Слайд-планшет для исследования осадка мочи методом

Слайд-планшет для исследования осадка мочи методом
Нечипоренко, а также эксудатов, транссудатов, перитонеальной и
синовиальной жидкости.
Миронова Ирина Ивановна
доцент кафедры лабораторной диагностики РМАПО
Пластиковый слайд-планшет содержит 10 камер для микроскопического исследования
нативных и/или суправитально окрашенных препаратов, приготовленных из биологических
жидкостей.
Длина слайд-планшета 8 см, ширина – 3 см, толщина – 1,7 мм (рис 1), что примерно
соответствует размерам предметных стекол для микроскопии. Каждая камера слайд-планшета
покрыта тонкой, идеально прозрачной пластиковой пластинкой, играющей роль покровного
стекла. Расстояние между поверхностью слайд-планшета и «покровным стеклом» позволяет
клеточным элементам располагаться однослойно.
В каждой камере слайд-планшета лева расположены
две серии окружностей, по 9 в каждой. Они видны в
проходящем свете и на малом увеличении микроскопа.
На большом увеличении микроскопа (объектив х40)
одна окружность занимает все поле зрения. Каждая
окружность имеет диаметр 0,376 мм, объем одной
окружности – 0,011 мкл. Объем каждой серии
окружностей составляет 0,0111х9 = 0,099мкл или ≈0,1
мкл. Следовательно, если количество клеточных
элементов, подсчитанных в одной серии окружностей
Рисунок 1.
умножить на 10, то получается содержание клеточных
элементов в 1 мкл исследуемой жидкости. Например: в
9-ти окружностях камеры слайд-планшета подсчитано 8 эритроцитов, следовательно в 1 мкл
жидкости содержится 80 эритроцитов.
Подсчет общего количества клеточных элементов в биологических жидкостях с
использованием одной или двух серий окружностей можно производить на малом увеличении
микроскопа (окуляр х10, объектив х8 или х10). Дифференциацию клеточных элементов
(подсчет лейкоцитарной формулы и количества эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров и других
клеточных элементов) ориентировочно можно произвести, используя объектив х20 и окуляры
х10. Более точная дифференциация клеток проводится на большом увеличении микроскопа
(объектив х40 и окуляры х10).
Исследование мочи по методу Нечипоренко
Доставленная в лабораторию моча, собранная после туалета наружных половых органов
(желательно средняя порция), аккуратно, без пены размешивается и переносится в 10 мл
центрифужную пробирку. Если мочи мало, менее 10 мл, вся доставленная моча выливается в
центрифужную пробирку, центрифугируется со скоростью 1500-2000 об/мин в течение 10-15
мин.
Надосадочную мочу удаляют с помощью пипетки с баллоном. В пробирке оставляют 1 мл мочи
с осадком.
Осадок аккуратно без пены перемешивают и каплей осадка заполняют слайд-планшет.
Лишнюю мочу удаляют с поверхности слайд-планшета кусочком фильтровальной бумаги или
ватным тампоном.
Препарат помещают на предметный столик микроскопа и при увеличении х200, х250,
подсчитывают раздельно количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров.
Рассчитывают количество форменных элементов в 1 мл мочи по формуле:
N=X x 1000, где
V
1
N – количество форменных элементов в 1 мл мочи,
Х – количество форменных элементов в 9 окружностях камеры слайд-планшета,
10 – коэффициент пересчета количества форменных элементов в камере слайд-планшета на 1
мкл мочи,
1000 – количество мочи с осадком в мкл, оставленное для исследования,
V – количество мочи в мл, взятое для центрифугирования.
Если для центрифугирования всегда берут 10 мл мочи, то окончательный вариант формулы
следующий:
N = X x 1000
Нормальное количество форменных элементов мочи по А.З.
Нечипоренко:
Лейкоциты – 2000 в 1 мл мочи.
Эритроциты – 1000 в 1 мл мочи.
Цилиндры – 20 в 1 мл мочи.
Если в 9-ти окружностях обнаружен один цилиндр, необходимо исследовать эту мочу в камере
Горяева. При обнаружении в камере Горяева одного и более цилиндров необходимо
просмотреть еще не менее 4-х камер, заправленных осадком мочи и усреднить полученный
результат.
Подсчет клеточных элементов в ликворе, окрашенном реактивом Самсона (определение
цитоза)
Реактив Самсона: уксусная кислота ледяная 30,0 мл, концентрированная карболовая кислота 2,0
мл, фуксин, спиртовой раствор (1:10) 2,5 мл, дистиллированная вода – до 100 мл.
Уксусная кислота разрушает эритроциты, карболовая кислота консервирует клетки и сохраняет
их морфологию в течение 2-4 часов, а фуксин окрашивает ядра клеток в вишневый цвет,
цитоплазму плазматических клеток – в ярко малиновый цвет, а зернистость эозинофилов
окрашивается в коричневато-желтоватый цвет, кроме того, в цитоплазме нейтрофилов
просматривается мелкая, пылевидная зернистость коричневато-вишневого цвета.
10-20 капель хорошо перемешанной спинномозговой жидкости поместить в центрифужную или
видалевскую пробирку; внести, соответственно, 1-2 капли реактива Самсона и аккуратно, без
пены перемешать. Через 10-15 мин вновь перемешать содержимое пробирки и каплей
перемешанного окрашенного ликвора заполнить камеру слайд-планшета. Лишний ликвор
удалить с поверхности слайд-планшета фильтровальной бумагой или ватным тампоном.
Подсчитать общее количество ликворных клеток в 9 окружностях камеры и сделать расчет по
формуле:
H = X x 10, где
H – количество клеток в 1 мкл ликвора;
Х – количество клеток в 0,1 мкл, т.е. в 9 окружностях;
10 – коэффициент для пересчета клеток в 1 мкл ликвора.
Если клетки в камере слайд-планшета распределились неравномерно, нужно сосчитать клетки
во второй серии окружностей и произвести перерасчет на 1 мкл ликвора.
В камере слайд-планшета при патологии обычно содержится достаточное количество клеток,
позволяющее сосчитать лейкоформулу ликвора. Дифференциацию клеточных элементов
необходимо производить при увеличении х 400.
Результат выражается в процентах или в абсолютном количестве подсчитанных клеток.
Например: общее количество клеток 39, из них: 15 нейтрофилов, 10 лимфоцитов, 5 моноцитов,
4 макрофага, 2 эозинофила и 3 плазматических клетки.
Если в камере слайд-планшета клеток мало (единичные) и решается вопрос о нормальном или
патологическом количестве клеточных элементов в ликворе, необходимо провести подсчет в
камере Фукса-Розенталя.
2
Поиск патологических клеточных элементов, тканевых клочков, комплексов клеток
злокачественных новообразований, клеток арахноэндотелия, кристаллов всегда производится
на малом увеличении микроскопа.
Преимущества исследования биологических жидкостей в слайд-планшетах
1. При работе со слайд-планшетами не используются предметные и покровные стекла
2. Исследование осадка мочи в слайд-планшете позволяет одновременно определить
количество клеточных элементов в 1 мл мочи (число Нечипоренко) и получить
представление о количестве форменных элементов в поле зрения или в препарате
3. В норме в люмбальном ликворе число клеток сосатвляет 3-5 в 1 мкл. Увеличенное
количество клеток (плеоцитоз) определяется с помощью слайд-планшета быстрои
достаточно точно.
4. Подсчет и дифференциальная диагностика клеток в ликворе и в осадке мочи требуют
для каждого анализа пришлифовывать покровное стекло к камере, что вызывает
затруднение в работе и отнимает время. Подсчет и дифференциальная диагностика
клеток в камере слайд-планшета производится под фиксированным покровным стеклом
3