минут.
Утилизируйте дезинфицирующее средство после дезинфекции отходов в канализацию.
Соберите твердые отходы после обеззараживания в полиэтиленовый мешок и утилизируйте как
обычные отходы.
Обработайте руки в перчатках 700 спиртом.
Снимите аккуратно защитную одежду и перчатки, вымойте руки с мылом.
РУКОВОДЯЩИЕ ДОКУМЕНТЫ:
1. Инструкция по инфекционному контролю в организациях здравоохранения КР. Утверждена
Постановление Правительства КР № 32 от 12.01.2012 г.
2. Приказ МЗ КР № 104 от 15.03.2011г. Методические рекомендации по обеспечению безопасной
работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности) и возбудителей паразитарных
болезней.
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
344
ВЫДАЧА И ИЗЪЯТИЕ
ВЫДАНО (кому)
Фамилия
Подпись
ИЗЪЯТО (у кого)
Дата
Подпись
Дата
ИЗМЕНЕНИЯ
ДАТА
ПРИЧИНА ИЗМЕНЕНИЙ
Приложение 1.
Расположение контрольных точек в паровых стерилизаторах (автоклавах)
Емкость камеры стериЧисло конлизатора
трольных точек
(дм 3)
Расположение контрольных точек (Т)
Для паровых стерилизаторов прямоугольных:
До 100
5
Т.1 – у загрузочной двери;
Т.2 – у противоположной стенки (разгрузочной двери)
Для паровых стерилизаторов круглых вертикальных:
Свыше 100 до 750
включительно
11
Т.1 – в верхней части камеры;
Т.2 – в нижней части камеры
Для паровых стерилизаторов круглых горизонтальных:
Т.1 – у загрузочной двери;
Свыше 750
13
Т.2 - у противоположной стенки (разгрузочной двери);
Т.3-Т.13 – в центре стерилизационных коробок или внутри стерилизуемых
упаковок, размещенных на разных уровнях, против часовой стрелки.
Примечание: контрольные точки 1 и 2 находятся в стерилизационной камере вне стерилизуемых
изделий.
Приложение 2.
Журнал учета работы автоклава
№ п/п
Дата
Время и t экспозиции
Наименование материала
Результаты контроля
Роспись исполнителя
1
2
3
4
5
6
РАЗДЕЛ 09
БЕЗОПАСНОСТЬ В ЛАБОРАТОРИИ
345
Приложение 3.
Режимы обеззараживания различных объектов, потенциально инфицированных вирусами и
неспорообразующими бактериями (кроме микобактерий)
№
1
Объекты дезинСпособ дезинфекции
фекции
Медицинские
изделия
однократного
применения
из пластика и
перчатки
Замачивание в одном из
дезрастворов
Кипячение
2
Посуда
лабораторная
(пипетки,
пробирки, колбы, Замачивание в одном из
шприцы и др.)
дезрастворов
Дезинфицирующее средство*
2,5 %
60
Полное
погружение
Хлорапин
0,1 %
60
Полное
погружение
Раствор перекиси водорода
6%
360
Полное
погружение
Раствор пищевой соды
2%
30
Полное
погружение
1,5 %
30
2%
15
6%
360
Лизоформин -3000
Хлорная известь
Гипохлорита кальция (ДТС
ГК или ДСГК)
Кровь, сыворотка,
плазма, смывные
воды
Засыпать и размешать
Норма расхода
Лизоформин 3000
Раствор перекиси водорода
3.
Концен­ Экспози­
трация
ция,
%
мин.
Нейтральный гипохлорид
кальция (НГК)
Полное
погружение
Полное
погружение
60
200 г/л(кг)
60
120
150 г/л(кг)
30
200 г/л(кг)
200 г/л(кг)
Гипохлорид кальция
технический (ГКТ)
120
марки А
250 г/л(кг)
марки Б
346
СБОРНИК СТАНДАРТНЫХ ОПЕРАЦИОННЫХ ПРОЦЕДУР
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ