В ходе выполнения проекта по Соглашению о предоставлении

В ходе выполнения проекта по Соглашению о предоставлении субсидии от
22 августа 2014 № 14.575.21.0073 с Минобрнауки России в рамках
федеральной целевой программы «Исследования и разработки по
приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса
России на 2014-2020 годы» на этапе № 1 в период с 22.08.14 по 31.12.14
выполнялись следующие работы:
1.1 Выполнение аналитического обзора современной научно-технической,
нормативной, методической литературы, затрагивающей научнотехническую проблему. Выбор и научное обоснование направления
исследования.
1.2 Проведение патентного поиска.
1.3Формирование критериев включения и исключения пациентов в выборку.
1.4 Сбор клинических образцов, формирование базы данных.
1.5 Оптимизация выделения лимфобластов из клинических образцов.
1.6 Выбор и оптимизация технического решения для выделения белков и
ДНК из лимфобластов. Разработка проекта протокола пробоподготовки
клинических образцов.
1.7 Разработка алгоритма протеомного профилирования клинических
образцов методом ПААГ-ЭФ – времяпролетной масс-спектрометрии.
1.8 Формирование набора генетических маркеров функциональной
активности системы детоксикации, потенциально значимых для
индивидуализации лекарственной терапии острых лимфобластных лейкозов.
При этом были получены следующие результаты:
- Выполнен аналитический обзор современной научно-технической,
нормативной,
методической
литературы,
затрагивающей
научнотехническую проблему. Осуществлен выбор и научное обоснование
направления исследования.
- Проведен патентный поиск.
- Сформированы критерии включения и исключения пациентов в
выборку.
- Проведен сбор клинических образцов, формирование базы данных.
- Проведена оптимизация выделения лимфобластов из клинических
образцов.
- Осуществлен выбор и оптимизация технического решения для
выделения белков и ДНК из лимфобластов. Разработка проекта протокола
пробоподготовки клинических образцов.
- Разработан алгоритм протеомного профилирования клинических
образцов методом ПААГ-ЭФ – времяпролетной масс-спектрометрии.
- Сформирован набор генетических маркеров функциональной
активности системы детоксикации, потенциально значимых для
индивидуализации лекарственной терапии острых лимфобластных лейкозов.
В ходе работ были разработаны проект протокола пробоподготовки
клинических образцов и алгоритм протеомного профилирования методом
ПААГ-ЭФ – времяпролетной масс-спектрометрии. Проект протокола
пробоподготовки клинических образцов содержит детальную, пошаговую и
исчерпывабщую информацию по проведению пробоподготовки образцов
цельной крови, с целью выделения ДНК и белков из лимфобластов. Данный
протокол может быть использован в исследованиях, направленных на
изучение механизмов острого и хронического лимфобластного лейкоза как у
детей, так и у взрослых пациентов. Кроме того, с небольшими изменениями
данный протокол можно использовать в изучении других злокачественных
заболеваний, например миелоидный лейкоз, лимфома и т.д. Алгоритм
протеомного профилирования методом ПААГ-ЭФ – времяпролётной массспектрометрии является высокоточным инструментом, способным найти
применение в исследованиях множества патологических состояний человека,
в частности, поиска биомаркеров заболеваний, дифференцировке групп риска
и тяжести протекания заболевания, поиске маркеров неэффективности
лекарственной терапии и множестве других задач, появившихся на стыке
молекулярной биологии и трансляционной медицины.
Оценивая научно технический уровень выполнения работ необходимо
отметить использование наиболее современных методов молекулярной и
клеточной биологии при решении задач, поставленных в проекте.
Использование магнитного сортинга клеток для выделения лимфобластов из
крови, высокопроизводительного секвенирования для установления
генетических детерминант и ПААГ-ЭФ в сочетании с МАЛДИвремяпролётной масс-спектрометрией для протеомного профилирования
является комбинацией методов, которые позволят с высокой долей
уверенности достичь поставленных целей.
Подводя итоги работ, проведенных на первом этапе ПНИ итоги можно
сделать следующие краткие выводы:
По результатам проведенного литературного обзора были выявлены
ключевые особенности, осложняющие эффективное лечение ОЛЛ у детей:
высокая
токсичность
препаратов,
высокая
интериндивидуальная
вариабельность функций систем детоксикации у детей, высокий вклад
возрастных изменений, глубоко влияющих на физиологические процессы.
Существующие методики индивидуализации терапии смогли существенно
повысить выживаемость пациентов с ОЛЛ, однако, число рецидивов после
проведения терапии у детей по-прежнему превышает количество
установленных диагнозов всех других онкологических заболеваний.
Изучение современной литературы показало, что применение методов
молекулярной биологии имеет очень высокие перспективы в поиске
биомаркеров, которые позволят ещё до начала химиотерапии дать
информацию о ключевых индивидуальных особенностях пациента.
Проведенный патентный поиск выявил отсутствие на сегодняшний день тестсистем
для
индивидуализации
лекарственной
терапии
острых
лимфобластных лейкозов у детей, что показывает высокую необходимость
проведения разработки таковой системы в рамках данных ПНИ.
Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по Соглашению на
отчетном этапе исполненными надлежащим образом.